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十一、哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验In Vivo Mammalian Bone Marrow Cell Chromosome Aberration Test1范围本规范规定了哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于检测化妆品原料及其产品的遗传毒性。
2规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals （No. 475, April 1997）3试验目的本试验是一项致突变性试验，检测整体动物骨髓细胞染色体畸变，以评价受试物致突变的可能性。
4定义染色体型畸变(Chromosome-type aberration)：染色体结构损伤，表现为在两个染色单体的相同位点均出现断裂或断裂重组的改变。
染色单体型畸变(Chromatid-type aberration)：染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤。
染色体数目改变(Numerical-fype aberration)：哺乳动物细胞正常染色体数目的改变。
5试验基本原则使哺乳动物（如大鼠或小鼠）经口或其它适宜途径染毒，动物处死前用细胞分裂中期阻断剂处理，处死后制备骨髓细胞染色体标本，分析染色体畸变。
6试验方法6.1 实验动物和饲养环境：选用健康成年大鼠或小鼠，每组每种性别至少5只。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
6.2 受试物6.2.1 受试物配制：固体受试物应溶解或悬浮于适合的溶剂中，并稀释至一定浓度。
液体受试物可直接使用或予以稀释。
受试物应在使用前新鲜配制，否则就必须证实贮存不影响其稳定性。
6.2.2 溶剂的选择：溶剂在所选用浓度下，不引起毒性效应，不与受试物发生化学反应。
首选为水溶性溶剂。
6.2.3 剂量设置：应进行预试验以选择最高剂量。
当有毒性时，可以引起死亡或者抑制骨髓细胞有丝分裂指数（50%以上）为指标确定最高剂量。
在第一次采集样品时，需设置3个可供分析的剂量，在第二次采集样品时，则仅需设置最高剂量组。
观察小鼠脾脏实验报告观察小鼠脾脏的形态和组织结构，了解其基本组织构成和功能。
实验步骤：1. 实验前准备：a. 所需实验器材：手套、手术刀、显微镜片等。
b. 所需实验物品：小鼠尸体、解剖盘、理化盐水等。
2. 实验过程：a. 将小鼠尸体放在解剖盘上，进行外部解剖。
观察小鼠的腹部，用手术刀轻轻切开腹部皮肤。
b. 将小鼠的内脏器官暴露出来，找到脾脏。
c. 将脾脏取出，放在显微镜片上，用理化盐水清洗，以去除血液和杂质。
d. 用显微镜观察脾脏的形态和组织结构，并进行描述。
实验结果：小鼠脾脏是一个椭圆形的器官，位于腹腔的左上前部，与胃相邻。
观察到脾脏表面光滑，颜色暗红，呈现出类似叶片的形态。
通过显微镜观察，可以看到脾脏由纤维结缔组织包膜包裹，包膜内有纵横交织的网状纤维和平滑肌纤维。
进一步观察脾脏切片，可以发现脾脏内部由红髓和白浆组成。
红髓部分是由红色血球聚集而成，呈现出深红色，主要负责产生和贮存红血球。
白浆部分呈现出浅红色，主要负责产生、贮存和分化白血球。
除了红髓和白浆，还可以观察到脾小体。
脾小体是脾脏的功能单位，由中央的细动脉和围绕其排列的淋巴组织组成。
细动脉在脾小体内分支，形成富集淋巴细胞的血窦，血窦内的小窦构成了纤维结缔组织和巨噬细胞，这些巨噬细胞负责清除衰老或异常的红血球和其他细胞碎片。
实验分析与结论：通过观察小鼠脾脏的形态和组织结构，可以得出以下结论：1. 小鼠脾脏是一个椭圆形的器官，位于腹腔的左上前部，与胃相邻。
2. 脾脏具有纤维结缔组织包膜，包膜内有纵横交织的网状纤维和平滑肌纤维。
3. 脾脏主要由红髓和白浆组成。
红髓部分负责产生和贮存红血球，白浆部分负责产生、贮存和分化白血球。
4. 脾小体是脾脏的功能单位，由细动脉和排列的淋巴组织构成。
血窦和小窦在脾小体中起到清除血液中异常细胞和细胞碎片的作用。
脾脏是小鼠免疫系统的重要组成部分，它在免疫应答中起到重要的作用，如清除病原体和损伤细胞，调节细胞免疫和体液免疫等。
小鼠骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核实验简介_百替生物小鼠骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核实验简介微核（micronucleus），与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质中，比主核小，故称微核。
故微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。
实验目的1.学习和掌握小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核测定方法2.了解细胞染色体损伤情况，掌握检测断裂剂和部分非整倍体致突变剂的测定方法3.进一步熟练制片和镜检操作器材与试剂1.器材手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、载玻片、玻璃染色缸、定时钟、晾片架、显微镜（带油镜）、注射器及针头、干净纱布、乳头吸管、玻璃铅笔、电吹风机2.试剂甲醇、Giemsa储备液、磷酸盐缓冲液（PH6.8）环磷酰胺操作步骤1.试验动物及处理（1）动物选择：一般选用大小鼠，小鼠最常用，18-20g，每组10只，雌雄各半。
（2）染毒途径：根据研究目的或受试物性质不同，原则上可尽量采用人类接触受试物的途径：通常采用灌胃法和腹腔注射。
（3）染毒次数：多次染毒法（每天染毒一次，连续4天，第五天取样）或两次染毒法（处死前30h+处死前6h）（4）剂量及对照选择据受试物的LD50，以1/2LD50为最高剂量组，下设3-4个剂量组。
同时设立阳性（环磷酰胺）和阴性对照（溶剂组）2.骨髓细胞制片和涂片：最后一次染毒后，在确定时间脱颈椎处死动物，迅速剪取其胸骨，剔去肌肉，用干净纱布擦拭，剪去每节骨骺端，用小型弯止血钳挤出骨髓液，点在载玻片一端预先滴好的一滴小牛血清中。
混匀后推片。
长度为2-3cm。
3.固定：将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，用甲醇固定15min,取出晾干。
4.染色：Giemsa应用液染色15min.冲洗染色液，晾干。
5.观察计数：先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分布均匀、疏密适度、形态完整、染色良好的区域，再在油镜下按一定顺序进行PCE和微核计数。
骨髓细胞微核试验(保健食品)1.实验动物小鼠是微核试验的常规动物，也可选用大鼠。
通常用7周~12周龄，体重25g~30g的小鼠或体重150 g~200 g的大鼠。
每组用两种性别的动物至少各5只。
动物购买后适应环境至少3天。
2．剂量及分组受试物应设三个剂量组，最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量，一般可取1/2LD50，低剂量组应不表现出毒性，分别取1/4LD50和1/8LD50作为中、低剂量。
急性毒性试验给予受试物最大剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）动物无死亡而求不出LD50时，高剂量组则按以下顺序：a) 10g/kg体重; b)人的可能摄入量的100倍;或c) 一次最大灌胃剂量进行设计，再下设中、低剂量组。
另设溶剂对照组和阳性对照组。
阳性对照物可用环磷酰胺40mg/kg体重经口或腹腔注射(首选经口)给予。
3．操作步骤3.1 受试物配制一般用蒸馏水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、羧甲基纤维素等配成乳化液或悬浊液。
受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液(或悬浊液、乳浊液等)保存具有稳定性。
3.2 实验动物的处理经口灌胃。
根据细胞周期和不同物质的作用特点，可先做预试，确定取材时间。
常用30h给受试物法。
即两次给受试物间隔24h，第二次给受试物后6h，颈椎脱臼处死动物。
3.3 标本制备取胸骨或股骨,用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀,常规涂片,或用小牛血清冲洗股骨骨髓腔制成细胞悬液涂片,涂片自然干燥后甲醇固定5~10min。
当日固定后保存。
将固定好的涂片放入Gleams应用液中，染色10~15 min，立即用pH6.8的磷酸盐缓冲液或蒸馏水冲洗、晾干。
写好标签，阴凉干燥处保存。
3.4 阅片选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域,在油镜下观察。
以有核细胞形态完好作为判断制片优劣的标准。
本法系观察嗜多染红细胞的微核。
用Giemsa染色法，嗜多染红细胞呈灰蓝色，成熟红细胞呈粉红色。
染色体畸变和微核检测标准操作文件
微核试验，简单说，就是看看细胞里的小圈圈。
你知道细胞里的小圈圈吗？它们叫微核，是细胞分裂时形成的小东西。
通过看看这些微核的数量和样子，我们就能知道细胞是不是健康。
小鼠骨髓细胞微核试验，就是拿小鼠做实验，看看某种东西会不会让细胞里的微核变多。
这样，我们就能知道这个东西是不是对细胞有害。
染色体畸变，有时候，我们的遗传密码本会出错，这就是染色体畸变。
想象一下，你的遗传密码本就像一本书，但有时候这本书的页码会乱，或者少了几页，这就是染色体畸变。
它可能会导致一些健康问题。
为了了解这种畸变，科学家们会研究小鼠等动物的染色体。
他们会看看染色体是不是完整，数量对不对。
这样，他们就能找出导
致染色体畸变的原因，并找到解决办法。
预防染色体畸变，就像保护一本书。
我们要尽量避免让书受损，保持它的完整。
这样，我们的遗传密码本就能正常工作，我们也就
更健康啦！。
骨髓细胞微核实验报告骨髓细胞微核实验是一项常用的毒理学检测方法，可以有效地评价某种物质对DNA损伤的影响，具有重要的毒性评价价值。
本文将对骨髓细胞微核实验进行详细的介绍和解读，为相关研究人员提供指导。
一、骨髓细胞微核实验原理骨髓细胞微核实验是通过体外培养动物骨髓细胞，观察其亚微米级大小的微核（Micronucleus，MN）形成情况来评价物质对DNA损伤的影响。
在骨髓细胞分裂时，如果染色体发生异常分离或断裂，就会产生一个或多个亚微米级的小核结构，称为微核。
微核中包含未被分离的染色体片段或全染色体，它们将被保留在新细胞核内，从而形成有两个或多个核的细胞。
形成微核的细胞与正常细胞相比，DNA的稳定性已经受到了不同程度的损伤。
因此，骨髓细胞微核实验通过检测细胞中微核的数量和形态，可以初步判断某种物质对DNA的损伤程度，进而评价其毒性。
二、骨髓细胞微核实验步骤1. 骨髓细胞培养：将动物骨髓细胞取出，利用适当的培养基进行体外培养。
通常可以采用罗氏61#或麦戈文液等培养基，具体选择应根据实验需要确定。
2. 处理检测物质：将待检测物质加入到骨髓细胞培养基中，通常需要设立不同的浓度梯度，以便观察物质对骨髓细胞DNA损伤的剂量效应。
3. 细胞收集：培养一定时间后，用适当的方法收集细胞，可选择离心法或离心浓缩法等，通常可在离心时加入适当的溶解剂溶解红细胞。
4. 细胞扩增：将收集到的细胞加入到分装好的培养皿中，加入细胞生长因子，推动细胞继续增殖。
5. 制片染色：取适当量的细胞悬液，制作染色片并染色。
一般情况下，常用的染色方法包括单盐酸染色、儿茶酚蓝染色和吉姆萨染色等。
6. 观察分析：观察所制的染色片，采用恒定镜观察和计数，并对微核数量和形态进行统计分析。
为了获得稳定可靠的数据，一个实验通常需要做多组重复测定。
三、常见问题解答1. 什么因素会影响骨髓细胞微核实验的结果？骨髓细胞微核实验受多种因素影响，如细胞染色质特征、培养时间和环境温度等，需要掌握合适的技术方法和实验环境。
评估染色体畸变的实验材料染色体畸变可以导致遗传信息的改变，这些改变将对细胞和个体的发育和健康产生重要影响。
因此，评估染色体畸变对于发现与潜在致癌物质有关的遗传变化、筛选药物毒性、诊断染色体畸变等方面都具有重要意义。
本文将讨论用于评估染色体畸变的实验材料。
1. 细胞系细胞系是用于研究生物现象的重要工具。
在染色体畸变的研究中，使用细胞系可以更好地控制实验条件和操作。
常用的细胞系包括人类淋巴细胞、小鼠红骨髓细胞、人类体细胞（如肝细胞或肾细胞）等。
利用细胞系评估染色体畸变通常采用细胞培养技术。
首先，需要选择合适的培养基和补充物。
然后，在尽可能少干扰细胞生长的前提下，加入实验物质，如致癌物质或药物。
细胞经过一定时间培养后，需要采集适量的细胞进行染色体分析。
细胞染色体畸变分析可以采用染色体分析法、基因突变检测法等实验技术。
细胞系可以在实验中提供可重复、规律的数据，有利于对结果的分析和解释。
2. 动物模型与细胞系相比，动物模型可以更好地反映物质的影响对整个生物体的影响。
常用的动物模型包括小鼠、大鼠、斑马鱼等。
用于评估染色体畸变的动物模型主要是小鼠和大鼠，因为它们的染色体结构较为相似，且在基因水平上具有相对较好的可比性。
动物模型评估染色体畸变通常采用各种体内实验方法。
与细胞系相比，动物模型可以模拟更接近自然情况的生物环境。
一些评估染色体畸变的实验可以通过观察小鼠或大鼠出生后的表型特征来获得数据，例如出生缺陷率、生存率等。
其他实验可以通过取组织样本，比如骨髓细胞和淋巴细胞，来对染色体进行分析。
3. 人类生物样本在评估染色体畸变方面，人类生物样本具有相对较高的生物学意义。
在不同的实验操作下，不同来源的人类生物样本都可以用于染色体畸变的评估。
其中，血样是最常用的人类样本类型之一。
由于血液样本可以更容易地获取和处理，它通常被用于评估遗传性疾病的诊断和监测，如分析癌症病人的染色体异常。
人类生物样本的评估染色体畸变通常采用染色体分析法、基因突变检测法等实验技术。
