syh2016-呼吸道病毒

呼吸道疾病的病原体检测与鉴定技术随着呼吸道疾病在全球范围内的流行和威胁不断增加，对于准确、快速地确定病原体的检测与鉴定技术变得越来越重要。

病原体检测与鉴定技术是指通过分析病患的样本，确定其体内所携带的病原微生物的方法和技术。

本文将着重探讨呼吸道疾病的病原体检测与鉴定技术，包括传统方法和现代技术。

一、传统方法1. 细菌培养法细菌培养法是最早用于病原体检测与鉴定的方法之一。

它通过将样本在适宜培养基上进行培养，观察和鉴定生长的细菌。

这种方法虽然具有准确性较高的优势，但需要较长时间来等待细菌的生长，通常需要2-3天或更长的时间才能得到结果。

此外，细菌培养法对于不易培养的病原体无法应用，因此在呼吸道疾病的病原体检测中应用较少。

2. 核酸扩增技术（NAT）核酸扩增技术，包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR （qPCR），是一种常用的病原体检测与鉴定方法。

它们通过扩增和检测目标基因的特异性序列，来确定病原体的存在。

相对于传统细菌培养法，核酸扩增技术具有更高的灵敏度和更短的检测时间。

但是，核酸扩增技术对于操作人员技术要求较高，且在样品处理过程中容易出现污染，可能导致假阳性结果。

因此，在实际应用中需要科学严谨地操作。

二、现代技术1. 基因芯片技术基因芯片技术，也称为DNA芯片技术，是一种高通量的病原体检测与鉴定方法。

它通过将大量的寡核苷酸探针固定在玻璃或硅片上，同时与样本中的DNA进行杂交反应，从而检测和鉴定多种病原体。

基因芯片技术具有高度的自动化和高通量的优势，可以同时检测多种病原体，并且在检测过程中不需要特殊的操作技巧。

但是，由于芯片设计和制备的技术难度较大，以及较高的成本，使得该技术在一般实验室中应用较为有限。

2. 下一代测序技术下一代测序技术，也称为高通量测序技术，是近年来快速发展的一种病原体检测与鉴定方法。

它通过对待检样本中的DNA或RNA进行高通量测序，从而获得样本中所有的基因组序列信息，并通过比对分析确定其中的病原体。

呼吸道病毒检测阳性率偏低问题处理的专题报告前言呼吸道病毒是指一类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为入侵门户，主要引起呼吸道组织器官病变的病毒。

常见的呼吸道病毒主要包括：呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Fl uA)、乙型流感病毒(FluB)、副流感病毒1、2、3型(PIV1、2、3 )、腺病毒(ADV)等。

呼吸道病毒多通过空气或唾液飞沫方式传播，传播速度快，春、冬季婴幼儿发病率高，非常容易造成局部流行，甚至可导致爆发性流行[1]。

呼吸道病毒的检测对于明确诊断、防止医院感染及抗菌药物的滥用、流行病学的研究都有重要的意义。

现状分析2012年之前我科尚无关于呼吸道病毒检测的项目，应儿科医生的要求以及实验室发展的需要，决定开展此类项目。

经过前期的调查，我们了解到呼吸道病毒的检测方法很多，主要包括：病毒分离培养、PCR技术、免疫荧光技术、ELISA等，根据我科现有的条件，我们最终选用直接免疫荧光法进行该项目的检测，直接免疫荧光法是一种快速、简便、特异性及敏感性高的诊断呼吸道病毒感染的方法，仅需配备相应的荧光显微镜即可。

经过市场调研和论证，我们最终选用美国Diagnostic Hybrids公司提供的七项呼吸道病毒检测试剂盒。

问题确立免疫荧光检测技术在我科属于一种全新的检测技术，工作人员对该技术了解不多，我们都是边学习边摸索边实践，希望能够尽快掌握该技术。

任何检测技术从开展之初到熟练应用都需要经历一个过程。

在项目开展后没过多久，儿科医生就向我们反映样本的阳性率太低，对指导诊断治疗意义不大。

目的得知儿科反映的情况后，我们立刻制定出相应的对策，希望尽快解决阳性率低的问题。

我们初步确定从厂家的技术支持、临床沟通以及科内自查几个方面寻找原因并解决。

文献查证在急性呼吸道感染中，成人病毒阳性率约为61.8%，儿童为46.6%-66.9%[2]。

急性下呼吸道感染是儿童住院的主要原因，病毒感染率为32.3%-52.3%[3]。

呼吸道病毒检测方法呼吸道病毒是引起呼吸道感染的主要病原体之一，包括流感病毒、腺病毒、冠状病毒等。

及时准确地检测呼吸道病毒对于诊断和治疗呼吸道感染至关重要。

下面将介绍几种常见的呼吸道病毒检测方法。

1. 核酸扩增技术（PCR）。

PCR技术是目前最常用的呼吸道病毒检测方法之一。

该方法通过扩增病毒核酸，然后利用特异性探针或引物进行检测，能够快速、准确地确定病毒的存在。

PCR技术对呼吸道病毒的检测灵敏度高，特异性强，是临床上常用的检测方法之一。

2. 免疫层析法。

免疫层析法是一种简便、快速的呼吸道病毒检测方法。

该方法通过利用抗体与病毒抗原结合的原理，将样本中的病毒抗原检测出来。

免疫层析法操作简单，结果快速，适用于临床急诊室、门诊等场所的病毒检测。

3. 培养法。

培养法是一种传统的呼吸道病毒检测方法，通过将样本接种到细胞培养物中，观察病毒在细胞中的生长情况来进行检测。

虽然培养法能够检测到一些无法通过其他方法检测到的病毒，但是该方法耗时长，且操作复杂，目前在临床上的应用较少。

4. 全基因组测序。

全基因组测序是一种高通量的呼吸道病毒检测方法，通过对样本中的病毒进行全面测序，可以获得病毒的全基因组信息，包括基因型、亚型等。

全基因组测序技术对于呼吸道病毒的分型、溯源等研究具有重要意义，但是在临床上的应用较为有限。

综上所述，针对不同的临床需求和实验室条件，可以选择合适的呼吸道病毒检测方法。

在进行呼吸道病毒检测时，需要根据临床病情、样本类型等因素综合考虑，选择合适的检测方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。

希望本文所介绍的呼吸道病毒检测方法能够对临床医生和实验室人员有所帮助。

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政法干警 | 招警 | 军转干 | 党政公选 | 法检系统 | 路转税 | 社会工作师 医疗卫生辅导医学基础知识：呼吸道病毒
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呼吸道病毒是指以呼吸道为侵入门户，在呼吸道黏膜上皮细胞中增殖，引起呼吸道局部感染或呼吸道以外组织器官病变的病毒。

1.呼吸道病毒生物学性状特点如下：
(1)核酸类型除腺病毒为DNA 外，其余均为RNA ，且多为单股(仅呼肠病毒为双股)。

(2)除腺病毒、鼻病毒和呼肠病毒外，其余病毒均有包膜和刺突。

刺突具有凝集红细胞、水解宿主细胞膜表面的神经氨酸、融合细胞等作用，与病毒的致病性有关。

(3)抵抗力不强，对酸敏感，流感流行期间可以用乳酸或食醋加热熏蒸消毒空气以预防感染。

(4)抗原型别多，易变异，如鼻病毒和甲型流感病毒。

2.呼吸道病毒主要包括正粘病毒科的流感病毒;副粘病毒科的副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒;小RNA 病毒科的鼻病毒;以及呼肠病毒、冠状病毒、风疹病毒和腺病毒等。

3.呼吸道病毒中可引起全身感染的病毒有：
(1)麻疹病毒.引起麻疹，极偶然引起亚急性硬化性全脑炎。

(2)腮腺炎病毒，引起流行性腮腺炎，并发症有宰丸炎、卵巢炎，可导致生育机能障碍。

(3)风疹病毒，引起风疹。

妊娠20周内感染风疹病毒后有时可导致胎儿先天性风疹综合征，影响胎儿发育。

最新抗呼吸道病毒药物临床应用要点呼吸道RNA病毒包括冠状病毒(Co V)、流感病毒(IF V)、副流感病毒(PIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人偏肺病毒(hMPV)以及鼻病毒(HRV)等。

小分子抗呼吸道RNA病毒药物按作用机制可分为M2离子通道阻滞剂（金刚烧胺、金刚乙胺）、神经氨酸酶(NA)抑制剂（扎那米韦、奥司他韦、帕拉米韦）、抑制RNA合成药物（阿兹夫定、莫诺拉韦、氢浪酸氛瑞米德韦、玛巴洛沙韦）、蛋白酶抑制剂（奈玛特韦利托那韦、先诺特韦利托那韦、阿泰特韦利托那韦、来瑞特韦）以及其他类型的药物（阿比多尔）。

临床用药评价公众号：阿泰特韦利托那韦2023-11-24刚获NMP A批准上市。

另外，还有一种抗呼吸道病毒药物是大分子单克隆抗体安巴韦单抗／米罗司韦单抗。

1、M2离子通道阻滞剂M2离子通道阻滞剂通过抑制病毒脱壳而阻断病毒RNA进入宿主的细胞质中，从而阻断病毒复制。

由千M2蛋白只存在千甲型流感病毒中，因此该类药物只对甲型流感病毒有效，主要包括金刚烧胺、金刚乙胺。

目前临床对该类药物使用较少，不将其常规用千治疗或预防感。

2、神经氨酸酶(NA)抑制剂NA抑制剂通过抑制NA活动而限制病毒在机体中的扩散。

我国上市的NA抑制剂药物主要包括扎那米韦、奥司他韦、拉米韦。

奥司他韦为首一线用药，扎那米韦和帕拉米韦个口服NA抑制剂，是甲型／乙型流感的可以作为其替代选择。

奥司他韦最常见的不良反应是恶心和呕吐；扎那米韦可引起支气管痉挛；拉米韦可引起腹泻。

3、抑制RNA合成药物抑制RNA合成类药物包括RNA聚合酶抑制剂和C a p依赖性内切酶抑制剂。

RNA聚合酶抑制剂在病毒复制过程中充当RNA聚合酶的底物，起到竞争性抑制作用，使病毒不能合成RNA,如阿兹夫定、莫诺拉韦、氢淏酸氛瑞米德韦；C a p依赖性内切酶抑制剂抑制聚合酶功能和流感病毒mRNA复制，如玛巴洛沙韦。

阿兹夫定试验研究中不良事件主要与谷氨酰转肤酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高和头痛有关，其他不良反应还包括恶心、腹泻、腹胀等胃肠道反应、神经系统反应、中性粒细胞绝对值降低、呕吐、血尿酸升高、皮疹等，详见：阿兹夫定对新冠病毒的效果如何？。

呼吸道病原体谱呼吸道疾病是指影响呼吸道系统的各种疾病，包括感染性疾病和非感染性疾病。

感染性呼吸道疾病主要由呼吸道病原体引起，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。

在呼吸道病原体谱中，常见的有流感病毒、冠状病毒、肺炎支原体、肺结核菌等。

流感病毒是引起呼吸道感染的主要病毒之一。

流感病毒属于Orthomyxoviridae家族，分为A、B、C三型。

其中，流感A型病毒分为不同亚型，如H1N1、H3N2等，能引起大流行。

流感B型病毒引起的疾病一般比较轻，不会出现大规模流行。

流感C型病毒引起的疾病相对较轻，一般不会出现大规模流行。

冠状病毒也是一类常见的呼吸道病原体，目前已发现多种冠状病毒引起的人类疾病。

其中，最为人们熟知的是SARS冠状病毒和MERS 冠状病毒，它们引起的疾病严重，病死率较高。

而新型冠状病毒疫情暴发后，引起了全球范围内的关注，该病毒被命名为SARS-CoV-2，引起的疾病被命名为COVID-19。

肺炎支原体是一类革兰阴性细菌，也是常见的呼吸道病原体，它能引起呼吸道感染和肺炎。

肺炎支原体感染一般病程较长，常见症状包括发热、咳嗽、喉咙痛等。

肺炎支原体感染主要通过空气飞沫传播，易于在冬季季节流行。

肺结核菌是引起结核病的致病菌，一般通过空气飞沫传播。

结核病主要累及肺部，但也可以侵犯其他部位，如淋巴结、脑膜等。

结核病具有传染性，早期发现和早期治疗非常重要。

此外，还有一些其他呼吸道病原体，如麻疹病毒、腺病毒、白喉杆菌等，它们也能引起呼吸道感染和相关疾病。

预防呼吸道病原体感染的最有效方法之一是切断传播途径。

保持良好的个人卫生习惯，特别是用肥皂和水洗手，咳嗽或打喷嚏时用纸巾或屈肘遮挡口鼻，避免接触已经感染的人或环境等。

此外，接种疫苗是预防某些呼吸道感染的重要手段，如流感疫苗、肺炎球菌疫苗等。

对于已经感染的人群，及早就诊是关键。

根据病情的不同，医生可能会给予相应的治疗措施，如使用抗病毒药物、抗生素、抗菌素等。

治疗过程中，患者要注意休息、保持充足的水分摄入、调整饮食等。

儿童呼吸道感染病毒知多少呼吸道感染性疾病是影响人类健康的最常见疾病之一，这些疾病大多是由病毒引起或引发的。

能够引起儿童下呼吸道疾病的重要病因：呼吸道合胞病毒、偏肺病毒及副流感病毒。

婴幼儿及其他年龄组儿童病毒性支气管炎和肺炎的病因中，它们占据了前三位。

01呼吸道合胞病毒属于肺炎病毒科，正肺病毒属。

单链负义包膜RNA 病毒，呈不规则球形，直径为150-300 nm，基因组大小为15 kb，包含10 个基因，编码11 种蛋白质。

G 蛋白和 F 蛋白介导病毒附着在宿主细胞上，是宿主免疫反应的主要目标，而NS蛋白具有抗干扰素活性，能够抑制宿主抗病毒应答反应。

02偏肺病毒属于肺炎病毒科，偏肺病毒属。

与呼吸道合胞病毒相比，体积稍大，刺突较长。

同样也是单链负义包膜RNA 病毒，基因组为13 kb，缺少NS1 和NS2 基因，而NS蛋白的缺失可能是偏肺病毒致病性较弱的原因之一。

03副流感病毒属于副黏病毒科的副黏病毒亚科，根据遗传构成和抗原性分成4个血清型，1、3型属于呼吸道病毒属，2、4型属于风疹病毒属。

基因组为16 kb 的单链负义RNA ，编码6种结构蛋白。

与上面两种病毒最显著的区别是它的基因组能够编码HN蛋白，HN蛋白的存在能够触发病毒颗粒与细胞的融合。

Q1：这些病毒都是什么时间流行呢？哪些人群容易感染？1、呼吸道合胞病毒常在温带气候地区的冬春季节流行，持续4-5个月，发病周数和持续时间因年份和地点而异，在流行期间传播效率很高。

在儿童中感染非常普遍，几乎所有儿童在 2 岁前都会感染。

与此同时，它也是潜在免疫系统缺陷人群患严重下呼吸道疾病的重要原因。

2、偏肺病毒每年也会在寒冷的天气中流行，而且发病高峰期常与呼吸道合胞病毒一致，偏肺病毒更有可能全年出现。

虽然引起的疾病总体负担略低于呼吸道合胞病毒，但与包括流感病毒在内的其他常见呼吸道病毒相比，两者共同导致的儿童下呼吸道感染更多。

3、副流感病毒流行散发，无明显季节性，但有研究显示，副流感病毒会在6 个月至 6 岁的儿童中引起两年一次的秋季大流行性，其中1型占50%。

呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。

本指导原则是对呼吸道病毒多重核酸测定试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

如申请人认为有必要增加本指导原则未包含的研究内容，可自行补充。

如果申报产品检测项目包括的病毒有相应的指导原则，应首先满足指导原则要求的内容。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。

呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。

目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。

本指导原则适用于呼吸道病毒多重核酸检测试剂，适用样本类型为鼻咽拭子、鼻拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物样本等，可包括但不限于：甲型流感病毒（Influenza A，IFV A）、乙型流感病毒（Influenza B，IFV B）、呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）、副流感病毒(Parainfluenza Virus，PIV)、人偏肺病毒（Human Metapneumovirus，hMPV）、腺病毒（Adenovirus，Adv）、呼吸道感染肠道病毒（肠道病毒/鼻病毒）（Enterovirus，EV/ Rhinovirus，RhV）、冠状病毒（Coronavirus，CoV）等。

【医学检验笔记】呼吸道病毒知识呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道，引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为入侵门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。

90%以上的急性呼吸道感染由该类病毒引起。

主要包括正粘病毒科、副粘病毒科、小RNA病毒科、冠状病毒科等。

临床特点：传染源为病人及病毒携带者；飞沫传播，传染性强；潜伏期短，发病急；感染可发生在呼吸道任何水平；病后免疫力不牢固；同一病毒的反复感染，不同病毒引起同一疾病表现。

正粘病毒正粘病毒原来只有流行性感冒病毒一个种，流感病毒(inf1uenza)为流感的病原体，A、流行性感冒病毒分型：有三型：据RNP和M蛋白抗原性分：甲、乙、丙三型。

甲型根据HA和NA抗原性不同，又分若干亚型(H1~H16∖N1~N9)。

乙型、丙型至费索发现亚型甲型流感病毒抗原易发生变异，曾多次引起世界性大流行。

乙型流感病毒对人类致病性较低，常局部爆发；丙型流感病毒主要侵犯婴幼儿或只引起人类轻微的上呼吸道感染，很少流行。

一、生物学性状(一)形态与结构流感病毒呈球形或丝状，直径80∙120nm,新分离株丝状多于球形。

结构：主要包括病毒核酸与蛋白组成的核衣壳和包膜1＞核心：分节段的（-）SSRNA、核蛋白（NP）、RNA多聚酶（三种依赖RNA的RNA多聚酶蛋白），呈螺旋对称。

2、包膜：内层为基质蛋白（MP）,也具型特异性，外层为脂质双层（源于宿主细胞膜）。

基质蛋白（M蛋白）：覆盖在核衣壳外面，抗原性稳定，也具有型特异性。

M1（促进病毒的装配）、M2（膜蛋白，为离子通道，辅助HA2释放核衣壳）包膜上镶嵌两种刺突，血凝素（HA）和神经胺酸酶（NA）。

1、血凝素（HA）：匕IhHA1、HA2功能：凝聚红细胞一血凝现象，鉴定病毒（定性）；吸附宿主细胞一与受体结合；具有抗原性一产生相应抗体：中和病毒，抑制血凝（定型）HA抗原结构易发生变异2、神经氨酸酶（NA）：呈蘑菇状，能水解红细胞表面的神经氨分子。

是弱中和抗原功能：参与病毒释放、促进病毒扩散、具有抗原性一产生非中和抗体（二）变异病毒核酸为分节段的负链单股RNA,甲型和乙型分8个节段，丙型分7个节段，每个节段均为独立基因组，这一特点使基因在复制中易发生重组而致病毒变异。

呼吸道合胞病毒与哮喘的相关性
周冰洁;宋文秀
【期刊名称】《中国农村卫生》
【年(卷),期】2016(000)004
【摘要】目的：：哮喘是儿童最常见慢性呼吸道疾病之一,在全球范围内成为一个严重的公共卫生问题。

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是婴幼儿下呼吸道感染最常见的病原体。

有资料显示,呼吸道合胞病毒是诱发婴幼儿哮喘发作的主要原因。

大量临床研究证实,婴幼儿时期患 RSV 毛支炎与儿童时期患支气管哮喘具有密切相关性。

【总页数】2页(P10-11)
【作者】周冰洁;宋文秀
【作者单位】遵义医学院第五附属珠海医院 519100;遵义医学院第五附属珠海医院 519100
【正文语种】中文
【中图分类】R256.12
【相关文献】
1.儿童呼吸道合胞病毒相关性急性下呼吸道感染的影响因素分析
2.呼吸道合胞病毒感染相关性哮喘的发病机制初探
3.呼吸道合胞病毒毛细支气管炎与支气管哮喘的相关性研究
4.婴幼儿呼吸道合胞病毒相关性急性下呼吸道感染的调查及其因素分析
5.婴幼儿呼吸道合胞病毒相关性急性下呼吸道感染的调查及其因素分析
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