脐血间充质干细胞的体外扩增及向类肝细胞分化的实验研究

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人脐血间充质干细胞治疗肝纤维化的研究进展论文

人脐血间充质干细胞治疗肝纤维化的研究进展【中图分类号】r329 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）13-0068-02研究发现，具多向分化潜能的间充质干细胞（mesenchymal stem cells，mscs），脐带间充质干细胞具有无限增殖和多项分化潜能，可以向肝细胞分化，能在体外自我增殖，并可以定向分化为内、中、外3 个胚层来源的多种细胞，如骨、软骨、脂肪、神经及类肝细胞等，有望用于肝脏疾病的治疗。

脐带来源广泛，无伦理道德方面的争议。

如果能够利用易于获得的mscs在体内外定向分化为肝前体细胞，则可做为肝细胞移植的一个主要来源。

不过脐血中的间充质干细胞含量很少，如何分离纯化？如何使其较长时间保持干细胞特性？如何诱导其向肝细胞分化？据研究表明，人脐血间充质干细胞能够贴壁生长，而体外培养的贴壁细胞是一个异质细胞群，可能含有多种细胞成分。

一般呈现类纤维细胞形态，并可分裂增生，且同时具有间皮细胞标志的贴壁细胞，如cd44+ 细胞，可以初步判断为是mscs。

之前，报道hucmscs可采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离获得，并可冷冻保存；复苏后在肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子4 的联合诱导下，能定向分化为表达ck8&18，并合成白蛋白和糖原的类肝细胞，类肝细胞可能具有诱导人脐血间充质干细胞向肝系细胞定向分化的作用。

脐血中存在mscs， ucbmsc 形态与mscs相似，倍增时间为48 h ，传代后形态基本无变化； ucbms c 不表达cd34及cd45，强表达cd44及cd166 ，与mscs的表面抗原特性一致，是脐血中区别于造血干细胞的一群处于未分化状态的非定向干祖细胞。

本研究先通过对hucmscs 的体外培养，对hucmscs进行纯化、扩增和鉴定；初步掌握hucmscs分离、培养及冻存的技术和方法，探索有效诱导hucmscs 分化为肝前体细胞的途径；然后，将诱导和未诱导的hucmscs在体外与人肝星状细胞（hsc）共培养，为下一步研究其在体内通过不同途径移植到肝纤维化鼠体内，以观察其对肝功能的修复情况及对肝纤维化进程的影响奠定基础。

脐血间充质干细胞在神经系统疾病中的研究进展及应用前景

多向分化潜能，后的研究相继报道了从骨髓中可随
因疗法的一种理想的靶细胞，生物学和组织工程在中具有巨大的科学价值，为ＭＳｓ典来源的骨作Ｃ经髓间充质细胞已被广泛应用于研究领域。新近研
２１脐血采集．
选择健康足月产或早产妇，胎待
儿娩出后，在距胎儿５１的脐带处进行双结扎， —７ＣＩＴ
剪断脐带，消毒母侧脐带断端，刺脐静脉，含抗穿用凝保护液的一次性负压采血袋抽取５左右的脐０ｍｌ带血，４℃冰箱保存，标本在４ｈ内进行处理。２．脐血ＭＳｓ２Ｃ的分离主要有密度梯度离心法、
１脐血间充质干细胞的发现
作为人成体干细胞的一种，有自我更新、度增具高殖和多向分化潜能的特性，且其应用避免了胚胎并
干细胞所带来的伦理问题，１成为细胞疗法和基３渐
１７９６年，ｒｄｎｔｉ先研究发现骨髓中存Ｆｉｅｓｅｅｎ首在一种纺锤形的成纤维细胞集落，有自我更新和具
胞［。而且脐血取材容易，源丰富，疫源性较来免弱，耐受更大程度上的ＨＬ能Ａ配型不符，就为脐这
２脐血间充质细胞的分离培养
血Ｍｓ作为 “ 种子 ” 细胞治疗多种系统疾病提供了
新的思路，其由原来普遍应用于血液系统疾病扩使展到多种疾病的研究和治疗中，一步扩展了脐血进

人脐血CD34^+造血干细胞的分离和体外扩增培养问题

３讨论
脐带血，指的是胎儿娩出、脐带结扎并离断后，残留在脐带内以及胎盘近胎儿侧血管内的血液，其中含有大量干细１材料与方法胞，包括造血干细胞和间充质干细胞等。干细胞具有较强的１．１材料自我复制能力。胚胎干细胞在一定的环境条件下可以分化１．１．１ＵＣＢ来源：人脐带血由相关医院妇产科提供。为多能干细胞。造血干细胞是多能干细胞的一种，是骨髓中１．１．２仪器和药品：使用的主要仪器包括细胞培养箱，超净的干细胞，它具有自我更新的能力，也能够分化成为各种血工作台；细胞培养板，流式细胞仪；显微镜，照相机；电子天细胞前体细胞并最终分化为各种血细胞，如红细胞、白细胞和血小板。脐带血可以重建骨髓造血和人体免疫，多用来治平，离心机；低温冰箱等。使用的药品主要包括细胞因子ＳＣＦ、ＩＬ一３、ＩＬ一６、Ｇ— 疗骨髓衰竭以及严重的血液疾病，在一些遗传病和严重的免ＣＳＦ、ＥＰＯ；青霉素、链霉素；ＮａＣ１、ＫＣＩ；甲醇、乙醇；Ｎａ２ＨＰＩＭ、疫缺陷疾病中也被广泛应用，并且获得了一定的成功。有研ＫＨ２Ｐ０４；Ｆｉｃｏｌｌ淋巴细胞分离液；胎牛血清；ＤＭＥＭ培养液。究表明脐带血中含有大量的干细胞，无论是对外界刺激的反１．２方法：采用胎盘娩出后采血法采集脐带血，要求孕妇无应还是增值能力都比骨髓干细胞强。在体外生长培养中也产科，内科合并症以及其他血液疾病。采血过程由助产士帮显示出由于骨髓干细胞的特点，比骨髓干细胞生长的更好，助完成。在无菌条件下抽取脐带血，注入无菌采血袋后置于即更适合做体外扩增培养… 。脐带血不仅含有丰富的干细４℃保存。２４ｈ内分离制备ＭＮＣ悬液后用Ｉｓｏｌｅｘ５０免疫磁胞，其分泌生长因子的能力也很强。此外，其端粒酶活性也珠分离系统收集ＣＤ３４造血干细胞，用流式细胞仪检测收远远高于骨髓和外周血干细胞，这些特点导致了脐带干细胞集的ＣＤ３４纯度后行体外扩增培养。通过血液涂片进行形扩增会有更强的分裂存活能力。态学观察。根据细胞计数调整细胞悬液量，加入胎牛血清和造血生长因子分为刺激增殖的刺激因子和维持细胞存ＤＭＥＭ溶液。在２４孔培养板上做５组不同细胞因子组合的活的存活因子。根据各种生长因子的不同功能，合理搭配可ＣＦ、ＩＬ一３、ＩＬ一６、Ｇ— 培养孔，以不加细胞因子的培养孔作为生长对照，每组重复以起到协同作用。本研究结果表明Ｓ三次，共培养６周。每周计数单个核细胞数和集落形成单位ＣＳＦ、ＥＰＯ５种细胞因子联合应用诱导ＣＤ３４造血干细胞体且ＣＤ３４造血干细胞体外培养第１３（ＣＦＵ）。细胞因子分组为：（１）ＳＣＦ＋ＩＬ一３＋ＩＬ一６；（２）ＳＣＦ外扩增培养效果最好，脐带血造血干细胞的研究有不少成＋ＩＬ一３＋Ｇ—ＣＳＦ；（３）ＳＣＦ＋ＩＬ一６＋Ｇ —ＣＳＦ；（４）ＳＣＦ＋ＩＬｄ时达到高峰。目前，３＋ＩＬ一６＋Ｇ—ＣＳＦ；（５）ＳＣＦ＋ＩＬ一３＋ＩＬ一６＋Ｇ —ＣＳＦ＋果，但至今成功移植的例子却很有限。一方面是因为干细胞ＥＰＯ。其中浓度分别为：ＳＣＦ１００ｎｇ／ｍＬ、ＩＬ一３１０ｉｒｇ／ｍＬ、ＩＬ的数量较少；另一方面则是由于脐带干细胞移植入成人骨髓６５０ｎｇ／ｍＬ、Ｇ —ＣＳＦ８０ｎｇ／ｍＬ、ＥＰＯ２Ｕ。的成功率较低Ｊ。所以，如何提高脐带血造血干细胞的移植１．３数据分析：用ＳＰＳＳ１３．０软件对数据进行统计学分析，成功率，如何在体外扩增和培养脐带血造血干细胞就成为了也是其进一步发挥于临床医学应用所要面对的对数据进行卡方检验。剂量资料采用平均数标准差表示。研究的热点，Ｐ＜０．０５表明差异具有统计学意义。重费挑战。参考文献

人脐血间充质干细胞的体外培养

１１材料．
无菌条件下取本院正常足月剖腹产胎
的ＭｓｃｋＴｅｅｕＭ进行培养，ｎ观察细胞贴壁延伸及原代培养时间。⑤观察首次换液时间对细胞生长的影响：行以上研究时，进分别于接种后第２—７ｄ首次换液，将换下的液体转人新瓶继续培养至少６ｄ观，察是否仍有贴壁细胞，以确定首次换液时间。⑥观察不同培养基对细胞生长的影响：８份脐血，取以
１ｎ分离，获得的单个核细胞均分，１×１５ｍｉ将以０／
ｍｌ１×１。ｌ１×１ｍｌ１×１ｍｌ种于ＦＳ包、０ｍ、０／、０／接Ｂ
性，为其在组织工程方面的应用进行初步探索。
１材பைடு நூலகம் 与方法
被的培养瓶中。首次换液时间３ｄ用含１％ＦＳ，０Ｂ
液面清晰，稀释脐血与淋巴细胞分离液的柱高比为
３— ：。用Ｆｃｌ以适当的速度及时问离心，５】ｉ法ｄ取中间界面白膜层，ＰＳ后吹打，１５０ｒｍｉ加Ｂ以０／ｎ离
心５ｍｎ弃上清，ｉ，共洗涤２次，后加入培养基；以一定密度接种于培养瓶中，３置７℃ 、积分数为５％体的ＣＯ饱和湿度的孵箱中培养，细胞到８％融合时０用０２％胰酶和００％乙二胺四乙酸（：）．５．４１１消化，１：传代培养。２１２方法 ①不同离心速度及时间分离脐血单个．
以往研究 ¨ 表明，血中存在间充质干细胞脐

维甲酸联合神经生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究

摘要目的：讨脐血间充质干细胞（Ｃ）探ＭＳｓ向神经样细胞定向诱导分化的条件及方法，
以明确其神经分化潜能。方法：将人脐血间充质干细胞体外培养扩增、保存后，第５代的ＭＳｓ取Ｃ
分别用维甲酸（Ａ）维甲酸联合神经生长因子（Ｆ）Ｒ、ＮＧ诱导方法向神经样细胞诱导，导分化期诱
间观察细胞形态变化，比较表达神经元特异性烯醇化酶（ｓ并ＮＥ）ｍＲＮＡ、质纤维酸性蛋白胶
（ＡＰ）ＧＦｍＲＮＡ的差异。结果：两种不同诱导方法均能诱导细胞发生典型变化，对照组未发现神
经样细胞生长。免疫组化法显示三种诱导方法诱导后均表达Ｎｓｉ、Ｅ、ＡＰ，ＧＦｅｔＮＳＧＦｎＮ＋Ｒ组Ａ多于Ｒ组。ｅｌｔ — Ｃ显示诱导组及对照组均有ＮＳＮＡ、ＡＰｍＲＡＲａ— ｍｅＲＴＰＲｉＥｍＲＧＦＮＡ表达，但
【中图分类号】Ｒ７１０【４．５文献标识码】Ａ
【文章编号１１０ — ３７２１）４００ —４００７７（０００ — ４４０
Ｔｈｅｅｐｒｍｅｎｒｔｎｉｃｄａｖｒｇｏｈｆｃｏｎｄｃｘｅｉｎｔｏｅｉｏｃａｉｎｄｎｅｅｒｗｔａｔｒｉｕｅ
ＤｅｒｍｅｔｏｆＮｅｒｌｇｙ，ＴｈｅＡｆｉｉｔｄＨｏｓｔｌｏｆＮｏｒｈｐａｔｎｕｏｏｆｌａｅｐｉａｔＣｈｉａｅｉａｎａＣｏｌＭｄｃｌＣｏｌｅｌｇｅ（ｎｈａ６００）Ｔａｇｓｎ０３０

鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化

《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2018)13-02027-062027www.CRTER .org·研究原著·陈俊，男，1991年生，湖北省随州市人，汉族，徐州医科大学在读硕士，主要从事脐血间充质干细胞相关研究。

通讯作者：杨自金，主任医师，硕士生导师，徐州医科大学附属连云港医院(连云港市第一人民医院)儿内科，江苏省连云港市 222002中图分类号:R394.2 文献标识码:A稿件接受：2017-12-18Chen Jun, Master candidate, Department of Pediatrics, Lianyungang Hospital Affiliated to Xuzhou Medical University (First People’s Hospital of Lianyungang), Lianyungang 222000, Jiangsu Province, ChinaCorresponding author: Yang Zi-jin, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Pediatrics, Lianyungang Hospital Affiliated to Xuzhou Medical University (First People’s Hospital of Lianyungang), Lianyungang 222000, Jiangsu Province, China鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化陈俊，杨自金(徐州医科大学附属连云港医院(连云港市第一人民医院)儿内科，江苏省连云港市 222002) DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.0492 ORCID: 0000-0002-3762-1586(陈俊)文章快速阅读：文题释义：鼠神经生长因子：是从小鼠颌下腺分离纯化出的一种细胞因子，对神经元有营养支持作用，能够促进受损神经的修复，对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。

低氧促进人脐带血间充质干细胞向神经细胞分化

ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｂｌｏｏｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｄａｎｄｄｉｆｅｒ－
ＷａｎｇＨａｉｙａｎ，ＷａｎｇＧａｎｇ，ＺｈａｎｇＸｉａｏｙａｎ，ＬｉＪｕｙｉｎｇ，ＨｅＪｕｘｏｌｏｇｉｃａｌｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＱｉｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ）
导成神经细胞的过程中，低氧诱导的间充质干细胞向神经细胞的分化能力增强。神经细胞表面标记Ｎｅｓｔｉｎ、ＮＦ — Ｍ表达阳性。与常氧诱导的脐带血间充质干细胞组比具有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论
关键词
低氧条件可以提高脐带血间充质干细胞向神经细胞分化的产率。低氧脐带血间充质干细胞神经细胞分化
ｅｎｔｉａｔｉｏｎ —ａｂｉｌｉｔｙｏｆｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｒｏｇｕｐｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｒｏｇｕｐ．ＲｅｓｕｌｔＴｈｅ
王海燕，王刚，张晓岩，李菊英，贺菊香
（青海大学医学院病理教研室）

人脐血间充质干细胞定向成骨分化的研究进展

干细胞是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的细
胞，为胚胎干细胞和成体干细胞。间充质干细胞（Ｃ）分ＭＳｓ属于成体干细胞的一种，早在骨髓中被发现 … 。但由于骨最
髓源性ＭＳｓ在高度病毒污染的可能，随着年龄的不断Ｃ存且
［图分类号］Ｒ２．中３９２
［献标识码］Ａ文
［章编号］１０８４（０２１文０８— ８９２１）３—１７０４５— ３
高密度接种的相关报道。于海微等以５×１。密度接０Ｌ种时细胞一直无法传代，５×１Ｌ的密度接种时细胞贴以０壁时间、出现伸展时间及原代培养时间均短于其他接种密度，有显著性差异（００）Ｐ＜．５。孙海梅等在研究相关问题时，
法，现有无血清均能培养出ＭＳｓ只不过无血清培养，胞发Ｃ，细
的方法分离脐血，果可得到明显的白膜层细胞，左右达结２周到８％～９％汇合。也有利用沉淀法分离脐血的报道，取００并得了良好的分离效果。迟作华等采用羟乙基淀粉沉淀法
人脐血间充质干细胞定向成骨分化的研究进展
鲁俊山王建伟。马勇。，，

人脐血间充质干细胞体外向神经元样细胞分化的实验研究

ｍｅｉｍ．Ａｆｅｒａｅｔ０ｆｌＬｒｔｏｃａｉｎ１／／ａｉｉｒｂａｔｇｏｈｆｃｏ，ｄｕｔｒｔｅｔｄｗｉｈ３ｌ／ｅｉｉｃｄａｄＬＬｂｓｃｆｏｌｓｒｗｔａｔｒｍｏｎ０ｇｂ
ｓｅｃｌｓｉｕｃｄｉｏｎｅｒｔｍｅｌｎｄｅｎｔｕｏｎ—ｉｅｌ．ＭｅｈｏｓＭｏｎｕｌａｅｌｒｒｐｒｄｆｏｈｐｒｎｉｅｌｋｅｃｉｓｔｄｎｏｃｅｒｃｉｓｗｅｅｐｅａｅｒｍｅａｉｚｄｈｕｎｍｂｌｃｌｏｄｂｌｏｄｓｍｐｅｅｒｆｇａｉｏｅｍａｕｉｉａｃｒｏａｌｓｂｙｃｎｔｉｕｔｏｎｖｒＬｙｍｐｈｒｐａｄｃｌｕｒｄｎＭｅｅＣｕｌｏｐｅｎｕｔｅｉｓｎｔ
［ｓｒｃＡｂｔａｔ］ＯｂｅｔｖｎｅｔｇｔｈｅｓｂｌｙｏｕｎｕｉｃｌｃｒｌｏｓｎｈｍａｊｃｉｅＴｏｉｖｓｉａｅｔｅｆａｉｉｔｆｈｍａｍｂｌａｏｄｂｏｄｍｅｅｃｙｌｉｉ
离心方法分离人脐带血单个核细胞，ＭｅｅＣｈ培养液体外扩增生长传代培养，用ｓｎｕ于倒置显微镜下观察其生长特性。取第３代的脐血间充质干细胞，１ｇＩ成纤维细胞生长因子和３ｍｏ／反式维甲酸诱导培养的细胞向神经细胞分用０／０ｂｌＩ全ｃ

脐带血造血前体细胞在间质干细胞微环境中的增殖和分化特性研究

ｃａｅｓ（Ｃ）ｆｍｃｒｌｄｗｒｅｐｎｅＣｍｃｏｎｉｎｅｔｉｔｅｐｅｅｃｆｔｅａｔｒＳＦ，ｌｒｌＭＮｓｒｏｄｂｏｅｅｘａｄｄｉＭＳｉｅｖｒｍｎｒｓｎｅｏｅｃｌｆｏ（Ｃ）ｅｃｌｏｏｎｒｏｎｈｓｍｌｃＦＭＳ—ｌｅｔｏｉｅｋｎｓｉｎ（ｌ）ｈｏｂｐｉｉ（Ｐｉｒｓｉａｅ３ｌａｄＦｔＬ，ｔｒｍｏｏｅｎＴＯ）ａｄＩｋｙｎｇ３ｔｎＬ一６．ＭＮｏｎｄｃｌｎＣｃｕｔａｏｏｙ—ｆｒｉｇｃｌｎｏｍｎｅｌ（Ｆ）ｃｌｒｗｒｐｒｒｅｔｅｋ１２３ａｄ４ＥＵＴ：（）ＴｅｎｍｅｆＣｃａｅｎａｈｄ１８ＣＣｕｔｅｅｅｅｆｄａｗｅ，，ｎ．ＲＳＬＳ１ｈｕｂｒｓｉｒｓｄａｄｒｃｅ０ｕｏｍｏＭＮｎｅｅ
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志
ＣｉｅｅＪｕｎｌｆａｏｈｓｌｙ０７２（）ｈｎｓｏｒａｏｔｐｙｉｏ２０，３５；Ｐｈｏｇ
二
・
９９・５
［文章编号］１０４１（０７００９０００－７８２０）５— ９５— ４
ＣＥＮｎ．ＬＮＭａＨｏｇＩｏ—ｆｎａｇ（ｅａｔｅｔｆＣｅｏｈｒｐ，Ｔｅｆｌｔｕｏｏｈｌｕｎｘｄａｎｖｒｔ，Ｎｎｉ３０１ｈｎ；ＤｐｒｎｈｍｔａｙｈｆｉｅＴｍｒｓａ，ＧａｇｉｍｏｅＡａｄｉＨｐＭｅｉｌＵｉｓｙａｎｎ５０２，ＣｉａｃｅｉｇＤｐｒｅｔｆＨｍｔｌｙｈｉｔｆｌｔｏｉｌｚｊｇＵｉｒｔ，ａｇｈｕ３００，ｈｎ）ｅａｔｎｅａｏｇ，ＴＦｒｆｉｅＨｓｔ，ｈ￣ｎｎｖｓｙＨｎｚｏ１０３ＣｉｍｏｏｅｓＡａｄｐａｅｉｅｉａ［ＢＴＡＣＡＩ：ｏｉｅｔａｅｔｅｐｏｉｒｉｎｉｅｅｔｔｎｐｔｒｓｆｅａｐｉｉｐｅｕｓｒｆｍＡＳＲＴ］ＭＴｖｓｇｔｈｒｆａｏａｄｄｆｒｎａｏａｅｍｔｏｅｃｒｃｒｏｏｎｉｌｅｔｎｉｉｔｏｈｎｏｔｓｒ

脐血间充质干细胞的培养与分化②：本刊中文部

ＺｎＤ．ａＰｎｍａｑｌｒｆｒｔｒｔａｌｎｖｓａｌｏｔａｎｅｏｓｈａｇｅｔｌｃｕｔｅｏａｅｉａｄｉｕｃｒｉｌｕｒｎ：Ｍｅｈｏｏｉａｃｒｃｅｉｔｓｕｎｃｔｏｄｌｇｃｌｈａａｔｒｉｓｃ
— —
ＷＷＷ．ＲＴＲ．ｒＣＥｏｇ
原代培养大鼠视网膜与视皮质神经元的方法学特点 ☆
张荻’ ，吴小影２，刘双珍（河南省眼科研究所，河南省郑州市４００；中南大学湘雅医院眼科，湖南省长沙市４００） ’ Ｉ５０３１０８
适合应用于临床。Ｌ人肝细胞系源于正常成Ｏ２
人肝细胞，是一种高分化的人肝细胞系，各项
生物功能较好。
实验在查阅大量文献的基础上对培养基的选
择、离心速度及时间、接种密度、生长因子的选
９香丹注射液诱导人脐血间充质干细胞向神
便，且人脐血细胞相关的免疫发育尚未成熟，类似于胚胎细胞，不易发生免疫排斥反应，更
化能力更强；淋巴细胞的免疫功能不够成熟，移植物抗宿主病发生率较低；微生物和肿瘤细胞污染的可能性小。但目前存在的问题是脐血
摘要
背景：经元的原代培养是进行神经系统结神
构和功能研究的一种重要手段。果能建立如
张荻，吴小影，刘双珍原代培养大鼠视网膜与视皮质神经元的方法学特点【】中国组织Ｊｌ工程研究与临床康复，２１，４１）００１（４：

人脐带血间充质干细胞的分离培养研究与展望

获取的单个核细胞，经椎虫蓝染色进行活细胞计数，每毫升脐血收集的单个核细胞（．２２１）０，Ｏ４～．２ ×１
但由于骨髓源性ＭＳ存在高度病毒污染或其他污Ｃｓ染的可能，随着年龄的不断增长其细胞数量和扩且增、分化能力出现明显下降趋势，因此，找一种能替寻
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四川解剖学杂志２００７年
第１卷
第２期
・
・２・９
综述・
人脐带血间充质干细胞的分离培养研究与展望
苏维祥杨静爱麦秋萍，，综述，解继胜瑞雅。黄审校
（．江民族医学院２０临床医学系本科生；．１右０４级２右江民族医学院组胚教研室；
平均为（．６．５ ×１肝素钠采血体积３￣５１４士０２）０，５５ｍｌ经密度梯度离心法分离新鲜脐带血，取的单个，获核细胞，经椎虫蓝染色进行活细胞计数，毫升脐血每收集的单个核细胞（．１．５ ×１平均为（．１２３～４０）０，３１ ±０３）０，者相比差异具有显著性意义（一．１ ×１两ｔ００１Ｐ．５，．１，（００）即肝素钠抗凝获取的单个核细胞数明显高于枸橼酸钠所获取的细胞数。１２不同抗凝剂对获取的单个核细胞细胞生长状．
代骨髓ＭＳｓ并可弥补其缺陷的间充质干细胞来Ｃ，源，越来越受到各国学者的关注。人脐带血已（ＨＵＣ）Ｂ是胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液，有丰富的干细胞和祖细胞，含主要包含造血干细胞和ＭＳｓＣ。ＨＵＣＢ优势［在于：１脐血】］（）从分娩后的胎盘、脐带残端收集，其过程比从骨髓或胚胎获取干细胞简单。对于新生儿及产妇均无任何痛苦和不良作用，于接受。（）血受胎盘屏障的易２脐保护，其成分被病毒、细菌污染的几率低。（）血免３脐疫系统的原始性，降低了移植后受体的排斥反应。（）血包含丰富的ＭＳｓ仅可用于造血系统疾４脐Ｃ不病，也可用于非造血系统疾病的治疗。（）血中含５脐有ＭＳｓ为原始，Ｃ更具有更强的分化能力。（）涉６不及社会、伦理及法律方面的诸多争论。（）７收集的脐血不仅可做异基因移植的供体，而且还可将之低温保存数十年，用于自体移植治疗相关疾病。（）８随着世界各国脐血库的建立完善及脐血体外扩增技术的成熟，为脐血的临床应用奠定了坚实的基础。故脐血干细胞的作用越来越突出，可作为一种新的替代细胞来源用于各系统疾病的细胞移植及基因治疗。１人脐带血的采集选择健康足月产或早产妇，儿娩出后（胎胎盘仍在宫腔内）在距胎儿５ｃ的脐带处进行双结扎，，￣７ｍ剪断脐带，消毒母侧脐带断端，刺脐静脉抽取脐带穿血，经抗凝剂抗凝，℃冰箱保存，４并于１２ｈ内进行分离。１１不同抗凝剂对获取的单个核细胞数的影响．国内学者孙海梅等［分别用复方枸橼酸和肝素２］钠两种抗凝剂各采集人脐血６份，复方枸橼酸采血体积３￣８，密度梯度离心法分离新鲜脐带血，０２ｍｌ经

多组学整合解析脐带间充质干细胞扩增后异质性介绍演示培训课件

扩增后的脐带间充质干细胞中，不同亚群的迁移速率可能存在差异，影响整体细胞迁移能力。
异质性导致侵袭性差异
异质性使得细胞在迁移过程中可能产生不同的侵袭性，导致部分细胞具有更强的侵袭能力，可能对周围组织产生不良影响。
06
结论与展望
研究结论总结
脐带间充质干细胞扩增后存在异质性
通过多组学整合分析，我们发现脐带间充质干细胞在扩增过程中会出现明显的异质性，表现为基因表达、蛋白质组学和代谢组学等多个层面的差异。
特性
具有自我更新、多向分化潜能和免疫调节等特性，可分化为多种组织细胞类型，如骨、软骨、脂肪和神经等。
脐带间充贴壁法、酶消化法或流式细胞术等方法从脐带中分离出间充质干细胞。
培养条件
在含有适当生长因子和细胞因子的培养基中，进行原代培养和传代培养，以获得足够数量的细胞用于后续实验。
扩增是UC-MSCs应用于临床治疗的关键步骤，但扩增过程中细胞的异质性变化可能影响其治疗效果和安全性。
因此，解析UC-MSCs扩增后的异质性变化，对于优化其扩增方法和提高临床应用效果具有重要意义。
国内外研究现状及发展趋势
目前，国内外学者已采用基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学等多组学方法对UC-MSCs的生物学
脐带间充质干细胞的应用前景
组织工程和再生医学
细胞治疗
用于构建组织工程化组织或器官，治疗各种组织缺损和功能障碍。
通过移植脐带间充质干细胞或其分化产物，治疗多种疾病，如血液系统疾病、神经系统疾病和自身免疫性疾病等。
药物筛选和基因治疗
生物医学研究
作为药物筛选的模型或基因治疗的靶细胞，用于研究新药或基因治疗策略。
代谢产物的变化与基因表达的改变存在关联，一些代谢产物可能作为信号分子参与基因表达的调控，从而影响细胞的生物学特性。

脐带间充质干细胞的研究进展

更短，具有更强的扩增能力，７代后可扩增３００倍；Ｌｕｎｄ等 ” 的研究认为一条人脐带共可扩增到１０个细胞；ＵＣ．
中华临床医师杂志（电子版）２０１２年３月第６卷第６期ＣｈｉｎＪＣｌｉｎｉｃｉａｎｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｒｃｈ１５，２０１２，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．６
脐带包含丰富的干细胞，每条脐带的ＭＳＣｓ的数目４×１０，密度为（１Ｏ～１５）×１０／ｃｍＪ，而每份脐血中的数目是（１—５）× １０，骨髓中的数目是每１０单个核细胞中含有１—１０个
ＭＳＣｓ［５２－５４］。
三、ＵＣ—ＭＳＣｓ的生物学特性由于脐带基质细胞的结构特征和主要功能与成纤维细胞相似，早期认为这些细胞是 “特殊的成纤维细胞 ”。以后进一步的研究示，这些细胞既不是成纤维细胞也不是平滑肌细胞，而是肌纤维母细胞，在超微结构上具有平滑肌细胞和成纤维细胞的特点，表达收缩蛋白如肌动蛋白、非肌球蛋白、索蛋白和ｄ－平滑肌肌动蛋白（肌纤维母细胞的标志）［２ｏ，３５，３９］，而肌球蛋白不表达。另外这些细胞还表达波形蛋白，这种中间丝蛋白表达于间充质来源的细胞如成纤维细胞，而不表达于平滑肌细胞。共表达波形蛋白和索蛋白提示这些细胞本质上是肌纤维母细胞。
时间从３０ｍｉｎ＿４至１６ｈ＿舶不等，取决于消化液的剂量和组织块的体积。然后用孔径７０—１００ｍ的滤网过滤以去除组织碎片。也可以不用酶消化，而采用组织块培养法。

人脐血间充质干细胞体分离、培养及向脂肪细胞分化的实验研究

ＭＳＣｓｄｉｆｒｎｔａｅｉｏｄｐｏｙｅｓｎｄｌｐｄｒｌｔｗｅｅｃｒｅｒｄｆｅｅｉｔｄｎｔａｉｃｔａｉｉｄｏｐｅｓｒｓａｌｔｅｂｙｏｉｅｌｄ０ｓａｎｎｈｅ４ｈａｙｎｒｔｉｏｔ１ｔｄｉ

摘要目的：讨脐血间充质干细胞（ＢＭＳｓ探ＵＣ — Ｃ）的分离培养及向脂肪细胞的分化潜
能。法：足月儿脐血中获得间充质干细胞，外培养传代，方从体流式细胞检测细胞表面及抗原细胞
周期；１Ｍ地塞米松、０ｇｍｌ１甲基一一丁基一嘌呤（ＢＭＸ）５ｇｍｌ坏血酸的予Ｏ１０￣／一３异黄Ｉ、０￣／抗
ＤｅａｔｅｄａｒｃＧｕａｇｘｐｒｍｎｔｏｆＰｅｉｔｉｓ，ｎｉＺｈｕｎｇＡｕｔｏｍｏｏｅ’ ｓｔｌ（ｎｎｎｇ５０）ａｏｎｕｓＰｅｐｌｓＨｏｐｉａＮａｉ３０２１
ＤｅｇＹｉｅＴａａｌｎｇｎｎｙｏＹｎｉＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｅｔｖｊｃｉｅ：Ｔ０ｅｔｂｉｈｍｅｈｄｏｓｐｒｔｍｅｅｃｙｌｔｍｅｌｆＯＴｈｕｎｓａｌａｓｔｏｔｅａａｅｓｎｈｍａｓｅｃｌｒ１ｍａｓＩ
ｕｂｌａｏｄｂｏｄＵＣ— Ｓ）ｕｔｒｍｉｉｌｒｌｏ（ｃｃＭＣｓ，ｃｌｕｅＵＣ— Ｓｎｖｔｏ，ａｄｓｕｙｉｓｂｏｏｉａｃａａｔｒｓｉｓＭＣｓｉｉｒｎｔｄｔｉｌｇｃｌｈｒｃｅｉｔｃ．Ｍｅｈｄ：ｔｏｓ

脐血间充质干细胞体外培养的细胞学特性研究

【要】目的摘研究脐血间充质干细胞（Ｃ在体外扩增的细胞学特点。方法用梯度离心和贴壁培养法ＭＳ）
获取脐血间充质干细胞，体外进行传代和培养，第１、５代和第１细胞，噻唑蓝还原法（在取代第Ｏ代用ＭＴＴ）验检实测的表达，流酶联免疫吸附试验检测细胞因子的分泌情况，在各代之间进行并比较。结果第１Ｏ代ＭＳ的分泌功能和增殖活性有所下降。结论ＭＳＣＣ在体外培养多代后细胞特性会发生变化，ＭＳ对Ｃ进行研究应该在细胞培养的前几代进行。
维普资讯
检验医学与临床２００７年７月第４卷第７期ＬｂＭｅｌ，ｕａｄＣｉｊｌｎ
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６３３
脐血间充质干细胞体外培养的细胞学特性研究
李丽王铉，
（．东省淄博科技职业学院微生物学教研室２５０；．１山５００２解放军３７医院肿瘤中心）０
ＤＭＥ悬浮混匀，种到５细胞培养瓶，入含灭活的Ｍ接０ｍｌ加
１胎牛血清的低糖ＤＯＭＥ，整细胞浓度为５０／，Ｍ调 ×１ｍｌ在３７℃ ，Ｃ饱和湿度条件下培养。２～４５Ｏ２４８ｈ后更换新鲜培养液，除未贴壁细胞。以后每隔３４ｄ半量换液１次。去～待细胞生长至９融合时，０２胰蛋白酶（１ｍｍｏ／Ｏ用．５含ｌＬ

脐血来源间充质干细胞的分化潜能

ＣｈｅｎＭｉｎｇ — ｘｉｎｇ，ＯｕｙａｎｇＧｕｉ－ｆａｎｇ（ＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌｏｆＮｉｎｇｂｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎｉｎｇｂｏ３１５０００，ＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ）
细
＊
＿
陈明星★ 男，１９８３年生，江西省宜丰县人，２０１３年
，
宁波大学医学院毕业，硕
￣－－－１－
胞成分，而是否真正产生心肌细胞、脂肪细胞却存在相当大的争议，分化的机制不明确。
Ａｂｓｔｒａｃｔ
ＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ：ＵｍｂｉｌｉｃａＩｃｏｒｄｂｌｏｏｄ－ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａＩｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｒｅｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔｉａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅ
ＷＷＷ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ
ｄｏｋｌＯ．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－４３４４．２０１３．３２．０２０［ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｒｔｅｒ．ｏｒｇ］酶甓星，歇陌桂艿．聩血来源闯充质干细胞的分化潜自芝．中国组织Ｉ程研究２０１３．１７（３￣：５８７７－５８８２

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ＣＣ。分阶段诱导６后，ＤＤ周细胞形态呈多角形，并检测到肝细胞表面标志物白蛋白、ＦＡＰ和Ｃ一９Ｋ１。结论新
生儿脐血中可分离出ＭＳｓ并可在体外进行培养扩增，Ｃ，分阶段诱导可分化为类肝细胞。
关键词：血；充质干细胞；肝细胞；化脐问类分
Ａｓａｔ０ｂｅｔｅＴｎｅｔａｈｅｓｉｔｏｕａｍｉｃｌｃｒｌｄｍｓｎｈｍｌｅｅｓ（Ｃ — ｂｔｃ：ｊｃｖｏｉｖｓｇｔｔｅｆａｉｌｙｆｈｍｎｕｂｌａｏｄｂｏｅｅｃｙａｔｃｌＵＢｒｉｉｅｂｉｉｏｓｍｌ
ｏ．ｈｈｎｅｏｃｌｓａｅｅｅｂｅｖｄｂｖｒｄｐａｅｃｎｒｓｍｃｏｃｐ．ｈｖｌｏａｕｉ（Ｌ）ａａｆｎＴｅｃａｇｓｆｅｈｐｒｏｓｒｅｙｉｅｅｈｓｏｔｔｉｓｏｅＴｅｌｅｆｌｍｎＡＢ，ｌｈ — — ｗｎｔａｒｅｓｂｐｅ
ｍｅｓｃｈｅｎｙｍａｌｔｅｍｌｎｏｆｃｉａｌｈｅｔｙｅ—ｉｅｃｌｎｖｉｏｓｃｅｌｌｔｕｎｔｓｏｎｐａｏｃｐｔｌｅｌｉｔｋｓｒ
ＨＮＣｉｉｇ，Ｉｉｏｇ，Ａｅ，Ｅｉ — ａ，Ｕｉ－ｉ，１Ａｕ－ｎＬＵＪ— ｎＧＯＬｉＰＩｎｓｈＳＮＸｎｘｎ Ⅳ ｐｙＱｇｈ
化。倒置相差显微镜观察细胞形态变化，诱导后４周和６周的细胞分别采用Ｒ－Ｃ取ＴＰＲ法检测ＡＢＡＰ和Ｃ一９Ｌ、ＦＫ１基因ｍＮＲＡ水平，析类肝细胞诱导表达情况。结果分按１ｍ接种，含１％ＦＳ的ＤＥ／１０／ｌ用５ＢＭＭＦ２培养基培养可成功获取ＵＣＭＳｓＢ — Ｃ。细胞呈长梭形，胞表面抗原测定显示强烈表达Ｃ、Ｄ而不表达造血细胞的标志物细ＤＣ，
一ｕ），
（ｒｖｅｌｏｉｌｆｌｔｈｎｏｇＵｉｒｔ，ｉａ５０，．．ｈｎ）１ＰｏｉｉｓｔｆｉｅｔＳａｄｎｎｅｉＪｎｎ２０２ＰＲＣｉａｎａＨｐａＡａｄｏｉｖｓｙ１
ｔｎｌｈｐｔｃｐｅｌｅｃＨｙｓａｅｉｈｐｌａｉｎｏｎｎｒｄｅｔｓｃｓａＦｉａｅａｏｙｔ — ｋｅｓｂｔｇｓｗｔｔｅａｐｉｔｆｍａｙｉｇｅｉｎｓｕｈａ — ＧＦ，－ＧＦ，ｏｉｈｃｏｂＦＨＧＦ，ＭｎＯＯＳａｄＳ
ＭＳＣｓ１ｎｕｃｄｉｔｕｔｏｌｈｐｔｅｐｔ—ｉｅｌｎｉｒ．ＭｅｈｏＦＬ —ｅｍＵＣＢ— ＳＣｓｓｍｐｅｗｅｅｂａｎｄｎｉｄｅｎｏｆｎｃｉｎａｅａｏｙｅｌｋｅｃｌｓｉｖｔｏｔｄｓｍｔｒＭａｌｓｒｏｔｉｅｉｓｅｉｅｃｎｔｏｎｄｉｏａｔｄｂｙｄｎｉｙｇａｅｔｃｎｒｆａｉｎａｄｄｒｃｌｄｈｒｎｅｇｏｈ，ｈｒｕｔｒｄｉｉｒ．ｔｒｌｏｄｉｎａｓｌｅｅｓｔｒｄｉｎｅｔｕｇｔｎｉｅｔｙａｅｅｃｗｔｔｅｎｗｅｅｃｌｕｅｎｖｔｏｉｉｏｒＡｆｅｈｅｆｕｔａｓｇｅｏｔｒｔ０ｒｈｐｓａｆＵＣＢ— ＳＭＣｓ，ｕ￣ｃｎｉｅｓｗｅｅｄｔｃｅｔｏｃｔｍｅｒｓＹａｅａｔｇｎｒｅｅｔｄｗｉｈｆｗｙｏｔｙ，ａｄｔｅｒｎｄｃｄｉｔｕｃｌｎｈｎｗｅｅｉｕｅｎｏｆｎ —
山东医药２１００年第５０卷第７期
脐血间充质干细胞的体外扩增及向类肝细胞分化的实验研究
韩翠萍刘吉勇ｈ。，高蕾裴庆山孙欣欣文婷玉，，，
（１山东大学附属省立医院，南２０２；济５０１２深圳市宝安区人民医院）
摘要：目的
探讨人脐带血问充质干细胞（Ｂ．Ｃ）ＵＣＭＳｓ向类肝细胞定向分化的可能性。方法
无菌条件下Leabharlann 集新生儿脐带血７５份，采用密度梯度离心法与直接贴壁法相结合分离ＵＣＭＳｓ体外培养传代，Ｂ— Ｃ，获得第４代集落生长细胞作流式细胞仪表面抗原测定，并应用ａＦＦｂＦＦＨＦＯＭ等多种成分，阶段向肝细胞定向诱导分 —Ｇ、—Ｇ、Ｇ、Ｓ分
中图分类号：８３１Ｑ１．文献标志码：Ａ文章编号：０ —６Ｘ（０００－０－３１２２６２１）７０３０００
ＥｐｒｘｅｉｎａｔｄｎｔｅａｍｅｔＩｕｙｏｈｍｐｉｃｔｎａｄｄｆｒｎｉｔｎｏｕｓｌｉａｉｎｉｅｅｔｉｆｈｍａｍｂｌａｃｒｌｏｆｏａｏｎｕｉＩｏｄｂｏｄｉｃ