图1 连续错流萃取回收酶的流程图
目的产物的萃取
细胞悬浮液经珠磨机破碎细胞后,与PEG和无机 盐在萃取器中混合,然后进入离心机分相。通过 选择合适的双水相组成,一般使目标蛋白质分配 到上相( PEG相) ,而细胞碎片、核酸、多糖和杂 蛋白等分配到下相(富盐相) 。主要原因有: (1) 核酸和多糖由于其亲水性,易分配到富盐相, 目标蛋白质只有分配到富PEG相才能达到分离目 的。 (2) 下相的高盐浓度易造成蛋白质失活或沉淀,而 PEG对蛋白质有保护作用。 (3) 细胞碎片分配在下相有利于连续式离心机分离, 如在上相易堵塞离心机出口。
第1步萃取后的上相中还含有较多杂蛋白及一些 核酸、多糖和色素(色素因其疏水性分配在上相) 等,可通过加入适量的盐,再次形成PEG/无机盐 体系来进行纯化。目标蛋白质仍留在PEG相中。 在第3步萃取中则将蛋白质转入富盐相,从而将 蛋白质与PEG分离开。但从经济角度考虑,一般 用2步萃取,即在第2步将目标蛋白质转入富盐相。
含水量是反胶团的一个重要参数,决定反胶团物 理性质,决定其大小和每个胶团中所含表面活性 剂的个数。 含水量与表面活性剂的种类、助表面活性剂、水 相中盐的种类和浓度有关。
反胶团体系分类
反胶团制备
相转移法
注射法 溶解法
溶解推动力
A 静电作用: 当溶质所带电荷与表面活性剂相反时,由于静电引 力的作用,溶质易溶于反胶团,溶解率或分配系数 较大,反之,则不能溶解到反胶团相中. B 空间相互作用 盐浓度增大对反胶团相产生脱水效应, 含水率W0 随盐浓度的增大而降低,反胶团直径减小, 空间排 阻作用增大, pro溶解下降.
生物分子的分配系数取决于溶质与双水相系统间 的各种相互作用,其中主要有静电作用、疏水作 用和生物亲和作用等。因此,分配系数是各种相 互作用的和。