分光光度计使用原理及操作方法

可见分光光度计使用方法

分光光度计是一种常用的实验仪器，用于测定溶液中物质的浓度，其原理是利用光的吸收和透射特性来测定溶液中物质的浓度。下面介绍可见分光光度计的使用方法。

一、仪器准备

1.开启分光光度计电源，确保仪器处于工作状态。

2.打开分光光度计条纹盖，并将溶液架放置在样品室上方。

3.打开分光光度计软件，并连接至计算机。

二、调整仪器

1.调整参考光路径

a.点击软件界面上的“参考”按钮，将光杆放置在溶液架上的空槽中。

b.调节光杆高度，使其与溶液架平齐。

c.点击软件界面上的“参考”按钮，将光杆移至参考槽中，然后点击“参考”。

2.调整样品光路径

a.点击软件界面上的“样品”按钮，将光杆放置在溶液架上的空槽中。

b.在参考槽中加入去离子水，并将光杆放置在参考槽中。

c.点击软件界面上的“样品”按钮，将光杆移至样品槽中。

三、测量样品 1.设置波长

a.在软件界面上的波长选择栏中选择所需测量的波长。

b.点击软件界面上的“确定”按钮，确认波长设置。

2.校准基准值

a.点击软件界面上的“样品”按钮，将光杆放入样品槽中。

b.在样品槽中加入去离子水，并将光杆放入样品槽中。

c.点击软件界面上的“校正”按钮，校正基准值。

3.测量样品

a.将待测样品加入样品槽中，确保溶液填满槽。

b.将光杆放入样品槽中，避免气泡影响测量。

c.点击软件界面上的“测量”按钮，开始测量样品。

四、数据处理

1.记录吸光度值

a.在测量完成后，软件界面上会显示吸光度测量值。

b.记录并保存测量结果。

2.绘制标准曲线

a.准备一系列已知浓度的标准溶液。

b.依次测量这些标准溶液，并记录吸光度值。

c.利用已知浓度和相应吸光度值绘制标准曲线。 3.计算未知浓度

a.测量未知样品的吸光度值。

b.根据标准曲线，找到相应吸光度值对应的浓度。

c.计算得到未知样品的浓度。

五、结束测量

1.关闭分光光度计软件。

2.将光杆从样品槽中取出，并将样品架取下。

第 1 页 共 8 页 紫外分光光度计的使用方法 光度计操作规程

紫外分光光度计是依据物质的吸取光谱讨论物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。基本工作原理和红外光谱仪相像，利用确定频率的紫外可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸取。一组吸取随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。紫外分光光度计的使用方法如下：

1开机

打开样品室盖，检查样品室中是否放置遮光物，若有取出。打开电源开关，仪器进入预热状态，预热20min。

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2选择光源

（此操作适用于紫外—可见分光光度计）

电源开关打开后，钨灯即亮；若仪器需要在紫外光区（200nm～290nm）工作，则需将光源切换至氘灯；若仪器需要在紫外光区（290nm～360nm）工作，则要同时点亮氘灯和钨灯。

3选择波长

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调整波长旋钮或输入试验所需的波长，选择须用的单色光波长。

4校准

目前型号较新的分光光度计具有开机自动校准功能，无自动校准功能的设备使用前需参照使用说明书手动校准。

5测量

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如试验方法中无特别规定，通常使用装有蒸馏水的吸取池调零后放入样品和参比样进行测试，并记录测试结果。

6数据处理

定量测试时通常需要先测定若干个已知浓度的待测物标准样品，依据其吸光值与浓度绘制标准曲线。目前新型号的紫外分光光度计本身都有制作和计算标准曲线的功能，实在操作方式可参照设备使用说明。不具备标准曲线绘制功能的设备，可利用Excel软件或坐标纸辅佑襄助绘制。

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7关机

测量完毕，取出吸取池，清洗并晾干后入盒保存。关闭电源，拔下电源插头，在样品室内放入干燥剂，盖上样品室盖，罩上防尘罩。

红外分光光度计基本原理及用途

红外分光光度计由光源发出的光，被分为能量均等对称的两束，一束为样品光通过样品，另一束为参考光作为基准。这两束光通过样品室进入光度计后，被扇形镜以确定的频率所调制，形成交变信号。

分光光度计的使用方法

主体内容：

1．使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。以及各个 操作旋钮之功能。在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接 线应牢固。通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源 开关。

仪器在使用前先检查一下，放大器暗盒的硅胶干燥筒(在仪器的左侧)，

如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。

2．将灵敏度旋钮调置 “ 1档”(放大倍率最小)。

3．开启电源，指示灯亮，选择开关置于 “ T，”波长调至测试用波长。仪器 预热 20 分钟。

4．打开试样室盖(光门自动关闭)，调节 “ 0旋”钮，使数字显示为

“ 00.0， 盖上试样室盖，将比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率 “ 100%旋”钮，使数字显示为 “ 100.0。”

5．如果显示不到 “ 100.0，”则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可 能置低倍率档使用，这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按

(4)重新校正 “0和”“ 100%。”

6．预热后，按

(4)连续几次调整 “ 0和”“100%，”仪器即可进行测定工作。

7．吸光度 A 的测量按

(4)调整仪器的 “ 00.0和”“100%，”将选择开关置于 “A，”调节吸光度调零旋 钮，使得数字显示为 “.000，”然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的 吸光度值。

8．浓度 C 的测量： 1 / 18

选择开关由 “A旋”置 “C，”将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使 得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度值。

9．如果大幅度改变测试波长时，在调整 “ 0和”“ 100%后”稍等片刻，（因光 能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定 后，重新调整 “0和”“100%”即可工作。

10．每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。

紫外分光光度计的原理和使用方法

紫外分光光度计是一种用于测量物质吸收或透过紫外光的仪器，它利用了物质对不同波长的紫外光的吸收特性来分析样品的化学组成和浓度。紫外分光光度计广泛应用于生物化学、药物分析、环境监测、食品安全等领域。

紫外分光光度计的原理主要基于比尔-朗伯定律，即物质溶液对入射的光强的吸收与物质浓度成正比。当光通过样品时，样品中的分子会吸收特定波长的光，吸收的光强度与样品中的物质浓度成正比。紫外分光光度计通过测量光源透过样品后的光强度与光源透过参比溶液后的光强度之比来计算吸光度。吸光度的数值与样品中物质的浓度成正比，因此可以通过测量吸光度来确定样品中物质的浓度。

使用紫外分光光度计需要以下步骤：

1. 准备样品：将待测物质溶解在适当的溶剂中，制备成一定浓度的溶液。确保样品溶液的透明度和浓度符合测量要求。

2. 设置光源：打开紫外分光光度计，选择合适的光源。常见的光源有氘灯和钨灯，氘灯适用于紫外光区域，钨灯适用于可见光和近紫外光区域。

3. 调节单色器：根据待测物质吸收峰的波长范围，选择合适的单色器波长。单色器的主要作用是从光源中选择特定波长的光。

4. 校准仪器：使用空白试剂（即不含待测物质的溶液）校准仪器，使得仪器的基线为零。校准是为了消除仪器本身的漂移和背景吸光度的影响。

5. 测量样品：将样品溶液倒入测量池中，确保池中没有气泡或杂质。将测量池放入光度计中，选择合适的波长和测量模式（如吸光度或透光率）。启动测量程序，等待测量结果。

6. 记录数据：根据测量结果记录样品的吸光度或透光率数值。根据所测得的吸光度值和标准曲线，可以计算出样品中物质的浓度。

需要注意的是，在使用紫外分光光度计时，应注意以下几点：

1. 样品的浓度应适合于仪器的测量范围，过高或过低的浓度都会影响测量结果的准确性。

2. 样品的溶剂选择要合适，避免与待测物质发生反应或造成吸光度的变化。

3. 测量过程中要保持测量池的清洁，避免污染和杂质的干扰。