2023年内蒙古自治区鸡新城疫抗体水平测定赛项规程

新城疫抗体水平检测文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-新城疫的血凝和血凝抑制试验高若开 一、实验目的1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。

2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。

二、实验内容1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反应。

2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。

这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。

病毒颗粒红细胞四、实验材料离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。

五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。

1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。

（二）10%红细胞悬液的配制1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。

2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。

3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。

4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。

5、2-6摄氏度储存，备用。

（三）血凝试验（HA)1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul 生理盐水抗体抗原2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。

新城疫的血凝和血凝克制试验高若开一、实验目的1.掌握血凝和血凝克制试验的基来源理、操作方法和结果判断方法。

2.剖析血凝和血凝克制试验的影响要素，用以确立最正确免疫时间、判断免疫成效和协助疾病诊疗。

二、实验内容1.血凝试验 (HA) 检测新城疫抗原2.血凝克制试验 (HI) 检测新城疫抗体三、实验原理1.血凝试验（ HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝聚，这类凝聚红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反响。

病毒红颗细粒胞2.血凝克制试验（ HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这类抗体的量足以克制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不可以与病毒颗粒或血凝素直接接触。

这时红细胞的凝聚现象就被克制，称为红细胞凝聚克制（HI ）反响，也称血凝克制反响。

抗原抗体I am late！四、实验资料离心计、恒温箱、冰箱、振荡器、 96 孔血凝版（ 5 块）、微量移液器（ 20-100 （若干）、洗耳球、离心试管、一般试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、微升可调）、吸液尖ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。

五、实验步骤（一）抗凝剂的配制将 1 克柠檬酸钠用25 毫升生理盐水稀释备用。

1 毫升抗凝剂可用于收集9 毫升血液。

（二） 10%红细胞悬液的配制1、用注射器汲取 0.5 毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞 4.5 毫升。

2、 1500 转离心 5 分钟，吸弃上清液。

3、用 5-10 倍生理盐水 1500 转清洗 3 次，前两次 5 分钟，后一次10 分钟。

4、吸弃上清液，用吸量管汲取红细胞，配制成10%红细胞悬液。

5、 2-6 摄氏度储藏，备用。

（三）血凝试验（ HA)1.在血凝板上第一排的1－ 12 孔内各加入 50ul 生理盐水2.将系苗用生理盐水 5 毫升稀释，在第 1 孔内加入 50ul 病毒抗原，而后挨次倍比稀释至第11 孔，最后弃 50ul。

全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷（一）工位号：考试时长：120分钟一、填空题（每空0.5分，共10分）1. 传染病的传播方式可分两大类：和。

2. 传染病流行的三个基本环节是、传播途径和。

3. 细菌的特殊结构包括、、和。

4. 病毒的复制过程包括、穿入、、、和五个阶段。

5.根据动物机体感染病原体后病程长短的不同，感染可以分为、、和。

6.当口蹄疫流行时，绵羊是口蹄疫病毒的储存器，是感染的放大器，是发病的指示器。

7. 抗原的性质包括__________和__________两个方面。

二、单项选择题（每小题1分，共10分）1. 国家对动物疫病实行的主要方针是（）。

A. 预防为主B. 加强检疫C. 监督管理D. 扑杀2. 鸭传染性浆膜炎的主要特征不包括（）。

A. 纤维素性心包炎B. 纤维素性肝周炎C. 纤维素性气囊炎D. 纤维素性肠炎3. 下列哪一条关于禽霍乱的表述是错误的？（）A. 病原为禽多杀性巴氏杆菌B. 产蛋鸡常发C. 肉髯肿胀，变青紫色D. 对水禽无致病性4. 关于病毒的特点，叙述错误的是（）A. 对抗生素敏感B. 能通过细菌滤器C. 增殖方式为复制D. 不能在人工培养基上生长5.细菌的运动器官是（）。

A. 荚膜B. 鞭毛C. 菌毛6.下列属于人工主动免疫的是（A.注射卵黄抗体获得的免疫C.通过胎盘获得的免疫7. 下列（ D.芽胞B. 患传染病康复后获得的免疫D.接种疫苗获得的免疫）属于中枢免疫器官。

A. 脾脏B. 胸腺C. 淋巴结D. 哈德尔氏腺8. 抗感染免疫的主力抗体为（ ）A. IgGB. IgMC. IgAD. IgE9. 对动物采取免疫接种的目的是（ ）A ．降低易感动物的易感性B ．控制传染源C ．切断传播途径D ．控制疫源地10. 牛结核病检疫是利用了（ ）变态反应。

A. Ⅰ型B. Ⅱ型C. Ⅲ型D. Ⅳ型三、多项选择题（每题至少有2个及以上答案，多选、少选均不得分。

全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷（九）工位号：考试时长：120分钟一、填空题（每空0.5分，共10分）1. 细菌细胞壁结构中，为革兰阴性菌所特有，位于外壁层的最表面。

2. 是病毒增殖的唯一场所。

3. 是细菌的运动器官。

4. 外毒素经甲醛溶液处理后失去毒性，但仍保留很强的抗原性，称为，其可作为疫苗进行免疫接种。

5. 细菌毒力因子主要有和两个方面。

6. 垂直传播包括、和经产道传播三种方式。

7. 在动物传染病的流行过程中，根据在一定时间内发病率的高低和传播范围的大小，可分为________、________、________和大流行四种表现形式。

8. 破伤风又称为强直症，俗称______，是______经伤口厌氧感染引起的一种急性、创伤性、中毒性人兽共患病。

9. 免疫效应分子包括抗体、和。

10.既有免疫原性又有反应原性的抗原称为。

11.B细胞介导的免疫应答为免疫应答。

12.病毒的复制过程可分为吸附、、、生物合成、五个主要阶段。

二、单项选择题（每小题1分，共10分）1.细菌摄取钠离子的方式是（）。

A. 单纯扩散B. 促进扩散C.主动运输D. 基团转位2. 以下微生物中，引发强直症的病原为（）。

A.肉毒梭菌B.产气荚膜梭菌C. 破伤风梭菌D.炭疽杆菌3. 酒精的有效杀菌浓度是（）。

A.60%~65%B.70%~75%C. 80%~85%D. 90%~95%4. 我国饮用水的卫生标准是，每毫升水中细菌总数不超过（）。

A. 50个B.100个C.150个D.200个5. 没有抗体参与的变态反应是（）型变态反应。

A.ⅠB.ⅡC.ⅢD.Ⅳ6.不是免疫应答的特点的是（）。

A.特异性B.免疫记忆C.有免疫期D.遗传性7. 下列物质中，（）可以激活补体。

A.抗原B.抗体C.抗原抗体复合物D.半抗原8.血清学反应中的两阶段比较，（）。

A.第一阶段快B.第二阶段快C.两阶段一样快D.不一定9. 《中华人民共和国动物防疫法》将动物疫病分为（）。

162019年第 49卷·第5期本赛项由学校、行业、企业共同设立。

通过采取全国统一标准进行技能竞赛，有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间的交流，引领专业建设与课程改革；能进一步深化学校与企业之间的合作交流，为专业建设和课程改革增添了新的思路，同时通过本赛项的资源转化，可以向社会展示畜牧兽医类专业的师生风采和建设成果，提高专业的教学水平，提升人才培养质量[1,2]。

１　比赛对照标准鸡新城疫抗体水平测定技能大赛赛项是以教育部颁布的国家职业标准《动物疫病防治员》（高级）为基础，以国家标准GB/T16550-2008[3]《鸡新城疫诊断技术》为依据，严格按照大赛组委会赛项规定[4]，进行结果判定和评分。

1.1 实验仪器的准备以2018年全国职业院校技能大赛赛项规程为例。

实验器材的准备占实验总成绩的8%。

主要要求参赛选手按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。

由赛组委会提供的项目竞赛用仪器、设备与材料共计34项。

但在实际操作过程中并不是所有的全部选用，选择仪器设备要以“使用合理的前提下够用”为原则。

在仪器与材料准备时要检查清点，并要做好清晰合理的标识。

使用的烧杯、离心管、离心管盖和血凝板都要进行标识。

实验器材的摆放要严格遵守分区摆放的原则，明确污染区和洁净区各自物品的数量和用途。

摆放完毕尽可能的不要去来回挪动器材，尽可能的做好各区域之间的互不干扰。

该赛项中主要用到的仪器有不同规格的精准微量移液器及相应的配套材料、离心机、托盘天平、微型震荡器，用到的实验材料及动物有非免疫公鸡、禽用采血器、96孔微型反应板、烧杯等。

对仪器的操作和使用要掌握其工作的原理，尤其要做好规范操作和合理使用。

1.2 1%鸡红细胞悬液配制1%鸡红细胞悬液的配置情况直接影响到实验的进度和实验结果的准确性。

而配置过程中采血是否成功是最为关键的。

在配置1%鸡红收稿日期：2019-03-26作者简介：张春霞（1989-），女，青海湟中人，讲师，主要研究方向为动物疫病防控。

职业院校技能大赛“鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程一、赛项名称赛项编号：GZ-108赛项名称：鸡新城疫HI抗体水平测定。

英语翻译：Detection of the antibody titer against the Newcastle disease virus赛项组别：高职组赛项归属产业：农林牧渔大类二、竞赛目的本赛项考核的核心技能是鸡的采血方法、1%鸡红细胞悬液配制、红血球凝集（hemagglutination，HA）试验操作与结果判定、四个血凝单位（HAU）病毒溶液配制、红血球凝集抑制（hemagglutination inhibiion，HI）试验操作与结果判定、HI抗体滴度报告撰写等技能。

本赛项考核的核心知识是《动物微生物学》、《兽医免疫学》、《兽医临床诊疗技术》、《动物传染病学》等专业课程理论知识。

本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台，加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。

同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医等专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。

三、竞赛内容该项目由两人配合完成，按照操作规程进行试验器材的准备，并进行标识，合理摆放；之后进行采血、离心、洗涤，配制1%鸡红细胞悬液；用微量移液器在96孔V形微量反应板上进行红血球凝集试验，测定新城疫标准抗原的血凝价；根据血凝试验测定的新城疫标准抗原的血凝效价，配制4个血凝单位病毒溶液；进行被检血清的血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取HI抗体滴度结果，并完成试验相关记录和测定结果报告。

四、竞赛方式本赛项为团体赛。

每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，参赛选手均为高职院校在籍学生。

每组选手限2名指导教师，指导教师须为本校专兼职教师。

五、竞赛流程本项目竞赛日程与流程安排见表1。

全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷（六）工位号：考试时长：120分钟一、填空题（每空0.5分，共10分）1. 病毒衣壳的主要成分为。

2. 中枢免疫器官又称初级免疫器官，包括骨髓、法氏囊和。

3. 哺乳动物再次免疫应答后血清中含量最高的免疫球蛋白成分是。

4. 细菌在生长繁殖过程中产生和释放的具有损害机体组织、器官并引起生理功能紊乱的毒性成分是。

5. 当两种病毒感染同一细胞时，可发生一种病毒抑制另一种病毒复制的现象，称为病毒的现象。

6. 疫苗用量超过了一定限度后，免疫效果不但不增加，还可能导致免疫受到抑制，称为。

7. 侵入动物机体的病毒不能杀死宿主细胞，二者形成共生平衡，使动物长期处于感染状态，并且经常或不定期地排出病毒，但常无症状，称为感染。

8. 口蹄疫病以口腔粘膜、蹄部、乳房发生和糜烂为特征。

9. 蓝舌病的传播媒介是。

10. 常用于分离鸡新城疫病毒所用鸡胚日龄是。

11. 传染性法氏囊发病2~3天，病毒含量最高的器官是。

12. 绦虫虫体可分头节、体节和。

13. 猪囊尾蚴寄生于猪的，其成虫寄生于人的小肠。

14. 某1000只肉鸡群，4周内发病500只，死亡300只，该病的病死率是 %。

15. 动物出现某病特有症状的感染称为感染。

16. 急性猪瘟的典型淋巴结病理变化是。

17. 容易形成长久疫源地并难以根除的疫病是。

18. 病毒的增殖方式是。

19. 病毒是自然界中最小的微生物，测量单位为。

20. 吸虫幼虫的发育一般包括毛蚴-包蚴- -尾蚴-囊蚴五个时期。

二、单项选择题（每小题1分，共10分）1. 基因组有8个节段的病毒是（）。

A.马立克氏病病毒B.禽流感病毒C.新城疫病毒D.禽传染性支气管炎病毒2. 引起母猪繁殖障碍的疱疹病毒是（）。

A.猪传染性胃肠炎病毒B.猪细小病毒C.猪圆环病毒I型D.伪狂犬病病毒3.鸡群暴发传染性法氏囊病时，控制该病最好紧急注射（）。

A.疫苗B.中药制剂C.抗生素D.高免卵黄抗体4.动物传染病的预防措施中，属于预防接种的措施是（）。

附件1：高职农林牧渔专业类鸡新城疫抗体水平测定赛项技能竞赛规程、评分标准及选手须知一、竞赛内容本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准进行。

本赛项不设理论考试，只对技能操作进行综合考核，技能竞赛题为公开试题，见本赛项规程的主要技术规程及要求。

二、竞赛方式本赛项为2人小组赛，以院校为单位组队参赛，不得跨校组队。

三、竞赛时量比赛时间为3小时。

比赛时由参赛队自行确定分工完成相关竞赛内容。

四、名次确定办法本赛项满分100分，采用分项计分法。

按总分由高到低排序，总分相同按完成时间先后排序，用时少者列前；若二项均相同，则按抗体滴度报告、西凝试验得分高低依次排序。

五、评分标准与评分细则1．评分标准及分值项目技能竞赛评分标准及分值见表1。

表1 项目技能竞赛评分标准及分值2．评分细则项目技能竞赛评分细则见表2。

表2 项目技能竞赛评分细则六、赛点提供的设施设备仪器清单仪器设备按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准要求配制，且均为常用仪器、设备与材料。

本赛项所用的仪器、设备与材料见表3。

七、选手须知（一）主要技术规程及要求鸡新城疫抗体水平测定（微量法）按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准进行,具体步骤及其分值如下：（一）试验器材准备（占总成绩的8%）按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。

（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。

（三）血凝试验（占总成绩的20%）按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。

要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。

2022年河北省职业院校学生技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛样卷（5）一、填空题（每小题0.5分，共10分）1.细菌的大小的度量单位用________表示。

2.________为革兰阴性细菌所特有，为于外膜的最表面，厚度8-10nm。

3.细菌以________进行无性繁殖。

4.在生长曲线中________的病原菌致病力最强、其形态、染色特性及生理活性均较为典型。

5.________是最古老、作用最大、应用最广、使用最简便以及效果最可靠的灭菌方法。

6.________是确定某种病原菌是否具有致病性的主要依据。

7.细菌产生的毒素按照其来源、性质和作用等不同可以分为内毒素、________。

8.________是增强细菌毒力的最佳方法。

9.________是微生物分离的基本单元。

10.临床中种鸡场沙门菌最常用的检测方法是________。

11.临床中动物源多杀性巴氏杆菌列为多杀亚种、________和杀禽亚种。

12.支原体典型的典型菌落呈________状。

13．病毒一般以________的形式存在，具有一定的形态、结构及感染性。

14.________是一种可靠的病毒滴度测定的方法。

15.________在我国是分布最广、危害最严重的禽病之一。

16.新城疫病毒旧名________。

17.国家规定鸡免疫接种新城疫疫苗________d后才可调运。

18.临床中鸡新城疫抗体水平检测的方法是________。

19.根据国家标准鸡新城疫HI试验阳性的判断标准是≥________。

20.国家认定的一类疫病中对人和动物危害严重的有________种。

二、单选题（每小题1分，共10分）1.在动物传染病发展过程中其特征性逐步明显、充分表现出来的这段时间称为（）A.潜伏期B.前驱期C.明显期D.转归期2.注射油乳剂灭活苗后产生的抗体比注射相同的活疫苗产生的抗体比（）。

A.维持时间短，效价高 B．效价低，维持时间长C．效价高且维持时间长 D维持时间短，效价低3．疫点、疫区、受危胁区和封锁令由划定公布部门是（）。

教学实习内容一．鸡新城疫的免疫检测目的：系统掌握鸡新城疫的抗体检测技术。

实验材料：新城疫疫苗、待测鸡蛋、生理盐水、5%柠檬酸钠、1%鸡红细胞悬液、胶头滴管、注射器、锥形瓶、15ml离心管、试管、96孔V型板、离心机等1.1%鸡红细胞悬液的制备（1）每组采取3ml左右健康鸡静脉血，迅速注入装有约0.3-0.4ml抗凝剂的离心管内，轻轻颠倒混匀；（2）加入适量生理盐水，混匀，3000rpm*10min，吸弃上清液和红细胞沉淀上层的白细胞层（3）加入适量生理盐水，重悬红细胞，3000rpm*10min，吸弃上清液。

如此，重复3次。

（4）量取红细胞沉淀的体积，用生理盐水配成1%的红细胞悬液，待用。

2.HA试验1%红细胞根据所用NDV液的凝集价，配制4单位病毒液。

3.HI试验（1）待测卵黄样品的制备：用镊子敲破鸡蛋小头，将蛋清倒去，留蛋黄在蛋壳内；吸取0.5ml 生理盐水，放入小试管内；去掉部分蛋壳，用1ml注射器（不带针头）吸取蛋黄0.5ml，加到有生理盐水的试管内，混匀（避免其很多泡）待检。

（2）按照检测血清抗体的方法检测卵黄中的抗体。

被检鸡蛋卵黄1%红细胞（3）判定和记录所检测鸡蛋的卵黄抗体效价。

结果与分析对所测得的结果进行分析，确定该鸡群目前的免疫状态，并对生产提出合理建议或给出科学指导。

分析并指出影响本实验结果的主要因素。

二．传染病的分子生物学检测——PCR检测（以PCV2为例）1.DNA提取：将猪肝脏称重后，按照1:3（W:V）的比例加入PBS，用组织研磨器研磨成组织悬液，反复冻融3次后8000 rpm离心5 min，取上清300 μL提取DNA。

取冻融、离心后的组织悬液/血清300μL，加入300 μL细胞裂解缓冲液和5 μL的蛋白酶K(20 mg/mL)，混匀，置50 ℃消化2 h，每隔30 min，剧烈震荡一次；加入等体积的Tris饱和酚，充分振荡混匀，4 ℃ 12000 rpm 离心10 min；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）混匀后，4 ℃ 12000 rpm 离心10 min；用酚：氯仿：异戊醇（25:24: l）重复抽提一次；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，加入2倍体积冰预冷的无水乙醇和1/10体积的3 mol/L醋酸钠（pH 5.2），室温放置30 min 以沉淀基因组DNA；4 ℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清；用75%乙醇1 mL 洗涤沉淀，4 ℃ 12 000 rpm 离心10 min后，弃去上清，自然晾干。

鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。

2．实验内容或原理某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。

这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。

3．需用的仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。

器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。

药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清4．实验步骤(1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。

(2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。

（3）免疫机体抗体效价的测定：3.鸡新城疫（ND）的HA和HI（1）试验准备①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。

② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。

如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。

红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。

再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。

全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷（三）工位号：考试时长：120分钟一、填空题（每空0.5分，共10分）1. 在新城疫抗体的检测中，常用的红细胞浓度为。

2. 微生物的种类繁多，包括、、、、、、、等八大类。

3. 病原携带者一般分为、、三类。

4. 根据感染后是否出现临床症状，可将感染分和。

5. 当口蹄疫流行时，是口蹄疫病毒的储存器，是感染的放大器，牛是发病的指示器。

6. 试验是目前诊断结核病最有现实意义的方法，也是OIE推荐的检测方法。

7. 垂直传播是传染病从亲代动物到其子代动物之间的纵向传播形式，主要包括以下几种途径、和。

二、单项选择题（每小题1分，共10分）1. 传染病的流行过程有（）个基本环节。

A. 5个B. 2个C. 3个D. 4个2. 因（）病能引起鸡皮肤损伤，从而继发葡萄球菌病，所以做好该病的免疫接种可有效预防鸡葡萄球菌病的发生。

A．曲霉菌病B．大肠杆菌病C．鸡毒支原体感染D．鸡痘3. 在培养基上与葡萄球菌混合培养形成“卫星菌落”的是（）。

A．曲霉菌B．副鸡禽杆菌C．鸡毒支原体D．新城疫病毒4. 下列不属于成熟T、B淋巴细胞定居和免疫应答的主要场所的是（）。

A. 胸腺B. 脾脏C. 哈德尔氏腺D. 淋巴结5. 动物机体初次接触某种抗原时最早产生的抗体是（）。

A.IgGB.IgMC.IgAD.IgE6. 鸡白痢检疫常用的血清学试验是（）。

A. HIB. 中和试验C. 琼扩试验D. 全血平板凝集试验7. 参与I型变态反应的免疫球蛋白是（）A. IgGB. IgMC. IgED. IgA8. 使细菌在外界具有强大抵抗力的结构是（）。

A. 菌毛B. 芽胞C. 鞭毛D. 荚膜9. 机体抵抗病原微生物感染的功能称为（）。

A. 免疫监视B. 免疫防御C. 免疫耐受D. 免疫稳定10. 下面（）不可采用干热灭菌。

A. 玻璃培养皿B. 剪刀C. 营养琼脂培养基D. 镊子三、多项选择题（每题至少有2个及以上答案，多选、少选均不得分。

全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷（四）工位号：考试时长：120分钟一、填空题（每空0.5分，共10分）1.马立克氏病的临床病型有神经型、内脏型、眼型和。

2.布氏杆菌病常用血清学检疫方法是。

3.禽类特有的中枢免疫器官是。

4.马立克氏病病毒是一种结合性病毒。

5.某些革兰氏阳性菌在一定条件下，细胞质和核质脱水浓缩，在菌体内形成一个折光性强、通透性低的圆形或椭圆形的，称为芽孢。

6.细菌具有运动性的特殊结构是。

7.仔猪黄痢易发病的仔猪日龄是。

8.猪气喘病由引起的呼吸系统疾病。

9.病原微生物刺激机体产生的抗体可以用反应检查出来。

10.在我国，弓形虫病属于类动物疫病。

11.传染病流行过程的三环节是传染源、和易感动物群。

12.从流行病学的观点来看，被称为口蹄疫的“指示器”的动物是。

13.破伤风是经伤口感染引起的一种急性中毒性人畜共患病，其病原体是。

14.痘病是多种家畜共患的病毒性传染病，其中有典型病理过程和危害最严重的痘病是。

15.根据消毒的目的划分，传染病的消毒可分为预防性消毒、随时消毒和。

16.布鲁氏菌病的病原中对人危害最大的是。

17.牛结节性皮肤病可以通过接种疫苗起到保护作用。

18.引起沙门氏菌病的主要传播途径是。

19.目前唯一已知核酸为DNA的虫媒病毒是。

20.伪狂犬病毒的原始宿主是。

二、单项选择题（每小题1分，共10分）1. 鸡产蛋下降综合症是由（）引起。

A.大肠杆菌B.沙门氏菌C.饲养管理不善D.禽腺病毒2. 可用于鉴定细菌血清型的方法是（）。

A.生化试验B.药物敏感性试验C.玻片凝集试验D.血凝试验3. PCR检测病毒检测的靶标是（）。

A.蛋白质B.核酸C.磷脂D.胆固醇4. 由五个单体分子构成五聚体的免疫球蛋白是（）。

A.IgGB. IgMC. IgAD. IgEE. IgD5. 先天性免疫应答具有的特点是（）。

A.特异性强B.具有一定的免疫期C.具有免疫记忆D.具有遗传性6. 预防大肠杆菌感染最好使用（）。

2022年河北省职业院校学生技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛样卷（4）一、填空题（每小题0.5分，共10分）1.病毒的培养方法有________、________、________。

2.传染病流行的三个基本环节是________、________、________。

3.狂犬病病毒在电子显微镜下呈________。

4.有传染源及其病原体排出存在的地区称为________。

5.在一定的地区中畜群发生规模比较小的家畜传染病的流行，称为________。

6.病原体由传染源排出后，经一定的方式再侵入其他易感染动物所经历的路径称为________。

7.传染病流行过程的表现形式：________、________、________、________。

8.除病畜和可疑感染家畜外，疫区内其他易感家畜称为________。

9.人和动物血清中含量最高的免疫球蛋白是________。

10.禽类所特有的淋巴器官是________。

11.病原体主要靠吸血昆虫在动物间来传播的传染病称为________。

12.鸡的沙门氏菌病又称为________。

13.用于鸡新城疫抗体检测的鸡红细胞的浓度是________。

二、单项选择题（每小题1分，共10分）1.下列哪种不属于人工被动免疫（）A.注射免疫血清B.注射康复动物血清C.注射卵黄抗体D.注射疫苗2.鸡胚培养一般选择（）日龄的鸡胚。

A.7～8B.8～10C.9～12D.12～143.属于病毒界的微生物是（）A.放线菌B.立克次氏体C.噬菌体D.藻类4.类毒素是（）A.抗毒素经甲醛处理后的物质B.内毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质C.外毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质D.细菌经甲醛处理后的物质5.对动物注射疫苗，属于（）。

A.人工被动免疫B.人工主动免疫C.天然主动免疫D.天然被动免疫6.疯牛病的病原体是（）。

A.类病毒B.朊病毒C.拟病毒D.蛭弧菌7.某鸡场成年鸡群发生一种以结膜炎、呼吸困难、喀出带血的粘液等为主要临床症状的急性传染病，在诊断上应首先怀疑该病为（）A.鸡新城疫B.鸡传染性支气管炎C.鸡传染性鼻炎D.鸡传染性喉气管炎8.病毒性传染病主要用（）进行预防。

鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。

2．实验内容或原理某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。

这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。

3．需用的仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。

器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。

药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清4．实验步骤(1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。

(2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。

（3）免疫机体抗体效价的测定：3.鸡新城疫（ND）的HA和HI（1）试验准备①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。

②0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。

如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。

红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。

再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。