革兰氏染色实验步骤演示教学
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革兰氏染色操作方法过程革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法,用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
操作步骤如下:1. 取一支细菌培养液,用无菌棉签蘸取适量的细菌样品。
2. 在显微镜片上滴加一滴细菌样品。
3. 用锡夹夹住显微镜片,将显微镜片通过火焰杀菌,以消毒细菌样品。
4. 将显微镜片上的细菌样品放置于乙醇中,浸泡1-2分钟,进行固定。
5. 取出显微镜片,倾倒掉乙醇,用水冲洗显微镜片,以去除残留的乙醇。
6. 滴加革兰氏染色液(由紫色的结晶紫和碘酒混合制成),使其完全覆盖细菌样品。
7. 静置1分钟,将显微镜片冲洗至水清。
8. 将显微镜片放入去结晶紫酒的洗涤液中,浸泡20-30秒,进行除色。
9. 冲洗干净后,加入洗净的碱性碘液,浸泡20-30秒,进行碘固定。
10. 将显微镜片放入无菌水中,冲洗干净。
11. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
12. 将显微镜片放入苏木精洗涤液中,浸泡20-30秒,进行染色。
13. 冲洗干净后,用水洗涤。
14. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
15. 将显微镜片放入氯仿中,浸泡1-2分钟,清洗细胞。
16. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
17. 将显微镜片放入醋酸乙酯中,浸泡1-2分钟,清洗细胞。
18. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
19. 将显微镜片倒置在玻璃片上晾干。
20. 最后,在显微镜下观察染色结果。
革兰氏阳性菌为紫色,革兰氏阴性菌为粉红色。
注意事项:- 操作中要使用无菌试剂和器皿,以防止细菌污染。
- 染色液的配制和保存要按照说明书进行。
- 操作过程中要注意不要受伤,避免染色液和化学物品溅到皮肤或眼睛上。
- 染色后,显微镜片要彻底干燥,以便观察。
革兰氏染色【2 】一.试验流程:1. 取载玻片用纱布擦干,载玻片的一面用marker笔画一个小圈(用来大致肯定菌液滴的地位).涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂.2. 涂片:液体造就基:左手持菌液试管,在酒精灯火焰邻近5cm阁下打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌,等冷却后从试管中沾取菌液一环,在干净无脂的载玻片上涂直径2mm 阁下的涂膜,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌.固体造就基:先在载玻片上滴一滴无菌水,再用接种环取少量菌体,涂在载玻片上,使其薄而平均.3. 晾干:让涂片在空气中天然湿润.4. 固定:让菌膜朝上,经由过程分焰2-3次固定(以不烫手为宜).5. 染色:将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液,染1min.6. 水洗:用水迟缓冲洗涂片上的染色液,用吸水纸吸干.简略染色停止可不雅察细胞形态.7. 媒染:滴加1滴碘液,染1min,水洗.8. 脱色:吸去残留水,持续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色,立刻水洗.9. 复染:滴加蕃红复染3-5min,水洗.至此,革兰氏染色停止.二.染色成果:革兰氏阳性菌都呈紫色,革兰氏阴性菌都呈红色.备注:1.革兰氏阳性菌:葡萄球菌属(主如果金黄色葡萄球菌.表皮葡萄球菌等).链球菌属(肺炎链球菌.草绿色链球菌.肠球菌等).白喉杆菌.炭疽杆菌.破感冒杆菌.蜡样芽孢杆菌等,个中,金黄色葡萄球菌.肠球菌等为临床重要等病原菌.2.革兰氏阴性菌:埃希氏菌属.枸橼酸菌属.假单胞菌属(绿脓杆菌等).莫拉菌属(卡他莫拉菌等).奈瑟菌属(淋球菌.脑膜炎双球菌等).不动杆菌属(鲍曼不动杆菌.罗菲不动杆菌等).克雷伯菌属(主如果肺炎克雷伯杆菌).沙门氏菌属.志贺氏菌属(痢疾杆菌等).黄杆菌属.变形杆菌属.军团菌属.耶尔森菌属.嗜血杆菌属(杜克雷嗜血杆菌.流感嗜血杆菌等).产气杆菌属.霍乱弧菌.暗沟肠杆菌等.。
革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色
一.实验流程:
1、取载玻片用纱布擦干,载玻片的一面用marker笔画一个小圈(用来大致确定菌液滴的位置)。
涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂。
2、涂片:
液体培养基:左手持菌液试管,在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌,等冷却后从试管中沾取菌液一环,在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基:先在载玻片上滴一滴无菌水,再用接种环取少量菌体,涂在载玻片上,使其薄而均匀。
3、晾干:让涂片在空气中自然干燥。
4、固定:让菌膜朝上,通过火焰2-3次固定(以不烫手为宜)。
5、染色:将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液,染1min。
6、水洗:用水缓慢冲洗涂片上的染色液,用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7、媒染:滴加1滴碘液,染1min,水洗。
8、脱色:吸去残留水,连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色,立即水洗。
9、复染:滴加蕃红复染3-5min,水洗。
至此,革兰氏染色结束。
二.染色结果:革兰氏阳性菌都呈紫色,革兰氏阴性菌都呈红色。
备注:
1.革兰氏阳性菌:葡萄球菌属(主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等)、链球菌属(肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等)、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等,其中,金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。
2.革兰氏阴性菌:埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属(绿脓杆菌等)、莫拉菌属(卡他莫拉菌等)、奈瑟菌属(淋球菌、脑膜炎双球菌等)、不动杆菌属(鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等)、克雷伯菌属(主要是肺炎克雷伯杆菌)、沙门氏菌属、志贺氏菌属(痢疾杆菌等)、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属(杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等)、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。