生化实验基本操作

实验一基因的PCR扩增技术一、实验目的与原理简介聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。

因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。

常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。

通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。

二、复性。

降低温度使DNA单链分子同引物结合。

温度为55℃，时间1min。

三、延深。

升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。

同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。

经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。

PCR反应包含的七种基本成分：1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg.2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。

3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。

每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。

4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。

Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。

5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。

在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。

生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。

留长发的同学应挽短、戴帽。

2. 整洁。

实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。

实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。

3. 安静。

实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。

4. 废物及废液处理。

实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。

但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。

少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。

火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。

5. 试剂与标准溶液。

取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。

取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。

取样时，应注意用多少取多少。

如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。

7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。

调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。

8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。

如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。

9. 防火。

勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。

若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。

10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。

实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。

生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。

实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。

例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。

一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。

因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。

如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。

生化基本操作方法生化学作为一门重要的科学，广泛应用于医学、生物学、化学等领域。

生化基本操作方法是生化学研究中必不可少的一部分，其正确性和可靠性对于实验结果的准确性和科学性有着决定性的影响。

本文将介绍生化基本操作方法。

一. 实验前的准备在进行生化实验之前，首先需要进行实验前的准备工作。

这包括实验室的准备和实验物品的准备。

实验室的准备：实验室应该是整洁、干净和有序的，以防止实验过程中出现误差。

实验室应该要有充足的安全设施，例如事故处理设施和防护设施，以预防任何实验失误而导致的伤害。

实验物品的准备：实验物品是生化实验中必不可少的物品，包括试剂、器材、培养基等。

在准备实验物品时，需要考虑物品的纯度、存储条件和到期日等因素，并按照实验的需要正确选取和配制所需的物品，以确保实验的准确性和稳定性。

二. 实验操作的步骤1. 分配试样将待测试的样品分配到适当的量的试管或反应器中，这是生化实验的第一步。

2. 预处理样品为了得到准确的测试结果，通常需要对试样进行预处理。

例如，对于生化酶的活性测定，通常需要通过离心或超滤等步骤分离和浓缩酶的样品。

3. 装载试剂将所需的试剂和溶液配制好，并按照一定的比例加入到待测试的试样中。

为确保测试结果的准确性，必须严格控制每种试剂和溶液的质量和分量。

4. 开始测试开始测试前，首先需要对测试仪器进行预热和校准。

一旦测试仪器准备就绪，就可以将试样装入测试器中，开始进行测试。

在进行生化测试时，必须严格按照测试步骤和时间表的要求进行操作。

例如，在生化酶活性测定中，必须在恰当的时间内准确的读取试样的吸光度。

5. 结果分析在测试完成后，需要对结果进行分析和处理。

根据不同的实验要求和目的，分析和处理方法也有所不同。

例如，在酶活性测定中，可以使用Michaelis-Menten 方程式计算酶的动力学参数，如Km值和Vmax值，从而了解酶的性质和功能等。

三. 实验过程中的注意事项在进行生化实验时，需要特别注意以下几点：1. 实验操作过程中应保持实验室干净、整洁和有序，避免实验失误。

生化实验基本操作目的要求：1．熟悉实验室规则及常用生化仪器2．清点洗刷实验用具。

3．掌握各种仪器的正规操作及维护实验操作1．玻璃仪器的洗涤(1) 洗涤液：①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。

②玻璃仪器专用洗涤液：主要成份为中性稀氯氧化剂，上海日化研究所出品(2) 洗涤的要求与步骤：要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。

步骤：不净的器皿：洗衣粉或肥皂水刷洗自来水冲净对使用过的仪器应养成及时清洗的习惯，特别是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当立即用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就很不容易清除。

(3)玻璃仪器的干燥一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理：①试管、离心管、烧杯、烧瓶等普通玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。

烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且均匀，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。

③使用电吹风干燥一般玻璃仪器也很便利常用。

④下列玻璃仪器应避免烘烤：吸管：容易造成器壁变形而致容量不准。

比色杯：易在烘烤时发生破裂。

2．移液操作：(1)吸量管的使用①吸量管的选择：在一次完成转移的前提下，应选用容量较小的吸量管。

·对于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管②操作·用洗耳球将液体吸至超过标线·移开洗耳球，迅速用食指压紧管口·必要时将管尖端外围拭净·调液面至标线·放开食指，使液体流入容器·将最后液滴沿器壁而下或吹出③读数·吸量管保持垂直·视线与液面应水平·管中液面与刻度线应呈切线注：对于刻度由上至下的吸量管应尽量使用上端刻度管尖残液是否需吹出，(2)枪式移液器的使用①枪式移液器的结构1. 液体吸放钮2．体积选取钮3. 体积、显示4．枪头排放钮5. 枪头排放器6．枪头接嘴其内部柱塞分2段行程，第1档为吸液，第2档为放液，手感十分清楚。

实验1 生化实验基本操作一、生化实验特点介绍生化的重要性和有趣性，引起学生对生化课的兴趣，帮助学生树立正确的实验态度1、简介生物化学学科特点：1）一门在分子水平上研究和探索生命现象和本质的学科，发展迅速，进展快，是生命科学的领头羊，其理论和技术已渗入到医学各学科，二十一世纪被称为分子生物学时代，这门学科的发展，已很大程度上改变着人类的生存状态，但仍有很多未知领域。

2）从同学们关心的角度（考研）说明生化的重要性。

3）是一门实验性学科，每一理论的提出都来自于科学实验，实验本身是这门学科的基础和重要组成部分，是探究问题的重要途径，培养我们发现问题、分析问题解决问题的能力，而非机械的操作（多问为什么！多想怎么办！）。

2、生化实验的特点：1）主要运用化学的原理和方法设计的科学实验。

2）生化实验拥有先进的实验手段。

3）微量和定量是生化实验的一大特点。

二、生化实验室规则让学生树立科学正确的实验意识，培养基本的科研素养。

1、实验前：认真预习，有自己的见解，提出实验思路和问题。

2、实验中：认真操作，仔细观察，如实纪录。

养成良好的科学实验习惯，注意安全。

3、实验后：独立完成实验报告，分析结果和出现的问题，培养分析解决问题的能力。

离开实验室时，清点仪器，安排值日，检查灯火水电气等。

三、生化实验基本操作1、玻璃仪器的清洗：（开始实验的重要步骤，是实验能否成功的重要因素）一般玻璃仪器：（如试管，烧杯）自来水冲洗—肥皂水刷洗—自来水冲洗—蒸馏水淋洗—干燥（倒置风干）容量分析仪器：（如吸量管，滴定管）自来水冲洗—铬酸洗液浸泡—大量自来水冲洗蒸馏水淋洗—干燥比色杯：自来水冲洗—酒精或盐酸浸泡—自来水冲洗—蒸馏水淋洗***注：切忌用试管刷、粗布擦洗，分清毛面光面，手拿毛面。

清洁标准：对光面玻璃璧上有均匀的水膜，倒置不挂水珠。

教学内容与组织安排：2、吸量管的种类及使用分类：奥式吸量管，移液管，刻度吸量管（实验中要根据情况选取合适的吸量管）刻度吸量管：全流出式（刻度到尖端，吹）和不完全流出式使用：执管；取液（忌悬空）；调准刻度（液体凹面，视线，刻度平行）；放液（管尖贴内壁）；洗涤。

生化实验的基本操作（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。

配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。

2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。

3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。

不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。

4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。

5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。

倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。

6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。

7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。

手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。

还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。

8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。

9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。

一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。

10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。

（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。

2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。

而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。

滤纸越致密，过滤就越慢。

3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。

沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。

最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。

4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。

折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。

放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。

撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。

生化实验基本操作技术一：玻璃仪器的洗涤及干燥：（一）意义：去除干扰物，提高实验结果的准确性。

（二）常用洗涤剂：1．洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉----用于一般去污。

2．强酸，强碱，尿素------去除蛋白质，核酸。

3．铬酸洗液------见附2。

4．水（自来水，蒸馏水）------用来冲洗容器。

（三）洗涤方法：* 洗涤程序：泡→洗（→泡）→冲→漱1．新仪器的洗涤：2%的盐酸浸泡数小时→自来水冲净→洗涤剂溶液中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。

2．非定量敞口仪器的洗涤（试管、烧杯等）用后立即放入洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。

注意：检查毛刷顶部是否裸露，洗刷时用力不可过猛，以免戳破玻璃仪器。

3．窄口仪器的洗涤（容量瓶、试剂瓶）使用后立即在洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→洗涤剂溶液倒入容器内（约1/4）→小心转动或摇动仪器→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。

4．刻度吸管的洗涤使用后立即用大量自来水冲洗（切勿使样品干在管内，否则难以洗净）→干燥后放入铬酸洗液中浸泡过夜→取出，在特制的容器中用自来水冲洗30 分钟→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。

（四）判断洗净的标准：洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍；被水湿润后，管壁呈现均匀水膜，无挂水珠。

（五）干燥方法1、晾干：仪器倒立放在特制架子上，自然晾干。

2、烘干：尽量倒净仪器内部的水，将其倒立放在托盘上，放入烘箱烘干。

普通仪器用80-100℃，容量分析仪器用37-40℃。

3、有机溶剂干燥：体积小的容器急需干燥时，可用此法。

洗净的仪器先用少量酒精洗一次，再用少量丙酮或乙醚洗涤，吹干（不必加热）。

二：吸管和微量移液器的使用及注意事项：（一）刻度吸管：1．作用：用于准确移取一定体积的溶液。

一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。

最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。

2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。

若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。

在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。

因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。

生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。

其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。

重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。

因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。

由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。

洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。

（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。

（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。

（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。

（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。

玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。

生化实验操作规程一、实验目的本实验操作规程旨在确保生化实验的顺利进行，保证实验结果的准确性和可重复性。

二、实验前准备1. 确认所需实验器材和试剂的齐全性。

2. 检查实验室安全设备的完好性，如洗眼器、紧急淋浴等。

3. 穿戴实验室安全防护用具，如实验服、手套、眼镜等。

4. 清洁并消毒实验台面和各项实验器皿。

三、实验操作步骤1. 根据实验需求，准备好所需样本和试剂，并按照提供的配方准确称量。

2. 将准备好的样本和试剂按照实验器具要求加入相应容器中，并进行混匀。

3. 设置实验仪器或设备的参数，确保其正常运行。

4. 将准备好的样本和试剂按照实验要求进行处理，如加热、冷却、离心等。

5. 在实验过程中，保持实验操作区域的整洁，避免交叉污染。

6. 在实验操作完成后，根据实验要求及时保存或处理样本和试剂。

7. 清洁并消毒使用过的实验器具，确保下次使用前的准备工作。

四、实验安全注意事项1. 遵守实验室安全操作规范，严禁单独操作以及无指导下进行实验。

2. 注意个人防护，正确佩戴实验服、手套、眼镜等防护用具。

3. 使用化学试剂时，避免直接接触皮肤和吸入有害气体。

4. 注意实验仪器或设备的安全操作要求，避免损坏设备或引发事故。

5. 在实验过程中，及时清理溢出物和废弃物，并正确处理。

五、实验记录与结果分析1. 按照实验要求记录实验操作的步骤、试剂使用量等相关信息。

2. 将实验结果进行详细记录，并进行数据分析和解释。

3. 对实验结果进行总结，归纳出可能存在的误差和改进方向。

六、实验后处理1. 根据实验室规定，妥善处理产生的废弃物和实验材料。

2. 清洁实验器具并归位，确保实验室的整洁和安全。

七、实验注意事项1. 严格按照操作规程进行实验，不得随意更改实验过程或参数。

2. 在实验过程中严禁食品和饮品的摄入，以免引起误食或误呼吸。

3. 如在实验过程中遇到问题或意外情况，应立即向指导老师报告。

通过以上的实验操作规程，我们能够确保每一次生化实验的顺利进行，并获得准确可靠的实验结果。

临床生化实验报告实验名称：吸量管与加样器的使用实验目的：掌握吸量管和加样器的使用，比较两者的准确度实验原理：①吸量管是用于准确量取一定体积液体的量出式的玻璃仪器。

②加样器是精密量器，只能在特定范围内使用，移液范围选择在满量程的35%到100%时，可以保证最佳的准确性和重复性，尽量避免将移液器量程设置为最大值的10%以下。

实验材料：自来水实验仪器：洗耳球、吸量管、加样器、烧杯、电子天平实验操作步骤：1.使用移液管，首先要看一下移液管标记、准确度等级、刻度标线位置等。

2．吸液：用右手的拇指和中指捏住移液管的上端，将管的下口插入欲吸取的1号烧杯中的水中，插入不要太深或太浅（一般1-2cm处）。

左手拿洗耳球，接在管的上口把液体慢慢吸入，先吸入该容量的1/3左右，用右手的食指按住管口，取出，横持，并转动管子使液体接触到刻度以上部位，以置换内壁的水分，然后将溶液从管的下口放出并弃去，如此反复洗3次后，即可吸取溶液至刻度以上5mm处，立即用右手的食指按住管口。

2.将空烧杯放置在调平的电子天平上并置零。

3．调节液面:将移液管向上提升离开液面，用滤纸将沾在移液管外壁的液体擦掉，管的末端靠在盛溶液的1号烧杯的内壁上，管身保持垂直，略为放松食指（有时可微微转动吸管）使管内溶液慢慢从下口流出，直至溶液的弯月面底部与标线相切为止，立即用食指压紧管口。

将尖端的液滴靠壁去掉，移出移液管，插入承接溶液的2号烧杯中。

4.放出溶液：将管的末端与2号烧杯内壁接触，移开食指，将移液管内的液体放入烧杯中。

并记录烧杯此时的重量，即为移液管内的水的重量。

5.将上述操作再重复两次，并记录下数据。

6.在吸液杆上安装与吸取量匹配的洗液嘴，套紧7.右手握住加样器，用拇指把“推进按钮”向下按到第一档位，将吸液嘴尖头浸入一号烧杯中1-3mm深度，在缓慢放开“推进按钮”，使其返回远处，停留1-2秒后，将吸液嘴离开溶液8.目测吸入体积是否合理，注意不要有气泡9.将3号烧杯放在电子天平上清零9．把吸液嘴尖头轻轻轻轻地接触3号烧杯内壁，成15-20°角倾斜，将推进按钮向下按到第一静止点，停留1-2秒，再按到第二档位，排出尖头残液，此时的重量即为加样器取出水的质量，观察并记录数据⑤将上述操作重复三次后记录数据⑥使用完毕，将吸头嘴卸下。

生化实验的基本操作和常用仪器使用-31、72型分光光度:72型分光光度计是可见光分光光度计，其波长范围为420—720毫微米。

（1）操作方法：① 按照接线要求，将稳压器和检流计连接在单色器上。

注意，将检流计与单色器相接时，应按三股接线的颜色准确连接。

而稳压器的输出接线柱与单色器相接。

② 在电源电压与仪器要求的电压相符时，分别插上稳压器和检流计的电源插头。

③ 将单色器的光路闸门找到黑点（关闭光路的指示）位置后，再将检流计上的电源开关旋到“开”处。

此时，指示光点即出现在标尺上，用零点调节器将光点中线准确地调至透光率标尺的。

“0”位上。

④ 打开稳压器的电源开关和单色器的光源开关，隔10分钟，再使用仪器。

⑤ 将比色杯架暗厢盖打开，取出比色杯架，将4支比色杯中的1支装入空白溶液或蒸馏水，其余3支装入待测液。

将比色杯置于架上，空白溶液杯应放在第一格内，放回暗厢内，盖好暗厢盖。

此时，空白溶液杯应在光路上。

⑥ 旋转波长调节器，将所需波长对准红线。

把光路闸门拨到红点（打开光路的指示）位置上，并以顺时针方向旋动光点调节器，使光点中线移至透光率“100”的刻度处。

数分钟后，待光电池趋于稳定，再轻轻转动光点调节器，使光点中线准确地处于透光率“100”的位置。

⑦ 将单色器的光路闸门拨回黑点处，校正检流计的光点中线于“0”位上。

然后，立即开启光路闸门，拨至红点处，校正检流计光点中线对准透光率“100”刻度上。

⑧ 调节好后，可以进行样品溶液的测定。

将比色杯定位装置的拉杆轻轻地拉出一格，使第二个比色杯内的待测液进人光路。

此时，检流计标尺上光点中心线所指示的读教，即为该溶液的光密度或透光率。

依此测定第二、第三个待测液，并读出数据。

重复2—3次后，取其平均值。

⑨ 在测定过程中，应经常关闭光路闸门，核对检流计的零点位置。

如有改变，及时用零点调节器核准。

⑩ 测定完毕，将每个旋钮、开关和调节器等复原或关闭。

拔掉电源插头，切断电源，并盖好仪器罩。