结核病免疫学诊断新进展——TSPOTTB

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ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４１３５８．２０１０．０２．０１８作者单位：１００７３０北京市，中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院感染科（刘晓清、霍霏霏）通讯作者：刘晓清，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｘｑ＿ｐｕｍｃｈ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
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２０１０年５月第４卷第２期ＣｈｉｎＪＥｘｐＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｙ２０１０，Ｖｏｌ４，Ｎｏ．２中华实验和临床感染病杂志（电子版）
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２０１０年５月第４卷第２期ＣｈｉｎＪＥｘｐＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｙ２０１０，Ｖｏｌ４，Ｎｏ．２中华实验胸腔积液进行ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测的报道，如Ｗｉｌ［１６］ｋｉｎｓｏｎ等对８名确诊结核性胸膜炎（１例合并结核性腹膜炎）患者的胸水单核细胞（１例腹水）以及外周血单核细胞进行了ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测，结果显示胸腹水和外周血的ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测均为阳性，同时胸腹水的阳性细胞计数远高于外周１７］血的阳性细胞计数，平均为外周血阳性细胞计数的１５倍；Ｌｅｅ等［对４０名胸腔积液患者（１９例确诊结核性胸膜炎）的胸水和外周血单核细胞进行ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测，结果显示胸腔积液的ＴＳＰＯＴ．ＴＢ结果诊断结核性胸膜炎的敏感性和特异性分别为９４．７％、８５．７％，外周血的ＴＳＰＯＴ．ＴＢ结果对于诊断的敏感性和特异性为７７．８％、９０．５％，同时胸水的阳性细胞计数平均为外周血阳性细胞计数的８～１０倍。以上结果表明对胸腔积液中的单核细胞进行ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测是诊断结核性胸膜炎的一个有效的方法。１８］Ｋｏｂａｓｈｉ等［应用ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测进行疗效评估，他们对４０例活动性结核４例活动性肺结核）进行ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测，治疗前其阳性率为病患者（其中２９０％，治疗６个月后其阳性率降至６３％、９个月后降至５８％、１２个月后降至５５％，与临床疗效一致，证明ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测对于结核病患者可进行疗效评估。［１９］Ｐａｉ等对２００８年３月３１日之前纳入在ＰＵＢＭＥＤ的报道 γ 干扰素释放分８个研究资料进行了总结分析，其中分析ＴＳＰＯＴ．析试验敏感性及特异性的共３ＴＢ敏感性及特异性的研究均非来自于结核病高流行地区。对其中１３个研究中２６例入选者进行分析显示ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测的敏感性为９０％（ＣＩ，８６％～的共７９３％），对６个研究中的２９０例患者进行分析显示ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测的特异性为９３％（ＣＩ，８６％～１００％）。［２０］Ｋａｎｇ等在韩国首尔进行的一项前瞻性研究中入选了１４４例疑诊为肺结核的患者，最终６７例确诊为活动性肺结核，统计分析结果显示ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测的敏感性为９２％（ＣＩ，８３％～９７％），特异性为４７％（ＣＩ，３６％～５９％），阳性预测值６０％（ＣＩ，５０％～７０％），阴性预测值８７％（ＣＩ，７３％～９６％）。ＴＳＴ敏感性为６８％（ＣＩ，５６％～７９％），特异性５１％（ＣＩ，３９％～６２％），阳性预测值５５％（ＣＩ，４４％～６６％），阴性预测值６４％（ＣＩ，５１％～７６％）。上述结果表明ＴＳＰＯＴ．ＴＢ在诊断结核感染方面较ＴＳＴ敏感性高，虽然其阳性预测值较低限制了其在结核感染诊断中的应用，但其较高的阴性预测值有利于协助排除活动性结核病的诊断。四、ＴＳＰＯＴ．ＴＢ在结核感染诊断中的应用展望综上所述，ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测方法的主要优点是：（１）敏感性及特异性高，能从［２１］６００００个分泌ＩＮＦγ的细胞中检测出１个细胞，且受机体免疫状态的影响较［９］［２］小；只有结核分枝杆菌和极少数非结核分枝杆菌２才会出现阳性反应，而ＢＣＧ及环境中的多数非结核分枝杆菌因不分泌ＥＳＡＴ６和ＣＦＰ１０蛋白，因此本检测方法可区别ＢＣＧ接种后出现的阳性反应。（２）本检测方法可应用于多方面：在［５，９活动性肺结核、肺外结核、潜伏性结核感染及免疫抑制的结核患者均能检测］，１７］对胸腔积液中的单核细胞进行ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测有助于结核性胸膜炎的诊断［。
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５］情况。Ｌａｌｖａｎｉ等［首先将此原理用于结核病的诊断，其使用ＲＤ１基因编码的早期分泌靶抗原６（ｅａｒｌｙｓｅｃｒｅｔｅｄａｎｔｉｇｅｎｉｃｔａｒｇｅｔ６，ＥＳＡＴ６）和培养过滤蛋白１０（ｃｕｌｔｕｒｅｆｉｌｔｒａｔｅｐｒｏｔｅｉｎ１０，ＣＦＰ１０）作为抗原，体外刺激从外周血分离的单核细胞，计数释放 γ 干扰素的细胞数，以协助诊断结核感染的存在。ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测所应用的方法为酶联免疫斑点技术（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＰＯＴ），其可干扰素的细胞数量，经过多年大量检测经结核分枝杆菌特异性抗原刺激后释放γ 的研究与临床试验，应用ＥＬＩＳＰＯＴ技术体外检测经结核分枝杆菌特异性抗原ＥＳＡＴ６或ＣＦＰ１０刺激后释放 γ 干扰素的细胞技术日趋完善，该试剂盒２００４年首先在欧洲上市，２００５年在加拿大被批准使用，２００８年７月通过美国ＦＤＡ审批。基于相同原理，可以不分离细胞而直接向外周血中加入结核分枝杆菌特异性抗原进行刺激，之后应用ＥＬＩＳＡ方法测定 γ 干扰素的浓度，据此生产的试剂盒Ｑｕａｎ［６］ｔｉＦＥＲＯＮＴＢＧＯＬＤ已于２００５年通过，在美国被广泛应用。三、ＴＳＰＯＴ．ＴＢ在结核感染诊断中的应用［５］Ｌａｌｖａｎｉ等对４７例痰菌阳性的结核患者（其中２例肺外结核）进行ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测，结果显示ＴＳＰＯＴ．ＴＢ阳性率为９６％（４５例）；对其中２６例患者同时作ＴＳＰＯＴ．ＴＢ和皮肤结核菌素试验（ＴＳＴ），结果显示ＴＳＰＯＴ．ＴＢ阳性率为９２％（２４例），ＴＳＴ阳性率为６９％（１８例），二者的阳性检出率比较差异有统计学意义。上述研究结果表明ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测诊断活动性结核感染比ＴＳＴ的灵敏度高。肺外结核是指发生在肺部以外的全身其他脏器的结核病，能够单独的感染肺以外其他部位或者联合感染肺部。与肺结核相比，肺外结核的诊断通常更加困难，主要的原因之一是由于肺外结核缺乏肺部病变的特点，而且其病变的部位并７］不一致，典型的临床症状不明显［，ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测对肺外结核有较高的敏感［８］性，Ｋｉｍ等随诊７２例疑诊肺外结核患者的前瞻性研究显示，对于活动性肺外结核，ＴＳＰＯＴ．ＴＢ的敏感性为９４％，ＴＳＴ敏感性为４７％。［１０］Ｐｉａｎａ等入选了接触过痰菌阳性肺结核病人的免疫抑制患者１３８例，均患有血液系统疾病，包括非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急慢性淋巴细胞白血病等。最终对１２９例患者进行了ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测，对１２２例患者进行了ＴＳＴ检测。统计分析结果显示ＴＳＰＯＴ．ＴＢ的阳性率为４４．２％，ＴＳＴ的阳性率为１７．４％。进一步的研究显示，在外周血白细胞计数正常的患者ＴＳＰＯＴ．ＴＢ的阳性率为９９４４．６％，在外周血白细胞计数减少或增多（＜４．３× １０／Ｌ或＞１０．８× １０／Ｌ）的患者ＴＳＰＯＴ．ＴＢ阳性率为４４．３％，而ＴＳＴ的阳性率分别为２５．９％和１４．５％。以上数据说明在诊断免疫抑制人群的结核感染时，ＴＳＰＯＴ．ＴＢ检测具有更高的敏感性。结核性胸膜炎是导致胸腔积液的一个重要原因，在结核高发地区，其占胸腔［１１１３］积液病因的２５％，传统的诊断结核性胸膜炎的方法包括检测胸腔积液的常１１，１４，１５］规生化特征及ＡＤＡ水平，但上述检测方法特异性较差［。鉴于效应Ｔ细胞

T-spot.TB检测的临床研究及应用进展

T-spot.TB检测的临床研究及应用进展【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）06-0324-02据世界卫生组织统计结果，目前全球约有20亿人感染了结核分枝杆菌（MTB），每年新感染患者约800～1000万，因结核病死亡的患者约200～300万[1]。

结核病已是重要的全球公共卫生问题，严重危害人类健康。

早期准确诊断结核病是控制疫情的重要手段之一。

传统的诊断方法存在众多不足，如抗酸染色试验检出率低，M T B培养的时间长，组织病理学检查为有创试验等。

长期以来，结核菌素试验一直是诊断M T B感染的重要方法，具有操作简便、成本低廉的优势，但特异性及敏感性较低，其使用的结核菌素纯蛋白衍生物（P P D）为200多种蛋白的混合物，多数与非MTB以及卡介苗（BCG）具有共同的抗原成分，易发生交叉反应，因此在BC G普遍接种的区域“假阳性”的比例较高。

近年来T-s p o t.T B检测成为诊断结核病的新方法。

本文就近年来该法的研究及应用作如下综述：1.T-spot.TB检测的原理及发展克隆的MTB基因组与BCG以及非MTB基因组的对比结果显示[2]，M T B所特有的片段即缺失区域（R D）仅在极少数的非M T B内发现，其表达的蛋白为M T B所特有，且未发现存在于B C G中，因此，接种BCG后不会发生免疫交叉反应；另外，研究表明[3]，近期暴露的抗原再次侵袭效应T细胞后，会释放γ干扰素，故对某一抗原的效应T细胞进行体外检测，可有效判断体内近期抗原暴露状态。

用来检测抗原特异性T细胞的技术——“酶联免疫斑点技术（E L I S P O T技术）能够检测出1/100000至1/50000的外周血单核细胞（P B M C s）中经抗原刺激后释放细胞因子的细胞，目前已成为最敏感的检测方法之一[4]。

随着基因分子生物学及免疫学的发展，应用E L I S P O T技术进行的T-s p o t.TB检测应运而生。

T-SPOT.TB阳性结果分析

T-SPOT.TB阳性结果分析T-SPOT.TB是IGRA（γ干扰素释放试验）的一种，主要用于MTB 感染的诊断，鉴于MTB感染包括潜伏性结核感染（LTBI）和活动性结核病（ATB），因此T-SPOT.TB在临床上的适应症即为这两种的辅助诊断。

目前临床上对于LTBI和ATB的关注度及处理方式有较大的不同，所以临床需要实验室提供其较明确的结果，在这种情况下，T-SPOT.TB（主要指T-SPOT.TB阳性结果）需要结合其他检查结果来达到临床需求。

目前T-SPOT.TB阳性结果可以从以下几个方面进行分析：1、患者存在结核中毒症状，影像学检查支持结核病诊断，临床排除其他疾病，考虑活动性结核病的诊断。

2、患者存在结核中毒症状，影像学等临床检查手段未发现结核病证据，临床排除其他疾病，考虑MTB感染状态，建议试验性抗结核治疗（既治疗，又诊断），观察疗效（临床症状），再做诊断。

3、患者不存在结核中毒症状，影像学显示病灶存在（钙化或陈旧性病灶），存在结核病史，考虑结核之前患过结核病，不代表目前为活动性结核。

4、患者不存在结核中毒症状，影像学等临床检查手段未发现结核病证据，考虑潜伏性结核感染。

根据发展为活动性结核病风险程度决定是否进行预防性抗结核治疗。

5、4种环境分枝杆菌的感染（海、堪萨斯、苏尔加、戈登分枝杆菌）也会造成T-SPOT.TB的阳性，上述四种情况仍未做出合理判断的可以考虑这中情况。

（我国未见大样本量的NTM病流行病学调查资料，但历年的结核病流行病学调查资料显示，NTM分离率1990年、2000年和2010年分别为4.9%，11.1%和22.9%）上述五种情况中，第1和第2种情况表明感染了MTB，且称活动状态，应积极治疗；第3和第4种情况提示体内有处于持留状态的MTB，两种情况较为稳定，需随访观察，高危人群，根据情况可以进行预防性治疗。

文章摘自《中华结核和呼吸杂志》2014年10月第37卷第10期。

γ干扰素释放分析T-SPOT.TB在诊断结核感染中的研究进展

ｒ３７ｃ分别编码相应蛋白。６Ｋｖ８９，Ｄ早期分泌靶向抗
原（ａｌｓｃｅｎｎｉｎｔｇｔ，ＳＴ６是Ｒ１区ｅｒｅｒｔｇａｔｅｒｅ６ＥＡ．）ｙｉｇａ．Ｄ
发现较早的小分子分泌型蛋白，ｒ３７由ｖ８５基因编
码，全长２５碱基对，码９８个编５个氨基酸。１９９８年Ｂｒｅ６在研究ｅａｅｈｔｔ［等３ｓｔ因表达调控机制时，现６基发
了ｌｈ因，ｐ基因即ｒ８４基因，于ｅａｐ基ｌｈｖ７３位ｓｔ因６基
上游３ｂ处，ｅａ４ｐ和ｓ６基因处于同一操纵单元。编ｔ码１０个氨基酸，白分子量大小约为ｌｋ由于０蛋ＯＤ，其基因产物在早期培养滤液中出现，因此称为ＩＫＯＤ培养滤液蛋白（ｕｔｅｆｔｔｐｏｉ一，Ｆｃｌｒｉｒｅｒｅ１ＣＰ一１）ｕｌａｔｎ００。ｅｔ基因和ｃ１因由同一操纵子调控，行协ｓ６ａｆ０基ｐ进同转录。研究证实结核Ｒ１区编码抗原ＥＡ．ＤＳＴ６和ＣＰ１Ｆ．０具有良好的免疫活性，够用于诊断结核感能
中国实验诊断学
２１年１月００２
第ｌ４卷
第ｌ２期
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２５。— ０６＿＿ — ＿
ห้องสมุดไป่ตู้
文章编号：０ — ２７２１）２０５— ４１７４８（００１ —２６００

21世纪的结核诊断解决方案_T_spot_TB检测

可与ＢＣＧ接种后出现的阳性反应相鉴别，具有很高的特异性。
ＴＢ检测的斑点形成细胞数与结核活动程度存在一定的正相关趋势，但并
②临床应用广泛：可应用于活动性肺结核、潜伏性结核、免疫抑制患不精确。另外，某一抗原特异性的效应Ｔ细胞存在向病变部位聚集的特
１．２检测方式：（１）腹部超声。在检测之前３ｈ，患者要喝水憋尿，中著超出正常值范围，表现最为显著的为６０－６９岁组与７０－７９岁组。结
度充盈膀胱，检测当中采取仰卧位，探头与耻骨弓上紧贴呈现４５°角［２］。果见表１。
２０１４年３月第８卷第６期
大家健康ＦｏｒａｌｌＨｅａｌｔｈ
检验与诊断
２１世纪的结核诊断解决方案———Ｔ－ｓｐｏｔ．ＴＢ检测
王松林
（辽宁省朝阳市第四医院辽宁朝阳１２２０００）
【中图分类号】Ｒ５６【文献标识码】Ａ【文章编号】１００９－６０１９（２０１４）０３－００５５－０１
岁，依照患者的年龄将患者分成三组，分别为５０－５９岁组（２２例），６０－６９学意义。
岁组（４６例），７０－７９岁组（３０例）。所有患者均通过腹部超声以及直肠２结果
内超声进行检测与诊断。
２．１两种超声检测结果：在各径线值上，腹部超声与直肠超声均显
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腺增生患者的临床资料，并采用腹部超声和直肠腔内超声进行检测，分析测当中采取左侧膝胸卧位，把臀部与肛门充分暴露出来。把耦合剂涂抹

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T-SPOT.TB阳性结果分析

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