分光光度计使用原理及操作方法

分光光度法

原理：光是一种电磁波,具有一定的波长和频率。可见光的波长范围在400-760nm，紫外光为200-400nm，红外光为760-500000nm。可见光因波长不同呈现不同颜色，这些波长在一定范围内呈现不同颜色的光称单色光。

利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等，这就是光谱。有色物质溶液可选择性地吸收一部分可见光的能量而呈现不同颜色，而某些无色物质能特征性地选择紫外光或红外光的能量。

物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成吸收光谱，由于物质的分子结构不同，对光的吸收能力不同，因此每种物质都有特定的吸收光谱，而且在一定条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比，分光光度法就是利用物质的这种吸收特征对不同物质进行定性或定量分析的方法。

在比色分析中，有色物质溶液颜色的深度决定于入射光的强度、有色物质溶液的浓度及液层的厚度。当一束单色光照射溶液时，入射光强度愈强，溶液浓度愈大，液层厚度愈厚，溶液对光的吸收愈多，它们之间的关系，符合物质对光吸收的定量定律，即朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律。这就是分光光度法用于物质定量分析的理论依据。

朗伯-比尔定律：

物理意义：当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,与其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比。

数学表达式：A=lg(1/T)=Kbc

A——吸光度；

T——透射比，是透射光强度比上入射光强度；

K——为摩尔吸收系数，它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关；

C——吸光物质的浓度；

B——吸收层厚度。

使用方法：

721可见分光光度计其波长范围360～800nm，色散元件为三角棱形.

1.检查仪器各调节钮的起始位置是否正确，接通电源开关，打开样品室暗箱盖，使电表指针处于“0”位，预热20min后，再选择须用的单色光波长和相应的放大灵敏度档，用调“0”电位器调整电表为T=0％。

分光光度计使用原理及操作方法

分光光度计是一种常用的光学仪器，用于测量溶液或气体中物质对特定波长的光的吸收或透射程度。它的工作原理基于比尔-朗伯定律，即物质对光的吸收与物质的浓度成正比。以下是关于分光光度计的使用原理及操作方法的详细介绍。

一、工作原理

分光光度计的工作原理基于比尔-朗伯定律，它描述了物质溶液或气体对光的吸收或透射程度与物质的浓度之间的关系。根据该定律，若吸光度为A，物质的浓度为c，吸光度与浓度之间存在一个线性关系，即A =

εcl，其中ε为摩尔吸光系数，l为光程长度。

在分光光度计中，光源会通过一束光线产生可见光或紫外线，该光线通过一个狭缝，称为波长选择装置，以选择特定波长的光进行测量。然后进入样品室，通过样品室中的溶液或气体，通过光电三极管（光敏元件）接收到另一端。分光光度计会比较入射光和通过样品后的光的强度差异，通过转化为电信号进行测量和计算。根据比尔-朗伯定律，通过对吸光度的测量，可以推算出溶液中物质的浓度。

二、分光光度计的操作方法

1.打开分光光度计电源，待仪器启动完成，确保仪器工作正常。

2.校准仪器：选择所需波长，并将光路调整为100%T（透过率）或0%T（吸光度）。根据操作手册的指示进行校准。

3.准备样品：使用准确的浓度称量所需样品，并使用溶剂稀释至合适的浓度范围。 4.装载样品：打开样品室并放置样品池，将样品注入样品池，并确保池中没有气泡。

5.设置参数：根据实验需要，在分光光度计上设置参数，如波长、采集速度等。

6.测量样品：选择所需波长，并将样品室对准该波长设置，调节入射光的强度。

7.记录数据：测量样品的吸光度，并将数据记录下来。可以选择多次测量，以获得更准确的结果。

8.分析结果：根据吸光度值和已知浓度值之间的关系，计算出样品的浓度，或者在已知浓度下，确定样品的吸光度。

9.清洗仪器：在测量结束后，将样品室和样品池清洗干净，以防止可能的交叉污染。关闭仪器电源。

紫外可见分光光度计的原理与使用方法

单光束分光光度计的原理是：光源发出光束通过准直系统，经过光栅的分光作用后进入样品池，与样品发生相互作用后经过检测器，最后由显示器显示吸光度数值。

双光束分光光度计的原理是：光源发出光束，一部分经过参比池进行比较，另一部分经过样品池与样品相互作用，分别被检测器检测后与参比值进行比较，最后由显示器显示吸光度数值。

使用紫外可见分光光度计的方法如下：

1.准备工作：

-检查仪器是否处于正常工作状态，确认光源、检测器和显示器的功能正常。

-清洁样品池，确保无杂质和残留。

2.样品处理：

-准备需要测量的样品溶液，并将其转移到清洁的样品池中。

-如果样品浓度过高，可能会引起光透过度低，此时可进行适当稀释。

3.测量步骤：

-打开仪器电源，进行预热，通常需要一段时间让光源稳定。

-选择合适的波长范围和检测模式（吸光度/透过度）。

-调节仪器，使得显示器上的示数为零或基线稳定。

-将样品池放入样品室，尽量避免空气泡存在。 -记录或保存测量数据，可以进行后续数据处理和分析。

4.清洁和维护：

-测量完成后，及时清洁样品池和其他相关部件，防止污染和积累。

-关闭仪器电源，注意安全操作。

总结一下，紫外可见分光光度计是一种基于比尔－朗伯定律原理的实验仪器，主要用于测量物质溶液或气体的光吸收特性。使用时需要进行准备工作，处理样品并进行测量，同时注意仪器的清洁和维护。

分光光度计简易操作步骤

1操作步骤

1.1连接仪器电源线，确保仪器供电电源有良好的接地性能。

1.2接通电源，开机使仪器预热20分钟。至仪器自动校正后，显示器显示“546.0nm 0.000A”

仪器自检完毕,即可进行测试。

1.3用键设置测试方式，根据您的需要选择，透过率（T），吸光度（A）浓度（C）

1.4选择分析的波长，按键6（设定键）屏幕上显示“WL=×××.×nm”字样，按键1或键2输入所要分析的波长,之后按键7(确认键)、显示器第一列右侧显示“×××.×nm BLANKING ”，仪器正在变换到所设置的波长及自动调出0ABS/100%T请稍等。待仪器显示出需要的波长，并且已经把参比调成0.000A时，即可测试。

1.5将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的比色

皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第一个槽位中。仪器所附的比色皿，其透过率是经过配对测试的，未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不能有气泡、悬浮物，否则也将影响样品测试的精度。

1.6将参比样品推（拉）入光路中，按<0ABS/100%T>键调“0ABS/100%T”。此时显示器显示的 “BLANKING”， 直至显示“100.0”%T或“0.000A”为止。

1.7当仪器显示器显示“100.0%T”或“0.000A”后，将被测样品推（或拉）入光路,这时，便可以从显示器上得到被测样品的测试参数。

2注意事项

3.1使用前注意预热20分钟。

3.2空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。

3.3室内无强电磁干扰源及有害气味。

3.4仪器放置应避开有化学腐蚀气体的地方，如硫化氢、氨气等，仪器应避免阳光直射。

3.5取洁净的吸收池时，应拿毛玻璃两面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及时用测定溶剂冲净，再用纯化水冲净，用干净绸布或擦镜纸擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防尘保存。