盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制-论文

ICSDB34备案号：安徽省质量技术监督局发布前 言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。

本标准由安徽省质量技术监督局批准。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。

本标准起草人：许世富、蔡东东、汤春莲、明文庆。

本标准于2008年8月1日首次发布。

饲料中盐酸克伦特罗的测定——胶体金免疫层析法1 范围本标准规定了用胶体金免疫层析法检测饲料中的盐酸克伦特罗。

本标准适用于饲料中盐酸克伦特罗的快速检测。

本标准检测限为10µg/kg。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理本试验为竞争抑制法。

将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。

硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移。

在移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。

样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA 偶联物的结合，使检测线不显颜色，结果为阳牲；反之，检测线显红色，结果为阴性。

4 试剂和材料除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合 GB/T 6682 二级水的规定。

4.1 胶体金免疫层析快速检测装置组成4.1.1 盐酸克伦特罗全抗原的偶联率为 1：10～1：20 （ BSA：CL）。

4.1.2 抗盐酸克伦特罗抗体、多抗或单杭。

多抗可以由兔或羊血清获得，效价应大于5000（间接ELISA 法），或有效抗体含量应大于0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展盐酸克伦特罗是一种临床常用的药物，常用于治疗心血管疾病和高血压。

克伦特罗也被用于研究细胞的信号传导途径。

为了定量检测盐酸克伦特罗的含量，需要建立可靠的分析方法。

本文将综述盐酸克伦特罗检测方法的研究进展。

盐酸克伦特罗的检测方法主要包括物理化学方法和生物化学方法两大类。

物理化学方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等；生物化学方法主要包括酶联免疫吸附法、免疫荧光法、生物传感器等。

高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的分析方法之一。

该方法具有分离能力强、分析速度快、检测灵敏度高等优点。

HPLC检测盐酸克伦特罗的条件包括流动相的选择、柱温的控制、流速和检测波长等参数的优化。

近年来，研究者通过改进色谱柱材料和液相色谱柱填料，进一步提高了方法的分离能力和分析速度。

毛细管电泳法（CE）是一种电分离技术，其分离效率取决于使用的毛细管和电场强度。

CE检测盐酸克伦特罗的关键是控制pH值和缓冲液浓度，以增强样品的分离效果。

研究人员还通过改进偏析电泳、等温电泳等技术，提高了方法的分离效率和检测灵敏度。

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种高度选择性和灵敏度的生物化学方法。

通过将特异性抗体固定在酶标板上，可以与盐酸克伦特罗结合并形成可检测的复合物。

ELISA检测盐酸克伦特罗的关键是选择适当的抗体和酶，以及优化反应条件。

近年来，研究人员采用改进的ELISA技术，如发光ELISA和荧光ELISA，提高了方法的检测灵敏度和准确性。

生物传感器是一种新兴的生物化学方法，可以直接测量盐酸克伦特罗与生物分子的相互作用过程。

生物传感器检测盐酸克伦特罗的关键是选择合适的生物分子，如酶、抗体或DNA探针，以及优化传感器的构建和检测条件。

研究者近年来发展了多种类型的生物传感器，如电化学传感器、光学传感器和电子传感器。

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展包括物理化学方法和生物化学方法两大类。

未来的研究方向包括提高方法的分析速度、灵敏度和选择性，并探索新的检测技术和应用领域。

盐酸克伦特罗检测方法的研究进展盐酸克伦特罗是一种重要的药物原料，广泛应用于医药、化工、农药等领域。

其质量的检测是非常重要的，因为不良的质量可能会导致产品的安全性和有效性问题。

随着科学技术的发展，盐酸克伦特罗检测方法也在不断地得到改进和完善。

本文将对盐酸克伦特罗检测方法的研究进展进行介绍和总结。

一、传统的盐酸克伦特罗检测方法传统的盐酸克伦特罗检测方法主要包括物理性质检测法和化学性质检测法。

物理性质检测法包括外观和溶解度测定，这在一定程度上可以反映出盐酸克伦特罗的纯度和结晶形态。

而化学性质检测法则主要包括红外光谱法和紫外分光光度法，通过研究其在特定波长下的吸光度和吸收峰的变化来进行分析。

传统的检测方法虽然简单、便捷，但往往存在着准确性不高、重现性差、专业设备要求高等问题。

需要不断地对盐酸克伦特罗检测方法进行改进和优化。

二、近年来的盐酸克伦特罗检测方法研究进展1. 色谱法色谱法是一种常用的化学分析方法，可以对物质进行快速、高效的分离和检测。

近年来，人们在盐酸克伦特罗的检测方法中，引入了高效液相色谱法和气相色谱法。

这些方法具有分离效果好、准确性高等特点，能够更加准确地检测盐酸克伦特罗的含量和纯度。

2. 质谱法质谱法是一种能够测定物质分子量、结构和组成的分析方法，近年来被广泛应用于盐酸克伦特罗的检测中。

包括质子磁共振质谱法、质子谱法和质子化学位移谱等不同的质谱方法，能够对盐酸克伦特罗的结构和组成进行精确的分析和测定。

3. 生物传感技术生物传感技术是一种将生物学和传感技术相结合的新兴技术，近年来也得到了在盐酸克伦特罗检测中的应用。

通过改变生物材料的电化学特性，来检测盐酸克伦特罗的含量和纯度。

这种方法具有快速、灵敏度高、成本低等优点，成为了盐酸克伦特罗检测领域的新热点。

三、未来的发展方向随着科学技术的不断发展，盐酸克伦特罗检测方法也将不断地得到改进和完善。

未来的发展方向主要包括以下几个方面：1. 多种方法的综合应用：在盐酸克伦特罗检测中，可以将色谱法、质谱法、生物传感技术和光谱法等多种方法进行综合应用，从而得到更加准确和全面的检测结果。

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制姜艳彬;孙冠如;王海;姚松涛;杨红菊;崔立莉;曹健荣;于雷【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)010【摘要】研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测.以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条.如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与同相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带.经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作.【总页数】5页(P109-113)【作者】姜艳彬;孙冠如;王海;姚松涛;杨红菊;崔立莉;曹健荣;于雷【作者单位】中国动物疫病预防控制中心,农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100125;北京金豪制药股份有限公司,北京,100176;中国动物疫病预防控制中心,农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100125;北京金豪制药股份有限公司,北京,100176;中国动物疫病预防控制中心,农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100125;北京金豪制药股份有限公司,北京,100176;北京金豪制药股份有限公司,北京,100176;中国动物疫病预防控制中心,农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100125【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器 [J], 张洪才;刘春燕;刘国艳;陈小连;叶雨丹;王艺如;柴春彦2.用试纸条快速检测盐酸克伦特罗的试验 [J], 宋天增;冯静;杜迎春;石国庆3.克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制 [J], 姜金庆;杨雪峰;王自良;邓瑞广;王选年;张改平4.盐酸克伦特罗快速检测试纸条 [J], 张娟敏;蒋皓;张少东5.盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制 [J], 肖治理;余建华;雷红涛;杨金易;孙远明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

盐酸克仑特罗快速定量检测试剂条研制（时间分辨微球法）作者：宋文何鲁江来源：《食品安全导刊》2018年第06期目前，一般检测盐酸克仑特罗的快速诊断试剂条采用的方法是胶体金检测法，该方法虽然能满足快速现场检测的要求，但是只能定性判断样品的阴、阳性，而时间分辨微球检测试剂条可以实现现场的快速定量检测。

时间分辨荧光微粒是将镧系稀土元素Eu3+、Tb3+等填入高分子纳米微粒内制成。

将其用于免疫分析中，则是将蛋白共价交联在纳米微球表面的化学基团上，通过免疫反应和待检物结合，通过测定荧光强度来推算待检物的浓度。

1 材料与方法1.1 材料与试剂阳性尿样、阴性尿样、时间分辨微球（长沙特优异）、酪蛋白、Tris、BSA、Borax等化学试剂（购自Sigma）。

盐酸克仑特罗单克隆抗体、盐酸克仑特罗BSA偶联物（购自杭州隆基生物）。

1.2 仪器与设备高速冷冻离心机（湘仪）、超声波细胞粉碎仪（宁波新芝）、旋转混合仪（宁波新芝）、时间分辨读卡仪（苏州和迈）。

1.3 方法1.3.1 盐酸克仑特罗的标记时间分辨微球1.3.1.1 配置标记使用的缓冲液Buffer A：50mM MES溶液（pH6.0）;Buffer B：0.23% Tris+0.25% casein（pH8.0）;Buffer C：0.76% Borax（pH9.0） ;Buffer D：0.76% Borax+0.25% Casein。

1.3.1.2 微球标记抗体①100μL直径200nm的时间分辨微球，原始浓度1%（W/V），稀释到900μL Buffer A中;②15000rpm离心20min，去上清;③加入1000μL Buffer A，使用移液枪吹打混匀;④15000rpm离心20min，去上清;⑤加入1000μL Buffer C，超声2min（功率30%，超声5s，间歇5s，温度设定10℃宁波新芝JY92-IIN，2号变幅杆）;⑥配置50mg/mL EDAC溶液（使用纯化水溶解），配置50mg/mL NHS溶液（使用纯化水溶解），以上溶液现配现用。

ICS备案号：DB34动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法Determination of clenbuterrol residue in animal tissues Colloidal gold immunochromatographic method（征求意见稿）安徽省市场监督管理局 发布DB34/T 824—2008II前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。

本标准代替DB/T 824-2008《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法》，除编辑性修改外主要技术变化如下：——修改了范围（见1）；——修改了规范性引用文件（见2）；——修改了检测步骤（见5）；——修改了结果判断（见6）；——修改了结果确认（见7）。

本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所。

本标准起草人：许世富、。

本标准2008年8月发布，本次为第一次修订。

DB34/T 824—2008 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法1 范围本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留测定的胶体金免疫层析法。

本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留的快速检测。

本标准检测限为3µg/kg。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理本试验采用胶体金竞争抑制法。

将氯金酸用枸橼酸钠还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。

硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，将样本滴加在胶体金检测条样品垫一端，使液体慢慢向吸水纸另一端渗移。

在样本移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。

样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上的盐酸克伦特罗人工抗原的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显紫红色，结果为阴性。

华中科技大学硕士学位论文盐酸克伦特罗快速检测试剂盒的研制与开发姓名：***申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：***20080529摘要盐酸克伦特罗（CL）是ß-兴奋剂的一种，具有促进动物生长，提高饲料利用率，改善瘦肉率的作用。

但该药排泄速率慢，易蓄积在动物组织中，引起消费者发生急性中毒，目前已被大多数国家列为违禁药，然而，CL滥用和残留的问题仍然存在，灵敏、有效的残留检测方法是控制残留的基本手段。

目前国际上多使用ELISA方法作为CL快速检测的筛选方法，国内检测机构一般采用进口试剂盒进行检测，成本高，到货周期长，售后没有保证，但是在这一领域的国产试剂盒产品又存在着稳定性差，假阴性、假阳性率高等缺点，从而使国产试剂盒在这方面迟迟未打开市场。

本实验着力于研制出稳定性好，假阴/阳性率低，能够与国外产品相媲美的CL快速检测试剂盒。

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，通过优化条件得到最终反应条件为：包被抗原约0.2µg/mL，抗体工作浓度约为0.059µg/mL，总体反应时间为90min，酶标二抗的稀释倍数为1：1000。

建立的标准曲线的线性范围为0-8ng/mL，IC50平均为1.0ng/mL，最低检测限（LOD）达0.1ng/mL，标准点批内变异系数为1.28-13.19%，批间变异系数在5-15%之间，试剂盒保存期在1年以上。

与荷兰（ED）试剂盒比对实验表明，本试剂盒的回收率在80%-120%之间，高于ED试剂盒的50%-80% 的样品回收率，同时本试剂盒可以保持稳定1年以上，这与ED试剂盒相当，领先于国内试剂盒。

总之，在标准点符合程度、曲线参数、实际样品回收率等方面与ED试剂盒的测量结果相当，部分指标甚至优于ED试剂盒，从而证明了本试剂盒的可用性和替代国外试剂盒的可能性。

关键词：盐酸克伦特罗，间接竞争ELISA，条件优化，试剂盒，保护剂，回收率AbstractClenbuterol（CL）is a ß-agonist registered as a veterinary bronchospasmolytic drug in some countries. It was well known that CL can be used as a growth-promoting and repartitioning agent in several livestock species at comparatively high doses, as it can improve lean meat deposition and production efficiency. However, there have been several reported incidences resulted from consumption of CL-tained edible tissues of bovine and swine. Its use as a feed additive has been banned within most countries. It is necessary to develop a sensitive and applicable assay for effective surveillance of the illicit use of CL.At present, most countries use ELISA as a rapid screen method for CL. Testing organizations in China almost all use the import kits for the testing wrok. The import kits are high in price and poor at the after sale service. The domestic kits of CL have the price advantage and can give good after sale service, but the quality problems such as poor stability, high false positive/negative rates etc are so ubiquity that the home-made kits still cannot take place of the import kits. This reseach aims at developing a self-made kit for CL which is of good stability, low false positive/negative rates and can compare with the import kits.The development of this kit bases on the principle of indirect competitive ELISA, by condition optimization，final reaction parameters are achieved: the concentration of coating antigen is 0.2µg/mL, that of antibody is 0.059µg/mL, dilution rate of IgG-HRP is 1：1000, whole reaction time is 90min. Linear range of the standard curve is 0-8ng/mL, IC50 with an average of 1.0ng/mL, LOD can reach to 0.1ng/mL on avenage, which is the same as the import kits. The self-made kit shows high sensitivity with CL and almost no cross-activity with Salbutamol, Chioramphenicol, Ractopamine and other ß-adrenergic receptor agonists. The standard variation coefficients of intra-assay and inter-assay are 1.28-13.19% and 5-15%, respectively. Compared with the import kits(ED kits), theextraction recoveries of self-made kits are ranged from 80% to 120%, which is higher than the import kits(50%-80%); the self-made kits can also keep stable and provide reproductive result for more than 1 year, which is one-up in China and the same as the import kits. In all, on the aspects of extraction recoveries, RE of standards and veracity, the self-made kit act the same or even better than ED kits, which means the self-made kit can possiblily replace the import kits.Key words：Clenbuterol, indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay, condition optimization, Kit, protective agent, recovery rate独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

盐酸克伦特罗快速检测方法的研究进展程　政（河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳４７１０００）中图分类号：Ｓ８１６．７９　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００５－７３０７（２０２３）０４－００１１－００４ 盐酸克伦特罗（ＣＬＢ）作为一种β受体激动剂类药物，多用于临床，又因其具有促进畜禽生长、提高畜禽瘦肉率等作用而用于畜禽养殖。

人食用后易造成心悸、心慌、胸闷、心律失常等并发症，因此国内外多数国家已严禁使用，我国也明令禁止在饲料中添加。

盐酸克伦特罗作为一种能在短期内迅速提升畜禽瘦肉率的肾上腺素类药物，其有效快速的检测手段一直被学者广为研究。

吕睿研究出利用混合铱／硅纳米线基质，可将质谱信号提高１０倍，灵敏检测克伦特罗和其他小分子。

刘文光建立了包括克伦特罗在内的１６种β 受体激动剂类药物在猪、牛、羊毛发及尿液中的超高效液相色谱串联质谱的多残留检测方法。

周珊珊通过ＥＬＩＳＡ方法检测猪尿中克伦特罗残留量，分析此方法定性检出限为０．１４７μｇ／Ｌ，定量检出限为０．４９０μｇ／Ｌ。

马璐瑶开发了一种基于微流纸的酶联免疫吸附测定牛奶中的盐酸克伦特罗含量，检测极限为０．２μｇ／Ｌ。

张雪娇则研究了山羊体内盐酸克伦特罗的检测靶标，结果表明肝脏和尿液更为适合作残留检测靶标。

而近期更有研究发现使用硼碳氧氮化物（ＢＣＮＯ）纳米片作为传感介质用于电化学检测猪血清和药片中盐酸克伦特罗有良好的稳定性和分析性，该传感器有１７ｎｇ的低检测限，为盐酸克伦特罗的检测提供了新策略。

结合近年来相关的快速检测方法，如色谱法、传感器分析法、免疫分析法为盐酸克伦特罗新型检测技术提供新的思路和参考，将检测条件优化、检测效率提高，为食品及其他类别中盐酸克伦特罗残留量做出更精准的测定。

１　快速检测盐酸克伦特罗的方法１．１　色谱法１．１．１　液相色谱 质谱联用法　盐酸克伦特罗测定的国家标准《动物源性食品中多重β 受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》曾于２００８年出台，并将于２０２３年２月１日废止。