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黑色素瘤组织中RI的表达量检测及过表达RI对B16-F10细胞体内外生长的调节作用吴远慧;黄攀登;安国芝;周向昭【期刊名称】《海南医学院学报》【年(卷),期】2016(022)004【摘要】目的:研究黑色素瘤组织中核糖核酸酶抑制因子(RI)的表达量及过表达RI 对B16-F10细胞体内外生长的调节作用.方法:取黑色素瘤组织和肿瘤旁正常组织,检测RI的表达量;培养B16-F10细胞,过表达RI后测定细胞的增殖、侵袭行为以及相关基因的表达量;建立黑色素瘤移植瘤动物模型,称量移植瘤的重量.结果:(1)临床组织标本相关结果:不同TNM分期黑色素瘤组织中RI的表达量均低于肿瘤旁正常组织且TNM分期越高、RI的表达量越低;(2)细胞实验相关结果:过表达RI组细胞的OD值显著低于阴性对照组,发生侵袭的细胞数目少于阴性对照组,PKB、GSK-3β、ILK、PI3K、AKT的mRNA含量显著低于阴性对照组;(3)动物实验相关结果:过表达RI组小鼠的黑色素瘤移植瘤重量低于阴性对照组.结论:黑色素瘤组织中RI 的表达量显著减少,增加RI的表达能够抑制黑色素瘤细胞的体内外生长.【总页数】4页(P313-315,319)【作者】吴远慧;黄攀登;安国芝;周向昭【作者单位】河北北方学院附属第一医院皮肤科,河北张家口 075000;河北北方学院附属第一医院皮肤科,河北张家口 075000;河北北方学院附属第一医院皮肤科,河北张家口 075000;河北北方学院附属第一医院皮肤科,河北张家口 075000【正文语种】中文【中图分类】R739.5【相关文献】1.骨肉瘤组织中NOV基因表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性研究 [J], 高飚2.Gab2、IRX2表达量与骨肉瘤组织中细胞生长、迁移行为的相关性 [J], 周学军3.转化生长因子-β1、β3及其受体βRI、βRII mRNA及蛋白在子宫肌瘤组织中的表达 [J], 白会敏;王惠兰;陈素琴;尹桂然4.肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量检测及其与肿瘤增殖、侵袭的关系研究 [J], 黄朝友;李响;赖飞;杨振;钱友良5.RNAi沉默rictor基因表达抑制人膀胱癌T24细胞体内外生长 [J], 何春锋;张青川;刘永因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
恶性黑色素瘤的免疫治疗进展齐忠慧;斯璐【摘要】恶性黑色素瘤病死率高、预后差,但随着基础免疫学和肿瘤生物学的迅速发展,针对恶性黑色素瘤发生发展、侵袭转移的过程所进行的免疫治疗正进入一个新时期,黑色素瘤患者的生存获得可观改善.目前免疫治疗主要围绕PD-1单克隆抗体、CTLA-4单克隆抗体、免疫联合治疗展开.Pembrolizumab、Nivolumab、Ipilimumab单用、Nivolumab联合Ipilimumab以及Talimogene laherparepvec均已被证明是有效和安全的,已被美国食品药品管理局(FDA)批准用于恶性黑色素瘤的治疗.该文概述了目前免疫治疗药物的最新进展,并探讨其前景及挑战.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2019(038)008【总页数】7页(P997-1003)【关键词】恶性黑色素;免疫治疗;免疫检查点抑制剂;免疫联合治疗【作者】齐忠慧;斯璐【作者单位】北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所肾癌黑色素瘤内科、恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京 100142;北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所肾癌黑色素瘤内科、恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京 100142【正文语种】中文【中图分类】R979.1恶性黑色素瘤(malignant melanoma，MM)恶性程度极高，全球每年新发病例约20万例，我国每年新发病例达2万例[1]。
早期黑色素瘤患者术后5年总体生存率(overall survival，OS)较高，晚期黑色素瘤患者术后5年OS为24%～29%，ⅢC、Ⅳ期患者5年OS仅10%～19%。
传统化疗单药总体反应率(overall response rate，ORR)均小于20%，BRAF抑制剂的ORR虽达50%，但存在爆发性耐药问题。
白细胞介素2、肿瘤疫苗、过继T细胞疗法因为不良反应重或疗效欠佳未得以推广[2-3]。
相比之下，以免疫检查点抑制剂为首的免疫治疗可显著延长患者OS，降低死亡及复发风险，改善无进展生存期(progression-free survival，PFS)。
重组人内皮抑制素抑制肺黑色素瘤转移张海宁;宋海峰;张晋昕;汤仲明;郝一彬【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2008(24)16【摘要】目的:研究重组人内皮抑制素的抗肿瘤活性.方法:鸡胚绒毛尿囊膜实验观察重组人内皮抑制素的体内抗血管生成活性;将B16-BL6黑色素瘤细胞尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,构建肺转移瘤模型,评价重组人内皮抑制素的抗肿瘤活性.结果:重组人内皮抑制素可以明显抑制血管的生成.与生理盐水组相比,高、中、低剂量重组人内皮抑制素明显减少肺转移瘤数目,并对由于黑色素瘤体积的增长而引起的肺重增加也有抑制趋势.结论:重组人内皮抑制素通过抑制血管生成可以抑制肺黑色素瘤的转移.【总页数】3页(P2766-2768)【作者】张海宁;宋海峰;张晋昕;汤仲明;郝一彬【作者单位】510182,广州医学院药理学教研室;100850,北京市,军事医学科学院;510080,广州市,中山大学公共卫生学院;100850,北京市,军事医学科学院;030001,太原市,山西医科大学药理学教研室【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.重组人血管内皮抑制素注射液对老年转移性乳腺癌患者疗效及对血清血管内皮细胞生长因子和基质金属蛋白酶-9的影响 [J], 沈国满2.肝动脉化疗栓塞联合重组人血管内皮抑制素对兔VX2肝癌生长和转移的抑制 [J], 李智;倪才方;杨超;李明明;樊宝瑞3.重组人血管内皮抑制素联合化疗一线治疗晚期黑色素瘤的Ⅱ期临床研究 [J], 崔传亮;迟志宏;袁香庆;斯璐;盛锡楠;郭军4.重组人血管内皮抑制素(恩度)联合达卡巴嗪治疗晚期黑色素瘤的临床研究 [J], 罗毅;陈佳;李先安;黄钢;刘剑帆;徐学政;吴宏伟;王鑫;姚新宇5.重组人血管内皮抑制素对结肠癌生长及肝转移抑制作用的研究 [J], 韩春全;刘汉锋;蔡正文;王莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
・基础论著・ 两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的构建和比较李佳悦朱欣凯王萍钮利喜【摘要】 目的 采用尾静脉接种法建立C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移动物模型，观察小鼠肺部成瘤过程，并对两种模型进行比较。
制作肿瘤切片，通过HE染色分析两种肿瘤模型的组织病理学特征。
方法培养B16黑色素瘤细胞至对数生长期时收集细胞，用生理盐水调整浓度为5×106/ml备用。
将备好的B16细胞通过尾静脉接种小鼠，每只注射0.2 ml。
接种后，两种小鼠每隔一定时间随机各取一只小鼠处死，解剖取肺，观察成瘤情况，计数肺表面的瘤结节数，测量瘤结节大小。
以出现瘤结节开始计时，记录小鼠荷瘤时间。
形成稳定的肿瘤模型后，制作肿瘤组织切片，HE染色进行病理学观察分析。
结果B16细胞尾静脉接种C57BL/6小鼠和KM小鼠，均能形成肺转移模型，但两种小鼠成瘤情况差异较大。
KM小鼠的荷瘤时间比C57BL/6小鼠荷瘤时间长。
HE染色结果显示黑色素瘤B16细胞在两种小鼠的肺组织中均形成巢团状的转移瘤，且两种模型肺转移瘤均多分布在支气管周围。
结论通过对C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的成瘤特点的分析比较，可以看出KM小鼠更适合用于研究新的肺肿瘤治疗药物，为研究黑色素瘤的发生发展提供依据。
【关键词】 B16细胞；肺转移小鼠模型；尾静脉Establishment and comparison of two kinds of lung metastasis mouse models Li Jiayue, Zhu Xinkai,Wang Ping, Niu Lixi. Institute of Biotechnology, Shanxi University, Taiyuan 030006, ChinaCorresponding author: Niu Lixi, Email: nlx@【Abstract】 Objective To observe the tumorigenic process, two pulmonary metastatic modelsof melanoma B16 cells were established and compared using C57BL/6 and KM mice, respectively.Methods Tail intravenous injection of 1×106 melanoma B16 cells/mouse resulted in macroscopic diseaseby 4-9 days and a randomly selected mouse was sacrificed in a certain interval to survey the morphologiccharacteristics of melanoma. The number of tumor nodules in the lung surface was counted and the size oftumor nodules was measured. The tumor-burdened time of mice was recorded and the tumor sections weremade for pathological observation and analysis. Results HE staining showed that each mouse in the B16cell injection groups had nest-shape metastatic foci distributed around the bronchi in the lung, but thetumor-burdened time was significantly different which was longer in KM mice than in C57BL/6 mice.Conclusion By comparing the characteristics of two pulmonary metastatic models of C57BL/6 mice andKM mice, we can concluded that the B16 melanoma models in KM mice were ideal tumor models whichwere suitable for researching the new drugs in lung cancer treatment. Our research would provide evidencefor the occurrence and development of melanoma.【Key words】 B16 cells; Pulmonary metastatic mouse model; Tail vein肺肿瘤又叫支气管肺癌（lung carcinoma）是常见的恶性肿瘤之一，近年来肺癌的发病率和死亡DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2015.19.022基金项目：山西省青年基金资助项目（2011021035-5）作者单位：030006 太原，山西大学生物技术研究所通讯作者：钮利喜，Email: nlx@ 率都有明显增高的趋势，已成为人类因癌症死亡的主要原因[1-2]。
一种提高小鼠黑色素瘤在体转移模型成功率的方法陈泽慧;章亮;柴冰阳;张波【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2018(34)9【摘要】目的建立一种成功率较高的黑色素瘤转移动物模型,为黑色素瘤转移机制的研究提供可靠的造模方法.方法通过网络药理学方法筛选免疫抑制剂;腹腔注射免疫抑制剂及尾静脉注射B16F10 细胞在C57BL/6 小鼠建立黑色素瘤转移模型,每天观察小鼠状态,并记录体重;ELISA试剂盒检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10、VEGF、MMP-9 含量;解剖小鼠,观察肺部有无转移、转移结节的数目及全身其他器官的转移情况;HE染色确定转移灶组织形态.结果环孢素及地塞米松的网络接近中心度排名靠前,且靶点较集中于肺和肝脏.造模后小鼠体质量无明显变化,模型组小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10、VEGF、MMP-9 含量增加,肺与肝转移灶数量明显增加,肺组织 HE染色显示肿瘤组织呈浸润性生长.结论通过腹腔注射免疫抑制剂,可以成功增加小鼠黑色素瘤转移模型的成功率.%Aim To improve the rate of melanoma metastasis animal model and provide a reliable experimental modeling meth-od for the study of melanoma metastasis mechanism. Methods Five immunosuppressants were selected and then their targets were screenedby network pharmacology. Intraperitoneal injection of immunosuppressants and intravenous injection of B16F10 cells were performed on C57BL/6 mice, then the mice were observed, and body weight were recorded daily. The contents of TNF-α, IL-6, IL-10, VEGF and MMP-9 in serum were measured with ELISA kit. The mice were dissected,then the metastasis situa-tion and the number of metastatic nodules in the lung and other organs were evaluated. HE-staining was involved to determine the morphology of metastatic tissues. Results The closeness centrality of cyclosporine and dexamethasone ranked the top and the targets were concentrated in lung and liver. No significant difference in body weight were observed after animal madel in-duced. The contents of TNF-α, IL-6 IL-10, VEGF and MMP-9 in the model group increased. The number of metastatic nodules in the lung significantly augmented with some kind of liver metas-tasis. HE-staining in the lung tissues showed that tumor presen-ted invasive growth. Conclusion By intraperitoneal injection of dexamethasone, the success rate of mice melanoma metastasis model can be greatly increased.【总页数】5页(P1326-1330)【作者】陈泽慧;章亮;柴冰阳;张波【作者单位】新疆植物药资源利用教育部重点实验室,石河子大学药学院,新疆石河子 832002;新疆植物药资源利用教育部重点实验室,石河子大学药学院,新疆石河子832002;新疆植物药资源利用教育部重点实验室,石河子大学药学院,新疆石河子832002;新疆植物药资源利用教育部重点实验室,石河子大学药学院,新疆石河子832002【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.35;R392.12;R73-37;R734.2;R739.502.2;R979.5【相关文献】1.两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的构建和比较 [J], 李佳悦;朱欣凯;王萍;钮利喜2.高强度聚焦超声抑制小鼠黑色素瘤细胞B16-F10在体内的转移 [J], 李欢;罗进勇;何通川;李崇雁;王嫣;李发琪;王志彪;周兰;袁世梅;杨敏;段亮;王海燕;查何;李雪茹;孙晖;翁亚光3.C57BL/6 J小鼠黑色素瘤肺转移模型的构建 [J], 孟星君;李孝东;刘俊;周康熙;崔庆亚;胡仁萍;闫荣;戴克胜4.小鼠黑色素瘤胰腺转移模型的建立及针对肿瘤的控制性实验 [J], 胡国章;颜游游;李金梁;宣巍5.血小板增多对小鼠恶性黑色素瘤转移模型的影响及机制 [J], 陈芋屹;周杰;张甘霖;杨国旺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
诱导肺泡巨噬细胞分泌细胞毒因子抑制小鼠黑色素瘤肺转移任园;张友会
【期刊名称】《中国免疫学杂志》
【年(卷),期】1998(014)006
【摘要】以腹腔注射卡介苗或康赛宁，再雾化吸入ｒＩＬ－２，来抑制小鼠黑色
素瘤Ｂ１６－ＢＬ６细胞的肺转移。
结果表明，小鼠肺转移被显著抑制，抑制率了高达７８．９５％，小鼠生存期最多延长了４８．２０％；腹腔注射Ｎ－单甲基－Ｌ－精氨酸（ＮＭＡ）使抑制作用显著减弱，平均下降了６９．００％。
体外实验证明，Ｂ１６－ＢＬ６细胞对ＮＯ的细胞毒作用敏感，对ＴＮＦ不敏感。
结果显示，肺转移的抑制作用可能主要是活化的肺泡世噬细胞分泌
【总页数】3页(P431-433)
【作者】任园;张友会
【作者单位】中国医学医学院中国协和医科大学肿瘤研究所;中国医学医学院中国
协和医科大学肿瘤研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R734.203
【相关文献】
1.DATS通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达 [J], 朱桂军;李淑瑾;胡振杰;于占彪;张玉想;张勇
2.MeCP2增加LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞的炎症因子分泌 [J], 郑松;王殿超;张磊
3.人参皂甙对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的作用及机制探讨[J], 刘轩;魏育林;李波;李亚俊;金恩源;王学静
4.诱导小鼠肺泡巨噬细胞产生一氧化氮抑制肿瘤实验性肺转移 [J], 任园;张友会
5.体内诱导巨噬细胞分泌细胞毒因子对肿瘤肺转移的控制 [J], 周颖;高鹏根;苏蕴成;张友会
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IL-17对黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭的影响王倩;马跃美;孙涛;刘艳荣;房东亮;田原【摘要】Objective: To investigate the influence of interlukin-17 ( IL-17) on the proliferation and invasion of mouse B16F10 melanoma cells. Methods: Mouse B16 melanoma cells were cultured in vitro. Cells in research group were treatead with a certain-concentration IL-17 and those in control group treated without IL-17.The proliferation of B16 cells was detected by MTT. And the in-vasieness of B16 cells was determined by transwell. Then the expression activities of MMP-2 and MMP-9 of cells were mesured by Gelatin Zymography. Results: The growth rate of B16 cells treated with IL-17 was not changed (P>0.05) compared with the control group. Matrigel invasion assay revealed that addition of IL-17 to B16 cells stimulated marked invasion (P<0.01). And Gelatin Zymography analyzed that the expression of MMP-2 and MMP-9 of cells was significantly enhanced in the research group(P<0.01). Conclusion: IL-17 has no effect on proliferation of B16F10 cells but can promote the invasion which may due to the increased MMP-2 and MMP-9 activities.%目的:探讨白细胞介素-17(IL-17)对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭的影响.方法:体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,选择对数生长期的细胞,在培养基中加入一定浓度的IL-17,并设空白对照组,MTT法检测IL-17对B16细胞增殖能力的影响；transwell侵袭实验检测IL-17对B16细胞侵袭能力的影响；明胶酶谱法分析IL-17处理后细胞MMP-2和MMP-9的表达活性.结果:IL-17处理组与对照组相比,B16细胞的增殖能力无变化(P＞0.05).transwell侵袭实验显示,IL-17处理组B16细胞穿膜细胞数明显增多(P＜0.01).明胶酶谱实验显示,IL-17处理后细胞MMP-2和MMP-9的表达活性增强(P ＜0.01).结论:IL-17对黑色素瘤B16F10细胞的增殖能力无影响,但可促进细胞侵袭,可能通过增强MMP-2和MMP-9的活性而发挥作用.【期刊名称】《天津医科大学学报》【年(卷),期】2013(019)001【总页数】3页(P28-30)【关键词】IL-17;B16细胞;黑色素瘤;基质金属蛋白酶;侵袭【作者】王倩;马跃美;孙涛;刘艳荣;房东亮;田原【作者单位】天津医科大学外科手术学教研室,天津300070;天津医科大学外科手术学教研室,天津300070;天津医科大学病理学教研室,天津300070;天津医科大学病理学教研室,天津300070;天津医科大学外科手术学教研室,天津300070;天津医科大学外科手术学教研室,天津300070【正文语种】中文【中图分类】R739.5白细胞介素-17（IL-17）在炎症和自身免疫性疾病中具有重要的调节作用且在多种肿瘤中高表达，但其在肿瘤发生发展中的作用目前尚未定论。
B16F10黑素瘤细胞培养上清对同基因小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用贾靖;孙立新;葛志华【期刊名称】《河北医学》【年(卷),期】2010(016)007【摘要】目的:研究B16F10黑素瘤细胞培养上清对同基因小鼠脾淋巴细胞的抑制作用.方法:制备B16F10黑素瘤细胞培养上清,作用于同基因小鼠脾淋巴细胞,通过PHA刺激和混合淋巴细胞反应,用MTT法检测淋巴细胞的增殖活性.结果:在B16F10黑素瘤细胞培养上清的作用下,PHA诱导的同基因小鼠脾淋巴细胞增殖率平均为63.00%,明显低于对照组,差异有显著性(t = 16.447,p = 0.000);混合淋巴细胞反应的淋巴细胞增殖率平均为61.82%,亦明显低于对照组,差异有显著性(t=8.097,P=0.000).结论:B16F10黑素瘤细胞培养上清对同基因小鼠脾淋巴细胞的增殖具有抑制作用.【总页数】3页(P769-771)【作者】贾靖;孙立新;葛志华【作者单位】承德医学院附属医院,河北,承德,067000;承德医学院附属医院,河北,承德,067000;承德医学院附属医院,河北,承德,067000【正文语种】中文【相关文献】1.B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α和一氧化氮的影响 [J], 齐海花;胡云才;兰天飞;孙立新;段昕所;陆洁;宋有鑫;杨晓峰;杨新宏2.CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素瘤细胞B16的影响 [J], 张峻岭;徐士福;柳君如;程琳;ZHOU Youwen3.灵芝多糖对小鼠黑素瘤B16F10细胞分泌VEGF的抑制作用 [J], 李红;陆洁;段昕所;齐海花;孙立新4.黑素瘤细胞培养上清液抑制小鼠腹腔巨噬细胞分泌白介素-12的研究 [J], 宋宁静;王千秋;程兴望;张晶;姜文华;崔盘根;孙建方;曾学思5.小鼠黑素瘤细胞培养上清对同型小鼠淋巴细胞转铁蛋白受体CD71的抑制作用分析 [J], 赵红侠;蒋苗苗;孙立新因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
腺病毒介导的色素上皮衍生因子对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用陈巧玲;白亦光;付曦;何朗;冯刚【摘要】目的探讨腺病毒介导的色素上皮衍生因子(Ad-PEDF)对小鼠B16F10黑色素瘤肺转移模型的治疗作用. 方法在体外用MTT实验测定Ad-PEDF感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50,100,150,200,250时对B16F10细胞增殖的抑制作用,Transwell实验检测Ad-PEDF对B16F10细胞侵袭的抑制作用,以PBS 和空载腺病毒(Ad-null)作为对照.在体内通过尾静脉接种小鼠B16F10细胞建立肺转移模型,将小鼠随机分为3组,分别经尾静脉注射100μlPBS、100μl Ad-null(1×108 PFU)和100μlAd-PEDF(1×108 PFU).隔日注射1次,共5次.观察静脉注射Ad-PEDF对黑色素瘤肺转移结节数量以及肺湿重的影响.对肺转移灶进行TUNEL染色检测肿瘤细胞的凋亡情况. 结果 MTT实验显示,Ad-PEDF在不同的MOI值下均能对B16F10细胞产生作用,并随着MOI值的增加抑制率逐渐升高,与Ad-null组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).Transwell实验显示,Ad-PEDF组与PBS组和Ad-null组相比,穿膜的肿瘤细胞数明显下降,侵袭能力受到显著抑制(123.3 ±21.9 vs 220.3 ±26.8,213.5±35.5,P＜0.01).体内实验结果提示,Ad-PEDF 组小鼠的肺部转移灶较PBS组和Ad-null组明显减少(47.7 ±14.1 vs75.1±20.9,73.3±17.3,P＜0.05).而Ad-PEDF组的小鼠肺湿重[(0.26±0.06)g]也明显低于PBS组[(0.39±0.05)g]和Ad-null组[(0.37±0.07)g],差异有统计学意义(均P＜0.05).TUNEL实验显示,Ad-PEDF组肺转移灶肿瘤细胞凋亡率较PBS组和Ad-null 组增多(25.3％±3.3％vs3.9％±1.2％,4.1％±1.4％,P＜0.01). 结论腺病毒介导的PEDF能够显著抑制小鼠黑色素瘤肺转移灶的形成,其作用机制可能为抑制肿瘤细胞增殖和侵袭,以及诱导肿瘤细胞凋亡.%Objective To explore the inhibitive effectof recombinant adenoviruses loaded with pigment epithelium-derived factor gene on pulmonary metastases of melanoma B16F10 inmice.Methods MTT and Transwell assays were performed to observe the inhibitive effect of Ad-PEDF on B16F10 cells proliferation and invasion ability of B16F10 cells with PBS and adenovirus vector(Ad-null) as the controls.The C57BL/6 mice pulmonary metastases models of melanoma were established by the injection of B16F10 cells via tail vein.Then 30 tumor-bearing mice were randomly divided into 3 groups:PBS group,Ad-null group and Ad-PEDF group.The mice were intravenously administrated with PBS(100 μl),adenoviruses vector(1 × 108 PFU,100 μ,l) or Ad-PEDF(1 × 108 PFU,100 μl) every other day for five times,respectively.The influence of Ad-PEDF on the pulmonary metastases nodule numbem was observed,and the wet weight of the lungs in mice was calculated.The apoptosis of the tumor cells in metastasis nodules was detected by TUNEL assay.Results MTT assay showed that B16F10 cells proliferation decreased in a dose-dependent manner after treatment with different multiplicity ofinfection(MOI) of Ad-PEDF(P ＜ 0.01).Transwell assay demonstrated that the number of B16F10 cells migrating to the other side of the membrane in Ad-PEDF group was markedly decreased compared with PBS group or Ad-null group(123.3 ± 21.9 vs 220.3 ±26.8,213.5 ±35.5,P ＜0.01).The in vivo results showed that the number of pulmonary metastases nodules in Ad-PEDF group was less than in PBS group and Ad-null group (47.7 ± 14.1 vs 75.1 ± 20.9,73.3 ± 17.3,P ＜ 0.05).And the wet weight of the lungs was reduced in Ad-PEDF group compared with PBS group and Ad-null group[(0.26 ± 0.06) g vs (0.39 ± 0.05) g,(0.37 ± 0.07) g,P ＜0.05].The TUNEL assay showed that Ad-PEDF increased the apoptosis rate of tumor cells in lung metastasis foci compared with PBS and Ad-null(25.3％± 3.3％ vs 3.9％± 1.2％,4.1％± 1.4％,P ＜ 0.01).Conclusion Ad-PEDF can inhibit the pulmonary metastasis of melanoma in vitro and in vivo.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2017(048)006【总页数】5页(P534-538)【关键词】色素上皮衍生因子;腺病毒载体;黑色素瘤;肺转移【作者】陈巧玲;白亦光;付曦;何朗;冯刚【作者单位】川北医学院第二临床医学院,南充市中心医院肿瘤科,南充637000;川北医学院第二临床医学院,南充市中心医院骨科;川北医学院第二临床医学院,南充市中心医院肿瘤科,南充637000;川北医学院第二临床医学院,南充市中心医院肿瘤科,南充637000;川北医学院第二临床医学院,南充市中心医院组织工程与干细胞研究所【正文语种】中文【中图分类】R739.5皮肤黑色素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,侵袭性强,极易复发和转移,而一旦出现转移则临床预后极差,因此抑制其侵袭和转移是临床治疗的重点[1]。
B16F10小鼠黑色素瘤高转移细胞
Cat Number：KG078 For Research Use Only
一、组成:
二、客户自备试剂:
1、PBS (凯基货号：KGB5001)
2、Complete growth medium (凯基货号：KGM 31800-500)
3、0.25% （W/V） Trypsin-0.53mM EDTA (凯基货号：KGY0012)
三、细胞简介:
四、常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。
次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞
活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项，确保细胞的培养条件一致，如果由于培养条件不一致导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
由于运输的情况，所以极个别细胞会出现不稳定，客户收到细胞后务必第一时间和我们联系，告知细胞具体情况，以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通，不胜感谢！。
小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株的建立与生物学特性分析吴伶俐;孙永强;王建红;何向锋;周玉清;郑丽云;赵文静;陈橼;李国兴【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2016(24)6【摘要】目的:构建表达香菇珊瑚红色荧光蛋白(discosomasp red fluorescent protein,DsRed)的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株,并检测其生物学特性.方法:用GenEscortTMⅡ转染试剂将pDsRed质粒导入小鼠黑色素瘤B16F10细胞,G418加压培养联合极限稀释法建立稳定、高水平表达DsRed的单克隆细胞系.FCM检测B16F10和B16F10-Red细胞的细胞周期.比较B16F10-Red和B16F10细胞的克隆球形成能力和小鼠体内致瘤能力.结果:稳定表达DsRed的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株基本保持了其亲代细胞的特征,能在C57BL/6小鼠腹部皮下形成肿瘤并继续生长和转移.结论:B16F10-Red细胞株构建成功,其移植瘤模型成瘤率和转移情况同B16F10肿瘤相比无明显差别.【总页数】4页(P861-864)【作者】吴伶俐;孙永强;王建红;何向锋;周玉清;郑丽云;赵文静;陈橼;李国兴【作者单位】东南大学附属中大医院检验科,江苏南京210009;南通大学第二附属医院普外科,江苏南通226001;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361【正文语种】中文【中图分类】R739.5【相关文献】1.重组CCL2小鼠黑色素瘤B-16细胞的建立及生物学活性的鉴定 [J], 胡凯猛;熊俊;冀凯宏;汤淑萍;刘厚奇2.黑色素瘤细胞系HME1的建立及其生物学特性分析 [J], 吴尚辉;黄柏英;顾焕华;彭聪;罗学滨;祝和成3.喉癌顺铂耐药细胞株的建立及干性生物学特性分析 [J], 于锋;龚小蓉;周毅波4.C57BL/6小鼠黑色素瘤B16细胞株在ICR小鼠肿瘤模型的建立 [J], 李桂圆;陈龙邦;臧静;张群5.稳定表达T-钙黏蛋白的黑色素瘤顺铂耐药细胞株的建立及其生物学特性 [J], 陆海涛; 郭健; 何磊; 刘利君; 段昕所因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验性黑色素瘤肺转移模型的制备
模型建立方法：
将体外原代培养处于对数生长期的B16-F10黑色素瘤细胞，胰酶消化，用RPMI-1640培养液洗2遍，调至1×106/ml悬浮于RPMI-1640培养液中（台盼兰染色检测活性95％以上）。
经眼球后静脉丛每鼠注射0.1ml含0.1ml 1×105个B16-F10黑色素瘤细胞悬液。
模型特点及功用：
可用于研究黑素瘤肺转移的治疗研究。
模型建立和使用注意事项：
1、本课题组选用两种肿瘤细胞株建立了实验性肺转移及自发肺转移模型，发现：眼球后静脉注入2.5×104以上B16黑色素瘤活细胞/鼠是建立实验性肺转移模型的最适剂量；足掌注射2～5×105个Lewis肺癌（LLC）活细胞/鼠是建立自发转移模型的最佳接种方式和剂量范围。
2、近交系C57BL/6小鼠是比较好的选择。
多西他赛对小鼠肺转移黑色素瘤抑制作用的研究胡华【摘要】目的探讨多西他赛(多西紫杉醇)对小鼠B16-F10黑色素瘤肺转移的抑制作用.方法 MTT法检测多西他赛对小鼠B16-F10细胞生长能力的影响;细胞粘附性实验研究多西他赛对小鼠B16-F10细胞粘附能力的影响;体内实验采用C58BL/6小鼠尾静脉注射B16细胞建立实验性肺转移模型,观察腹腔注射多西他赛对小鼠肺组织肿瘤肺转移结节的影响.结果20μg/mL多西他赛对小鼠B16-F10细胞的体外生长有一定的抑制作用,并且能够显著降低B16-F10细胞同基质的粘附能力(P＜0.05).15μg/mL、10 μg/mL、20μg/mL的多西他赛24h对小鼠体外B16-F10细胞的抑制率分别是2.34％、16.27％和41.63％.荷黑色素瘤B16-F10肺转移癌小鼠经腹腔注射5μg/mL、10μg,/mL、20μg/mL三个剂量的多西他赛对肿瘤的抑制率分别为42.70％、15.47％和5.45％,高剂量组(20μg,/mL)显示对肺转移黑色素瘤有明显的抑制作用(P＜0.05).结论多西他赛能够抑制小鼠肺转移黑色素瘤,其机制可能与其对B16-F10细胞的粘附能力和生长能力的抑制作用有关.【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2015(022)006【总页数】4页(P555-558)【关键词】多西他赛;实验性肺转移;黑色素瘤;MTT法;细胞粘附性【作者】胡华【作者单位】武汉市161医院药械科,湖北武汉430012【正文语种】中文黑色素瘤是由异常黑素细胞过度增生引发的常见的皮肤肿瘤，高转移，高侵袭，预后极差［1］，恶性程度极高，生存期仅约6月，5年生存率＜5% ［2］，占皮肤肿瘤死亡病例的极大部分。
黑色素瘤容易通过血道发生肺转移，无特异的临床特征，部分病例仅表现为呼吸道症状。
高福平等［3］报道了一例黑色素瘤病例，患者仅有左侧颈部无痛性肿块，无其他特异性状况。
纳米金结合恩度抑制小鼠黑色素瘤肺转移李鑫;潘运龙;覃莉;李伟;吴秀;杨文德;潘璠【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2017(033)008【摘要】目的: 观察纳米金结合恩度对小鼠黑色素瘤肺转移的影响并探讨其机制.方法: C57BL/6小鼠24只,构建小鼠黑色素瘤B16-F10细胞自发性肺转移模型,随机分为恩度组、纳米金组、纳米金结合恩度组和模型组.成瘤后各组小鼠均经尾静脉注射相应药物0.1 mL(每天1次).9 d后麻醉小鼠并切取原位肿瘤,继续饲养2周后处死小鼠取肺组织观察转移情况.HE染色观察原位肿瘤坏死情况,免疫染色检测肿瘤CD31、碳酸酐酶IX(CA-IX)、vimentin和闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达.结果: 与模型组相比,药物处理组小鼠的肺转移灶均明显减少,其中纳米金结合恩度组的肺转移抑制率最高,肿瘤坏死明显减少,肿瘤中CD31、CA-IX和vimentin的表达量显著降低,ZO-1的表达量显著升高.结论: 与单用恩度或纳米金相比,纳米金结合恩度可明显抑制小鼠黑色素瘤肺转移,其机制可能为使肿瘤新生血管减少及血管正常化,改善肿瘤缺氧,从而抑制肿瘤上皮-间充质转化,使肿瘤细胞间紧密连接增加而侵袭性减低.【总页数】6页(P1393-1398)【作者】李鑫;潘运龙;覃莉;李伟;吴秀;杨文德;潘璠【作者单位】暨南大学附属第一医院胃肠外科, 广东广州 510630;暨南大学附属第一医院胃肠外科, 广东广州 510630;暨南大学附属第一医院胃肠外科, 广东广州510630;暨南大学附属第一医院胃肠外科, 广东广州 510630;暨南大学附属第一医院胃肠外科, 广东广州 510630;暨南大学附属第一医院胃肠外科, 广东广州510630;暨南大学附属第一医院胃肠外科, 广东广州 510630【正文语种】中文【中图分类】R730.23【相关文献】1.多西他赛对小鼠肺转移黑色素瘤抑制作用的研究 [J], 胡华2.Mac-1基因缺失抑制小鼠黑色素瘤肺转移的机制 [J], 段有发;陈坚;叶志金;王丽京;章倩倩3.海参硫酸软骨素抑制小鼠黑色素瘤肺转移作用的研究 [J], 李辉;王静凤;张珣;柳东;薛长湖4.腺病毒介导的色素上皮衍生因子对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用 [J], 陈巧玲;白亦光;付曦;何朗;冯刚5.三氧化二砷抑制小鼠B16黑色素瘤肺转移作用的研究 [J], 石莹;夏俊;杨同怀;张玉心;陈治文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
GM-CSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用杨传红;王捷;陈鸣丽;冼江;詹纯列;肖育华;夏冰【期刊名称】《中国肿瘤生物治疗杂志》【年(卷),期】2009(16)2【摘要】目的:研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)膜修饰小鼠黑素瘤B16.F10细胞制备的疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用。
方法:采用生物素-链亲合素-GM-CSF融合蛋白技术制备GM-CSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗,将BALB/c小鼠随机分为GM-CSF 膜修饰B16.F10细胞疫苗组、GM-CSF与B16.F10细胞混合疫苗组、B16.F10细胞疫苗组、GM-CSF组、生理盐水组。
各组于第1天和第7天分别进行免疫接种,第14天皮下注射0.2ml B16.F10细胞(1×106个细胞)进行攻击,观察各组小鼠无瘤率和生存期;攻击后24d用ELISA法检测小鼠脾细胞INF-γ分泌水平。
结果:接受B16.F10细胞攻击后第60天和第90天,GM-CSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组小鼠均未成瘤,存活率为100%;GM-CSF与B16.F10细胞混合组无瘤率分别50%和40%,存活率分别为70%和40%;B16.F10细胞疫苗组无瘤率均为20%,存活率分别为80%和20%;GM-CSF组和生理盐水组无瘤率为0,无小鼠存活。
GM-CSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组的IFN-γ分泌量比其他组明显升高(P<0.01)。
结论:GM-CSF膜修饰B16.F10肿瘤细胞疫苗可以激发BALB/c小鼠特异性抗肿瘤免疫反应,有效防止B16.F10肿瘤细胞的攻击。
【总页数】4页(P136-139)【关键词】粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子;黑素瘤细胞;膜修饰;肿瘤疫苗【作者】杨传红;王捷;陈鸣丽;冼江;詹纯列;肖育华;夏冰【作者单位】广州军区广州总医院医学实验科【正文语种】中文【中图分类】R739.5;R730.54【相关文献】1.GM-CSF修饰的异体肿瘤细胞疫苗治疗晚期肿瘤的Ⅰ期临床试验 [J], 康红刚;王运良;于津浦;曹水;任宝柱;张新伟;张维红;韩颖;任秀宝2.GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用 [J], 张清媛;李殿俊;王志华;李大林3.磷酸钙纳米颗粒修饰的甲胎蛋白和树突状细胞疫苗对小鼠皮下移植瘤的抑制作用[J], 曾斌;廖爱军;卢放根;方唯意;王健4.GM-CSF基因修饰肺癌细胞疫苗的抗肿瘤活性及其与化疗的协同作用 [J], 姜宏景;任秀宝;李慧;于津浦;魏枫;马明全5.GM-CSF及B7-1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的研究 [J], 张清媛;李殿俊;王志华;张春艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
B16黑色素瘤组织中上皮型钙黏附分子和S-100蛋白的表达及意义纪长伟;倪秀芹;贾立敏;朱保国;郭文广【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2007(030)006【摘要】目的:探讨B16黑色素瘤小鼠体内上皮型钙黏附分子与S-100蛋白的表达在肿瘤侵袭及转移过程中发挥的作用.方法:C57纯系小鼠分为12d和25d肿瘤组和正常对照组.肿瘤组将B16黑色素瘤细胞人工植入C57小鼠背部皮下,制荷瘤鼠模型,免疫组织化学法检测肿瘤病变中心区及交界区皮肤上皮型钙黏附分子和S-100的表达.结果:12d肿瘤组肿瘤组织中S-100蛋白表达的面密度和数密度明显增高,与正常对照组和25d肿瘤组比较差异有统计学意义;肿瘤组织中上皮型钙黏附分子表达的面密度和数密度较正常对照组明显降低.结论: 上皮型钙黏附分子和S-100蛋白的异常表达在皮肤黑色素瘤的恶性进展过程中起重要作用,其表达程度可作为判断黑色素瘤恶性程度及预后的指标之一.【总页数】4页(P745-748)【作者】纪长伟;倪秀芹;贾立敏;朱保国;郭文广【作者单位】哈尔滨医科大学大庆校区,大庆,163319;哈尔滨医科大学大庆校区,大庆,163319;哈尔滨医科大学,哈尔滨,150086;哈尔滨医科大学大庆校区,大庆,163319;哈尔滨医科大学大庆校区,大庆,163319【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.钙离子结合蛋白A4和上皮型钙黏附蛋白在膀胱癌中的表达及临床意义 [J], 孙明;刘学峰;潘春雨;詹运鸿;吴斌2.E-钙黏蛋白和上皮细胞黏附分子在结节型肝细胞性肝癌大体形态亚型中的表达及相关性研究 [J], 王时俊;陈洁;彭宁福;齐鲁楠;向邦德;黄国雄;黎乐群3.喉鳞癌中扭曲基因、上皮型钙黏附蛋白和神经型钙黏附蛋白基因表达及相关研究[J], 朱艳艳;俞建平;赵瑞力4.上皮性钙黏附蛋白及基质金属蛋白酶-9在皮肤黑色素瘤及色素痣中的表达及意义 [J], 杨慧敏;黄一凡;谢贤镛;李祖茂5.上皮钙黏蛋白和黏附分子CD44V6及基质金属蛋白酶2在贲门癌中的表达及意义 [J], 安继荣;张亚珍;刘小峰;陈乐天因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
A thesis submitted toZhengzhou Universityfor the degree of MasterStudy on antitumor effect and immunoregulatory mechanism of rMBP-NAP on B16-F10 pulmonary metastatic modelAuthor: Mingxuan DuSupervisor: Prof. Qiaozhen KangDr. Ting WangBiochemistry and Molecular BiologySchool of life sciencesApril 2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。
除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。
对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。
本声明的法律责任由本人承担。
学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。
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本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。
保密论文在解密后应遵守此规定。
学位论文作者：日期：年月摘要摘要目的近些年来黑色素瘤发生率不断升高，传统的治疗方法不能取得理想的治疗效果，采用免疫治疗联合传统治疗手段如化疗，激活机体免疫应答是有效治疗黑色素瘤的方法。
肿瘤局部微环境为肿瘤的生长和转移提供了庇护场所，通过诱导血管生成，形成免疫耐受等有利于肿瘤的恶化和转移。
靶向肿瘤微环境是有效治疗肿瘤的方法，通过作用与肿瘤微环境中的免疫抑制有利于机体免疫系统发挥抗肿瘤作用，通过调节肿瘤相关血管生成有利于控制肿瘤恶化和转移等。
为了进一步探讨免疫调节剂rMBP-NAP的抗肿瘤作用，研究rMBP-NAP对肿瘤微环境产生影响，我们利用高转移的B16-F10黑色色素瘤建立小鼠肺转移模型，研究rMBP-NAP对肿瘤微环境产生的影响以及其生物学意义。
方法1.选择鼠源的高转移性黑色素瘤细胞B16-F10细胞株，通过尾部皮下静脉注射肿瘤细胞的方法，建立小鼠黑色素瘤肺转移模型。
2.选择不同给药剂量：低剂量组10 μg/只、中剂量组50 μg/只、高剂量组100 μg/只，每48小时给药一次，连续给药7次。
根据不同给药剂量对肿瘤肺转移的影响，筛选最适给药剂量，研究讨论rMBP-NAP对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用。
3.采用ELISPOT方法检测肿瘤模型中，rMBP-NAP给药后分泌IFN-γ的脾脏细胞数量的变化；通过实时荧光定量PCR方法检测脾脏中Th1、Th2型细胞因子表达情况；采用细胞杀伤实验研究rMBP-NAP给药后效应细胞对肿瘤细胞的杀伤情况。
4.通过实时荧光定量PCR检测肺组织中Th1型细胞因子的变化情况以及肿瘤微环境中维持肿瘤内部稳态相关的炎性细胞因子、趋化因子的表达情况；通过流式细胞术检测浸润到肿瘤微环境中CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞数量的变化；对肿瘤组织中CD34+血管内皮细胞免疫组化染色，检测肿瘤组织中血管生成并检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达变化。
I摘要5.通过体外培养黑色素瘤细胞B16-F10，检测rMBP-NAP与肿瘤细胞共同孵育后对肿瘤细胞粘附和迁移的影响。
结果1. C57BL/6小鼠尾部皮下静脉注射黑色素瘤细胞B16-F10形成肿瘤肺转移成功率100%，成功建立黑色素瘤肺转移模型。
2. rMBP-NAP抑制了黑色素瘤细胞B16-F10肺转移灶形成数量，选择50 μg/只作为rMBP-NAP抗肿瘤药效剂量。
3. ELISPOT检测结果显示，rMBP-NAP作用后分泌IFN-γ脾细胞数量显著增多；脾脏中Th1型细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-27表达显著上升，Th2型细胞因子IL-4表达显著下降；外周血单个核细胞和脾脏细胞对黑色素瘤细胞B16-F10的杀伤作用增强。
4. rMBP-NAP作用后肺组织Th1型细胞因子表达显著上升；炎性因子如IL-6、TNF-α和趋化因子如CCL2、CCL20表达水平显著下降；浸润到肿瘤微环境中的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞数量显著升高；肺组织中VEGF 表达量显著下降,肿瘤血管生成受到抑制。
5.体外rMBP-NAP与黑色素瘤细胞B16-F10共同孵育，对肿瘤细胞的粘附和迁移没有明显影响。
结论1. rMBP-NAP显著减少黑色素瘤细胞B16-F10的肺转移灶数量。
2. rMBP-NAP引起Th1反应，激活系统性的抗肿瘤免疫应答。
3. rMBP-NAP显著增强肿瘤微环境中Th1细胞因子表达，逆转肿瘤微环境的炎症微环境和免疫抑制微环境并能通过下调VEGF抑制肿瘤血管生成。
4. rMBP-NAP在体外对黑色素瘤细胞B16-F10的粘附和迁移作用没有直接的影响。
关键词：rMBP-NAP ;Th1 肿瘤微环境 ; 肿瘤转移 ; 免疫调节剂IIAbstractAbstractObjectiveMelanoma incidence has been rising for many years. The stimulation of immune response against tumors via combined immunotherapy with conventional chemotherapy or targeted therapy is a promising approach for melanoma. tumor microenvironment provide a field to keep tumor grow and metastasis. The microenvironment was characteristiced as angiogensis and immune suppression situation.The forming vessel could afford oxygen and nutrient to keep tumor cells proliferation;the immune supression situation protect the tumor tissue from immune surveillance.We can inhibit tumor progression via target the tumor microenvironment. In this work, we aimed to figure out the anti-tumor effects and immunoregulatory mechanism of rMBP-NAP,and explore the effect of rMBP-NAP on modulating the microenvironment.Methods1.The B16-F10 metastatic melanoma cells were injected into the tail vein of C57BL/6 mice and established the pulmonary metastatic model.2.The pulmonary metastatic models were randomly divided into several different groups: rMBP-NAP low dose group (10μg/mice/48h); middle dose group (50μg/mice/48h) and high dose group (100μg/mice/48h). The optimal dose was selected according to the inhibit ration and the influence on normal mouse events.3.The number of IFN-γ-secreting spleen cells was calculated with ELISPOT assay, the expression of Th1、Th2 cytokines and the cytotoxicity of effector cells ,such as PBMC、spleen cell were analysised after rMBP-NAP treatment.4.The expression of cytokines such as:Th1、inflammatory cytokines、chemokines and adhesion molecule and the infiltration of CD3+CD4+T cells；CD3+CD8+T cells were calculated after mouse sacrificed.. Immunohistochemical staining for CD34 antibody against endothelial cells and the expression of VEGF in tumor microenvironment were analysised.IIIAbstract5.Study of the effect of rMBP-NAP on melanoma cell B16-F10 adhesion and migration.Results:1.The pulmonary metastatic model was successfully established .2.rMBP-NAP significantly inhibited the formation of lung metastatic nodules.3.The result of ELISPOT assay indicated that IFN-γ-secreting spleen cells were significantly increased. Moreover, the expression of Th1 cytokines and Th2 cytokines and the cytotoxicity of PBMC and spleen cells against B16-F10 were significantly changed after rMBP-NAP treatment.4.The infiltration of CD3+CD4+T cells；CD3+CD8+T cells was significantly increased, the expression of adhesion molecules(VCAM-1、ICAM-1) which play an important role in infiltration of effector cell were significantly increased；the tumor-promoting factor, such as inflammary cytokine(IL-6、TNF-α), chemokines (CCL2、CCL20) were significantly decreased within tumor microenvironment after rMBP-NAP treatment. Moreover, the rMBP-NAP treatment significantly limited angiogenesis and limited expression of VEGF.5.There is no effect of rMBP-NAP on the cell adhesion and cell migration after rMBP-NAP coincubated with melanoma B16-F10, in vitro.Conclusions1.rMBP-NAP significantly inhibited the formation of lung metastatic nodules.2.rMBP-NAP is capable of enhancing Th1 immune response and inducing systemic anti-tumor immune response.3.rMBP-NAP could modulated tumor microenvironment and regulated the existed inflammatory microenvironment and tumor immune-suppressed microenvironment, furthermore, the cancer associated angiogenesis progression was delayed by rMBP-NAP.4.The anti-tumor effect of rMBP-NAP was not the result from inhibiting tumor cells adhesion or migration.Key words: rMBP-NAP; Th1; tumor microenvironment; tumor metastasis; immunomodulatorIV目录目录摘要 (I)ABSTRACT (III)常见英文缩写一览表（按字母顺序） (X)1 引言 (1)1.1选题背景 (1)1.2系统性的免疫应答对肿瘤的影响 (2)1.3肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响 (3)1.4肿瘤血管生成 (4)1.5研究目的和意义 (5)1.6研究内容与方法 (6)1.7课题技术路线 (7)2 r MBP-NAP抗黑色素瘤细胞B16-F10肺转移作用的研究 (8)2.1仪器与材料 (8)2.1.1 主要仪器设备 (8)2.1.2 主要药品与试剂 (9)2.1.3 主要工作液 (9)2.1.4 细胞株 (10)2.1.5 实验动物 (10)2.2实验方法 (11)2.2.1 重组融合蛋白rMBP-NAP蛋白的制备 (11)2.2.2 黑色素瘤细胞B16-F10的培养 (13)2.2.3 C57BL/6小鼠黑色素瘤B16-F10肺转移模型建立 (14)V目录2.2.4 rMBP-NAP在黑色素瘤肺转移模型上的抗肿瘤作用研究 (14)2.2.5 rMBP-NAP对黑色素瘤B16-F10肺转移模型小鼠生存期的影响 (16)2.2.6 统计学分析 (16)2.3实验结果 (16)2.3.1 重组融合蛋白表达纯化 (16)2.3.2 C57BL/6小鼠黑色素瘤B16-F10肺转移模型建立 (17)2.3.3 rMBP-NAP在黑色素瘤B16-F10肺转移模型上的抗肿瘤作用研究 (18)2.3.4 rMBP-NAP对黑色素瘤B16-F10肺转移模型小鼠生存期的影响 (21)2.4结果讨论 (21)3 rMBP-NAP给药诱导系统性抗肿瘤免疫应答 (23)3.1仪器与材料 (23)3.1.1 主要仪器设备 (23)3.1.2 主要药品与试剂 (24)3.1.3 主要工作液 (24)3.1.4 细胞株 (25)3.1.5 实验动物 (25)3.2实验方法 (25)3.2.1 rMBP-NAP给药后ELISPOT法检测小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ能力 (25)3.2.2 rMBP-NAP给药后对荷瘤小鼠脾脏组织中细胞因子的影响 (27)3.2.3 rMBP-NAP给药后LDH方法检测效应细胞对黑色素瘤细胞B16-F10的杀伤作用的影响 (29)3.2.4 统计学分析 (32)3.3实验结果 (32)3.3.1 rMBP-NAP给药后ELISPOT法检测小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ能力 (32)3.3.2 rMBP-NAP给药后信使RNA水平检测肺转移小鼠脾脏细胞中细胞因子表VI目录达变化 (33)3.3.3 rMBP-NAP给药后对效应细胞细胞毒作用的影响 (34)3.4结果讨论 (35)4 rMBP-NAP药物干预对肿瘤微环境的影响及其生物学作用 (37)4.1仪器与材料 (38)4.1.1 主要仪器设备 (38)4.1.2 主要药物与试剂 (38)4.1.3 主要工作液 (39)4.1.4 细胞株 (40)4.1.5 实验动物 (40)4.2实验方法 (40)4.2.1 rMBP-NAP给药后荷瘤小鼠肺组织微环境中Th1型细胞因子表达变化404.2.2 rMBP-NAP给药后荷瘤小鼠肺组织微环境中炎性细胞因子、趋化因子和粘附因子表达变化 (40)4.2.3 rMBP-NAP给药后荷瘤小鼠肺组织微环境中效应细胞CD4+T细胞和CD8+T细胞浸润变化 (41)4.2.4 rMBP-NAP给药后免疫组织化学CD34染色检测肺组织中肿瘤血管生成情况 (42)4.2.5 rMBP-NAP给药后信使RNA水平检测荷瘤小鼠肺组织中血管内皮生长因子表达变化 (43)4.2.6 统计学分析 (43)4.3实验结果 (43)4.3.1 rMBP-NAP给药后荷瘤小鼠肺组织微环境中Th1型细胞因子表 (43)达变化 (43)4.3.2 rMBP-NAP给药后荷瘤小鼠肺组织微环境中炎性细胞因子、趋化因子和粘附因子表达变化 (44)VII目录4.3.3 rMBP-NAP给药后荷瘤小鼠肺组织微环境中效应细胞CD4+T细胞和CD8+T细胞浸润变化 (45)4.3.4 CD34免疫组织化学染色法检测rMBP-NAP给药后肺组织中肿瘤血管生成情况 (47)4.3.5 信使RNA水平检测rMBP-NAP给药后荷瘤小鼠肺组织中血管内皮生长因子表达变化 (48)4.4结果讨论 (49)5 rMBP-NAP在体外对黑色素瘤细胞B16-F10粘附、迁移的影响.. 515.1仪器与材料 (52)5.1.1 主要仪器设备 (52)5.1.2 主要药品与试剂 (52)5.1.3 常用试剂配制 (52)5.2实验方法 (53)5.2.1 CCK-8法检测rMBP-NAP对黑色素瘤细胞B16-F10增殖的影响 (53)5.2.2 CCK-8法检测rMBP-NAP对黑色素瘤细胞B16-F10粘附的影响 (53)5.2.3 划痕实验检测rMBP-NAP对黑色素瘤细胞B16-F10迁移的影响 (53)5.2.4 统计学分析 (54)5.3实验结果 (54)5.3.1 CCK-8法检测rMBP-NAP对黑色素瘤细胞B16-F10增殖的影响 (54)5.3.2 CCK-8法检测rMBP-NAP对黑色素瘤细胞B16-F10粘附的影响 (55)5.3.3 划痕实验检测rMBP-NAP对黑色素瘤细胞B16-F10迁移的影响 (56)5.4结果讨论 (57)6 结论与讨论 (59)参考文献 (62)个人简历、在学期间发表的学术论文和研究成果 (68)VIII目录致谢 (69)IX常见英文缩写一览表常见英文缩写一览表（按字母顺序）英文缩写英文全称中文名称bp Base pair 碱基对CAF Carcinoma-associated-fibroblasts 肿瘤相关纤维母细胞CD3 Cluster of differentiation 3 表面抗原分化簇3CD4 Cluster of differentiation 4 表面抗原分化簇4CD8 Cluster of differentiation 8 表面抗原分化簇8DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸ELISPOT Enzyme-linked immunospot assay 酶联免疫斑点测定法HP-NAP Helicobacter pylori neutropHil-activating protein 幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白IFN-γInterferon-γγ-干扰素IL-2 Interleukin-2 白介素2IL-6 Interleukin-6 白介素6IL-10 Interleukin-10 白介素10IP-10 Interferon induced protein 10 干扰素诱导蛋白10IR Inhibition rate 抑制率kDa Kilodalton 千道尔顿MBP Maltose binding protein 麦芽糖结合蛋白MCP-1 monocyte chemoattractant protein-1 单核细胞趋化蛋白- 1MDSC Myeloid-derived suppressor cell 骨髓源性抑制细胞NK Natural killer cell 自然杀伤细胞NKT Natural killer T cell 自然杀伤T细胞PBS PHospHate-buffered saline 磷酸盐缓冲液RNA Ribonucleic acid 核糖核酸SFU Spot-forming units 斑点形成单位TAM Tumor Associated Macrophages 肿瘤相关巨噬细胞TGF-βTransforming Growth Factor β转化生长因子βTh1 T helper 1 cell T细胞辅助细胞1Th2 T helper 2 cell T细胞辅助细胞2TLR Toll-like receptor Toll样受体TNF-αTumor necrosis factor-α肿瘤坏死因子αX常见英文缩写一览表Treg regulatory T cell 调节性T细胞VI Viscera index 脏器指数VEGF Vascular endothelial growth factor 血管内皮细胞生长因子XI引言1 引言1.1 选题背景随着社会的进步，人们生活节奏加快和环境污染愈演愈烈，全球范围内肿瘤发生率在逐年增加。
