培养基母液的配制方法

1 实验二培养基的配制及灭菌

一、实验目的：

1. 掌握常用培养基的制备方法；

2. 了解培养基的成分、类型及特点；

3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。

二、实验原理

人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。

基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。在配制母液时应注意防止沉淀产生。绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。通常使用的浓度单位是mg/L。

配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。

（一）、组成培养基的五类成分

目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

一、MS培养基母液的配制

注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2．微量元素母液的配制

按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，母液

成 分 1倍培养基用量 浓缩

倍数 称取量（mg） 母 液

体积（ml） 配制1升培养基吸取量（ml） 编号 种类

1 大量元素 KNO3 1900 10 19000

1000 100 NH4NO3 1650 10 16500

MgSO4·7H2O 370 10 3700

KH2PO4 170 10 1700

2 CaCl2·2H2O 440 10 4400 1000 100

3 微量元素 MnSO4·4H2O 22.3 100 2230

1000 10 ZnSO4·7H2O 8.6 100 860

H3BO3 6.2 100 620

KI 0.83 1000 830

1000 1 Na2MoO4·7H2O 0.25 1000 250

CuSO4.5H2O 0.025 1000 25

CoCL2.6H2O 0.025 1000 25

4 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 FeSO4.4H2O 27.8 100 2780

5 有机物 甘氨酸 2.0 50 100

500 10 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 50 25

盐酸硫铵素（VB1） 0.1 50 5

植物细胞工程

实验一 培养基母液的制备

一、实验目的与意义

学习和掌握培养基母液的配制方法。

在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。

二、实验器材

电子天平（称量为0.0001g）、电子天平（称量为0.01g）、烧杯（500ml、100ml、50ml）、容量瓶（1000ml、100 ml、50 ml、25 ml）、细口瓶（1000 ml、100 ml、50 ml、25 ml）、药勺、玻璃棒、电炉。

三、实验药品

NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、 H3BO3、 MnSO4·4H2O、

ZnSO4·7H2O、 Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素(维生素B1)、甘氨酸。

四、实验步骤

每种母液均配制500ml，各成分的质量如下：

1、大量元素母液的配制

表1 MS培养基大量元素母液制备

序号 药品名称 培养基浓度（mg/L） 扩大20称量(mg) 备注

1 NH4NO3 1650 16500

蒸馏水定容至500ml 2 KNO3 1900 19000

3 CaCl2·2H2O 440 4400

4 MgSO4·7H2O 370 3700

5 KH2PO4 170

1700

各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到500ml的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液50ml。

注意：

①配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的双蒸水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量双蒸水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。 ②CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。

关于植物组培中MS培养基，激素BA，NAA的疑问

植物组培中MS培养基中都有哪些物质? 激素BA和NAA的学名是什么?都有什么作用?

1 MS培养基的配制包括以下步骤。 培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避

免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各

种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或

1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg/L

NH4NO3 33 000 KNO3 38 000

CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400

KH2PO4 3 400

微量元素(母液Ⅱ) KI 166

H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460

ZnSO4·7H2O 1 720

Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5

CoCl2·6H2O 5 铁盐(母液Ⅲ)

FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460

有机成分(母液Ⅳ)

ⅣA 肌醇 20 000

ⅣB 烟酸 100

盐酸吡哆醇(维生素B6) 100

盐酸硫胺素(维生素B1) 100 甘氨酸 400

以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及

母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种

溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。