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流式细胞仪上海交通大学医学院丁磊副教授特点:单细胞的流动的活细胞的定量的多参数的高统计学精度的分选细胞一、流式细胞仪的分析及分选原理二、数据的显示与分析三、流式细胞仪分析的技术要求四、流式细胞术应用流式细胞仪的分析及分选原理一工作原理：FCM是一种在计算机技术支持下的高度自动化的细胞显微荧光脉冲分光光度仪。
(一）基本组成结构1、液流系统样品流和鞘流2、光学系统激光、透镜组、光电倍增管等。
3、数据处理系统InjectorTip Sheathfluid液流驱动系统（示意图）流速与压力的关系服从Bernoulli方程，即P=(1/2)ρV2 (忽略高度的变化)。
改变气压,就可获得不同的流速。
PMTPMT PMTFilters1234PMT球透镜和柱面透镜：20×200μm椭圆形光，短轴和细胞流平行，长光长轴与细胞流垂直。
Array束成形与细胞受照方式激发光焦斑这种椭圆形光斑的检测区保证每个细胞分别受到光照且受检时受到一致的光照单细胞照明技术（二）基本工作原理二散射光的测定（一）前向散射光(foword scatter)：FSC 信号的强弱与细胞的大小相关（二）侧向散射光（side scatter)：SSC 信号的强弱与细胞内的颗粒多少相关前向散色光FSC侧向散色光SSC散射光的测定三荧光测量荧光检测器检测特定荧光的特定发射波长（一）光信号测量线性放大器对数放大器（二）荧光补偿利用电子技术或计算机软件等方法将串入相邻荧光通道的信号加以扣除的技术称“荧光补偿”偿+-Charged Plates Single cells sorted阳性选择MACS-Magnetic Cell Sorting 磁珠分离阴性选择（二）分选的技术要求1 、分选速度：几千个细胞/秒2 、分选纯度:99.5%左右3 、分选收获率:90-95%4 、分选得率分选纯度是指分离后的样品中该亚群细胞所占的百分比。
分选收获率是指分离后所得的细胞亚群数占原细胞样品中该亚群细胞数的百分比。
