下载文档原格式
测定大豆蛋白粗蛋白含量的不确定度评定粗蛋白是大豆分离蛋白出厂检验项目，根据凯氏定氮法测定大豆分离蛋白中粗蛋白含量，依据JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与分析》计算在测定过程中的随机效应和系统效应导致的不确定度，最终评定结果的不确定度。
标签：粗蛋白不确定度1 概述①设备：Kjeltec2000全自动凯式定氮仪CP225D型电子天平。
②环境条件：温度21℃湿度55%RH。
③被测对象：大豆蛋白。
④测定项目：粗蛋白含量。
⑤方法简述：根据GB5009.5-2010测定蛋白质含量的规定，将称好的试样放入消化管内并加入硫酸一同消化，使蛋白质分解，再用凯式定氮仪进行蒸馏，记录仪器上显示的数据即为粗蛋白含量。
2 建立数学模型X=C（V1-V0）×0.014×6.25×100/m式中：X——为粗蛋白含量%C——为盐酸标准溶液的浓度mol/lV1——为试样消耗盐酸溶液的体积mlV0——为空白消耗盐酸溶液的体积ml0.014——为与1.0ml盐酸标准溶液相当于氮的质量g6.25——为蛋白质系数m——为样品质量g3 不确定度来源分析①蛋白质含量重复性测量引起的标准不确定度，用相对不确定度Ur1表示；②实验环境温度引起的相对不确定度Ur2；③电子天平（十万分之一）仪器型号CP225D引起的相对不确定度Ur3；④全自动凯式定氮仪引起的相对不确定度Ur4；⑤空白试验消耗盐酸溶液引起的相对不确定度Ur5；⑥盐酸标准溶液浓度引起的相对不确定度Ur6。
4 不确定度分量的计算4.1 Ur1的计算为获得重复性的不确定度，取测试样品进行独立重复测试6次，测量结果见表1表1 重复性测量的不确定度测量结果■S=■=3.877×10-4Ur1=3.877×10-4/85.5501%=4.532×10-44.2 Ur2的计算检测蛋白含量时实验室环境温度为21度，由此，相对不确定度为：ur2=2.1×10-4×1/■=1.212×10-44.3 Ur3的计算电子天平，e=0.0001g，按矩形分布则由天平引起的不确定度为：0.0001/■=5.774×10-5其相对不确定度Ur3=5.774×10-5/0.1484=3.962×10-44.4 Ur4的计算全自动定氮仪说明书中给出的回收率为99.5%-100.5%，即测定过程中由仪器误差所导致的相对不确定度Ur4=0.5%/■=2.8868×10-34.5 Ur5的计算在实验滴定过程，是由全自动凯氏定氮仪来完成测定的，空白所引起的不确定度Ur5=0.5%/■=2.8868×10-34.6 Ur6的计算4.6.1 标定过程及测定方法等引起的不确定度uAr（x）依据GB/T601-2002《化学试剂标准滴定溶液的制备》的测定方法，标定标准盐酸溶液的浓度，标定结果见表2。
凯氏定氮法测定灵芝破壁孢子粉中粗蛋白质含量的不确定度评定对采用凯氏定氮法测定灵芝(Ganoderma lucidum)破壁孢子粉中粗蛋白含量的不确定度进行评定，结果表明合成相对标准不确定度为0.02%，扩展不确定度为0.04%。
在本次孢子粉粗蛋白质测定中，引入不确定度的主要因素有盐酸标准溶液的浓度及样品测定中实际消耗的标准溶液体积。
凯氏定氮法；灵芝破壁孢子粉；粗蛋白质含量；不确定度评定随着公众对食品和保健品品质的关注度不断提高，对产品质量检测提出了新的要求，对检测机构所提供结果的可靠性和可信度也希望能够有更多的了解和评价。
为了不断提高测量技术水平，有必要对不确定度进行评定，分析不确定度来源，对测量结果不确定度影响较大的来源，给予足够重视并设法降低。
灵芝（Ganoderma lucidum）孢子粉中粗蛋白质含量是其质量评价中的一个重要指标，本研究依据国家质量技术监督局标准［1］，对采用凯氏定氮法测定灵芝孢子粉中粗蛋白质含量的不确定度进行评定，分析影响不确定度的主要来源，为进一步提高检测技术水平和检测结果质量提供参考。
1 材料与方法1.1材料灵芝（G. lucidum）破壁孢子粉为送检样品。
1.2蛋白质含量计算蛋白质测定方法同参考文献［2］。
孢子粉粗蛋白含量（X%）的计算公式如下：X=(V 1-V 0)×C HCl×0.014×6.25×100%mV 1：滴定待测试样时所消耗标准盐酸溶液的体积，mLV 0：滴定空白时所消耗标准盐酸溶液的体积，mLC HCl：盐酸标准溶液的浓度，mol/Lm：待测试样的质量，g0.014：与1.00 mL盐酸标准溶液相当的以g表示的质量6.25：氮换算成蛋白质的平均系数1.3分析不确定度的数学模型采用凯氏定氮仪（2200型，瑞典FOSS公司）测定灵芝孢子粉中粗蛋白含量方法中的不确定度主要来源有以下四个方面：测量重复性（REP）；样品的称量质量（m）；滴定样品溶液实际消耗盐酸标准溶液的体积（V 1-V 0）；盐酸标准溶液的浓度（C HCl）。
KJELTEC TM8400全自动凯氏定氮仪操作说明一、凯氏定氮仪器使用说明：1、开机：先打开水阀，再开主机电源，然后机器开始自检，需几分钟，此时勿动仪器。
注：带双引号的表示屏幕中的操作按钮。
2、预热：进入主界面后，点击触摸屏“工具”中“手动”下“打开/关闭安全门”，“打开安全门”，放入空消化管（注意轻放消化管不可拧，管口正好套在蒸馏头下，管底正好卡在下面的凹三角上就可以），“关闭安全门”，点击“加水到试管中”，约150ml即可（界面右下角有上下导航键可调节加水量），点击“添加”加水。
点击“启动/停止蒸汽发生器”进行预热，约3—5分钟，“停止蒸汽发生器”，完毕后，安全门会自动打开，拿出消化管。
3、输入标准酸浓度：“工具”——“设置”——“配置”——“当量浓度常数”（每次换标准浓度盐酸时必须更改）。
换酸操作：关上连接标准盐酸桶和滴定器的塑胶管上的卡夹，拔出连接标准盐酸桶和滴定器的塑胶管，装入新的标准浓度盐酸到盐酸桶后，连接上塑胶管，打开卡夹。
“工具”——“手动”——“排空滴定器到滴定缸”（务必排净）——“充满滴定器”——“排空滴定器到滴定缸”（务必排净）——“充满滴定器”，更改当量浓度常数。
4、设置：“工具”——“分析数据”——“程序”——“AN300”（根据需要可以选择和编辑程序）。
更改稀释液、碱液、接受液体积分别为50ml、50ml、30ml。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
“样品管排空”必须更改为“NO”，蒸汽发生器功率为100，若蒸汽温度过高，可改为70，“蒸汽结束方式”为自动。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
“设置”——“配置”——“接受液颜色报警”——“NO”。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
5 、添加样品：“列表”——“批次”——“新批次”——“编辑”更改批次名称——“样品架类型”20rack，250ml——“程序”AN300。
“批次名”——“样品”——“新建样品”（每次用仪器时要做4~5个空白样，以确保滴定体积稳定。
KJELTEC TM8400全自动凯氏定氮仪操作说明一、凯氏定氮仪器使用说明：1、开机：先打开水阀，再开主机电源，然后机器开始自检，需几分钟，此时勿动仪器。
注：带双引号的表示屏幕中的操作按钮。
2、预热：进入主界面后，点击触摸屏“工具”中“手动”下“打开/关闭安全门”，“打开安全门”，放入空消化管（注意轻放消化管不可拧，管口正好套在蒸馏头下，管底正好卡在下面的凹三角上就可以），“关闭安全门”，点击“加水到试管中”，约150ml即可（界面右下角有上下导航键可调节加水量），点击“添加”加水。
点击“启动/停止蒸汽发生器”进行预热，约3—5分钟，“停止蒸汽发生器”，完毕后，安全门会自动打开，拿出消化管。
3、输入标准酸浓度：“工具”——“设置”——“配置”——“当量浓度常数”（每次换标准浓度盐酸时必须更改）。
换酸操作：关上连接标准盐酸桶和滴定器的塑胶管上的卡夹，拔出连接标准盐酸桶和滴定器的塑胶管，装入新的标准浓度盐酸到盐酸桶后，连接上塑胶管，打开卡夹。
“工具”——“手动”——“排空滴定器到滴定缸”（务必排净）——“充满滴定器”——“排空滴定器到滴定缸”（务必排净）——“充满滴定器”，更改当量浓度常数。
4、设置：“工具”——“分析数据”——“程序”——“AN300”（根据需要可以选择和编辑程序）。
更改稀释液、碱液、接受液体积分别为50ml、50ml、30ml。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
“样品管排空”必须更改为“NO”，蒸汽发生器功率为100，若蒸汽温度过高，可改为70，“蒸汽结束方式”为自动。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
“设置”——“配置”——“接受液颜色报警”——“NO”。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
5 、添加样品：“列表”——“批次”——“新批次”——“编辑”更改批次名称——“样品架类型”20rack，250ml——“程序”AN300。
“批次名”——“样品”——“新建样品”（每次用仪器时要做4~5个空白样，以确保滴定体积稳定。
KJELTEC TM8400全自动凯氏定氮仪操作说明一、凯氏定氮仪器使用说明：1、开机：先打开水阀，再开主机电源，然后机器开始自检，需几分钟，此时勿动仪器。
注：带双引号的表示屏幕中的操作按钮。
2、预热：进入主界面后，点击触摸屏“工具”中“手动”下“打开/关闭安全门”，“打开安全门”，放入空消化管（注意轻放消化管不可拧，管口正好套在蒸馏头下，管底正好卡在下面的凹三角上就可以），“关闭安全门”，点击“加水到试管中”，约150ml即可（界面右下角有上下导航键可调节加水量），点击“添加”加水。
点击“启动/停止蒸汽发生器”进行预热，约3—5分钟，“停止蒸汽发生器”，完毕后，安全门会自动打开，拿出消化管。
3、输入标准酸浓度：“工具”——“设置”——“配置”——“当量浓度常数”（每次换标准浓度盐酸时必须更改）。
换酸操作：关上连接标准盐酸桶和滴定器的塑胶管上的卡夹，拔出连接标准盐酸桶和滴定器的塑胶管，装入新的标准浓度盐酸到盐酸桶后，连接上塑胶管，打开卡夹。
“工具”——“手动”——“排空滴定器到滴定缸”（务必排净）——“充满滴定器”——“排空滴定器到滴定缸”（务必排净）——“充满滴定器”，更改当量浓度常数。
4、设置：“工具”——“分析数据”——“程序”——“AN300”（根据需要可以选择和编辑程序）。
更改稀释液、碱液、接受液体积分别为50ml、50ml、30ml。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
“样品管排空”必须更改为“NO”，蒸汽发生器功率为100，若蒸汽温度过高，可改为70，“蒸汽结束方式”为自动。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
“设置”——“配置”——“接受液颜色报警”——“NO”。
（已经使用的仪器一般不需要更改）。
5 、添加样品：“列表”——“批次”——“新批次”——“编辑”更改批次名称——“样品架类型”20rack，250ml——“程序”AN300。
“批次名”——“样品”——“新建样品”（每次用仪器时要做4~5个空白样，以确保滴定体积稳定。
龙源期刊网 凯氏定氮仪测定饲料中粗蛋白的注意事项作者：刘传辉来源：《环球市场信息导报》2012年第08期蛋白质是鉴定饲料质量时必测的常规营养指标。
以往饲料检测普遍采用的标准方法是半微量凯氏定氮法，但是由于粗蛋白质测定过程相对较复杂，所以现在我省已有多家质检中心购买了半自动的凯氏定氮仪，它具有消化时间短，操作简单，准确性高、价格较便宜等特性，备受使用者青睐。
但在使用中有些不容忽视的注意事项，在此跟大家分享。
饲料；粗蛋白；凯氏定氮仪制样：用粉碎机粉碎样品后，一定要全部清理干净作为备用样，如果清理不彻底，将影响检验结果。
称量：称量时，由于消化管较长，所以直接称量不太现实，可以用滤纸制成适宜的尺寸用来包裹样品，要注意滤纸一定要用定量滤纸，因为里面含氮量很低，可以忽略不计。
用滤纸包住样品放入试管口慢慢滑到试管底部。
称样量约0.3000g为宜。
加催化剂和硫酸。
催化剂可以用仪器公司配备的消化片，但由于价格相对比较昂贵，所以还是用国标中混合催化剂的方法比较合适，不影响检验结果。
催化剂要按照国标中规定的用量（6.4g），如果加入了过量的催化剂，在消化结束时常会发生凝固现象；加少了就会消化不完全，影响检验结果。
消化：专用的消化炉相对于传统的消化方法来说是一种良好的改进。
在称量样品的同时就可以将消化炉打开预热，温度设置为420℃。
由于所配备的消化管的冷热膨胀性能好，所以不必担心由于骤热而引起破裂。
消化时间设定为1小时即可，节省了大量的时间。
蒸馏：仪器中有好几种设定程序，你可以根据自己平时的需要设定不同的程序。
在蒸馏程序开始前要先进行空蒸，使去离子水沸腾，产生水蒸气，为蒸馏程序做准备。
加碱的量与消化时所加入的硫酸量的比应为4∶1，程序中的延时设定根据情况而定，如果消化液不凝固，可以设定的短些；如果发生凝固，应设置的长些，以利于在蒸馏开始前用水蒸气使消化液溶解。
蒸馏时间初步设定为3分40秒，具体时间依照硫酸铵的检测结果进行调试。
FOSS全自动凯氏定氮仪KJELTEC 8400技术参数1. 货物名称：凯氏定氮仪。
2. 主要用途：用于氮及粗蛋白质含量分析及其它挥发性组分蒸馏分析。
3. 工作条件：连续工作8小时以上。
4. 技术指标：4.1*采用国际及中国国家标准的凯氏定氮方法：浓硫酸消化、碱性环境蒸汽蒸馏、硼酸吸收、指示剂滴定终点颜色判定法。
4.2检测范围：0.1-200mg 氮；回收率≥99.5%（1-200mgN）；重现性RSD≤1%。
4.3 *定氮仪主机内置操作系统，液晶彩色触摸屏操作，带中英文操作界面。
带全自动分析控制系统，包括：样品稀释、碱液添加、吸收液添加、蒸馏、滴定、计算、报告以及消化管自动排空、滴定缸自动清洗等全自动功能。
4.4 *SAfE技术：通过改变试剂的添加顺序，即在消化液中加入稀释水后立即通入蒸汽，通过蒸汽的搅拌作用使消化液中的浓硫酸被充分稀释，降低随后浓碱加入时的反应强度，改善蒸馏效果。
4.5双蒸馏模式：蒸汽平衡添加蒸馏模式和延时蒸馏模式。
4.6 *蒸馏馏出液温度监控系统，位于冷凝器下方，直接测定溜出液温度，监控是否有意外操作导致氨损失，保证分析结果准确可靠。
4.7*边蒸馏边滴定的功能和自动判断终点技术，确保得到准确可靠的分析结果，并缩短分析时间，降低成本。
4.8 *智能安全监控系统：包括自动旋转式安全门（如果安全门没有关闭或一旦安全门被意外打开，仪器会停止所有操作）、试管在位（如果没有试管放在蒸馏台上，仪器不会执行任何操作）和试管更换传感器（没有更换试管就开始下一次分析时会有报警，且在确认以前不能开始任何操作）、蒸汽发生器液位/过压传感器等一系列的安全保护措施，确保操作者安全。
4.9通用型消化管接头：一个消化管接头即可适配100ml/250ml/400ml/750ml消化管，满足不同分析需要。
4.10 可选20/60位进样器，实现无人值守的全自动操作，满足不同分析需求。
4.11*可单机工作，也可以选择和专用的计算机软件联机使用。
