显微镜技术基本原理讲解学习131页PPT

暗 视 野 照 明 方 式
六、紫外光显微镜
使用紫外光源可以明显提高显微镜的分辨率，对于 生物样品使用紫外光照明还具有独特的效果。生物 细胞中的原生质对可见光几乎是不吸收的，而蛋白 质和核酸等生物大分子对紫外光具有特殊的吸收作 用。因此，可以使用紫外光显微镜（ultraviolet microscope）研究单个细胞的组成与变化情况。
相衬显微镜比普通光学显微镜多了2个部件：
在聚光器上增加一个环形光阑； 在物镜后焦面增加一个相板，相板上有一个环形区，通过
环形区的光比从其它区域透过的光超前或滞后1/4λ，这样 就使通过标本不同区域光波的相位差转变为振幅差。
相衬显微镜照明原理
光通过标本致密区时发生衍射，产生偏折光，相位 和未受影响的直射光相比被推迟了1/4λ。只有未发 生偏折的的直射光可通过相位板的环形区，其它的 偏折光在物镜的后焦面上产生了一个与通过相位板 的环形区的光不同的1/4λ的光程差。两组光在平面 上成像。
如果离光轴越远处放大率越大，则像的外部线段将比中间 线段长，结果形成了枕形畸变，这种畸变称为正畸变。
反之则形成边缘放大率小而近轴放大率大的桶形畸变，称 为负畸变 。
(二)、 色 差
色差(chromatic aberration )是一种由白光或复色光经透镜成像 时，会因各种色光存在着光程差而造成颜色不同、位置不重 合、大小不一致的不同成像效果，从而造成像和物的较大失 真。
如相板的环形区使直射光超前1/4λ，加上开始直射 光超前的1/4λ，直射光共超前1/2 λ，直射光和偏折 光叠加形成的合成波振幅减少，产生暗反差。
如相板的环形区使直射光滞后1/4λ，加上开始直射 光超前的1/4λ，两者相抵直射光不发生变化，直射 光和偏折光无相位变化，形成的合成波振幅增加， 产生明反差。

【实验•探究】练习使用显微镜 二、双目显微镜的操作提示 2.对光调光
1
打开开关，载物台降到最低处、 低倍物镜对准通光孔。
2
调节两个目镜间距离以适应瞳距， 用光源调节旋钮调节视野亮度。
【实验•探究】练习使用显微镜 3.调焦观察
把玻片标本放在载物台上， 1 压片夹压住并正对通光孔。
顺时针转动粗准焦螺旋，使 2 载物台上升至玻片标本尽量
【实验•探究】练习使用显微镜
方法步骤： 1.取镜和安放
取镜：一只手握住镜臂 一只手托镜座放在前胸
安放：显微镜镜座距实验台 边缘大约7厘米
装好目镜和物镜
【实验•探究】练习使用显微镜 一、单目显微镜的操作提示
2.对光调光 转动转换器
低倍镜对准通光孔
大光圈对准通光孔
注视目镜
转动反光镜
2厘米
出现明亮圆形视野
【实验•探究】练习使用显微镜
3.调焦观察
1 玻片正面朝上
2 压片夹压住并正对通光孔
顺时针转动粗准焦螺旋下降 3 镜筒（侧面观察物镜）
4
左眼看目镜，逆时针转动粗 准焦螺旋（镜筒缓慢上升）
5 看见物象微调细准焦螺旋 （使图像变清晰）
⑥如需用更高倍数的物镜 观察，应将要观察的部位 移至中央，再转动转换器 转换物镜，用细准焦螺旋 调焦后观察。
没有螺纹
有螺纹
目镜
物镜
物镜 目镜焦螺旋：使镜筒大幅度升降。
逆时针旋转上升镜筒； 顺时针旋转下降镜筒。
细准焦螺旋：使镜筒小幅度升降。
逆时针旋转上升镜筒； 顺时针旋转下降镜筒。
2.显微镜的机械部分
通光孔：使光线通过
压片夹：固定玻 片标本
转换器：安放和转换物 镜镜头

本
6
反光镜
• 显微镜的照明部
分
• 作用：反射光线 • 有平面镜、凹面
镜两种
7
镜座
• 显微镜的机械部分 • 作用：稳定显微镜
8
镜柱
• 显微镜的机械部分 • 作用：支持作用
9
镜臂
• 显微镜的机械部
分
• 作用：握镜作用
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粗准焦螺旋
• 显微镜的机械部分 • 作用：升降镜筒，
升降幅度较大
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细准焦螺旋
试一试：1、比较反光镜两面的差异 2、转换遮光器上的不同光圈，看看视野亮度的变化
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三、观察
把所要观察的 玻片标本放在 载物台上，用 压片夹压住， 标本要正对通 光孔
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转动粗准焦螺旋， 顺时针旋转，使镜筒缓 缓下降，直到物镜接近 玻片标本为止
注意：此时眼 睛一定要看着 物镜！
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左眼向目镜内 看，同时逆时针方 向转动粗焦螺旋， 使镜筒缓缓向上上 升直到看清物像为 止。再略微转动细 准焦螺旋，使看到
2.用下列四组镜头看同一块血液的玻片标本，其中 可以看到血细胞数目最多的一组为（ A ）
A.目镜——5×，物镜——10× B.目镜——5×，物镜——40× C.目镜——10×，物镜——10× D.目镜——10×，物镜——40×
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3.在载玻片上写下一个小小的字母“d”，用显微镜 察时，会看到放大的图像形状是D( )
A. b
B. d
C. q
D. p
4.当显微镜视野很暗，影响观察时，应调节光亮程 度，此时应采取的措施是( C )
A.缩小光圈
B.换高倍物镜
C.选用凹面镜反光 D.调节准焦螺旋
5.显微镜放大倍数的计算方法是( C )

细胞数除以扩大倍数的平方
从20倍放大到40倍
16个细胞
4个细胞
从20倍到80倍呢？ 1个细胞
题型五：判断污点位置
污物可能存在的位置：物镜、目镜或装片上。
移动装片
污物移动
在装片上
污物不动
转动目镜
污物移动 污物不动 在目镜上 在物镜上
1.有一台显微镜，它有两个目镜和两个物镜，目镜的放 大倍数分别为5×和15×，物镜的放大倍数分别为 10×和40×。请问，这台显微镜的最大放大倍数是
3. 观察同一材料的同一部位时，高倍物镜与低倍物镜
相比，其（ C ）
A、物像小、视野亮，看到的细胞数目多 B、物像小、视野暗，看到的细胞数目少 C、物像大、视野暗，看到的细胞数目少 D、物像大、视野亮，看到的细胞数目多
4.当显微镜物镜由低倍换成高倍后，视野亮度比原来＿
＿暗＿，此时可采用的方法一是换成＿凹＿面＿反光镜，二 是将__光__圈_调大。
在低倍镜下找到物像
移动装片，将物像移至视野中央
转动转换器，换成高倍镜
调反光镜或光圈，使视野亮度适宜。 调细准焦螺旋，使物像清晰
题型二：如何将物象移至视野中央
往右上方移动 移动原则：往哪偏就往哪移动
低倍显微镜下和高倍显微镜下比较
10x10
10x40
4.高倍镜和低倍镜的比较
物像大 看到的细 视野 视野 物镜与载玻 小 胞数目 范围 亮度 片距离
（4）低倍镜下观察 （5）转动转换器换用高倍镜观察
高倍显微镜操作“四步曲”：
低倍镜
视野中央
转换器
答案：低倍镜 视野中央 转换器 细准焦螺旋 反光镜或光圈
细准焦螺旋 反光镜
注意：换用高倍镜后只能转动细准焦螺旋，不能动粗准焦螺旋

显微镜简史
大约在500年之前，简单的玻璃放大镜 就已经发明出来了。这种放大镜为凸透 镜（中间比边缘厚）。将放大镜放于标 本与眼晴之间即可进行调焦。这种“简 单显微镜”可通知过增加视角将图像放 大并成于视网膜上。
在1600年，通过Anton von Leeuwenhoek的 努力使该类“简单显微镜”或称之为放 大玻璃的性能达到了最完善的状态。这 种简单显微镜可用来观单细胞的动物 （他称这为微生物）及一些较大的细菌。 这类产品见图3。由一个十分靠近人眼 的放大镜将标本成像成于标本同一边， 该图像看起来距人眼大约为10英寸远。 该像为虚像，不能被胶片捕获。
显微镜简史
前面的章节涉及了显微镜的基本概念以及 从17世纪到现代的简要发展史。事实上， 对于显微镜来讲，作为一种常见的科学仪 器，显微镜广泛应用于多类科研、常规检 查及教育的各个领域，如对科学家来说， 显微镜及显微摄影术很早就是一个有用的 科研工具了。同时，在显微镜的发展过程 中，也极大地推动了细胞学、微生物学、 遗传学、病理学、材料学以及最新的半导 体产业的发展。在生命之谜的研究上显微 镜也起了很大的作用。
显微镜简史
因为很多的使用者均是用眼直接对显微镜进行观察，所以了解显微镜与眼晴之间的 相互关系显得很重要。人眼具有区别可见光谱范围可从紫光到红光，但人眼无法区 别紫外光和红外光。人眼也可感觉从黑色到白色之间的所有的亮度灰阶。这样，对 于人眼可看到的图像来说，它应具有可见光谱范围内的颜色变化及光亮度变化。人 眼视网膜上接受光颜色的传感器为锥细胞，能区别光亮度而不能区别光颜色的为杆 细胞。这些细胞位于人眼内后面的视网膜上。眼的前面（见图1）包括虹膜、弯曲
显微镜简史
在19世纪末期，由于在显微镜的制造上 产生了较为激烈的竞争及发展，制造成 本成为一个重要的因素。黄铜作为一种 显微镜的制造材料已显得十分昂贵。用 黄铜制作的显微镜主体及其它零件需要 冗长的加工及抛光工期。为了降低成本 显微镜制商开始在显微镜的主体、载物 台及其它外露的非运动部件上采用喷漆 的工艺方式。

按放大倍率 A.低倍物镜：放大倍率1X-5X，数值孔径 0.04-0.15 B.中倍物镜：放大倍率>5x-25x,数值孔径 0.15-0.6 C.高倍物镜：放大倍率>25x-100x,数值孔径 0.60-1.40
根据使用方法
A. 浸液系物镜：这是物镜与标本之间加入某 种液体的物镜。根据浸液的种类，可分 为油 浸系和水浸系两种。使用油浸系物镜时，通 常加入柏木油（折射率为1.515）；使用水浸 系物镜时，加入水（折射率为1.33）。此外， 还有甘油浸或石腊油浸系的特殊物镜。
显微镜的基本知识与使用
工欲善其事 必先利其器
显微镜的基本结构（两大部分）
光学系统 机械装置
一、显微镜的光学系统（四个主要部件）
物镜、目镜、聚光镜和光源系统。 其次还包括滤光片、载玻片和盖玻片。
（一） 物镜
物镜是显微镜的最主要部件，放大及分辨作用。其优劣直 接决定了显微镜的主要光学性能。
为了校正象差和色差物镜都由多块透镜组成，而且放大倍 数越高，结构越复杂。
一般的物镜所观察到的像面总是有些弯曲，平场物镜可以 较好地校正像面弯曲，使整个视场平坦,但其结构也相应 地复杂些。
有的油镜内还装有弹簧，在物镜前端受压时，镜头可以退 缩回来。这样一方面可以保护镜头，另一方面也不会把载 玻片和盖玻片压碎。这种物镜称为弹簧物镜。
1.物镜的分类
按象差（三类） ：
A.消色差物镜：这是最常见的物镜，虽然能完 全校正光谱中红光和F青光的色差，但还不能 完全矫正其他色光的色差。
B.复消色差的物镜：透镜一部分用荧石制成， 性能很高，能使光谱中的红光、蓝光和黄光在 同一焦平面上成象。
C.平场物镜：由于场曲的存在而使视场边缘的 象模糊不清，研制了平场消色差物镜和平场复 消色差物镜。