一级菌种制作

各级菌种制作方法文稿归稿存档编号：［KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-1,母种:又叫一级种,用直径18-22cm的试管制备.常用配方:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克，琼脂10-20克，水1000毫升，先把土豆去皮称重，切成小块煮至熟而不烂，过滤加水至1000毫升，再把琼脂剪成小段，放入锅内，边搅边煮，待琼脂溶化后加入葡萄糖，由于琼脂质量各有不同加入份量要看情况而定，装管前取一小勺浮在凉水中冷却观察其硬度适合然后分袋试管，用棉花塞塞住试管口，放入小高压锅内灭菌,当压力表达到1・5个压力时，再灭菌30分钟取出试管放成斜面，放置2-3天后,无杂菌感染再放入接种箱内接种，接了种的试管放入培养室内进行培养，温度要求25-C 左右，相对湿度75%以下.2,原种:二级种一般釆用原种瓶和罐头瓶.培养料不要装的太满,装至瓶肩•原种的制备多采用谷粒种，锯沫种和棉子壳种.①谷料种:用玉米，小麦为原料，精选后煮沸，使种子变软即成,不要煮的太熟，开花.熟后离火泡5分钟（不开盖而能吸足水份）而后装瓶，用小型或中型高压锅灭菌，放至温度25°C左右接入母种，放培养室内培养.一般25-30天即成.②木屑种:木屑78%,麦鉄20%,石膏1%,糖1%,料:水二］:1. 3,拌匀装瓶，灭菌，接种培养.一般25-30天即成.③棉子皮:因棉子皮各种营养丰富，一般不需要加其它物质，只加1%的糖和石膏，用料1. 3-1. 5倍的水拌匀即可，而后装瓶，灭菌，接种，培养即可.推荐通用配方：木屑（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：6斤糖：0.5斤菇耳壮:1.6两石膏：1斤3,生产种:三级种可用木屑，玉米，棉籽皮，菌草，麦秸等为原料，根据所栽培的品种，采用不同的配方，用聚乙烯或聚丙烯，直径15-28cm塑料袋装料, 然后用常压灭菌锅灭菌，达到1009后,再维持100-C8-10小时.待袋稍凉后出锅，使栽培袋温度降至259左右再用原种接种,而后放到培养室的培养架上培养.推荐配方：■地栽木耳配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：5斤豆粉：2斤菇耳壮：1.4两白灰：1斤■平菇猴头香菇金针菇配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）:80斤菇耳壮：1.4两糠夫：5斤白灰：1斤。

绣球菌菌种制备技术绣球菌菌种制作跟其他食用菌一样，包括母种、原种、栽培种三级，下面我们先来看一下母种的制作。

1.母种制备母种是指经规范方法选育后而获得的、具有结性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位，通常又称为一级种或者试管种。

关于绣球菌原始母种的来源，在有条件的地方可以从子实体上自行提取，但是由于制作过程要求严谨难度较高，所以一般的生产单位都是从国家认可研究单位购买而来的，买回后直接进行母种的扩繁就可以。

首先先来看一下母种培养基的制作。

2.母种培养基制作制作母种培养基时所采用的配方为：复合糖蛋白30克，蛋白1克，大豆粉1克，KH2PO4(磷酸二氢钾)1克，琼脂粉20克，水1000毫升。

上面的料都准备好以后就可以制作了，将准备好的培养基配方依次倒入锅内，琼脂粉先不要放入，边加热边搅拌，等沸腾后再加入琼脂粉，并不断搅拌，直到琼脂粉完全融化，然后再将煮好的培养基倒入塑料杯内，这时需要注意的是，如果体积不足1000毫升还要加水。

3.试管分装整理好以后，要趁热将培养基倒入固定在铁架台上的漏斗内，用量筒量取10毫升的蒸馏水，倒入一支空试管内，做分装试管的对照。

将漏斗软管下的玻璃管插入试管口约3厘米深处，用右手捏紧橡胶软管的止水夹，使培养基缓缓流入空试管内，直到液面与蒸馏水的液面持平为止，然后，松开止水夹让培养基停止流入，并将试管下移离开软管。

接下来，依次重复，直到将培养基全部分装到试管内，分装试管时需要注意的是，动作要迅速连贯，以防止培养基在漏斗内凝固。

分装完成后，每支试管都要用硅胶塞住，接下来还要将试管进行扎捆。

4.试管包扎一般情况下，每7支试管作为一扎，先用橡皮筋将试管下端扎紧，再用牛皮纸将试管口处进行包裹，并用橡皮筋进行困扎。

下面就要进行灭菌的工作了。

5.培养基灭菌将包扎好的培养基试管垂直放入灭菌框内，再将菌框放入灭菌锅内，在120摄氏度的高温下进行灭菌30分钟。

待灭菌锅温度降至60摄氏度左右时，要及时取出试管，并将它们摆放成斜面。

香菇的菌种制作人工栽培食用菌成功的关键是菌种，只有优良的菌种才能达到优质高产。

香菇菌种根据来源和生产目的分为母种(原始种称一级种)、原种(母种繁育而成称二级种)和栽培种(母种繁育用于生产栽培的种，称三级种)。

母种直接用于栽培造价高，自己生产母种需要设备和技术，成本太高。

自己繁育原种和栽培种，可以减少设备投入，降低成本，并能得到优质的菌源。

1 原种制作1.1 培养基的配制选新鲜、干燥、无霉变硬杂木细木屑55%、麦麸20%、棉籽壳20%、玉米面3%、石膏2%、料水比1∶1.1，均匀搅拌，装入15厘米×30厘米聚乙稀原种袋。

装袋松紧适宜，松装料少，紧装不透气，均影响质量和产量。

1.2 常压蒸汽灭菌条件具备用高压锅灭菌(在0.015兆帕压力下保持2小时)。

一般采用常压高温灭菌，少量可采用农村大锅蒸，要求升温快，升到100 ℃时保持12小时，闷锅8小时。

假如效果不好，可换间歇式灭菌法，将料袋在蒸锅内100 ℃条件下蒸3次，每次2小时，每次之间间歇24小时，虽耗时、麻烦，但效果好。

工厂化生产，采用常压蒸汽罩灭菌。

选耐高温、寿命长的塑料膜两层和一层花格布，组成一个密封的大空间，空间内摆放料袋，一次放4 500个，罩外用重物压严，以免漏气，在蒸汽罩底部放置排气管，管上用砖盖平，以免通气不匀造成死角，放气管与锅炉相连，温度上升至100 ℃时，蒸24小时，焖12小时。

然后将灭菌后的料袋运至灭过菌的房间，以备接种。

1.3 接种选通风良好的房间，将接种钩、铲、试管架放入接种箱，用必洁士或克霉灵烟雾剂对房间和接种箱消毒灭菌，经12小时烟雾自然散尽后，再开窗通风以备接种。

接种前用75%酒精浸泡的毛巾或棉球擦拭手，接种工具，点燃酒精灯使火焰周围为无菌区，并将接种铲、钩和母种的试管口经火焰烧灼，待凉后立即将试管中母种切成三块，将原种料袋口解开，放入一块菌种，立即系好袋口，动作要快，接种完毕后贴上标签，将接过种的袋移至消过毒的地方。

蘑菇菌种简易制作方法
以下是蘑菇菌种的简易制作方法：
1. 准备材料：新鲜的蘑菇菌盖和菌柄、培养基（如米糠、麦秸、木屑等）、石膏或泥土、酒精灯、培养箱、无菌器具（如培养皿、瓶子、剪刀等）。

2. 制备培养基：将培养基加入适量的水中，搅拌均匀后放入锅中煮沸，煮沸后保持一段时间，待冷却至适合菌种生长的温度（一般为25-30摄氏度）。

3. 消毒器具：将培养皿、瓶子、剪刀等工具用酒精灯或消毒液进行消毒，确保无菌环境。

4. 制作菌种：将蘑菇菌盖和菌柄分别切碎成小块，放入无菌的培养皿或瓶子中。

5. 添加培养基：将煮沸后的培养基倒入培养皿或瓶子中，覆盖盖子以保持无菌环境。

6. 储存菌种：将制作好的菌种放入培养箱中，在适合的温度下保存。

菌种通常需要一段时间才能生长成母菌。

注意事项：
- 确保所有材料和工具都经过消毒，以防止细菌和其他污染物的污染。

- 维持恰当的温度和湿度是蘑菇菌种生长的关键。

- 在操作过程中避免直接触摸菌种，以防止污染。

- 在制备过程中要保持室内通风良好，以保持无菌环境。

- 对于一些特殊品种的蘑菇，可能需要特殊的培养条件，可以参考专业的培养指导或咨询专业人士。

一般食用菌母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。

(一)常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。

培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。

第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。

如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。

第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。

第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。

这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。

这一点必须在配制时就考虑到。

这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。

一般高压蒸汽灭菌0．1～0．12兆帕30分钟，培养基的pH下降0．1～0．3。

高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH。

目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从10～24克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书。

此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。

1．通用培养基通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下：(1)PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升。

(2)综合马铃薯培养基马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。

(3)马铃薯麦麸综合培养基马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。

1,母种:又叫一级种,用直径18-22cm的试管制备.常用配方:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂10-20克,水1000毫升,先把土豆去皮称重,切成小块煮至熟而不烂,过滤加水至1000毫升,再把琼脂剪成小段,放入锅内,边搅边煮,待琼脂溶化后加入葡萄糖,由于琼脂质量各有不同加入份量要看情况而定，装管前取一小勺浮在凉水中冷却观察其硬度适合然后分袋试管,用棉花塞塞住试管口,放入小高压锅内灭菌,当压力表达到个压力时,再灭菌30分钟,取出试管放成斜面,放置2-3 天后,无杂菌感染再放入接种箱内接种,接了种的试管放入培养室内进行培养,温度要求25℃左右,相对湿度75%以下.2,原种:二级种,一般采用原种瓶和罐头瓶.培养料不要装的太满,装至瓶肩.原种的制备多采用谷粒种,锯沫种和棉子壳种.①谷料种:用玉米,小麦为原料,精选后煮沸,使种子变软即成,不要煮的太熟,开花.熟后离火泡5分钟（不开盖而能吸足水份）而后装瓶,用小型或中型高压锅灭菌,放至温度25℃左右接入母种,放培养室内培养.一般25-30天即成.②木屑种:木屑78%,麦麸20%,石膏1%,糖1%,料:水=1:,拌匀装瓶,灭菌,接种培养.一般25-30天即成.③棉子皮:因棉子皮各种营养丰富,一般不需要加其它物质,只加1%的糖和石膏,用料倍的水拌匀即可,而后装瓶,灭菌,接种,培养即可.推荐通用配方：木屑（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：6斤糖：斤菇耳壮：两石膏：1斤3,生产种:三级种可用木屑,玉米,棉籽皮,菌草,麦秸等为原料,根据所栽培的品种,采用不同的配方,用聚乙烯或聚丙烯,直径15-28cm塑料袋装料,然后用常压灭菌锅灭菌,达到100℃后,再维持100℃8-10小时.待袋稍凉后出锅,使栽培袋温度降至25℃左右再用原种接种,而后放到培养室的培养架上培养.推荐配方：■地栽木耳配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：5斤豆粉：2斤菇耳壮：两白灰：1斤■平菇猴头香菇金针菇配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤菇耳壮：两糠夫：5斤白灰：1斤。

菌种制作基础：平菇⼀级菌种培养基制备⽅法培养基虽然种类繁多，配⽅各异，但配制⽅法基本相同，都要经过营养物质的选择、称量调配、调节pH、分装和灭菌等步骤。

（1）营养物质的选择： 平菇⼀级种培养基的选择是根据⼀级种的⽤途和当时材料获得的难易决定的。

如配制⽣产⽤的⼀级种培养基，就可选择上述配⽅中的任何⼀种，⽽配制菌种保藏⽤的培养基就必须⽤配⽅（8）。

平菇⼀级种培养基使⽤的材料中，有些材料的种类、浓度、化学成分相对稳定，如磷酸⼆氢钾、硫酸镁等，有些天然植物体或动植物提取的成分相对不甚稳定，要⼗分注意，如马铃薯、蛋⽩胨、麦麸等。

发芽的马铃薯不能直接使⽤。

使⽤时要将刚刚出现的萌芽深深挖掉，否则芽眼处的龙葵碱，对平菇菌丝⽣长有毒害作⽤。

出芽较⼤的马铃薯不能使⽤。

⽊屑、麦麸、⽟⽶粉、棉籽壳等农副产品，使⽤前要认真检查，⽣⾍、发霉和不新鲜的不能使⽤，昆⾍的代谢物和霉菌产⽣的毒素都对平菇菌丝有毒害作⽤。

不够洁净的琼脂要事先浸泡冲洗去杂。

（2）称量： 培养基配⽅中标出的⽔1000ml，实际上是将各种营养物质都容于⽔后的营养液的容量，⽽不完全是⽔。

配制好后，最后总容量达到1000ml。

（3）调配： 植物体材料煮沸⽤其汁，⼀般煮沸20~30min，⽤2~4层纱布过滤。

如马铃薯、⽟⽶粉、⽊屑、麦麸等。

难溶解的物质先溶解，如蛋⽩胨，然后再加⼊易溶解的物质。

化学试剂后加⼊，不断搅拌使其均匀，⽽不与植物体材料⼀起煮沸。

如葡萄糖、磷酸⼆氢钾、硫酸镁等。

在⽔煮取汁的过程中，⽔不⾜时可加⽔⾄⾜量，调配到最后，容量不⾜时可加⽔补⾜⾄1000ml。

（4）调节pH： 不同平菇品种⽣长发育最适pH不同，不同地区，不同⽔源的pH也不同。

因此，需要调节。

通常先⽤pH试纸测定已调配好的培养基，然后再⽤稀酸或稀碱溶液调节。

平菇⼀级种的pH调节常⽤的酸性溶液是柠檬酸和⼄酸溶液，常⽤的稀碱溶液是碳酸氢钠和碳酸钠液。

（5）分装： 培养基调配好后，调节好pH即可分装。

菌种配方和制作过程菌种配方和制作过程是指在生物技术领域中，为了培养特定的菌种并获得所需的产品或产物，科研人员需要按照一定的比例和步骤配制菌种培养基，并进行相应的培养过程。

本文将介绍菌种配方和制作过程的基本步骤和注意事项。

一、菌种配方菌种配方是指根据所培养的菌种的需求，选择合适的培养基成分和比例，以提供菌种所需的营养物质和环境条件。

一般来说，菌种培养基包括碳源、氮源、无机盐和其他辅助成分。

1. 碳源：提供能量和碳原子，常用的碳源有葡萄糖、麦芽糖等。

2. 氮源：提供合成蛋白质所需的氮原子，常用的氮源有氨基酸、尿素等。

3. 无机盐：提供生长所需的微量元素和离子，如磷、钾、钙等。

4. 辅助成分：如维生素、酶等，根据具体菌种的需求进行添加。

在配制菌种培养基时，需要根据菌种的特性和需求，选择合适的成分和比例，确保菌种能够正常生长和繁殖。

二、菌种制作过程菌种制作过程是指根据菌种的特性和需求，按照一定的步骤进行培养和繁殖。

一般来说，菌种制作过程包括以下几个步骤：1. 菌种接种：将菌种接种到含有适当培养基的培养皿或培养液中。

接种前需要进行无菌操作，确保接种的菌种没有被其他微生物污染。

2. 培养过程：根据菌种的特性和需求，选择合适的培养条件，如温度、pH值、培养基的透气性等。

将接种好的培养皿或培养液放入培养箱或摇床中进行培养。

培养过程中需要定期观察菌种的生长情况，如菌落的形态、颜色等。

3. 菌种繁殖：菌种在适当的培养条件下会进行繁殖。

繁殖的方式有两种，一种是无性繁殖，即菌落的扩大和分散；另一种是有性繁殖，即通过生殖细胞的结合和交换基因进行繁殖。

4. 菌种保存：在菌种繁殖过程中，可以选择保存一部分菌种作为备份。

常见的保存方式有冷冻保存和冷冻干燥保存。

在菌种制作过程中，需要注意以下几点：1. 严格控制无菌操作，避免菌种被其他微生物污染。

2. 确保培养条件的合适性，如温度、pH值等。

3. 定期观察菌种的生长情况，及时调整培养条件。