苏丹Ⅲ染色液使用说明

1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。

还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。

如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。

2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。

称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。

把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。

用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。

柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。

使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。

3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml使用时，先加A液，后加B液作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。

也可用于鉴定多肽。

4、苏丹Ⅲ配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。

5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。

作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。

能杀死细胞固定。

6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。

7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用：观察成熟植物细胞质分离时用。

一、常用染色液的配制⒈碘—碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂.配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内.用时可将其稀释2—10倍,这样染色不致过深，效果更佳。

⒉苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。

配方：（1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml.（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液.⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。

配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀)，放入棕色瓶中备用.⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine) 核染色剂。

配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。

原液A:3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。

原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。

原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）.（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著(若立即用，则着色能力差）。

适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。

山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。

⒌中性红(neutral red)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。

粪便苏丹Ⅲ染色检查简介粪便检查是医学临床诊断中常用的一种检查方法，通过对患者的粪便样本进行染色观察，可以帮助医生判断患者的肠道健康状况。

粪便苏丹Ⅲ染色检查是其中的一种检查方法，具有较高的特异性和敏感性，常用于检测肠道感染和炎症等疾病。

检查原理粪便苏丹Ⅲ染色检查是通过特殊染色方法将粪便样本中的脂质类物质染色，进而观察细胞结构和细胞内脂质沉积情况。

苏丹Ⅲ染色是一种脂类颗粒染色方法，能够使细胞内的脂质颗粒呈现红色或橙色，从而帮助医生判断细胞内脂质含量的丰富程度。

检查步骤1.采集粪便样本：在患者排便后，用无菌容器收集新鲜的粪便样本。

2.制备涂片：取少量粪便样本涂布在载玻片上，待干燥后固定。

3.苏丹Ⅲ染色：将固定的载玻片依次浸入苏丹Ⅲ染色溶液中，定时染色。

4.脱色：将染色后的载玻片在适当的脱色液中脱色。

5.干燥：在通风干燥处晾干载玻片。

6.镜检：在显微镜下观察载玻片，观察粪便细胞的染色情况及脂质颗粒的分布。

检查结果分析1.正常情况下，粪便细胞内脂质颗粒很少，呈现淡红色或橙色。

2.异常情况下，粪便中脂质颗粒增多，呈现较深的红色或橙色。

这可能是由于肠道感染、炎症或其他疾病引起的细胞内脂质变化。

应用领域粪便苏丹Ⅲ染色检查主要应用于以下领域：•检测肠道感染性疾病，如细菌性痢疾、阿米巴肠病等。

•评估炎症性肠病，如溃疡性结肠炎、克罗恩病等。

•判断肠道吸收功能，如脂肪吸收障碍等。

注意事项1.采集样本应避免杂质和尿液等其他物质的污染。

2.染色操作应按照标准操作规程进行，避免染色不均匀或过度染色。

3.检查结果需结合临床病史和其他检查结果进行综合分析，不能单凭染色结果做出诊断。

结语粪便苏丹Ⅲ染色检查是一种简单而有效的肠道检查方法，对于一些肠道疾病的筛查和诊断具有重要意义。

医务人员在使用该检查方法时应掌握操作技巧，准确解读检查结果，从而提高检查的准确性和临床应用价值。

人教版高中生物新教材常见实验材料使用注意事项总结1.斐林试剂（甲液：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH溶液，乙液：质量浓度为）：将斐林试剂甲液和乙液等量混合，再将混合后的斐林试剂0.05g/ml 的CuSO4注入待测组织样液，50-65℃水浴加热约2min，如待测组织样液中存在还原糖，则由蓝色转为砖红色沉淀。

2.双缩脲试剂（A液：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH，B液：质量浓度为0.01g/ml）：向待测液中先注入双缩脲试剂A液1ml，摇匀，再向其中加入双缩脲的 CuSO4试剂B液4滴，摇匀。

如待测组织样液中存在多肽或蛋白质，则由浅蓝色转为紫色。

3.质量浓度为0.01g/ml的苏丹Ⅲ染液：取在花生子叶薄片上滴2-3滴苏丹染液，用吸水纸吸去染液，再滴加1-2滴体积分数为50%的酒精溶液，洗去浮色。

检测脂肪，可将脂肪染成橘黄色。

4.碘液：鉴定淀粉，淀粉遇碘液变蓝。

5.健那绿（活性染色剂）：用于检测线粒体，使线粒体染色呈蓝绿色。

6.酒精：①体积分数为50%的酒精溶液：在苏丹Ⅲ染液检测脂肪实验中用于洗去浮色。

②70%的酒精溶液：用于菊花组织培养实验中对操作者双手、超净工作台台面及流水冲洗后的外植体消毒。

③体积分数为95%的酒精溶液：和质量浓度为15%的盐酸等体积混合，作为解离液，可用于解离根尖，使细胞分散开来；在低温诱导植物细胞染色体数目变化实验中，用于洗去卡诺氏液。

④预冷的95%的酒精溶液：DNA不溶于酒精，尤其是不溶于体积分数为95%的预冷酒精，而细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，据此可以用于DNA的粗提取。

⑤100%的酒精溶液（无水乙醇）：用于色素的提取。

7.盐酸：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输。

②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。

③物质的量浓度为0.01mol/L的盐酸：用于影响酶活性的条件实验；用于模拟生物体维持pH 稳定实验。

④质量浓度为15%的盐酸：和体积分数为95%的酒精溶液等体积混合作为解离液，可用于解离根尖，使细胞分离开来。

高中生物染色剂1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。

还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。

如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。

2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。

称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。

把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。

用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。

柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。

使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。

3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml使用时，先加A液，后加B液作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。

也可用于鉴定多肽。

4、苏丹Ⅲ :配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。

5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。

能杀死细胞固定。

6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。

7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用：观察成熟植物细胞质分离时用。

三、常用染料介绍（一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。

苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。

苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。

被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。

所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。

常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。

苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。

分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。

2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。

一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。

单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。

常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。

洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。

用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。

用洋红配成的溶液染色后能保持几年。

洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。

（二）人工染料人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。

它们的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。

在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。

1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。

他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。

他跟甲基绿同染，能显示线粒体。

组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。

酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。

2、刚果红刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。

脂类染色脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。

它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。

在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。

脂类的主要功能是氧化供能。

脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。

在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。

脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。

脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。

经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。

根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。

脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。

一、苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ)染色法：操作方法：（1）固定于10%甲醛的组织。

（2）水洗后采用冰冻或石蜡切片。

（3）经蒸馏水后，浸染于Harris苏木素或明矾苏木素中淡染1-2分钟。

（4）自来水冲洗。

（5）水洗后，移入70%酒精5秒钟。

（6）投入苏丹Ⅲ染液中约30分钟或更长时间，置于56℃温箱中。

（7）在70%酒精中洗涤5-10秒钟。

（8）洗于蒸馏水中，然后将切片移于载玻片上。

（9）切片移于玻片上，将切片周围的水分小心擦掉。

（10）甘油明胶封固。

结果：脂肪呈橙红色或鲜红色或黑色，胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。

试剂配制：1. 苏丹Ⅲ染液配法：将0.15克苏丹Ⅲ溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中（各50ml），临用时过滤，所得滤液即为饱和浓度。

注：浸染时，容器必须盖好，否则酒精或丙酮挥发，染料沉淀。

2.甘油明胶配制：明胶 40g蒸馏水 210ml甘油 250ml石碳酸结晶 5ml先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间，然后加甘油和石碳酸，加热15分钟，摇搅直至混合液均匀为止。

二、苏丹Ⅳ(Sudan Ⅳ)染色法：苏丹Ⅳ又名猩红，是苏丹Ⅲ的衍生物，作为脂肪染剂，经各地实验证明，其结果优于苏丹Ⅲ。

广州市外显子生物技术有限公司Http//苏丹Ⅲ染色液产品说明：脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。

人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。

2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。

中性脂肪是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。

中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。

在正常情况下，除脂肪细胞外，其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴，如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性，常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。

中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。

苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。

苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度，所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去，使脂质呈现出染液的颜色。

产品组成：货号产品规格储存条件S-1524苏丹Ⅲ染色液50ml RT避光Harris苏木素染色液50ml RT避光-- 说明书1份实验前说明：1、要先做预实验，掌握基本操作。

2、石蜡切片不可用于脂肪染色，如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚一般为6-10um 。

过程说明：1.新鲜组织低温切片，一般-20℃～-25℃，如标本为脂肪瘤，应调节至-30℃。

2.冰冻切片5-10um（6～8um为佳），贴于载玻片上。

3.滴入70%乙醇20s-30s，4.甩掉70%乙醇，放入苏丹Ⅲ染色液中，37℃烘箱10-20分钟。

5.吸取少量70%乙醇冲洗标本。

水洗。

6. Harris苏木素染核2-3分钟，返蓝，水洗，甘油明胶封片。

染色结果：肝组织×400结果判定：脂肪呈猩红色，细胞核呈蓝色。