石蜡切片组织RNA提取

总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。

若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。

在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。

1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。

TaKaRa Taq TM是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。

TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。

Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。

EASYspin 石蜡包埋组织RNA 快速提取试剂盒目录号：RN3001适用范围：适用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA ，RNA 可用于反转录PCR ，荧光定量PCR 。

❖ 试剂盒组成、储存、稳定性：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

2. 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3. 为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K 为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入0.5毫升灭菌水溶解（终浓度40mg/ml ）。

因为反复冻融可能会降低酶活性，试剂盒组成 保存50次(RN3001) 裂解液PKD 室温 15 ml 结合液RBC 室温25 ml 漂洗液RW 室温10ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 蛋白酶K 粉 40mg/ml -20℃ 20mg RNase-free H 2O 室温 10 ml 基因组DNA 清除柱和收集管室温 50套 RNA 吸附柱RA 和收集管 室温 50套因此溶解后立即按照每次使用量)分装冻存，－20℃保存。

4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。

不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。

COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。

所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如不超过2个10μm厚度石蜡切片。

石蜡包埋组织中RNA提取方法的改进和完善孟青，杨文秀，胡军，高勤（贵阳医学院病理学教研室，贵州贵阳550004）［摘要］目的：建立和完善石蜡组织RNA提取的方法。

方法：收集临床病理诊断用石蜡包埋组织块共100例，经RNA灭活处理后，进行组织切片、脱蜡、清洗、消化等一系列提取前预处理，用TRIZOL试剂提取组织的RNA，并在-20C长时间沉淀RNA。

对提取的RNA以核酸测定仪检测RNA的浓度和纯度，并通过RT-PCR检查提取RNA 的!-actin基因，以检测提取RNA的质量。

结果：100例石蜡包埋组织中提取的RNA经过核酸测定仪测定后，浓度在20~50mmoi/L，260nm及280nm光密度比在1.75~2.0；经过RT-PCR反应，提取的RNA都能扩增出190bp的!-actin目的片段。

结论：通过RNA提取前对材料的一系列合理处理，从福尔马林固定、石蜡包埋档案组织材料中提取小片段RNA进行目的基因mRNA检测，可以成为一种稳定成熟的方法应用于临床病理诊断。

［关键词］RNA，肿瘤；石腊包埋；逆转录聚合酶链反应［中图分类号］R730.23 ［文献标识码］A ［文章编号］1000-2707（2005）03-0241-03The Improvement of Isolation Technigue of RNA from Formalin-fixedand Paraffin-embedded TissuesMENG Oing，YANG Wen-xiu，HU Jun，GAO Oin（Department of Pathology，Guiyang Medical College，Guiyang550004，China）［Abstract］Objective：To improve the technigue for extracting RNA from formaiin-fixed and paraffin-embedded tissue.Methods：Sampies of100cases that diagnosed pathoiogicaiiy were coiiected.After some pretreatment such as deparaffinage，washing，digestion，totai RNA were extracted from these tis-sues with TRIZOL reagent and，then，kept at-20C for iong time（above2h）to settie RNA.The pureness and content of these RNA extracts were assayed with a nucieic acid detecting instrument and the guaiity of the extracts was tested with detecting of gene!-actin with RT-PCR.Results：The con-centration of RNA in the extracts were between20~50mmoi/L.The ratio of260nm/280nm were be-tween1.75~2.00.The RNA of!-actin were detected in aii cases.Conclusions：The reasonabie pre-treatment adopted in this study makes it feasibie to extract RNA from formaiin-fixed and paraffin-em-bedded tissue and to detect genes specific to some diseases in daiiy pathoiogicai diagnosis.［Key words］RNA，neopiasm；paraffin embedding；reverse transcriptase poiymerase chain reaction在实际临床病理诊断和病理回顾性研究中，来源最丰富、最容易获得的是经过石蜡包埋保存的档案组织。

组织石蜡切片RNA提取试剂盒是一种用于从组织样本中提取RNA的实验试剂盒。

它的用处包括但不限于以下几个方面：1. 研究基因表达组织石蜡切片RNA提取试剂盒可以帮助科研人员从组织样本中提取出RNA，进而研究基因的表达情况。

通过分析组织中的RNA，可以了解特定基因在不同组织中的表达水平，从而揭示基因在生物体内的功能和调控机制。

2. 疾病诊断与治疗利用组织石蜡切片RNA提取试剂盒提取组织中的RNA，可以帮助医学研究人员研究与疾病相关的基因表达变化。

这对于疾病的早期诊断、疾病的分子机制研究以及疾病治疗靶点的筛选具有重要意义。

3. 药物研发在药物研发过程中，需要了解候选分子对于特定基因的调控情况，以及候选分子在不同组织中的代谢情况。

组织石蜡切片RNA提取试剂盒可以帮助药物研发人员获取组织样本中的RNA信息，为药物靶点的筛选和药效评价提供数据支持。

4. 癌症研究在癌症研究领域，组织石蜡切片RNA提取试剂盒可以帮助科研人员研究肿瘤组织中的基因表达情况，发现潜在的癌症标志物和治疗靶点，为个性化治疗提供依据。

5. 组织工程在组织工程领域，需要了解工程组织中细胞的基因表达情况，以评估工程组织的生物学特性和功能。

组织石蜡切片RNA提取试剂盒可以帮助研究人员从组织样本中提取RNA，为工程组织的设计和评估提供必要的基因表达数据。

总结起来，组织石蜡切片RNA提取试剂盒在基础医学研究、临床医学应用、药物研发、癌症研究、组织工程等领域都具有重要的应用价值。

它为科研人员提供了方便、快速、高效的方式来提取组织样本中的RNA，为相关研究和应用提供了可靠的实验基础。

随着生物技术和医学研究的不断深入，相信组织石蜡切片RNA提取试剂盒的应用领域还会不断拓展，为人类健康和疾病治疗带来新的突破和进展。

随着生物技术和医学研究的不断深入，组织石蜡切片RNA提取试剂盒的应用领域正在不断扩展和深化。

在医学研究领域，组织石蜡切片RNA提取试剂盒不仅扮演着起到提取RNA的作用，同时它还在分子医学、疾病机制研究、药物研发等方面发挥着重要作用。

石蜡切片rna提取步骤
石蜡切片RNA提取是从组织切片中获取RNA的一种方法，通常用于病理学研究。

以下是一般的步骤：
切片准备：
获取包含感兴趣组织的石蜡包埋切片，确保切片的质量和完整性。

脱蜡：
将切片置于适当的脱蜡溶液中，通常使用挥发性有机溶剂或低熔点的脱蜡剂，以去除石蜡。

这一步骤通常需要多次反复，确保充分脱蜡。

去脂质：
利用脱脂剂去除切片中的脂质，以提高RNA的纯度。

组织裂解：
使用裂解缓冲液将切片中的组织细胞裂解，释放RNA。

这可以通过将切片浸泡在裂解缓冲液中，或者直接在切片上涂覆裂解缓冲液来实现。

RNA提取：
使用RNA提取试剂盒或方法，如酚/氯仿法、琼脂糖柱法等，从裂解的组织中提取RNA。

这一步骤通常包括酚酚氯仿相分离，然后通过醇沉淀法或其他方法纯化RNA。

DNase I 处理：
通过使用DNase I来降解可能残留在RNA中的基因组DNA，以确保纯化的RNA是无DNA的。

RNA沉淀：
将RNA在异丙醇中沉淀，然后通过离心将RNA沉淀下来。

洗涤：
对RNA沉淀进行洗涤，以去除残留的盐和污染物。

干燥：
将RNA溶解并在适当的条件下干燥，准备进行后续的实验，如逆转录和定量PCR。

检测和质量控制：
使用分光光度计或其他RNA检测方法，如琼脂糖凝胶电泳、生物分析仪等，对提取的RNA进行浓度和纯度的检测和质量控制。

每一步都需要在RNAase-free（不含RNase酶）条件下进行，以避免RNA的降解。

整个过程需要严格控制实验室条件和使用RNase-free试剂、器具。

石蜡包埋组织rna完全解交联的方法石蜡包埋是一种固定和保护组织样本的方法，而RNA的完全解交联通常是在样本被包埋后的步骤。

以下是一种在石蜡包埋的组织中实现RNA完全解交联的基本方法：获取石蜡切片：从包埋组织中获得石蜡切片。

这通常涉及到用刀片或者微tome 从石蜡块上切割薄片的过程。

脱脂：将石蜡切片放置在去石蜡剂（如xylene）中，以去除石蜡。

这个步骤通常需要进行多次，确保完全去除石蜡。

水洗：将脱脂后的切片经过一系列浓度递减的醇（如95%、70%）和水洗涤，以去除去脂剂。

蛋白酶消化：使用蛋白酶（如蛋白酶K）进行组织中的蛋白质消化。

这一步有助于打破蛋白质的交联，使得RNA更容易被释放。

RNA抽提：使用适当的RNA抽提试剂（如TriZol）进行RNA的抽提。

这可以通过将抽提试剂加入组织样本中并进行机械破碎来完成。

DNA酶处理：在RNA抽提过程中，使用DNA酶来降解DNA。

这有助于进一步减少RNA和DNA之间的交联。

氨基酸处理：有时候，对组织进行氨基酸处理（例如，通过加入氨基酸溶液）可以帮助打破RNA的交联结构。

DNase I处理：使用DNase I处理，以进一步降解可能残留的DNA。

这可以在RNA 抽提后、纯化RNA前进行。

RNA纯化：对抽提的RNA进行纯化，通常通过使用RNA纯化试剂盒。

这一步有助于去除潜在的污染物。

质控：对解交联后的RNA进行质控，例如通过琼脂糖凝胶电泳或分析仪器，确保RNA的完整性和纯度。

这些步骤可以在确保RNA完全解交联的同时，最大限度地保留RNA的完整性和稳定性。

ffpe（福尔马林固定石蜡包埋）rna降解规律是指从福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）的组织标本中提取RNA时，RNA可能会发生降解的情况。

从石蜡包埋组织中提取RNA时，石蜡可以阻碍消化液对组织的渗透，因此，彻底脱蜡非常重要。

传统的脱蜡方式为二甲苯脱蜡，二甲苯脱蜡不仅容易造成核酸片段化和得率低，而且对人有毒害，切片越厚或存放时间越长，脱蜡效果越差。

此外，在RNA提取过程中，通过加入蛋白酶K消化与核酸结合的组蛋白，加入DNase 去除核酸中的DNA，最后得到纯净的RNA分子，可以减少RNA降解的风险，保证RNA的含量和完整性。

总的来说，从FFPE组织中提取RNA需要选择合适的方法和试剂，并注意操作细节，以减少RNA降解的风险，保证提取的RNA的质量。

分析测试百科»经验共享» [急求]石蜡切片可以做RTPCR吗？2011-10-7 10:47 阿敏[急求]石蜡切片可以做RTPCR吗？[size=4][color=Black][font=楷体_GB2312][b][急求]石蜡切片可以做RTPCR吗？小妹刚开始设计试验，很菜鸟，想请问各位大侠：我做子宫内膜癌的两个基因的rtpcr，石蜡标本可以做rtpcr吗，有什么特殊要求？如果要用冰冻的收集时该注意那些问题呢？[/b][/font][/color][/size]2011-10-7 10:48 +田田+[size=4]当然可以，查询：石蜡包埋组织的DNA提取及其应用[/size]2011-10-7 10:49 阿敏[size=4][color=Black][font=楷体_GB2312][b]谢谢主任，不过大概是我没有讲清楚，我要做的是提取mRNA,逆转录cDNA.听说用石蜡切片很难出结果。

[/b][/font][/color][/size]2011-10-7 10:49 阿敏[size=4][color=Black][font=楷体_GB2312][b]谢谢主任，不过大概是我没有讲清楚，我要做的是提取mRNA,逆转录cDNA.听说用石蜡切片很难出结果。

[/b][/font][/color][/size]2011-10-7 10:49 #甜#[size=4][color=Purple][font=仿宋_GB2312]RNA早降解了，还怎么作RT-PCR！即使是新鲜的标本如果没有及时放入液氮冻存都作不出来。

别在这上面浪费时间了。

[/font][/color][/size]2011-10-7 10:50 131415[size=4]理论上是可以的，也有报道作出来的，但我周围没有，如果有时间和钱，可以一试，否则，就别浪费了[/size]2011-10-7 10:50 韩梅梅[size=4]关键是从石蜡组织中提取RNA，我用如下方法：1. 切片8μm×10张，置1.5ml EP管2. 脱蜡：加二甲苯1200μl, 震荡混匀，8600rpm, 10 min ×33. 无水乙醇1200μl, 震荡混匀，8600rpm, 5min ×24. 吸弃乙醇，37℃烤箱干燥30min5. 加裂解液200μl，酶K（20mg/ml）5μl6. 组织溶解后，95℃水浴10min,7. 4℃冰箱冷却8. 加1mlTrozol混匀，9. 加氯仿200μl，充分混匀，置3min10. 4℃, 13000rpm 15min.11. 吸取水相，加入等体积的异丙醇，-20℃2h12. 4℃, 13000rpm 15min.13. 弃上清，加75%乙醇1200μl清洗，14. 4℃, 11000rpm 10min.15. 弃上清，室温干燥8min，加20μl DEPC水溶解RNA，55℃10min16. -70℃保存[/size]2011-10-7 10:51 韩梅梅[size=4]我按上面的方法提取的石蜡组织里的mRNA ,效果不错.操作要注意:1.注意DEPC消毒2.活检组织及早固定\包埋3.注意实验的第一步里,切片了马上开始提取4.提取MRNA时,最好有人在一旁指导. [/size]2011-10-7 10:52 微笑的海豚[size=3][color=Navy][b]关于韩梅梅网友“石蜡组织中提取RNA”的几点商榷：1、石蜡包埋组织大多来自病理科，这种组织一般是从手术室几经周折到达病理科，其中间环节较多，很少有人会注意避免RNA的降解，因此这些组织中的RNA是很难逃脱降解的命运；2、即使有RNA保留也很难逃过上述脱蜡、烘烤等处理过程；3、“DEPC消毒”表达不妥，其作用是灭活RNA酶；4、石蜡包埋组织中DNA提取绝对没问题，提取RNA恐怕...............？[/b][/color][/size]2011-10-7 10:52 冰激凌小姐[color=DarkOrchid][size=4][font=楷体_GB2312][b]我有个师姐曾经用石蜡切片做过原位杂交，可以得到阳性结果，但用的是新鲜制备的蜡块，作RT也应该没问题吧[/b][/font][/size][/color]2011-10-7 10:53 饭团团[size=4]求救:请问各路高手,小妹要做的是从石蜡切片中提取DNA，从什么可以较上面的连接节省时间的方法阿？不胜感激！谢谢！急[/size]2011-10-7 10:53 不懂[size=4][color=Sienna]理论上是可以做TR-PCR的，可是效果不是很好，尤其是在石蜡切片上，如果真的想做一下，我认为应该注意一下几点：1 采取的组织应尽快的固定，并且采取时按照做RT-PCR的采样注意事项进行。

石蜡包埋乳腺癌组织的RNA提取及基因表达研究孙冰;郭晓红;张利利;张峰;吴世凯;宋三泰;江泽飞;王敦梅;苏敏【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2009(49)12【摘要】目的探索从石蜡包埋乳腺癌样本中提取总RNA的质量和产量,并检测其基因的表达情况.方法收集保存时间1～17 a不等的人乳腺癌石蜡组织样本153例,取5 μm厚切片1～15张,用Roche和Ambion两种试剂盒提取总RNA.采用随机引物将mRNA反转录为cDNA,SYBR Green Ⅰ染料法实时荧光定量PCR分析ACTB、GAPDH、RPLPO和GUSB管家基因mRNA的表达情况.结果 153例标本总RNA浓度在3～375 ng/μl范围,总产量0.18～18.5 μg,A260/280值在1.32～2.07范围,RNA琼脂糖凝胶电泳片段弥散在100～1 000 bp之间.81例样本的4个管家基因的平均Ct值在24～30范围,随着样本保存时间的延长,Ct值也逐渐增加.结论从石蜡包埋样品标本中提取的RNA产量及质量可满足实验的要求,总RNA 有所降解,但可以进行目的基因mRNA的检测, 保存10 a以上的样本也能够进行基因表达研究,在基础研究和临床实践方面具有广阔的应用价值.【总页数】3页(P15-17)【作者】孙冰;郭晓红;张利利;张峰;吴世凯;宋三泰;江泽飞;王敦梅;苏敏【作者单位】军事医学科学院附属医院,北京100071;汕头大学医学院;中国科学院,北京基因组研究所;中国科学院,北京基因组研究所;军事医学科学院附属医院,北京100071;军事医学科学院附属医院,北京100071;军事医学科学院附属医院,北京100071;中国科学院,北京基因组研究所;汕头大学医学院【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.石蜡包埋乳腺癌组织DNA提取方法 [J], 康毓芝;王永兴;杨宝珍;韩恩善2.肝癌石蜡包埋组织miRNA提取方法的优化 [J], 党裔武;容敏华;陈罡3.石蜡包埋组织中RNA提取方法的改进和完善 [J], 孟青;杨文秀;胡军;高勤4.应用差别PCR检测石蜡包埋乳腺癌组织癌基因扩增时固定剂影响的研究 [J], 陈森清;马国建5.应用差别PCR检测石蜡包埋乳腺癌组织癌基因扩增时固定剂影响的研究 [J], 陈森清;马国建;等因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取RNA实验开始前准备：第一次使用Buffer RPE 溶液，需要加入乙醇。

（即向11ml Buffer RPE浓缩液中加入44ml 乙醇（96%-100%）溶液）。

所有Buffer溶液应平衡至室温（15~25℃）。

配置Buffer RPE溶液要摇匀。

设置加热器，加热模块或水浴温度至56℃，方便后续步骤5和步骤9使用。

为了减少等待时间，另外设置加热器，加热模块或水浴温度至80℃，方便后续步骤9使用。

1.用切片机切掉样本中多余的石蜡。

2.每张切片切成5-20μm厚。

如果样本表面已经暴露在空气中，将2-3张切片厚度的样本切掉。

3.立即将切片放在1.5ml或者2ml或者2ml的微量离心管（无备用），盖上管盖。

4.加入160或320μl 脱蜡溶液，涡旋10s 混匀，简短离心使样本沉于管底。

（替换成备注Page25的步骤）5.56℃孵育3min，然后冷却至室温。

6.加入150 或者240μl Buffer PKD，涡旋混匀。

7.11,000xg(10,000rpm) 室温离心1min。

8.向透明液体分层处加入10μl 蛋白酶K。

用移液器上下轻轻吹吸混匀。

9.56℃孵育15min，然后80℃孵育15min。

10.将管底无色透明液体转至一个新的2ml微型离心管。

11.置于冰上孵育3min。

然后，20，000xg(13,500rpm ) 室温离心15min。

12.将上层清夜转至一新的微型离心管中（没提供），注意不要搅动小团物质（组织碎片聚集体？）。

13.加入十分之一总样本量的DNaseBooster Buffer溶液（大约16μl 或25μl ）和常备的DNase I 溶液。

颠倒混匀。

简短离心，以除去管盖内壁的液滴。

14.室温孵育15min。

15.加入320μl 或500μl Buffer RBC 来调整体系，充分混匀溶解产物。

16.加入720μl 或1200μl 无水乙醇。

用移液器混匀。