5章 凝集(免疫学)

实验一凝集反应一、目的要求学习和掌握用试管凝集反应测定抗血清效价的方法。

二、实验说明细菌、螺旋体、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在有适量电解质存在的情况下，抗原颗粒相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。

参加反应的抗原称凝集原，抗体称凝集素。

三、实验材料1．试剂抗原、石炭酸生理盐水、阳性血清、被检血清、阴性血清。

2．器材及其他载玻片、小试管（1 cm×6.5 cm）、试管架、移液管、吸管、水浴锅。

四、方法步骤1．玻片凝集实验（1）在载玻片两端各滴一滴大肠杆菌菌悬液。

（2）在一端的菌悬液中加入一滴1:10稀释的大肠杆菌抗血清，另一端悬液加入一滴生理盐水。

（3）将载玻片小心地振动使混合液混匀后静置于室温，数分钟后便可观察到加抗血清的一端产生凝集块，而另一端生理盐水对照没有凝集块产生。

若反应不明显，可放入培养皿中（皿内放入湿滤纸，以保持一定湿度），37℃保温30 min后观察结果。

亦可将载玻片放置显微镜下，凝集块明显可见。

2．试管凝集试验（1）抗血清的稀释抗血清稀释采取倍比稀释法。

取干净小试管7支，排列在试管架上，依次注明号码，每支试管用移液管加入0.5 ml生理盐水。

（2）按下表操作用0.5%石炭酸生理盐水，将待检血清稀释成4个稀释度，5、6、7管分别设为抗原对照、阳性对照和阴性对照。

（3）加入抗原各管中加入抗原0.5ml，充分混匀。

（4）抗原抗体反应把各管混合液振摇混匀，置37℃水浴箱中水浴4 h或在室温中过夜，观察结果。

（5）结果观察与效价判断①生理盐水对照管中的抗原（细菌）应分散，无凝集块沉淀而呈混浊菌悬液。

②实验管如有凝集，管底可见到凝集块，液体上部澄清、半澄清或混浊度降低，管底凝集块轻摇即浮起，呈片块状。

③凝集强弱的判断（以“+”表示）“-”：细菌不被凝集，液体混浊、无透明度，管底无伞状沉淀，但由于菌体自然下沉，管底中央出现圆点状沉淀，振荡时复呈均匀混浊状态。

“+”：液体透明度不明显（25%清亮），25%菌体凝集，管底有少许不明显的伞状沉淀。

医学免疫学实验指导实验五凝集反应由长沙达尔锋生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。

BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。

BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。

BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。

【实验目的】1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。

2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。

【实验用品】1. 材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。

2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。

【内容和方法】一、玻片凝集试验(slide agglutination)1.原理玻片凝集试验(slide agglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。

此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。

免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。

如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。

2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。

3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。

4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。

5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。

6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。

2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。

一、名词解释第1章概论1.免疫学：2.免疫分子：3.补体：4.临床免疫学：第2章抗原抗体反应5.抗原抗体反应：6.抗原抗体反应特异性7.可逆性8.比例性9.抗原抗体反应的等价带（zoneofequivalence）10.最适比（optimalratio）11.带现象（zonephenomenon）第3章免疫原和抗血清的制备12.免疫原(immunogen)13.半抗原14.免疫佐剂15.多克隆抗体(polyclonal antibody, pcAb)第5章凝集反应16.凝集反应17.直接凝集反应18.间接凝集反应19.明胶凝集试验第6章沉淀反应免疫学及免疫学检验试卷第1页（共13页）20.沉淀反应21.絮状沉淀试验22.免疫浊度测定23.凝胶内沉淀试验24.单项扩散试验25.双向扩散试验26.免疫电泳技术27.对流免疫电泳28.火箭免疫电泳29.免疫电泳30.免疫固定电泳第19章补体检测及应用31.补体32.免疫溶血法33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应36.Ⅰ型超敏反应37.Ⅱ型超敏反应38.Ⅲ型超敏反应39.Ⅳ型超敏反应第24章自身免疫性疾病及其免疫检测40.自身耐受41.自身免疫免疫学及免疫学检验试卷第2页（共8页）42.自身免疫病43.自身抗体44.抗核抗体第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测45.免疫增殖性疾病46.免疫球蛋白增殖病47.本周蛋白48.血清区带电泳49.免疫电泳50.免疫固定电泳第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病52.获得性免疫缺陷综合征第27章肿瘤免疫与免疫学检验53.肿瘤免疫学54.肿瘤抗原55.肿瘤标志物第28章移植免疫及其免疫检测56.移植57.主要组织相容性复合体58.移植排斥反应59.移植物抗宿主反应(GVHR)60.血清学分型法二、填空题。

免疫学及免疫学检验试卷第3页（共13页）第1章概论1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学。

生物检测作业免疫凝集试验免疫凝集试验颗粒性抗原与相应抗体特异性结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象，成为凝集反应。

直接凝集试验病原菌（如细菌、螺旋体等）颗粒性抗原与相应抗体特异性混合后，在适量电解质存在的条件下，经过一定的反应时间后，出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。

试验中的抗原称为凝集原；抗体称为凝集素常用的实验方法有玻片法和试管法。

1、玻片法：——细菌薄片凝集试验将已知的抗体滴加于洁净的载玻片或凹玻片孔内，自加入待检病原体悬液混合均匀，同时做生理盐水或正常血清对照。

放置室温内数分钟后即可观察实验结果，出现颗粒状凝集者为阳性反应。

优点：其操作简便、迅速，适用于血型鉴定及微生物的菌种鉴定和分型等。

特别是诊断肠道传染病时用于鉴定病人标本中肠道杆菌的感染。

细菌薄片凝集试验：（1）实验目的：该试验用于菌种的鉴定及分型.（2）实验材料：待测菌培养物、已知菌培养物和已知诊断血清（3）实验过程:1.取洁净玻片一张，用蜡笔画为四格。

2.用接种环无菌去诊断血清各两环分别置于第1、3格中。

3.用接种环取生理盐水各两环分别放于第2、4格中。

4.用接种环取已知菌少许放入第2格生理盐水中混匀，随即转移1环于第1格中混匀。

5.同样用灭菌的接种环取待测菌少许放入第4格生理盐水中混匀，然后移一环菌液于第3格中混匀。

灼烧灭菌。

6.结果：已知菌在诊断血清中应出现颗粒状凝集，若待测菌在诊断血清中也出现颗粒状凝集，表明两种菌为同一种或属。

2、试管法：——肥达试验（试管凝集实验）将已知的抗原与系列等比稀释的待检血清在小试管内混合，39℃温育2~24h后观察结果。

生理盐水加抗原作为对照，应用非特异性自凝现象。

以出现明显的颗粒状或絮片状凝集现象的待检血清最高稀释度作为抗体的效价。

试管凝集实验为半定量试验，常用于某病原微生物感染的免疫学诊断，亦可用已知抗体鉴定未知的抗原。

（1）材料：病人血清、肥达实验诊断抗原、生理盐水、试管、吸管、试管架等。

《病原生物与免疫学基础》4-5章测试卷增加姓名班级学号得分A型题（单选题，每个题目有且仅有一个正确选项,1分7题一1.引起化脓性感染最常见的细菌是------------------------------- （）2.A、葡萄球菌B、脑膜炎球菌C、链球菌 D、肺炎球菌E、淋球菌3.化脓性炎症其脓汁粘稠、病灶局限，这是由于病原菌产生： ------- （）4.A透明质酸酶B血浆凝固酶C耐热核酸酶D链道酶 E链激酶5.肺炎链球菌的致病因素主要是--------------------------------- （）6.A毒性酶 B菌毛 C外毒素D荚膜E内毒素7.化脓链球菌与人肾小球基底膜、心肌组织的共同抗原是： --------- （）8. A G蛋白 B M蛋白 C T蛋白 D R蛋白 E S蛋白9.能引起超敏反应性疾病的化脓性球菌最常见的是： --------------- （）10.A金黄色葡萄球菌B化脓链球菌C肺炎链球菌11.D脑膜炎奈瑟菌E淋病奈瑟菌12.能引起亚急性细菌性心内膜炎的常见细菌是- -------------------- （）13.A金黄色葡萄球菌B甲型链球菌C肺炎链球菌14.D绿脓杆菌E脑膜炎奈瑟菌15.主要通过呼吸道传播的细菌是：------------------------------- （）16.A、肺炎球菌、白喉杆菌、结核杆菌B、百日咳杆菌、痢疾杆菌、链球菌17.C、葡萄球菌、破伤风杆菌、霍乱弧菌D、肺炎球菌、伤寒杆菌、白喉杆菌18.E、葡萄球菌、埃托弧菌、百日咳杆菌19.A群链球菌产生的致病物质不包括---------------------------- （）20.A链激酶B红疹毒素C溶血素D剥脱性毒素E透明质酸酶21.能引起人类猩红热的主要毒性物质是------------------------- （）22.A M蛋白B透明质酸酶C致热外毒素D溶血素E链激酶23.淋病奈瑟菌引起疾病不正确的是------------------------------- （）24.A细菌借菌毛吸附粘膜上皮细胞致病B人是细菌的唯一宿主25.C可引起淋病性阴道炎、尿道炎26.D细菌抵抗力不强，在外界易死亡E是一种性病，只能通过性接触传播27.淋病奈瑟菌的主要传播途径是：------------------------------- （）28.A呼吸道传播B消化道传播C创作伤口感染D性接触传播E节肢动物叮咬29.产生红疹毒素引起猩红热的细菌最常见的是- -------------------- （）30.A、金黄色葡萄球菌B、甲型链球菌C、乙型溶血性链球菌31.D、丙型链球菌E、肺炎球菌32.引起人类疾病的链球菌中90%属于：-------------------------------- （）33.A肺炎链球菌B A群链球菌C D群链球菌 D B群链球菌E甲型链球菌34.下列中不产生外毒素的细菌是：--------------------------------- （）35.A霍乱弧菌B伤寒沙门菌C痢疾志贺菌36.D鼠伤寒沙门菌E肠产毒素性大肠杆菌37.下列无动力的细菌是：--------------------------------------- （）38.A霍乱弧菌B伤寒沙门氏菌C痢疾志贺菌D大肠埃希菌E变形杆菌39.伤寒病程第一周阳性率最高的检验是： --------------------------- （）40.人、粪便培养B、尿培养C、血清学反应D、血液培养E、补体结合试验41.痢疾患者的粪便标本不能及时送检应： ------------------------- （42.A、保存在35%的甘油盐水中B、保存在25%的甘油盐水中43.C、保存在50%的甘油盐水中D、保存在30%的甘油盐水中44.E、保存在40%的甘油盐水中45.通过消化道传播的病原菌是：---------------------------------- （）46.A、痢疾杆菌、霍乱弧菌、破伤风杆菌B、链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌47.C、链球菌、沙门氏菌、埃托弧菌D、沙门氏菌、副伤寒杆菌、肺炎杆菌48.E、伤寒杆菌、霍乱弧菌、痢疾杆菌49.我国规定的水、食品等卫生细菌学检查的指标菌是： -------------- （）50.A克雷伯氏菌B变形杆菌 C沙门菌 D志贺菌E大肠埃希菌51.肥达氏反应的原理是：---------------------------------------- （）52.A、凝集反应，用已知抗体测未知抗原B、凝集反应，用已知抗原测未知抗体53.C、间接凝集反应D、协同凝集反应 E、沉淀反应54.具有Vi抗原的细菌是：--------------------------------------- （）55.A、大肠杆菌B、伤寒杆菌C、志贺氏菌 D、脑膜炎球菌 E、变形杆菌56.诊断霍乱时粪便标本应采集：---------------------------------- （）57.A、脓血粘液便B、粘液血便C、水样便D、米泔水样便E、柏油样便58.关于霍乱弧菌的叙述，下列哪项是错误的： ---------------------- （）59.A菌体短小，弯曲成弧形或逗点形B呈革兰氏染色阴性60.C 一端单鞭毛而运动活泼D营养要求高E耐碱不耐酸61.吃海产品或盐渍食品引起食物中毒的细菌是： -------------------- （）62.A霍乱弧菌B大肠埃希菌 C肉毒芽胞梭菌63.D痢疾志贺菌E副溶血性弧菌64.关于霍乱，下述哪项是错误的：-------------------------------- （）65.A为烈性传染病B人类是霍乱弧菌的唯一易感者 C经口感染D对霍乱的免疫力主要是SIgA的作用E病后可获得短暂的免疫力66.下列哪组是G-菌：----------------------------------------------- （）67.A肺炎球菌与葡萄球菌B白喉杆菌与链球菌 C百日咳杆菌与白喉杆菌68.D志贺氏菌与霍乱弧菌E结核杆菌和麻风杆菌69.患以下疾病后可获得持久免疫力，例外的是： ----------------------- （）70.A、猩红热B、伤寒 &百日咳D、细菌性痢疾E、霍乱71.能引起食物中毒的细菌不包括：----------------------------------- （）72.A葡萄球菌B霍乱弧菌C肉毒杆菌 D沙门氏菌 E副溶血性弧菌73.下列细菌除哪项外均为革兰氏阳性菌：----------------------------- （）74.A肺炎链球菌B脑膜炎奈瑟菌C白喉杆菌75.D产气荚膜杆菌E结核杆菌76.破伤风抗毒素治疗破伤风的机制是 ------------------------------ （）77.A、在补体参与下溶解破伤风杆菌B、中和与神经细胞结合的外毒素78.C、抑制破伤风杆菌生长D、中和游离的外毒素E、减轻临床症状79.紧急预防破伤风最好注射-------------------------------------- （）80.A破伤风类毒素B破伤风抗毒素C破伤风死疫苗81.D球蛋白E抗生素82.引起气性坏疽的病原菌主要是---------------------------------- （）83.A炭疽芽胞杆菌B产气荚膜杆菌C肉毒芽胞梭菌84.D破伤风芽胞梭菌E枯草芽杆菌85. 下列哪种微生物是专性厌氧菌 ---------------------------------- （ ） 86. A 、结核杆菌 B 、白喉杆菌 C 、变形杆菌 D 、破伤风杆菌E 、炭疽杆菌87. 可多途径传播的细菌是： -------------------------------------- （） 88. A 结核杆菌B 脑膜炎球菌C 百日咳杆菌D 白喉杆菌E 肉毒杆菌89. 在无芽胞厌氧菌感染中，最常见的是： -------------------------- （ ） 90. A 脆弱类杆菌 B 消化链球菌C 双歧杆菌D 梭形杆菌E 丙酸杆菌91. 从痰中检出下列哪种细菌时有临床意义： --------------------------- （ ） 92. A 、肺炎球菌 B 、溶血性链球菌C 、结核杆菌D 、流感杆菌E 、脑膜炎球菌93. 下列最适于接种卡介苗的是： ------------------------------------- （ ）94. A 、长期低热、咳嗽，疑为肺结核的患儿 B 、OT 试验阴性的麻疹患儿95. C 、OT 试验阳性儿童 D 、OT 试验阴性儿童E 、OT 试验阴性的细胞免疫缺陷者96. 结核菌素试验观察反应时间应为： --------------------------------- （ ） 97. A 15分钟B 30分钟 C 24小时 D 48~72小时 E 一周以后98. 结核菌素试验阳性解释正确的是： --------------------------------- （ ）99. A 成人可以确诊为结核病 B 表示病人对结核分枝杆菌无免疫力 100. C 阳性表示有传染性 D 表示人体对结核分枝杆菌产生超敏反应101. E 以上均正确102. 下列哪种不属于外毒素： --------------------------------------- （ ） 103. A 、霍乱肠毒素B 、破伤风痉挛毒素C 、肉毒毒素 D 、红疹毒素E 、结核菌素 104. 不经呼吸道感染的病原菌是： ----------------------------------- （ ）105. A 白喉棒状杆菌 B 破伤风芽胞梭菌 C 化脓链球菌106. D 肺炎链球菌E 脑膜炎奈瑟菌107. 不属于金葡萄感染病灶特点的是 ----------------------------------- （ ）A.局限性B.与周围组织分界清C.脓液稀薄D.脓液淡黄E.不易扩散 1.21、1、属于革兰阴性化脓性球菌的是（ ）A 、金黄色葡萄球菌 8、甲型链球菌 &乙型链球菌D 、肺炎链球菌E 、淋病炎奈瑟菌109 .链球菌属中主要的致病菌是（ ）A 、C 群链球菌B 、A 群链球菌C 、D 群链球菌 D 、B 群链球菌E 、E 群链球菌110 .肺炎链球菌的主要致病物质是（）A 、脂多糖B 、SPAC 、荚膜成分D 、M 蛋白E 、杀白细胞素111 .链球菌所致化脓性炎症易扩散的主要原因是该菌能产生（）A 、血浆凝固酶B 、透明质酸酶C 、链激酶D 、链道酶112 .属于革兰氏染色阴性的球菌是（ ）113 .能产生肠毒素的球菌是（ ） A 、链球菌 B 、肺炎链球菌C 、脑膜炎奈瑟菌D 、金葡菌 114 .引起医院内交叉感染最常见的细菌是：（ ） A 、结核杆菌 B 、肺炎球菌 C 、痢疾杆菌D 、金黄色葡萄球菌A 、金葡菌B 、肺炎链球菌C 、溶血性链球菌D 、脑膜炎奈瑟菌£、乙型溶血性链球菌 ）£、乙型溶血性链球菌115.医护人员携带率最高的病原菌是：（A、结核杆菌B、肺炎球菌C、痢疾杆菌D、金黄色葡萄球菌116.葡萄球菌生物学特性不包括（A.革兰氏染色阳性B.有透明质酸组成的荚膜C.可产生脂溶性色素D.无鞭毛E.无芽胞117.链球菌属中主要的致病菌是（）A、C群链球菌B、A群链球菌C、D群链球菌D、B群链球菌E、E群链球菌118.肺炎链球菌的主要致病物质是（）A、脂多糖B、SPAC、荚膜成分D、M蛋白E、杀白细胞素119.链球菌所致化脓性炎症易扩散的主要原因是该菌能产生（）A、血浆凝固酶B、透明质酸酶C、链激酶D、链道酶120.属于革兰氏染色阴性的球菌是（）A、金葡菌B、肺炎链球菌C、溶血性链球菌D、脑膜炎奈瑟菌121.能产生肠毒素的球菌是（）A、链球菌B、肺炎链球菌C、脑膜炎奈瑟菌D、金葡菌122.引起化脓性感染最常见的细菌是：A、葡萄球菌B、脑膜炎球菌C、链球菌D、肺炎球菌E、淋球菌123. 化脓性炎症其脓汁粘稠、病灶局限，这是由于病原菌产生：A 透明质酸酶B 血浆凝固酶C耐热核酸酶D链道酶 E链激酶124.鉴定葡萄球菌有无致病性的重要指标是：A、溶血素B、血凝固酶C、杀白细胞素D、甘露醇试验E、透明质酸酶125. 能引起大叶性肺炎的病原菌是：A金黄色葡萄球菌B肺炎杆菌C肺炎链球菌D草绿色链球菌 E化脓链球菌126.对青霉素产生耐药性最常见的细菌是：A 淋球菌B 脑膜炎奈瑟菌C 化脓链球菌D金黄色葡萄球菌E铜绿假单胞菌127. 化脓链球菌与人肾小球基底膜、心肌组织的共同抗原是：A G蛋白B M蛋白C T蛋白D R蛋白E S蛋白128.下列哪项不是化脓链球菌的致病因素：A溶血素 B红疹毒素 C M蛋白 D链激酶 E肠毒素129. 能引起超敏反应性疾病的化脓性球菌最常见的是：A 金黄色葡萄球菌B 化脓链球菌C 肺炎链球菌D 脑膜炎奈瑟菌E 淋病奈瑟130..医务人员鼻咽部带菌率高的细菌是：A 肺炎链球菌B 脑膜炎奈瑟菌C 化脓链球菌D 葡萄球菌E 铜绿假单胞菌131. 能引起亚急性细菌性心内膜炎的常见细菌是：A金黄色葡萄球菌B甲型链球菌C肺炎链球菌D 绿脓杆菌E 脑膜炎奈瑟菌132.621岁男青年发热.休克。