第十章种子健康检验本章讲3节§1、种子使康检验概述§2、种子病原物的检验方法§3、种子害虫的检验方法第一节种子健康检验概述一、种子健康检验的目的种子健康测定：主要是测定种子是否携带有病原茵(如真菌、细菌及病毒)，有害动物(如线虫及害虫)等的健康状况。
1、通过种子健康检验，可以有效防止和控制病虫的传播和蔓延，保证作物产量和商品价值。
2、防止种子的流通（包括进口种子批）将病虫害带入新区，为国内外种子贸易提供可靠的保证。
在我国，从国外引入带菌种子把新的病害传人的实例也很多。
甘薯黑斑病发生于美国，后传到日本，1937年从日本传入我国辽宁，现在全国各地均有发生。
棉花黄萎病及枯萎病是由美国引入的斯字4号棉种，后在国内广泛传播。
目前全国有32种检疫对象，山东补充14种:莱阳有5种：小麦全蚀病、甘薯茎线虫病、苹果棉蚜。
蔬菜二种：南美斑潜蝇、美洲斑潜蝇。
3、了解种子的种用价值或田间出苗不良的原因，弥补发芽实验的不足。
4、对种子的安全贮藏起重要作用。
目前随着国内外种子贸易的增加，种子携带病虫传播的机会也随之增多，万一种子携带的病虫害传入新区，就会给农业生产造成重大损失和灾难。
因此，现在健康测定日益受到重视，许多国家开展了种子健康测定，以保护农业生产和农产品质量。
事实上，GB规程上所列入的未经培养检验、培养后检验，方法都比较简单。
但检验人员需要具备一定的病理学和昆虫学知识和鉴别经验，并且需要一定的仪器设备。
二、种子健康检验的内容种子健康检验如同种子纯度鉴定一样，分为田间检验和室内检验。
田间检验，病虫表现明显，容易进行检查。
如小麦的散黑穗病田间检验很容易，在室内检验很困难或者费用较高；另外，一些病毒病，在种子外表无明显症状，又难以分离培养的方式来诊断，田间检验就比较容易确定带的是什么病害。
而印度腥黑穗病很难在田间检测，但在实验室即使孢子浓度很低也能检测。
室内检验的方法较多，是贮藏、调种、引种过程中进行病虫检验的主要手段。
（花生叶斑病直接培养分离不出孢子，放半年后才能培养出来）。
三、种子健康测定方法的特点种子健康测定方法主要有未经培养检验和培养后检验。
1、未经培养检验：包括直接检验、吸胀种子检验、洗涤检验、剖粒检验、染色检验、比重检验和X－射线检验等。
2、培养后检验：包括吸水纸法、砂床法、琼脂皿法等。
选择种子健康的测定方法，主要取决于种子种类、病虫害种类和检测的目的。
一般来说，要求该方法使病原体易于识别，结果有重演性，样品间结果有可比性和简单快速等特点。
四、试验样品根据测定方法，可把整个送验样品或其中一部分作为试验样品。
通常试验样品≮400粒净种子，或从送验样品中分取相当重量的种子。
五、仪器设备种子健康测定所需仪器设备因测定方法不同而异。
以测定真菌为例，最基本的仪器设备包括：双目显微镜、培养箱、紫外灯、冰箱、高压灭菌锅、培养皿、离心机、摇床等。
第二节种子病原物的检验方法 p147由于种子带病的类型不同，因此进行病害检验的方法也不相同。
目前应用的方法有以下几种：一、直接检查是借助肉眼或低倍放大镜进行检验。
适用于此法的病害：①混杂在种子间的较大病原体：如线虫瘿、麦角菌、黑穗病孢子等。
②污染大量病菌孢子的种子：如小麦种子污染了大量腥黑穗病孢子。
③种子带明显病症的病粒：如小麦黑胚病。
检验时将送验样品分出一半试样放在白纸或白瓷盘中，检出线虫瘿、麦角菌、黑穗病孢子、菌核及病粒，称其重量，计算病害感染率。
二、过筛检验过筛检验主要用于检查混杂在种子内较大的病原体、线虫瘿和杂草种子等。
方法：将送验样品分出一半作为试样，用圆孔筛过筛。
①花生米、大豆、玉米等大粒种子用3.5，2.5，1.5三层圆孔筛。
（玉米＜5mm一般筛不下来，只能筛下病原体；豆粒稍小一点；花生粒大）②稻、麦类、高粱、大麻等中粒种子用2.5，1.5二层圆孔筛。
③谷子、油菜、大白菜、芝麻小粒种子2.0，1.2二层圆孔筛。
各层样品倒入白瓷盘内检查，最下层的杂质倒入黑玻璃盘中用肉眼或放大镜检查。
三、洗涤检验（p148）用于检验附着在种子表面的真菌孢子或线虫。
方法:（同GB）分取试样两份，每份5g，分别放入100mL三角瓶内，加无菌水10mL，如使病原体洗涤更彻底，可加入0.1%润滑剂(磺化二羧酸酯)，置振荡机上振荡，光滑种子振荡5min；粗糙种子振荡10min。
将洗涤液移入离心管内，在1000～1500r/min离心3-5min。
吸去上清液，留1mL的沉淀部分，稍加振荡。
分别滴于5片载玻片上。
盖上盖玻片，用400-500倍的显微镜检查，每片检查10个视野，并计算每视野平均孢子数。
每克种子的孢子负荷量N：—每视野平均孢子数；式中：n1—盖玻片面积上的视野数；n2—1mL水的滴数；n3—供试样品的重量。
n4四、萌芽检验用于种传真菌的检验。
只要在种子萌发阶段开始危害或长出病菌的，都可用此法进行检验。
（但对种子带菌，在萌发阶段或苗期不表现症状，则不能用此法）。
方法1：吸水纸法：在培养皿中放三层吸水纸，用无菌水湿润；把种子播在纸上，保持一定距离(约1cm)，盖好培养皿。
检验种子内部病菌时，种子应进行表面消毒，即浸入1％次氯酸钠溶液中l0min，置于消毒过的培养皿内。
放入20～25℃箱内培养(低温作物20℃，高温作物25℃)，经过4～7d，可取出检查．根据种子或幼苗的病菌特征进行鉴别。
也可用显微镜检查病原菌种类。
方法2：砂床法：将砂子晾干，过1mm的筛子，将砂粒清洗，高温烘干消毒，放入培养皿内加水湿润，种子排在砂床内，盖上盖保持高湿，培养温度与纸床相同，经7～10d检查。
为了便于检查，可用0.1～0.2％ 2,4—D溶液来停止种子发芽，但2,4—D浓度不能过高，否则有抑菌作用。
（小麦除草剂）也可在萌发4～5d时使幼苗冰冻(-20℃)过夜，然后再培养病菌。
五、分离培养检验主要用于发育较慢的致病真菌、潜伏在种子内部的、表面的病原菌。
方法：在检验种子内部的病原菌时，可用1％的次氯酸钠作表面消毒5min后沥干；－→把灭菌的琼脂加入9cm培养皿内，每个培养皿播l0粒种子于培养基表面，20～22℃黑暗条件下培养5～7d检查。
用肉眼检查每粒种子外部长成的典型菌落。
培养基的作法见p150.六、接种指示植物法－病毒病（实验室内检测种传病毒的难度较大）从种子、幼苗获得的病原物，利用喷雾、针刺、汁液摩擦等方法接种到指示植物(寄主)。
观察指示植物接种后的病斑或幼叶的症状，判断是否有病毒病。
利用指示植物检验番茄种子上花叶病毒(TMV)的常规方法：取0.15g种子，放在培养皿内的1.5ml水中，充分研磨。
－→取1株心叶烟植株，去掉老叶和未展开的幼叶，保留4个叶片，砂布摩擦，用棉球蘸取汁液接种。
接种后2～4d 出现坏死斑。
七、隔离种植检验（1）有些种子所带的病害，有时不易发现症状或病原物，需要在生长发育阶段进行病害观察。
（2）从国内外引进种子时，不了解原产地有某种病毒病是检疫对象，也需隔离种植检验。
隔离种植应在温室或极为严密的隔离区进行，并在各个生育阶段进行观察。
综上所述，种子健康检验能有效地防止新病原物传入等作用。
常见作物种子病害分为：真菌病害、细菌病害、病毒病、线虫病。
真菌：大多数作物病害都是由真菌引起的。
主要作物种传真菌的检验列于附表3（p209）。
如稻瘟病、小麦散黑穗病、玉米小斑病（济南重）、玉米丝黑穗病（早熟品种重）、棉花枯萎病、黄萎病、花生叶斑病等。
病毒：是仅次于真菌的病原物，其中大约20％的病毒是通过种子传播的，症状表现多为花叶。
主要作物常见种子病毒病害及检验方法见表9—5（p153）如马铃薯病毒病、玉米矮花叶病等（玉米粗缩病非种子带病毒）。
细菌：引起的病害不如真菌多。
通过伤口、气孔、皮孔侵入，时常有菌脓溢出。
主要作物常见种子细菌病害及检验见表9—6（p154）. 如棉花角斑病、马铃薯环腐病。
线虫：主要通过口针穿刺植物并分泌酶类，吸取汁液，引起植物矮小、叶片黄化等。
主要作物种子线虫病害及检验方法见表9-7(p155-156).如花生根结线虫病、甘薯茎线虫病。
第三节种子害虫的检验方法 p156检验种子害虫，首先了解害虫的形态特征和生活习性，以及在种子上为害的症状。
常见的检验方法有:肉眼检验、过筛检验、剖粒检验、染色检验和相对密度检验等。
一、肉眼检验:对于明显感染害虫的种子，可用此法检验。
冬季低温时预先将种子样品放在18～25℃温箱内加温20～30 min，使害虫恢复活动；－→然后把种子倒在瓷盘内用肉眼或放大镜进行逐粒观察，拣出害虫危害过的种子，计算每千克样品中害虫的头数。
害虫头数害虫含量(头／kg) =样品重量(kg)二、过筛检验：凡是成虫或幼虫散布在种子中间的害虫可用过筛检验。
一般米象、谷象、谷蠹用2.5mm筛孔；锯谷盗、粉螨用1.5mm筛孔。
检查米象、谷象、谷蠹等害虫，最好用白瓷盘作底板；检查粉螨最好用光滑的黑纸作底板。
过筛后分别将各层筛的样品倒于光滑的底板上，用肉眼或5～10倍放大镜检验。
一般取送检样品的一半进行检验：计算每千克样品中害虫的头数。
三、剖粒检验对于隐蔽感染的害虫：如蚕豆象、豌豆象，可用剖粒检验法。
取试样5～10g(中粒种子5g，大粒种子10g)用刀剖开或切开种子的被害或可疑部分，检查害虫。
四、染色检验对于一些隐蔽感染的害虫：如米象、谷蠹，在种子内产卵后能分泌出一种胶质将产卵孔堵塞，一般肉眼难以看出，可用化学染色法将塞状物染色检查。
1、高锰酸钾染色法适用于检查隐蔽的米象、谷象等危害的禾谷类种子。
取试样15g，放入塑料网中，在30℃水中浸泡1min，再移入1%高锰酸钾溶液中染色1min。
然后用清水洗涤，倒在白色吸水纸上用放大镜检查，挑出表面有0.5mm斑点即为害虫籽粒。
计算害虫含量。
2、碘化钾染色法――用于检验豆象类危害的豆类种子（豌豆象）。
将样品50g放入塑料网中，放入1%碘化钾或2%碘酒溶液中1～1.5min。
取出放入0.5%的氢氧化钠溶液中浸泡30s，取出用水冲洗，用放大镜或肉眼检查：如豆粒表面有1～2mm 直径的圆斑点，即为豆象感染。
计算害虫含量。
五、种子相对密度检验（比重检查）被米象、谷蠹、豆象和麦蛾危害过的种子比重比较轻，用比重法捞出浮种进一步检查。
取试样100g，除去杂质，豆类等较重的种子倒入食盐饱和溶液中(含盐35.9g溶于100ml 水中)，搅拌10～15秒，静止1～2min，将悬浮在上层的种子取出，结合剖粒检验，计算害虫含量。
稻谷等较轻籽粒例入2％硝酸铵溶液，搅拌1min，即可使被害粒上浮而分开计算。
六、软X射线检验用于检查种子内部隐匿的害虫(蚕豆象、玉米象、麦蛾等)。
经X射线照射时，隐匿在种子内部的幼虫、蛹、成虫和虫蛀孔清楚可辨，通过照片或直接从荧光屏上观察。
检验时，把种子均匀摆放在装入暗袋的胶片或相纸上面，置于Hy－35型农用x线机上拍摄。
