华中农业大学《生物化学实验》试卷

华中农业大学本科生课程考试试卷

考试课程与试卷类型：植物生理学实验原理与技术（A）姓名：

学年学期：2008－2009－1 学号：

考试时间：2009－－班级：

一、名词解释 ( 每题 4 分 , 共 12分 )

1. 聚丙烯酰胺凝胶

2. 离心技术

3．可见光分光光度法/反相纸层析

二、填空题 ( 每空 2 分 , 共 42分 )

1. 反相纸层析法分离油菜不饱和脂肪酸的实验中 ,分离后的不饱和脂肪酸经红氨酸溶液显色后 , 其最终产物颜色是（1）,从点样端起层析谱带所对应的脂肪酸依次是 (2) 、（3）、（4）、（5）、（6）。

2. 圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物酶同工酶的实验中 , 电泳时上槽接电源（7）极 ,下槽接电源 (8) 极 , 电泳开始电流应调节至每管（9）mA, 十分钟后电流调节至每管 (10) mA; 在上槽或样品中加入溴酚蓝是起（11）的作用。

3. 核酸提取过程中 , 将含有 DNA 的溶液置72℃处理 3 分钟，其目的是（12）；在淀粉酶活性测定过程中将淀粉酶液置于 70℃下处理 15 分钟的目的是（13）。

4．在微量凯氏定氮法测定植物组织中的总氮和蛋白氮，有三个主要的实验阶段，它们分别是（14）、（15）和（16）。在第二阶段，若收集三角瓶中的溶液颜色由_（17）变为（18），表明反应完全。第三阶段所用的标准浓度的滴定溶液名称是（19）。

5. DNA 提取研磨时加入的研磨缓冲液的NaCl浓度是（20），研磨时加入SDS的作用是（21）

三、是非判断题 (判断对错，对的标T，错的标F，每题 2 分，共 10 分 )

1．萌发的小麦种子中含有很高活性的淀粉酶，其中α－淀粉酶不耐热，在70℃迅速钝化。（）

2．本学期测定还原性糖和可溶性蛋白含量时都用到了斐林试剂，这两个实验中所用的斐林试剂的配方是相同的。（）

3．DNA提取中，加入冷乙醇是为了使DNA分子复性变粗。（）

4．离心机使用中，要求同一台离心机所用的离心管都有相同的重量。（）5．油菜种子硫甙葡萄糖苷的快速分析法中，反应的实质是测定水解硫苷产生的葡萄糖的数量。（）

四、问答题（共36分）

1．试述维生素C测定的基本原理及其实验过程中的注意事项（12分）

2．简述凯氏定氮法测定蛋白质含量的基本原理。为什么一些不法商人要在蛋白质制品中加入三聚氰胺？（12分）

3．凝胶电泳法测定同工酶的原理是什么？为什么本学期所作的胶条染色后显示的谱带就是过氧化物同工酶带？（12分）

华中农业大学本科课程考试

参考答案与评分标准

考试课程：生物化学实验原理和技术学年学期：2008－2009－1 试卷类型：A 考试时间：

一、名词解释 ( 每题 4 分 9 共 l2 分 )

1. 聚丙烯酰胺凝胶：是由丙烯酰胺和N，N 一甲叉双丙烯酰胺在催化剂过硫酸胺以及加速剂四甲基乙二胺的催化下聚合成的凝胶。

2．离心技术：是根据物质颗粒在离心场中的行为而发展起来的分离细胞器和生物大分子的实验技术，不同的物质通常有不同的沉降速度或沉降位置。(4分)

3．可见光分光光度法：利用分光装置，将光源产生的连续光谱分成可见光的各种单色光，再利用单色光照射待测溶液，经检测器接收透过光的强弱，并转换成电信号，从而实现对物质进行定性和定量分析的方法。(4分)

二、填空题 ( 每空 2 分 , 共 42 分 )

1．(1) 灰褐色(2) 芥酸(3) 花生烯酸(4) 油酸

(5) 亚油酸(6) 亚麻油酸

2. (7) 负（8) 正 (9) 1 (10) 2-3 (11) 指示

3. (12) 变性 DNA 酶（或使DNA变性） (13) 使β-淀粉酶失活

4. (l4) 消化(15) 蒸馏 (l6) 滴定 (17)紫红色 (l8) 蓝色

(19) 盐酸（HCl）

5. (20) 1.0 M/L (21) 使核酸酶变性

三、是非判断题 ( 每题 2 分男共 10 分 )

1．( F ) 2.(F )3. (F ) 4.(F ) 5.( T )

四、问答题 ( 共 36 分 )

l. 试述维生素 C 测定的基本原理及其实验过程中的注意事项 (l2 分 )

原理：VC 具有还原性，易被氧化,2，6-二氯酚靛酚具有较强的氧化性且在酸性溶液中

呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，被还原后为无色（3分）。因此当用蓝色的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定含有 VC 的草酸溶液时, VC 可将 2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型 (3 分 )。当溶液中的 VC 完全被氧化后 , 再滴入2,6 -二氯酚靛酚就会在酸性草酸溶液中呈红色,借此可以指示滴定终点。根据用标准VC与滴定所用的2，6-二氧酚靛酚溶液的量求出二者的对应定量关系, 可以计算出被测样品溶液中的 VC含量。（3分 )

注意事项 :保护VC不被氧化：加草酸溶液研磨、不可用铁锈刀处理样品、用新鲜水果蔬菜做样品、操作要迅速,滴定要准确等 (3分 )

2. （12分 )

蛋白质制品是以蛋白质含量作为质量指标的，蛋白质含量测定多以N素含量推算蛋白质含量，加入高含N量的非蛋白质物质，可提高蛋白质表观测定值，因此不法商人用此法牟取非法利益。（3分）

测定原理 : 将植物材料与浓硫酸共热 , 硫酸分解为二氧化硫、水和原子氧 , 并将有机物质氧化分解为二氧化碳和水，其中的氮转变成氨 , 并进一步生成硫酸胺 (3分)。消化完成后 , 再加入过量的浓氢氧化钾（钠），使铵分解放出 NH3（2分）, 通过蒸馏，借蒸汽将 NH3 导入过量的硼酸溶液中, 并用标准HCl溶液滴定，至硼酸溶液恢复到原来的氢离子浓度。(2 分 ) 所用盐酸与N原子具有相同的化学当量，通过计算可得出样品的总氮量。（2分）。

3．（12分 )

混合蛋白质样品通过凝胶电泳后，因不同的蛋白质分子大小、结构和电性不同而有不同的迁移速率，不同的酶被分离存在于胶条的不同部位，通过特定的显色反应就可看出特定功能的蛋白质（酶）的所在的位置。（5 分）

过氧化物酶是由特定的染色方法显现出来的，其染色方法是 : 取 0.5Iml 联苯胺母液+ 9 .3m1H20 + 0.2ml 3 %H202, 混匀后倒入盛有凝胶条的培养皿。此时可以看到凝胶条上出现蓝色或棕褐色环 , 即过氧化物酶酶带（5分）根据条带数量，就可知有多少种同工酶。

(2 分〉