培养基灭菌与空气净化

无菌技术基本操作流程无菌技术是现代生物学和医学领域中非常重要的一项技术，用于防止细菌、真菌和病毒等微生物的污染。

无菌技术的基本操作流程如下：1. 实验室准备在进行无菌技术操作之前，首先要准备好实验室环境。

实验室应保持整洁干净，操作台面和仪器设备要进行彻底的清洁和消毒。

同时，准备所需的培养基、培养皿、试管、移液器等实验用具，并确保其无菌。

2. 消毒操作在进行无菌技术操作之前，必须进行消毒操作，以杀灭空气中的微生物。

常用的消毒方法包括用75%乙醇擦拭操作台面、试管架和实验器皿，并对培养基、培养皿进行高压蒸汽灭菌。

3. 空气净化无菌技术操作时需要保持操作环境的空气净化。

可以使用超净工作台或无菌层流罩等设备，保持空气中的微生物数量低于一定标准。

在操作过程中，操作者应注意尽量减少对操作空间的污染，避免摇晃操作台面，以减少气流扰动。

4. 穿戴防护服无菌技术操作时，操作者必须穿戴防护服，包括实验服、帽子、口罩、手套和鞋套等。

防护服的目的是防止操作者的皮肤、呼吸道和头发等对操作环境产生污染。

5. 操作技巧在进行无菌技术操作时，操作者应掌握正确的操作技巧。

首先，要保持双手的清洁，使用无菌手套，并经常更换新的手套。

其次，要注意避免操作过程中的直接接触，使用无菌的移液器等工具进行操作。

此外，要注意避免试管口与环境接触，以防止试管口的污染。

6. 培养基接种在进行无菌技术操作时，常常需要进行培养基的接种。

接种前，首先要将培养基加热至液态，并在无菌条件下打开培养皿盖。

然后，使用无菌的移液器将待接种的微生物转移到培养皿中，并迅速将盖盖好。

接种后的培养皿要进行彻底的密封，以避免空气中的微生物进入。

7. 培养条件控制在进行无菌技术操作时，要控制好培养条件，使微生物能够正常生长。

通常需要控制温度、湿度和氧气等因素。

不同微生物的培养条件可能有所不同，操作者应根据实际情况进行调整。

8. 结果判断在进行无菌技术操作后，需要根据培养结果来判断是否成功。

无菌技术的原则一、引言无菌技术是指在实验室或生产环境中，采取一系列措施，以保证实验材料或产品不受外界微生物污染的技术。

无菌技术广泛应用于生物医药、食品加工等领域，其重要性不言而喻。

二、无菌技术的原则1. 空气净化空气是微生物传播的主要途径之一，因此，在进行无菌操作时，必须保证空气的洁净度。

通常采用高效过滤器和UV灯等设备对空气进行净化处理。

2. 器具消毒所有与实验材料或产品接触的器具都必须经过消毒处理。

消毒方法有多种，如高温蒸汽灭菌、化学消毒等。

3. 人员防护人员是微生物传播的另一个重要途径。

因此，在进行无菌操作时，必须采取一系列防护措施，如穿戴洁净衣服、戴口罩和手套等。

4. 区域划分为了避免不同区域之间的交叉污染，应将实验室或生产环境划分为不同的区域，并采取相应的措施对不同区域进行隔离。

5. 操作规范无菌操作需要严格按照操作规范进行，如在无菌条件下打开器具、使用无菌棉签等。

6. 实验材料或产品处理实验材料或产品也是微生物传播的来源之一。

因此，在进行无菌操作时，必须对实验材料或产品进行适当的处理，如消毒、过滤等。

三、常见的无菌技术1. 灭菌灭菌是指将器具、介质等杀死所有微生物的方法。

常见的灭菌方法有高温蒸汽灭菌、化学消毒等。

2. 过滤过滤是指通过孔径较小的过滤器将微生物过滤掉。

常见的过滤器有0.22μm孔径的滤膜。

3. 压差检测压差检测是指通过检测过滤器两侧压差来判断过滤器是否堵塞。

当压差超过一定值时，需要更换过滤器。

4. 空气监测空气监测是指通过采集空气样品并培养分析来判断空气中微生物数量及种类。

常见的空气监测方法有活菌计数法、PCR等。

四、无菌技术的应用1. 生物医药领域无菌技术在生物医药领域中应用广泛，如制备无菌培养基、细胞培养、疫苗制备等。

2. 食品加工领域无菌技术在食品加工领域中也有重要应用，如罐头食品的生产、乳制品的生产等。

3. 环境监测无菌技术也可以用于环境监测，如对医院手术室、食品加工车间等进行空气监测和表面检测。

几种无菌技术操作方法
无菌技术是一种重要的实验室操作方法，用于防止细菌、病毒和其他微生物的污染。

以下是几种常用的无菌技术操作方法：
1. 灭菌：将实验室器具、培养基、培养皿等物品暴露在高温或化学物质中，以杀灭所有微生物。

常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌（autoclaving）和干热灭菌（dry heat sterilization）。

2. 空气净化：使用高效过滤器（例如HEPA过滤器）过滤空气中的微生物，以减少实验环境中的微生物数量。

3. 灭火：使用火焰对实验器具进行灭菌处理，例如对培养皿盖进行灭菌，或在实验过程中将工具头置于火焰中。

4. 剥离、涂气体或固体培养基：在无菌环境下，使用微量吸球将微生物转移到培养基上，或使用无菌棉签涂抹在固体培养基上。

5. 消毒擦拭：使用消毒剂润湿无菌纸巾，轻轻擦拭实验台面、操作区域和实验仪器，以消除表面的微生物。

6. 无菌操作罩：在无菌操作罩中进行实验操作，通过过滤器过滤空气中的微生物，以防止实验材料受到污染。

这些无菌技术操作方法的选择和使用取决于实验的特定要求和所处理材料的性质。

无论采用哪种方法，都需要注意操作过程的无菌操作和实验环境的清洁，以确保实验结果的准确性和可靠性。

培养基灭菌与空气净化培训一、引言在微生物实验室和生物制药等领域中，保持培养基的无菌状态以及空气质量的洁净是非常重要的。

为了确保实验结果的准确性和产品的质量，培养基灭菌和空气净化是必不可少的环节。

本文档旨在为实验室和生物制药相关人员提供培养基灭菌与空气净化的培训内容，包括培养基灭菌方法、灭菌设备的选择与操作、空气净化的原理与方法等。

通过培训，希望能够提高各位实验人员对培养基灭菌与空气净化的认识和技能，提升实验室和生产环境的无菌水平。

二、培养基灭菌方法培养基灭菌是指通过外部手段将培养基中的微生物杀灭，防止其污染实验结果。

常用的培养基灭菌方法包括物理灭菌和化学灭菌两种。

2.1 物理灭菌物理灭菌是通过提高温度、压力或辐射等手段来杀灭微生物。

常见的物理灭菌方法有：1.高温灭菌：将装有培养基的容器放入高压高温灭菌器中，在高温高压条件下进行灭菌，常用的温度和时间为121℃/15分钟。

要注意灭菌器的压力和温度控制，以确保达到有效的灭菌效果。

2.剂量灭菌：利用辐射源如紫外线、X射线或γ射线等，照射培养基以达到杀灭微生物的目的。

剂量灭菌需要严格控制辐射剂量，以免对培养基中的营养成分产生不良影响。

2.2 化学灭菌化学灭菌是通过加入能够杀灭微生物的化学物质来实现培养基的灭菌。

常用的化学灭菌方法包括：1.干热灭菌：将装有培养基的容器放入干热灭菌器中，在高温、低湿的条件下进行灭菌。

干热灭菌的温度和时间根据具体需求和培养基成分而定。

2.过滤灭菌：通过将培养基用0.22μm孔径的微孔膜过滤，阻挡微生物进入，达到灭菌的目的。

过滤灭菌适用于无法承受高温或辐射的特殊培养基。

三、灭菌设备的选择与操作选择合适的灭菌设备以及正确的操作方法是保障培养基灭菌效果的关键。

根据需要和实验条件，常见的灭菌设备有高压高温灭菌器、干热灭菌器和紫外线灭菌器等。

3.1 高压高温灭菌器高压高温灭菌器是常用的物理灭菌设备，适用于大部分常规培养基的灭菌。

在使用高压高温灭菌器时，应注意以下操作要点：1.根据培养基的特点和厚度合理选择灭菌温度和时间，避免对培养基造成损害。

第5章培养基灭菌和空气除菌教研室：生物工程教师姓名：余有贵教学过程一、灭菌的意义和方法1、灭菌的意义采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施,称为灭菌，例如各种高温灭菌措施等.保证纯种发酵，防止杂菌和噬菌体污染。

消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。

2、灭菌的方法（1）火焰灭菌：接种时使用, 灼烧是一种最彻底的干热灭菌方法，但它只能用于接种环、接种针等少数对象的灭菌(2)干热灭菌法：适于灭菌后要求保持干燥状态的物料，将金属制品或清洁玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2小时后，即可达到彻底灭菌的目的.在这种条件下，可使细胞膜破坏、蛋白质变性、原生质干燥,以及各种细胞成分发生氧化。

（3）湿热灭菌法：多数细菌和真菌的营养细胞在60℃左右处理5~10min后即可杀死；酵母菌和真菌的孢子稍耐热些，要用80℃以上的温度处理才能杀死；而细菌的芽孢最耐热，一般要在120℃下处理15min才能杀死。

工业生产上广泛使用，常用120℃,20—30min.（4)射线灭菌法：适于表面灭菌,紫外线波长在2600埃左右灭菌效力最强,一般用30瓦紫外灯照射20—30min（5）化学药剂灭菌：1）0.1％—0。

25%的高锰酸钾溶液:皮肤消毒2）2%-5%漂白粉：用具和车间环境的灭菌3)70%-75％酒精溶液:皮肤和玻璃器皿表面灭菌4)0。

25%新洁尔灭: 皮肤、小器皿表面和车间的灭菌5)0。

5%甲醛：用于无菌室、空罐和车间空间的灭菌，10ml/m3，6-12h(6)高压静电灭菌:应用于空气的灭菌（7）介质过滤除菌：滤除血清和抗生素溶液内的微生物和空气过滤除菌。

二、培养基和设备的湿热灭菌1、湿热灭菌的原理1。

1概念致死温度：杀死微生物的极限温度。

致死时间：在致死温度下,杀死全部微生物所需要的时间。

热阻：微生物在某一特定的条件下的致死时间性，表示微生物对热的抵抗力.1.2原理湿热灭菌的基本原理：湿热灭菌是直接用蒸汽灭菌。

第五章培养基的灭菌及空气除菌酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程e N N ⋅=菌)酶工程酶工程酶工程酶工程1/Tk （m i n -1）A ln k ln RT +−=酶工程酶工程维生素B12 96232 维生素B1盐酸盐 92048 嗜热脂肪芽孢杆菌孢子 283257 肉毒梭菌孢子 343088 枯草杆菌孢子317984各种物质的活化能酶工程嗜热脂肪芽孢杆菌孢子和维生素B 1的lnk ～1/T 图酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程：介质温度（K ）；T 0：介质初温（K ）；t ：时间（：蒸汽相对于介质的热焓（kJ/kg ）；s ：蒸汽的重量流率（：介质重量(kg)；C p ：介质比热[kJ/(kg.K)]；T H ：热源温度：总传热系数[kJ/（m2.min.K ）]；q ：传热速率（：冷却剂比热；W ：冷却剂流率；T CO ：冷却剂温度酶工程升温阶段35酶工程36酶工程降温阶段酶工程酶工程酶工程40酶工程41酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程47酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程酶工程1 辐射灭菌原理α射线、X射线、β射线、γ射线、紫外线、超声波等 从理论上讲都能破坏蛋白质，破坏生物活性物质，从 而起到杀菌作用。

2 加热灭菌利用压缩热进行空气灭菌的流程图应用范围通常用于无菌室和医院手术室。

缺点杀菌效率较低，杀菌时间较长。

一般要结合甲醛蒸汽 等来保证无菌室的无菌程度。

空气进口温度为21℃，出口温度为187~198℃，压力为 0.7MPa。

61酶工程62酶工程3 静电除菌原理利用静电引力来吸附带电粒子而 达到除尘、除菌的目的。

5.3.3 介质过滤除菌过滤除菌利用有孔介质从气体中除去微生物优点阻力小，约1.01325×104Pa 染菌率低，平均低于10~15％ 除水、除油的效果好 耗电少孔缺点设备庞大 、一次性投资较大 、捕 集率尚嫌不够，需要采取其它措 施。

第三章培养基灭菌与空气净化第一节培养基灭菌一、灭菌的原理和方法消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）的区别？消毒是指用物理或化学方法杀死物料、容器、器具内外的病原微生物。

一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢或非病源微生物。

例如，巴氏消毒法，是将物料加热至60℃维持30min，以杀死不耐高温的微生物营养细胞。

灭菌是用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。

包括全部病源和非病源微生物。

消毒不一定能达到灭菌要求，而灭菌则可达到消毒的目的。

抑菌（bacteriostasis）：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。

无菌：不存在活的细菌。

为防止杂菌的污染，哪些需要灭菌？培养基，发酵设备，空气，菌种制作关于灭菌和消毒的不正确的理解是（）A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B．消毒和灭菌实质上是相同的C．接种环用灼烧法灭菌D．常用灭菌的方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法防腐（antisepsis）防腐就是利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止食品等发生霉腐的措施。

（1）低温（4）高渗（2）缺氧（5）高酸度（3）干燥（6）防腐剂除菌的方法-培养基的加热灭菌-空气的过滤除菌-紫外线或电离辐射-化学药物灭菌1.化学试剂灭菌法方式：浸泡，添加，擦拭，喷洒，气态熏蒸甲醛、乙醇、过氧乙酸、酚类（苯酚）或新洁尔灭、高锰酸钾等①高锰酸钾：氧化 0.1%-0.25%②漂白粉：氧化，对细菌和phage均有效，是发酵工业中最常用的化学杀菌剂。

③75%酒精：杀菌作用在于使细胞脱水，引起蛋白质凝固变性。

适用范围：环境、皮肤及器械的表面消毒2.电磁波、射线灭菌法电磁波、紫外线或放射性物质。

以紫外线最常用。

紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。

紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室，培养间等空间的灭菌。

无菌操作实验报告引言无菌操作是生命科学和医学研究中重要的实验技术之一。

通过无菌操作，可以避免外部微生物的污染，确保实验结果的准确性和可靠性。

本实验报告旨在描述无菌操作的基本原理、操作步骤和注意事项。

无菌操作的原理无菌操作的原理是通过杀灭或阻止外源性微生物的进入，保持实验环境的洁净和无菌状态。

无菌操作通常包括以下几个方面：1.灭菌：通过高温蒸汽、紫外线照射、化学药剂等方法，彻底杀灭实验器材和培养基中的微生物。

2.防护：佩戴无菌手套、口罩和实验衣等防护用具，避免自身的微生物污染。

3.空气净化：利用高效过滤器等设备，过滤空气中的微生物，保持实验环境的无菌状态。

无菌操作的步骤1. 准备工作在进行无菌操作前，需要进行充分的准备工作，确保实验环境的洁净和无菌状态。

1.清洗实验室台面和器材：使用含有消毒剂的清洁剂彻底清洗实验台面和所需的器材，保证它们的无菌状态。

2.灭菌工具：准备好所需的高温蒸汽灭菌器、紫外线照射器等工具，以进行必要的灭菌操作。

2. 穿戴防护用具在进行无菌操作前，必须佩戴适当的防护用具，以防止自身的微生物污染。

1.穿戴实验衣：穿戴干净的实验衣，确保全身被完全覆盖。

2.戴口罩和帽子：戴上口罩和帽子，避免口腔和头发中的微生物进入实验环境。

3.戴无菌手套：佩戴无菌手套，以防止手部的微生物接触实验材料和器械。

3. 灭菌操作在进行无菌操作前，需要对器材和培养基进行灭菌处理，以确保它们不会引入外部微生物。

1.器材灭菌：将需要使用的器材，如试管、培养皿等，放入高温蒸汽灭菌器中进行灭菌处理。

2.培养基灭菌：将需要使用的培养基倒入培养瓶中，使用高温蒸汽或化学药剂对其进行灭菌处理。

4. 实验操作在进行实验操作时，必须保持无菌操作的环境和步骤。

1.打开实验台面灯光：打开实验台面上的灯光，以提供充足的照明。

2.打开无菌操作台：打开无菌操作台，确保台面和周围环境的无菌状态。

3.快速操作：在无菌操作台上迅速进行实验操作，减少操作时间，降低微生物污染的风险。