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实验项目：荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验题目】荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验目的】1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。
其结构式为：由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。
维生素B2在pH＝6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝2.303ФI0εbc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。
【主要仪器与试剂】主要仪器：F-2500 HiTachi荧光分光光度计；1cm石英皿；50mL容量瓶；5mL移液管；烧杯；胶头滴管试剂：维生素B2标准溶液：未知液4【实验内容及步骤】1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL分别置于50mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
标记为①②③④⑤的一系列维生素B2标准溶液。
待测。
2、待测液制备取5.00mL未知液4置于50mL容量瓶中，加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
待测。
3、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem＝540nm为发射波长，在250~500nm范围内扫描标准溶液③，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
维生素B2固体发酵后的提取方法
一直以来自维生素B2固体发酵成为维生素B2生产工艺的主流，它的好处是，烘干后直接可以做80%的饲料添加剂使用。
而从另一个侧面说明：维生素B2的进一步提纯的费用很高。
传统的工艺是：液-液萃取和固相萃取工艺路线,具体讲就是说：液-液萃取——将维生素B2固体发酵后的浓浆，加入碱及缓冲剂，通过过滤将大量蛋白拦截，或者直接膜过滤，经调PH后将得到纯品。
这种方法收率较低；固相萃取——将维生素B2固体发酵后的浓浆直接用配好的萃取剂萃取，这种方法收率也低。
通过各种工艺得比较，使用丙酮-碱性盐-水或乙醇-碱性盐-水两个双水相萃取的方法，取得了很高的收率。
方法是：预先配置碱性盐水（PH=7.5--9.5，20--70%硫铵水溶液）并加入化合物A混匀,再加入维生素B2固体发酵后的浓浆或干燥后的固体饲料，继续搅匀后加入1/2---1/5体积的丙酮，搅动一小时，静止4小时，形成界限分明的两层，其中上层颜色红黄，下层颜色淡淡显黄色。
简单蒸发上层得提取液中的丙酮，就得到98%以上的维生素B2固体。
下层烘干后即做蛋白。
vb作用功效，你清楚吗VB的种类有非常多，经常食用会给我们的身体带来很大的好处，所以有很多的人群每天都在补充VB通过相关的数据表示，经常食用VB不管是对我们的神经、皮肤、肝脏还是眼睛等都起到不可疏忽的效果。
虽然说VB的功效非常多，但是具体的功效大部分人都不是特别清楚，我们不妨一起了解下。
★ VB1的功效：维生素B1摄食量的多寡是不易界定的，因为每个人的新陈代谢速率不同，遇有新陈代谢较旺盛者，如：运动员、孕妇、产妇、甲状腺机能亢进、发烧(受伤或感染)，维生素B1的需求量也随之增加。
日常饮食也有关，食用醣类较多时，维生素B1的摄取量就要增加。
★ VB2的功效：维生素B2在体内的能量代谢(醣类、脂肪、蛋白质)作用中担任重要之角色，与形成血球、制造抗体有关，是生长所必须。
与维生素A并用，可改善消化道的黏膜组织。
服用避孕药与运动员(重度)须要增加补充量。
缺乏者易发生口唇部、眼部及皮肤等疾病：口角处泛白、发红及疼痛(溃烂)，即口角炎。
舌头呈紫红色(肿大)。
而鼻翼两侧有脂肪性分泌物。
眼睛畏光，眼脸发痒等症状。
国民营养调查显示，国人饮食中维生素B2摄取尚未达每日建议摄取量。
★ VB3的功效：维生素B3 菸碱酸对神经系统、血液循环及皮肤健康占有既定的角色功能。
协助神经系统运作之外更参与醣类、脂肪及蛋白质的代谢，以供身体利用能量之需。
此外，也是合成性荷尔蒙不可或缺的物质。
人体藉由主要氨基酸之一的色胺酸，可自行合成菸碱酸。
是维生素B群中人体需要量最多的一种，若体内维生素B1、B2及B6缺乏时将无法自行制造菸碱酸。
缺乏菸碱酸：会引起癞皮病(pellagra)，其症状为：腹泻、皮肤炎、痴呆、死亡(严重者)。
来源：肝脏、瘦肉、香菇、紫菜、猪肉、蛋、牛奶、起士全麦制品、小麦胚芽、糙米、胚芽米、啤酒酵母、酵母菌。
一、实验目的1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计基本原理、结构及性能，掌握基本操作。
二、实验原理维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。
其分子式为：C17H20N4O6，分子量：376.4。
VB2分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
VB2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
VB2溶液在430～440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。
VB2在pH＝6～7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与VB2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测VB2的含量。
VB2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比VB2的荧光强得多，故测VB2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，当实验条件一定时，荧光强度F与荧光物质浓度c 呈线性关系：F=Kc，这是荧光光谱法定量分析的依据。
注意：高浓度时，荧光物质发生熄灭和自吸收现象，使F与c不呈线性关系。
三、主要仪器与试剂主要仪器：荧光分光光度计；1cm石英皿；25mL比色管；1mL、5mL移液管试剂：VB2标准溶液5.0μg/mL；待测样品溶液四、实验步骤1、系列标准溶液的制备取VB2标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 分别置于25mL比色管中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
得浓度依次为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.30μg/mL、0.40μg/mL、0.50μg/mL 的一系列VB2标准溶液。
待测。
2、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem＝540nm为发射波长，在250～500nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。
从得到的激发光谱中找出最大激发波长，在此激发波长下，在450～700nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。
维生素B2一、概述维生素B2又名核黄素，微溶于水，在碱性溶液中容易溶解，在强酸溶液中稳定。
耐热、耐氧化。
光照及紫外照射引起不可逆的分解。
为体内黄酶类辅基的组成部分（黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用），主要生理作用有：促进发育和细胞的再生；促进皮肤、指甲、毛发的正常生长；帮助消除口腔内、唇、舌的炎症；增进视力，减轻眼睛的疲劳；和其他的物质相互作用来帮助碳水化合物、脂肪、蛋白质的代谢。
当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。
其病变多表现为口、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等。
二、生产工艺核黄素主要有三种生产方法：一是生物发酵法，该法又分为传统的酵母菌发酵法和新型的基因工程菌发酵法；二是化学合成法，以D –葡萄糖为原料，经化学反应合成；三是化学半合成法，以D –葡萄糖为原料经发酵生成D –核糖，再以D –核糖为原料进行化学合成。
目前，在工业上应用较多的核黄素生产方法有酵母菌发酵法、基因工程菌发酵法、化学合成法和化学半合成法。
1、酵母菌发酵法。
酵母菌发酵法生产核黄素已有约60 年的历史，可代谢产生核黄素的微生物很多，但真正应用于核黄素生产的菌种却很有限。
目前，工业生产中主要以棉病囊菌（Ashbya gossypii）、枯草芽孢杆菌（Bcillus subtiltis）和阿舒氏假囊酵母（Eremotheciumashbyii）等作为核黄素生产菌种。
酵母菌工业生产中主要以阿舒假囊酵母为生产菌种，工业发酵一般为二级发酵，发酵液先沉淀在氧化进行分离提纯。
发酵培养基中以植物油、葡萄糖、糖蜜或大米作为主要碳源，植物油中以豆油都其产量的促进效果最为显著，有机氮源以蛋白胨、骨胶、鱼粉、玉米浆为主，无机盐有氯化钠，磷酸二氢钾、硫酸镁。
种子扩大培养和发酵通气量要求均比较高，通气一般在1.0，罐压0.05Mpa左右，搅拌功率要求比较高。
阿舒假囊酵母最适生长温度在28-30℃，种子培养34-38h 后接入发酵罐，发酵培养40h后开始连续流加补糖，发酵ph控制在5.4-6.2，发酵周期150-160h，产量在50g/L左右。
1.计时器的Interval属性是用来设置一时间间隔，单位是 bA.1秒B.1毫秒C.1/100秒D.1/1000秒2.下列关于属性设置的叙述正确的是（ d）A．所有的对象都有同样的属性B．控件的属性只能在设计时修改，运行时无法改变C．控件的属性都有同样的默认值D．引用对象属性的格式为：对象名称 . 属性3.只有将组合框的Style属性设置为何值时，才能触发DblClick事件？bA) 0 B) 1C) 2 D) 34.．在过程定义中，Private表示（d ）A．此过程要以被其他过程调用B．此过程不可以被任何其他过程调用C．此过程只可以被本工程中的其他过程调用D．此过程只可以被本窗体模块中的其他过程调用5.使用语句Dim A(2) As Integer 声明数组A之后，以下说法正确的是bA) A数组中的所有元素都为0B) A数组中的所有元素值不确定C) A数组中所有元素值都为EmptyD) 执行Erase A后，A数组中所有元素值都不为06.在窗体上画一个名称为Text1的文本框和一个名称为Command1的命令按钮，然后编写如下事件过程：aPrivate Sub Command1_Click()Dim array1(10,10) As IntegerDim i As Integer, j As IntegerFor i=1 To 3For j=2 To 4array1(i,j) =i+jNext jNext iText1.Text=array1(2,3) +array1(3,4)End Sub程序运行后，单击命令按钮，在文本框中显示的值是A) 15 B) 14 C) 13 D) 127.在窗体上画一个命令按钮(其Name属性为Command1) ，然后编写如下代码：Option Base 1Private Sub Command1_Click()Dim as=0a=Array(1,2,3,4) ; j=1For i=4 To 1 Step-1s=s+a(i) *jj=j*10Next iPrint sEnd Sub运行上面的程序，单击命令按钮，其输出结果是dA) 4321 B) 1234C) 34 D) 128.下列程序的运行结果为bDim a(-1 To 6)For i=LBound(a, 1) To UBound(a, 1)a(i) =iNext iPrint a(LBound(a, 1) ) ; a(UBound(a, 1) )A) 0 0B) -5 0C) -1 6D) 0 69.在窗体上画一个名称为Text1的文本框和一个名称为Command1的命令按钮，然后编写如下事件过程：Private Sub Command1_Click()Dim array1(10,10) As IntegerDim i As Integer, j As IntegerFor i=1 To 3For j=2 To 4array1(i,j) =i+jNext jNext iText1.Text=array1(2,3) +array1(3,4)End Sub程序运行后，单击命令按钮，在文本框中显示的值是cA) 15 B) 14 C) 13 D) 1210.在窗体上画一个命令按钮(其Name属性为Command1) ，然后编写如下代码：Option Base 1Private Sub Command1_Click()Dim as=0a=Array(1,2,3,4) ; j=1For i=4 To 1 Step-1s=s+a(i) *jj=j*10Next iPrint sEnd Sub运行上面的程序，单击命令按钮，其输出结果是dA) 4321 B) 1234C) 34 D) 1211.下列程序的运行结果为Dim a(-1 To 6)For i=LBound(a, 1) To UBound(a, 1)a(i) =iNext iPrint a(LBound(a, 1) ) ; a(UBound(a, 1) )A) 0 0B) -5 0C) -1 6D) 0 612.在窗体上画一个名称为Text1的文本框和一个名称为Command1的命令按钮，然后编写如下事件过程：Private Sub Command1_Click()Dim array1(10,10) As IntegerDim i As Integer, j As IntegerFor i=1 To 3For j=2 To 4array1(i,j) =i+jNext jNext iText1.Text=array1(2,3) +array1(3,4)End Sub程序运行后，单击命令按钮，在文本框中显示的值是A) 15 B) 14 C) 13 D) 1213.运行下列程序段后，显示的结果为J1=63:J2=36If J1 ＜ J2 Then Print J2 Else Print J1A) 63 B) 36 C) 55 D) 233214.在IF语句的条件中，M≠6应写成A.M＜6 AND M＞6B.M≠6C.M＜＞6D.NOT M＜＞615.下列程序段的执行结果为a=75If a ＞ 60 Then Score=1If a ＞ 70 Then Score=2If a ＞ 80 Then Score=3If a ＞ 90 Then Score=4Print " Score="; ScoreA) Score＝1 B) Score＝2C) Score＝3 D) Score＝416.下列程序的执行结果为a=10b=20If a ＜＞ b Then a=a + b Else b=b - aPrint a, bA) 2020 B) 3020C) 3040 D) 151517.有如下程序段，该程序段执行完后，执行循环的次数是total=0Counter=1DoPrint Countertotal=total + CounterPrint totalCounter=Counter + 1If total ＞ 10 ThenExit DoEnd IfLoop While Counter ＜=10A) 5 B) 10C) 15 D) 2018.以下说法不正确的是。
A．Ｒnd()函数不是一个字符串函数B．字符串函数尾部的符号"＄"可以有,也可以省略,其功能相同C． Ltirm()和Left()函数都是字符串函数D．字符串函数必须以类型说明符“＄”19.设有下面的循环：i=0While i ＜=1i=i + 3Print iWend则运行后的输出结果是A) 1 B) 2C) 3 D) 420.下列程序段的执行结果为I=4x=5DoI=I + 1x=x^ 2Loop Until I＞=7Print "I="; IPrint "x="; xA) I＝4x＝258694B) I＝7x＝256987C) I＝6x＝365840D) I＝7x＝39062521.在窗体中添加一个命令按钮（Name属性为Command1），然后编写如下代码：Private Sub Command1_Click()Dim k, n, m As Integern = 5m = 1k = 1Do While k ＜= nm = m * 2k = k + 1LoopPrint mEnd Sub程序运行后，单击按钮，输出结果为（）A．12 B．32 C．48 D．9622.执行下面的程序后，输出的结果是x=1For j=1 To 4x=x - 1: y=0For k=1 To 4x=x + 1: y=y + 1Next kNext jPrint x; yA) 1 4 B) 13 4C) 12 8 D) 20 623.为了取消窗体的最大化功能，需要把它的一个属性设置为False，这个属性是A. ControlBoxB.MinButtonC.EnabledD.MaxButton24.MsgBox函数的返回值的类型为A) 数值型 B) 变体类型C) 字符串型 D) 日期型25.在 Visual Basic 中，___________被称为对象。
A．控件B．窗体C．窗体和控件D．窗体、控件、属性26.下列日期型数据正确的是A) @January 10,1979@ B) #January 10,1997#C) "January 10,1997" D) ＆January 10,1997＆27.如果一个变量未经定义就直接使用，则该变量的类型为A.IntegerB.ByteC.BooleanD.Variant28.VB窗体设计器的主要功能是（）A．建立用户界面 B．编写源程序代码 C．添加图 D．显示文字29.下列方法中不能退出Visual Basic的是A.按Alt+Q组合键B.按下Alt+F组合键，然后按Esc键C.打开"文件"菜单，执行"退出"命令D.按F10键，然后按F键，再按X键30.Print方法可以在对象上输出数据，这些对象包括A) 图片框 B) 状态栏C) 标题栏 D) 代码窗口31.下列符号常量的声明中，不合法的是A.Const a As Single=1.1B.Const a="OK"C.Const a As Double=Sin(1)D.Const a As Integer="12"32.设a=20，b="30"，则下列输出结果是"2030"的语句是A.print str(a)B.print "a"+bC.print a+bD.print a＆b33.表达式3 ^ 2 Mod 14 ＼ 2 ^ 3的值是A) 1 B) 0C) 2 D) 334.任何控件都有的属性是A.BackColorB.CaptionD.BorderStyle35.以下关系表达式中，其值为False的是A) "ABC"＞"AbC" B) "the"＜＞"they"C) "VISUAL"=UCase("Visual") D) "Integer"＞"Int"36.下列控件中可用于接受用户输入文本，又可用于显示文本的是bel 控件B.TextBox 控件C.Timer 控件mandButton 控件37.在Visual Basic语言中，表达式 2+3*3-2*3/2的值是A.6B.7C.8D.938.若x为偶数，dim a as booleana= x mod 2print a运行结果为false。
