丹参分子生药鉴定
- 格式:docx
- 大小:1.50 MB
- 文档页数:12
原药材检验标准操作规程目的:建立一个中药饮片原药材检验标准操作程序,确保检验结果准确可靠。
适用范围:中药原药材。
责任人:质量保证部主任、质量控制部主任、化验员。
标准来源:《中华人民共和国药典》2010年版一部、《安徽省中药饮片炮制规范》。
内容:1、性状取本品适量,放入白瓷盘中,用眼观察,可见以下性状特征:本品根茎短粗,顶端有时残留茎基。
根数条,长圆柱形,略弯曲,有的分枝并具须状细根,长10~20cm,直径0.3~1cm。
表面棕红色或暗棕红色,粗糙,具纵皱纹。
老根外皮疏松,多显紫棕色,常呈鳞片状剥落。
质硬而脆,断面疏松,有裂隙或略平整而致密,皮部棕红色,木部灰黄色或紫褐色,导管束黄白色,呈放射状排列。
气微,味微苦涩。
栽培品较粗壮,直径0.5~1.5cm。
表面红棕色,具纵皱,外皮紧贴不易剥落。
质坚实,断面较平整,略呈角质样。
2、鉴别主要使用仪器:电子分析天平、电子显微镜、紫外光灯等。
2.1显微鉴别:2.1.1 试液配制2.1.1.1 水合氯醛试液:取水合氯醛50克,加水15毫升与甘油10毫升使溶解,即得。
2.1.1.2 甘油醋酸试液:取甘油、醋酸及水各等份混匀,即得。
2.1.1.3 稀甘油:取甘油33毫升,加水稀释至100毫升,再加樟脑一小块或液化苯酚1滴,即得。
2.1.2 供试品制备2.1.2.1 取本品10g,研细后取少量粉末,置载玻片上,滴加水合氯醛搅拌均匀,置酒精灯上加热透化;加稀甘油数滴,搅拌均匀,分装2~3片,加盖玻片,即得。
2.1.2.2 取研细的粉末少量置载玻片上,加甘油醋酸试液,搅拌均匀,加盖玻片,即得。
2.1.2.3取研细后取少量粉末,置载玻片上,滴加水搅拌均匀,同时滴加少许稀甘油,加盖玻片,即得。
2.1.3 置显微镜下观察可见本品粉末红棕色。
石细胞类圆形、类三角形、类长方形或不规则形,也有延长呈纤维状,边缘不平整,直径14~70 μm,长可达257 μm,孔沟明显,有的胞腔内含黄棕色物。
丹参药材分析方法的确认丹参是一种常见的药材,具有活血化瘀、止血、降压等药理作用。
为了确保丹参的质量和药效,需要对其进行药材分析。
下面是丹参药材分析的几种常用方法:1.外观特征分析:通过观察丹参的外观特征,可以初步判断其质量。
正常的丹参应该呈黑褐色,紧密而有弹性的质地,无霉斑和虫蛀。
同时,还需要观察丹参的香气是否正常,香气浓郁的丹参药效更好。
2.理化指标分析:可以通过测定丹参的含水量、挥发油含量、总黄酮含量等理化指标来评估其品质。
含水量过高可能是由于丹参储存不当或存在霉变现象,而挥发油含量和总黄酮含量则能够反映丹参的药效。
3.超微量元素分析:丹参中含有多种重要的微量元素,如锌、铁、钙等。
这些元素对丹参的药效起到重要的作用。
采用原子吸收光谱法和电感耦合等离子体质谱法等技术,可以对丹参中的微量元素进行定量分析,从而评估其品质。
4.薄层色谱分析:薄层色谱法是一种常用的药材鉴别和质量评价方法。
利用不同溶剂体系的柱层进行分离和鉴别,在紫外可见光或者荧光检测器下观察色谱图谱,可以判断丹参中是否存在其他成分,进而评估其纯度和品质。
5.高效液相色谱分析:高效液相色谱法是一种常用的定性和定量分析方法。
通过采集丹参提取物的色谱图谱,并与已知标准品进行比对,可以鉴定丹参中的主要有效成分,如丹参酮、丹参酸等,并测定其含量,从而评估其药效。
总之,丹参药材分析方法的确认包括外观特征分析、理化指标分析、超微量元素分析、薄层色谱分析和高效液相色谱分析等多种方法。
通过这些方法的综合应用,可以对丹参的质量和药效进行准确评估,确保丹参的药用价值和安全性。
丹参的多种鉴别方法
丹参,是一种常用的中药材,具有活血化瘀、祛瘀通络、降脂、抗血
栓等多种药理作用。
由于丹参外观形态相似的药材很多,因此需要进行鉴别,以下是几种常用的丹参的鉴别方法:
1.观察外观:正宗的丹参应该呈现为颜色均匀、表面光滑,并且干燥
杂质少的状态。
假丹参可能因为保存不当或者受损而有色斑、霉斑,外观
不佳。
2.气味鉴别:真正的丹参应该有一种浓郁的清香味,而假丹参则可能
有发霉的或者腐败的味道。
3.叶子观察:正宗的丹参叶子应该是偏三角形的,通常为5-12片,
表面呈现深绿色,有光泽。
假丹参的叶子则可能呈圆形或者不规则形状,
颜色较浅,并且没有光泽。
4.茎杆观察:正宗的丹参茎杆应该坚实,质地细腻,并且有纵纹纹理。
而假丹参的茎杆则可能粗糙,质地不佳,且没有纹理。
5.加热鉴别:将丹参进行热处理,正宗的丹参会产生香气,并且叶子
表面会弯曲。
而假丹参则可能没有香气,并且叶子不会弯曲。
6.萃取物鉴别:将丹参用水或酒浸泡,真丹参可以产生红色溶液,而
假丹参可能没有或者产生较少的颜色反应。
7.使用显微镜观察:将丹参的茎叶进行切片,然后使用显微镜观察细
胞结构。
真丹参的细胞结构清晰,细胞壁完整,而假丹参的细胞结构可能
不清晰,细胞壁破损。
以上是目前常用的丹参鉴别方法,鉴别时可以结合多种方法进行,以准确确定材料的真假。
此外,还可以通过测试活性成分含量、进行化学分析等更科学的方法进行鉴别。
在购买丹参时,最好选择正规合法的药店或者药材商家,以保证购买到的是正宗的丹参。
丹参分子生药研究进展丹参Salvia miltiorrhizaBge.为唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvia)植物,是常用中药之一。
药用其根,因其根皮赤而肉紫且形状似参而得名“丹参”。
丹参作为传统中药在我国沿用已久,我国最早的药书《神农本草经》即收载有丹参,列为上品,中医理论认为丹参有祛淤止痛,活血通经,清心除烦之功效。
第一部分:丹参的传统鉴别方法与分子生药鉴别。
1丹参形态学鉴别1. 1植物学特性鉴别传统方法大多根据丹参的形态方面对药材的真伪进行别丹参为多年生草本,根砖红色,茎高40~80 cm,多分枝,被长柔毛。
叶常为奇数羽状复叶。
叶柄长1~7 cm,小叶3~7,顶端小叶较大。
小叶卵形或椭圆状卵形。
长1. 5~8 cm,宽0. 8~5cm,先端钝,边缘具圆锯齿,两面被柔毛,下面较密,花序顶生或腋生轮伞花序有花6至多花,组成假总状花序,密被腺毛及长柔毛;小苞片披针形;花萼钟状,长1~1. 3 cm,先端二唇形,萼筒喉部密被白色柔毛;花冠蓝紫色,二唇形,长2~2. 7 cm,花冠筒外伸,弯曲,上长达2 cm,筒内有毛环;雄蕊2,药隔长,花丝短,上臂药室发育, 2下臂的药室不育且联合;小坚果4,椭圆形,花期5~8月,果期8~9月。
根据丹参的植物学特征可以将丹参与混用的药材进行区分。
1. 2丹参药材根部性状鉴别丹参及其亲缘种类的药用植物甚多,以根部特征区别各类丹参也是沿用很久的经典方法。
丹参根的特征为:丹参多为带根茎的根,根茎粗短,有茎基残余,下着生多数细长的根。
根呈圆柱形,稍弯曲,表面呈砖红色,粗糙,具多数纵沟或皱纹,有须根痕,外部栓皮常鳞片状剥落,皮层有时开裂,长8~22 cm,直径5~12 mm,质坚脆,易折断,断面不平,疏松有裂隙,皮部棕渴色或砖红色,韧皮部狭。
形成层明显,淡棕色,木质部导管束灰黄色或黄白色,放射状排列。
气微, 味微苦、涩,以条粗壮、色紫红者为佳。
1. 3水试鉴别法:用水浸泡丹参根的方法对丹参进行鉴别,正品丹参根浸泡后的溶液无色,药材稍膨胀,颜色稍微变浅。
学术探讨·180·(上接第179页)2.2 不良反应。
两组患者不良反应发生情况对比如下(见表3)。
两组患者均未见严重不良反应发生,未有患者因不良反应终止治疗。
表3 两组患者的不良反应发生情况组别总例数外周水肿心悸发生率对照组31129.68%观察组3113.23%3.讨论高血压为临床常见心血管疾病,并易引发心力衰竭、冠心病,严重威胁患者健康,若病情未得到及时控制,就会发展成为难治性高血压,并引发其他严重并发病,进一步增加治疗的难度,因此,寻找有效的高血压治疗方法就成临床主要任务。
目前我国高血压指南建议:高血压患者使用降压药物,应该以坚持联合用药、小剂量开始、个体化、长效制剂的原则,尤其是老年高血压患者,一定要选择最为合理的降压方法。
选用小剂量降压药联合用药,不仅要注意降压效果,而且还要降低用药不良反应[3],能够更加有效地预防心血管疾病的发生。
苯磺酸氨氯地平片属于二氢吡啶类钙离子拮抗剂,可以通过选择性抑制心肌和血管平滑肌细胞的钙离子通道,使血管平滑肌松弛,舒张外周动脉血管,从而减轻心脏后负荷,降低血压。
本研究的结果表明,观察组(联合用药组)总有效率为93.55%,显著高于对照组(氨氯地平组)的总有效率80.65%(P<0.05)。
综上所述,运用小剂量替米沙坦联合氨氯地平片治疗高血压患者的临床效果显著,并且不良反应少,值得临床推广。
参考文献:[1]中国高血压指南防治委员会.中国高血压防治指南2010,中国医学前沿杂志(电子版)2011,3(5):44-45.[2]杨天伦,倪国华.高血压联合用药治疗方法评价〔J 〕.中国循证心血管医学杂志,2009;1(3):38-41.[3]王文,王继光,张宇清.针对中国高血压的特点制中国高血压防治的策略与方案[J].中华高血压杂志,2010,18:904-990.丹参及其伪品的鉴别研究孔小英 周宝玉江苏省常州市武进中医医院 江苏 常州 213161【摘要】丹参是一种干燥根和根茎,为唇形科植物鼠尾草属,是临床上的常用中药之一,随着其需求量的不断增加,市场上开始出现一些混淆品和伪品,大大影响了丹参的市场安全效益,埋下了巨大的药品质量安全隐患。
丹参综合实验设计班级:基础医学院药管系A0731组长:黄斌副组长:王群成员:姚亮凯琳玉琴小双生药学部分丹参真伪判断实验方案【目的】了解丹参的来源、性状及理化性质。
熟识不同的方法鉴别丹参的真伪。
【材料】丹参及其粉末、蒸馏水、水合氯醛试液、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丹参酮ⅡA对照品、苯、溴化钾;【仪器】显微镜、载玻片、过滤装置、蒸发皿、紫外灯、烧杯、加热装置、量筒等等【基源】本品为双子叶植物唇形科Labiatae 丹参Salviamiltiorrhiza Bge. 的干燥根及根茎.【性状】根茎极短,顶端有时带残留茎基.根数条,长圆柱形,略弯曲,并有分枝,长10-30cm,直径0.3-1.5cm.表面棕红色或暗棕红色,粗糙,有不规则纵沟或纵皱纹,老根外皮疏松,多显紫棕色,常呈鳞片状剥落.质硬而脆,断面疏松纤维性,有裂隙或略平整,皮部棕红色,木部灰黄色或紫褐色,导管束黄白色,呈放射状排列.气微,味苦涩.【显微特征】根横切面:木栓层为数层细胞,大多含橙色或淡紫棕色物,有时可见落皮层.韧皮部宽广,筛管群明显,颓废筛管群呈横条状.形成层环列;木质部射线甚宽;导管束作2~3歧状径向排列,近中心导管较少,向外渐多,常单个或2~12个径向或切向相接,后者与木薄壁组织间隔排成层状;木纤维发达,与导管常伴存.少数根的皮层及韧皮部有厚壁组织(纤维或石细胞),栽培品(四川)皮层和韧皮部一般无纤维或石细胞,导管束多,导管稀疏,木纤维少丹参横切面简图. 丹参横切面详图丹参粉末红棕色1. 石细胞类圆形.类方形形.类梭形或不规则形,长至257um,直径20-65um,壁厚5-16um.边缘不平整,壁较厚,有的胞腔含棕色物.2.网纹与具缘纹孔导管多位于侧壁3.韧皮纤维梭形,长60---70um,壁厚3—12um,孔沟明显,有的可见层纹与纹孔4.木纤维多成束,显微长梭形,末端长尖,直径18---25um.壁厚2-4um.纹孔斜缝状,孔沟较稀疏5.木栓细胞黄棕色,表面观类方形或多角形,壁稍厚,弯曲或平直,含红棕色色素(水合氯醛透化,色素则溶解)【显微操作】制作粉末装片:用牙签取丹参粉末少许,分别置于两片载玻片上,用镊子柄将其压碎至粉状。
药品质量及检验高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B 等3种有效成分游勇基1,陈铭辉2(1.福建省药品检验所,福建福州350001;2.福建中医学院药学系,福建福州350003)摘要:目的 测定丹参中丹酚酸B,丹参素和原儿茶醛等3种水溶性有效成分的含量。
方法 采用高效液相色谱法测定。
以甲醇-5%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,以对羟基苯甲酸为内标,检测波长为281nm,柱温30 。
结果 丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 浓度分别在3.95~47.4 g mL -1(r =0.9996),5.14~61.68 g mL -1(r =0.9999),16.8~117.6 g mL -1(r =0.9994)范围内呈良好线性关系,丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 的平均回收率分别为101.43%(RSD = 2.88%,n =6),99.89%(RSD=3.04%,n =6)和103.43%(RSD=1.52%,n =6)。
结论 方法简便,分离效果好,能同时测定丹参中丹酚酸B 、丹参素、原儿茶醛等3种水溶性有效成分的含量,结果准确可靠。
关键词:丹参;丹参素;原儿茶醛;丹酚酸B;高效液相色谱法中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1001-2494(2003)12-0950-03Determination of three effective components in Salvia miltiorrhiza by means of HPLCYOU Yong -ji 1,CHEN M ing -hui 2(1.Fuj ian I ns titute f or Dr ug Contr ol,Fuz hou 350001,China;2.D ep ar tment of Phar macy ,Fuj ian Colle ge of T r aditional Chinese M edicine,Fuz hou 350003,China)ABSTRAC T:OBJECTIVE T o investigate the determination of three water soluble components in S alvia miltior r hiz a .METHODS T he analysis w as carr ied on a column of Hypersil C 18(250mm 4.6mm,5 m)w ith a mobile phase of methano-l 5%acetic acid (gradient elution from 10 90to 35 65in 20minutes),using 4-hydrox y -benzoic acid as the internal standard.T he detection wave -length w as at 281nm.RESULTS T he linearit y w as obtained over 3.95~47.4 g mL -1(r =0.9996)for Danshensu,5.14~61.68 g mL -1(r =0.9999)for pro to catechuic aldrhyde and 16.8~117.6 g mL -1(r =0.9994)for salviamolic acid B,respectively.T he average recoveries w er e 101.43%(R SD=2.88%,n =6)for Danshensu,99.89%(RSD=3.04%,n =6)for protocatechuic a-l drhyde and 103.43%(RSD = 1.52%,n =6)for salv iamolic acid B,respectively.C ONC LUSION T his method appear ed to be r apid,simple and accurate.KEY WORDS :S atvia miltior r hiz a Bg e.;Danshensu;protocatechuic aldehyde;salv iamo lic acid B;HPL C 作者简介:游勇基,男,硕士,副主任药师Tel:(0591)7621966-3521E -mail:youyj @丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorr hiz a Bge.)的干燥根及根茎,是重要的传统中药。
丹参化学成分的分离与鉴定【摘要】目的:对唇形科鼠尾草属植物丹参(salvia miltiorrhiza bge.)的根及根茎化学成分进行研究。
方法运用硅胶柱色谱﹑sephadex lh-20柱色谱﹑ods柱色谱、制备hplc等分离手段进行化学成分的分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定其结构。
结果:从山楂核体积分数70%乙醇水溶液的提取物中分离得到4个化合物,分别鉴定为芥子醛(sinapic aldehyde)(1)、原儿茶醛(2)、原儿茶酸(3)、儿茶酚(4)。
结论:化合物1为首次从鼠尾草属植物中分离得到。
【关键词】丹参化学成分结构鉴定丹参为唇形科鼠尾草属(salvia l.)植物丹参(salvia miltriorrhiza bge.)的干燥根及根茎,丹参最早载于《神农本草经》,列为上品。
《本草纲目》记载丹参有“活血,通心包络,治疝痛的功效”。
《滇南本草》称其能“补心定志,安神宁心”。
丹参具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功能,临床用于月经不调、经闭痛经、癥瘕积聚、胸腹刺痛、热痹疼痛、疮疡肿痛、心烦不眠、肝脾肿大、心绞痛等症[1]。
现代研究表明,丹参具有扩张冠状动脉,增加冠状动脉血流量,改善心肌缺氧等之功效[2],其对心血管心痛作用明显。
本研究对丹参70%乙醇提取物的化学成分进行研究,从中分离得到4个化合物,根据理化性质及波谱数据,确定了化合物1-4的结构。
化合物1为首次从鼠尾草属植物中分离得到。
1 提取分离丹参10kg,粉碎后用体积分数70%工业乙醇加热提取三次,减压回收,得浸膏600g,浸膏用水混悬后,用乙酸乙酯萃取3次,合并水层。
水层经d101大孔吸附树脂,甲醇-水系统梯度洗脱(v/v=10%-95%),得到fr.1-fr.6 共6个馏分。
其中fr.3和fr.4继以sephadex lh-20、反复聚酰胺柱色谱、反复硅胶柱色谱,反相制备高效液相色谱分离、纯化得到化合物1(16 mg)、2(17 mg)、3(5 mg)、4(12 mg)。
丹参中药鉴定
丹参是一种常见的中药材,主要用于活血化瘀、祛风清热、促进血液循环等。
以下是一些丹参中药的鉴定方法:
1. 外观鉴别:正常的丹参呈不规则的形状,表面棕红色至黑褐色,有时有白霜;质地坚硬,易折断,断面有锯齿状边缘,横切面呈红棕色,有明显纵向纤维。
鉴别时可辨别其特征形状和颜色。
2. 气味鉴别:丹参有明显的特殊气味,鉴别时可嗅其香味。
3. 触感鉴别:丹参质地坚硬,质软易折断,触感粗糙。
鉴别时可触摸其质地和观察折断面。
4. 球果鉴定:丹参的果实称为球果,鉴定时可观察球果的形状和颜色,成熟球果呈亮红色或黑褐色,形状为近球形或近椭圆形。
此外,要准确鉴别丹参是否为正品,还需要通过专业的化学成分分析和质量评价方法,如薄层色谱法、高效液相色谱法等,对其有效成分进行定性和定量分析,从而确保丹参的品质和功效。
需要注意的是,以上只是一些常见的丹参中药鉴定方法,对于具体的鉴定工作还需要依赖于专业人士和实验室设备。
如果您需要进行丹参的鉴定工作,建议咨询有相关专业知识和经验的药师或药学机构。
试论丹参有效成分在生药中的分布及其提取工艺思路作者:韩智牧来源:《科学与财富》2016年第16期摘要:采用醇提工艺可以对丹参复方中成药中的溶脂性成分进行有效的提取,但是相比较而言,这一工艺不足之处在于会对丹参酮ⅡA产生一定的破坏,所以无法有效的保证成品质量,在这种情况下,笔者提出了一种全新的对有效成分进行提取的方法,与传统的丹参醇提工艺相比具有十分显著的差异。
关键词:丹参;有效成分;含量分布;提取工艺在中医医药中经常使用的活血化瘀药物为丹参,在丹参中主要含有的成分为菲醒类以及丹酚酸类,前者属于脂溶性,后者属于水溶性,其中菲醒类中主要含有的成分多达四十多种,例如丹参酮ⅡA以及丹参酮ⅡB都是其中的重要成分之一。
我国药典曾经对丹参的制备工艺进行了详细的研究,其中采用醇提工艺是主要的方式之一,但是并不能确保更高的质量标准,所以本文在此基础上研究出了全新的提取工艺,希望能够为今后的研究工作提供重要的参考依据。
1、丹参概述丹参的化学成分主要有两大类:脂溶性的丹参酮类化合物和水溶性的酚酸类化合物。
脂溶性成分属醌、酮型结构的有:丹参酮,隐丹参酮,异丹参酮,异隐丹参酮,羟基丹参酮,丹参酸甲酯,亚甲基丹参醌,二氢丹参酮,丹参新醌A、B、C、D,二氢异丹参酮,新隐丹参酮,去羟新隐丹参酮,代号为R0-090680的2-异丙基-8-甲基菲-3,4-二酮,去甲丹参酮,丹参二醇A、B、C,丹参新酮,1-氢丹参新酮,1-氢丹参酮,1-氧代异隐丹参酮,3α-羟基丹参酮ⅡA,1,2-二氢丹参醌,醛基丹参酮,亚甲二氢丹参酮,7β-羟基-8,13-松香二烯-11,12-二酮,1,2,5,6-四氢丹参酮,丹参环庚三烯酚酮等;属其他类型结构的有:降鼠尾草氧化物,弥罗松酚,鼠尾草酚,柳杉酚等。
2、生药中丹参脂溶性成分的分布首先应该选取适量的丹参药材,将其中的外皮去除,主要包含了木栓层以及韧皮部的少量部分,将已经去过皮的丹参以及木心进行称重,对丹参酮ⅡA的相应含量进行检测。
丹参分子生药研究进展丹参Salvia miltiorrhizaBge.为唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvia)植物,是常用中药之一。
药用其根,因其根皮赤而肉紫且形状似参而得名“丹参”。
丹参作为传统中药在我国沿用已久,我国最早的药书《神农本草经》即收载有丹参,列为上品,中医理论认为丹参有祛淤止痛,活血通经,清心除烦之功效。
第一部分:丹参的传统鉴别方法与分子生药鉴别。
1丹参形态学鉴别1. 1植物学特性鉴别传统方法大多根据丹参的形态方面对药材的真伪进行别丹参为多年生草本,根砖红色,茎高40~80 cm,多分枝,被长柔毛。
叶常为奇数羽状复叶。
叶柄长1~7 cm,小叶3~7,顶端小叶较大。
小叶卵形或椭圆状卵形。
长1. 5~8 cm,宽0. 8~5cm,先端钝,边缘具圆锯齿,两面被柔毛,下面较密,花序顶生或腋生轮伞花序有花6至多花,组成假总状花序,密被腺毛及长柔毛;小苞片披针形;花萼钟状,长1~1. 3 cm,先端二唇形,萼筒喉部密被白色柔毛;花冠蓝紫色,二唇形,长2~2. 7 cm,花冠筒外伸,弯曲,上长达2 cm,筒内有毛环;雄蕊2,药隔长,花丝短,上臂药室发育, 2下臂的药室不育且联合;小坚果4,椭圆形,花期5~8月,果期8~9月。
根据丹参的植物学特征可以将丹参与混用的药材进行区分。
1. 2丹参药材根部性状鉴别丹参及其亲缘种类的药用植物甚多,以根部特征区别各类丹参也是沿用很久的经典方法。
丹参根的特征为:丹参多为带根茎的根,根茎粗短,有茎基残余,下着生多数细长的根。
根呈圆柱形,稍弯曲,表面呈砖红色,粗糙,具多数纵沟或皱纹,有须根痕,外部栓皮常鳞片状剥落,皮层有时开裂,长8~22 cm,直径5~12 mm,质坚脆,易折断,断面不平,疏松有裂隙,皮部棕渴色或砖红色,韧皮部狭。
形成层明显,淡棕色,木质部导管束灰黄色或黄白色,放射状排列。
气微, 味微苦、涩,以条粗壮、色紫红者为佳。
1. 3水试鉴别法:用水浸泡丹参根的方法对丹参进行鉴别,正品丹参根浸泡后的溶液无色,药材稍膨胀,颜色稍微变浅。
伪品丹参溶液显红色药材变为淡红色。
水浸后续断会被染成红色,粉末中有草酸钙簇晶;丹参水浸不染成红色,粉末中无草酸钙簇晶,但有石细胞及红棕色物为丹参。
从而将两者进行区分。
2显微结构鉴别2. 1根的横切面显微结构鉴别]根据丹参横切面显微结构特征与紫丹参进行区分,丹参(Salvia miltiorrhizaBge. )木栓层3~7列,木栓细胞长方形,切向延长,壁非木化或微木化;外侧有时可见落皮层。
皮层窄,纤维单个散在或2~6个成群,孔沟放射状,层纹细密。
韧皮部较窄,由筛管群和薄壁细胞组成。
形成层明显成环。
木质部宽广, 4~12 mm呈放射状排列。
有些相邻的束在内侧合并,导管类圆形或多角形,有的沿径向延长,直径15~65 mm,单个散在或2~12个成群,径向排列或切向排列;木纤维发达,多成群分布于大导管周围;有的本质部束内有1~2群木化薄壁细胞;木射线宽广,射线细胞多木质化增厚。
紫丹参根茎表皮细胞1列,内含紫红色物质;皮质薄壁细胞有的具纹孔;髓部薄壁细胞壁呈连珠状增厚或稍增厚,具纹孔。
根本质部束常较小,导管也少。
2. 2根粉末的显微结构鉴别丹参粉末呈红棕色。
木栓细胞黄棕色,表面观呈类方形或多角形,壁稍厚,胞腔内常含红棕色色素,色素溶解后,断面观细胞类长方形,排列较整齐。
木纤维多成束,长梭形,纹孔斜裂缝状或十字状,孔沟稀。
导管主要为网纹和具斜纹孔导管。
石细胞呈类圆形、类三角形、类梭形、类长方形或不规则形,也有延长呈纤维状,有的胞腔内含棕色。
2. 3花粉形态学特征对丹参及同属药用植物的鉴别一定的植物具有一定形态的花粉,因此花粉形态研究也是植物分类鉴别的依据之一。
丹参的花粉以外壁较薄、纹饰网眼较浅、网脊较粗、沟较宽、沟底具颗粒而区别于其他种。
,3理化学方法鉴别3. 1根据丹参所含的化学成分进行鉴别经过大量分析研究说明丹参所含化学成分中二萜醌成分与系统发育有密切关系,二萜醌类化合物组成的不同可以作为种类鉴别的依据,根据二萜醌成分含量的多少对丹参组作丹参的药用植物的亲缘关系进行划分。
3. 2薄层色谱鉴别林佳等[9]采用薄层色谱定性鉴别的方法比较后指出在同一展开系统的条件下,无论是野生还是栽培品种,丹参的一些主要成分相同,以此可以作为识别丹参药材真伪的参考依据。
样品名称S.丹酚酸 B 1,2.丹参(产于河北)3.丹参(产于陕西)4-6.丹参(产于山东)7,8.丹参(产于安徽)相关条件供试品溶液:取丹参粉末0.2g,加75%甲醇25ml,加热回流1小时,放冷,滤过,滤液浓缩至1ml对照品溶液:取丹酚酸B对照品,加75%甲醇制成每1ml含2mg的溶液。
薄层板:高效硅胶GF254,预制薄层板(HPTLC-plate Nano-DLRASIL-20,UV254,MN)。
点样:2μl;条带状点样,条带宽度为1Omm.条带间距为5mm,原点距底边1Omm展开剂:甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2:3:4:0.5:2),20ml。
展开缸:双槽展开缸,20cm×10cm。
展开:展开缸一侧槽中加入展开剂,预平衡15分钟,上行展开,展距为8cm。
检视:置紫外光灯(254nm)下检视。
3. 3紫外吸收光谱鉴别丹参在253, 277 nm两处有吸收特征峰,而甘西鼠尾在264,248, 218, 203 nm 4处有吸收特征峰。
作丹参使用的药材紫外吸收光谱的范围不同,据此可以对两者进行鉴别。
丹参粉末处理后置紫外灯(365nm)下现察显亮蓝灰色荧光3. 4紫外导数光谱:李海鹰等研究认为丹参与番薯根的石油醚、甲醇及氯仿提取物的零阶和二阶导数光谱均可用于二者的鉴别。
3. 5丹参药材的近红外漫反射光谱模式识别法鉴别刘沭华等近红外漫反射光谱(NIRTDRS)模式识别法可以有效地应用于中药材自动鉴别、递归支持向量机等方法可以有效地完成自动分类和特征谱段选择。
不同种丹参药材的NIRTDRS丹参及属内植物为根茎类药材,其根茎中除含有大量的纤维素、淀粉等外,其他化学成分主要分脂溶性的其结果与化学成分测定一致。
NIRTDRS用于不同种丹参药材的鉴别,方法简便、结果可靠。
3.6指纹图谱鉴别(HPLC法)高效液相色谱(HPLC)具有色谱稳定性好、柱效高、应用范围广等特点,是中药指纹图谱研究中常用的手段。
对丹参等几种中药指纹图谱与代谢指纹图谱研究的结果,指出不同产地的药材在指纹图谱上存在较大差异。
4分子生物学鉴别方法4. 1RAPD鉴别法:随机扩增的多态性DNA(RAPD)技术已经被广泛应用于物种鉴别。
4. 2DNA遗传标记技术随着分子生物学和基因工程技术的日趋成熟,从遗传DNA分子水平检测生物遗传多样性并进行分类与鉴定已成为可能。
DNA分子遗传标记技术具有快速、微量、特异性强的特点,且不受生长发育阶段、供试部位、环境条件的影响,已在中药鉴定学研究中展示了良好的应用前景,并保持强劲的发展势。
5小结:生药分子鉴定中生药DNA 分子遗传标记鉴定是指通过比较生药间DNA 分子遗传多样性差异来鉴别生药基源,确定其学名的方法,因此,选择适当的DNA 分子遗传标记,能够在属、种、亚种、居群或个体水平上对研究对象进行准确地鉴别。
第二部分丹参分子基因组的分析及构建1丹参主要居群DNA指纹图谱的建立1.1基因组DNA的提取表1实验所用材料编号名称来源花颜色Al 大叶丹参四川中江紫色A2 商洛丹参陕西商洛紫色A3 首县紫花丹参山东芭县紫色A4 四倍体丹参中国药科大学紫色A5 芭县白花丹参山东芭县紫色A6 北京丹参中国中医药研究院紫色A7 毫州丹参安徽亳州紫色A8 丙城丹参山西茵城紫色A9 江苏丹参江苏射阳紫色A10 小叶丹参四川中江紫色A11 安国丹参河北安国紫色A12 甘西鼠尾草甘肃紫色A13 一串红陕西省杂交油菜研究中心红色A14 油菜陕西省杂交油菜研究中心黄色A15 小麦陕西省杂交油菜研究中心注:Al一Al,为各居群编号,以下同。
1.2 RAPD一PCR扩增反应体系及扩增程序的优化别设计M扩+、Taq酶、模板DNA的浓度及退火温度等单因子试验,同时保持扩增体系的其它成分浓度及扩增程序其它环节不变,以优化、确证适宜的M 扩+、Taq酶、模板DNA的浓度及退火温度。
结果如下:1.3鉴别丹参与其近缘和远缘植物的特征引物及其DNA指纹图谱引物s2035、s222扩增结果不仅稳定、条带明亮,而且采用引物s2035、s232建立的指纹图谱丹参主产区的n个居群丹参的PCR扩增带型几乎相同(1一n 泳道),其中有200一1100bp的七条共同的特异条带,即图6的条带Cl、CZ、C3、C4、图7的CS、C6、C7,各丹参居群完全相同。
结果验证:结果验证显示,PCR扩增重复性较好,取样合理,能够代表各居群。
2丹参EST序列中SSR信息的分析及建立2.1丹参EST序列中SSR信息的分析微卫星(Microsatellite)又称简单重复序列(Simplesequence repeat),指的是基因组中由1~6 个核苷酸组成的基本单位重复多次构成的一段DNA,广泛分布于基因组的不同位置,长度一般在200bp 以下SsR 分子标记具有数量丰富,多性高,多等位基因,共显性,重复性高等优点。
根据建立SSR 标记的序列性质不同可分为基因组SSR (Genomic SSR,gSSR)和表达序列标签SSR(Expressed sequence tag SSR,EST-SSR)。
EST 及表达序列标签是通过从cDNA 文库中随机挑选的克隆进行大规模测序所获得的5’或3’端序列,长度一般在150~500bp。
2.2丹参EST序列中SSR信息的分析及建立2.2.1对丹参EST-SSR引物设计SSR001 (TACA)5 CV172410 241 GAGGCTACTTCGTGGAGG 52.3GAAACTAAAGCAACAAACCC 52.1 SSR002 (CA)16 CV172134 176 CCGTGGTGTTCCCTCTTT 55TGCCGATTCTAACCTGTATG 53.7 SSR003 (CT)10 CV171877 137 AGAGGCTGCTGCTTCATT 52.7TCAAGTCATAGGCGTGGC 54.5 SSR004 (AAC)6 CV171649 222 AGGCAGACAGACCTCATA 46.7CTTCCCACCAAATAACTC 46.8 SSR005 (GTG)6 CV171565 153 CTCAGCACCTACTACCACAT 49.6CTTATCCCAACACTTCTTCT 48.5 SSR006 (ATC)5 CV171563 155 AAACAGAGCGACGAAGCAG 56.2ACCACCATCACTCAAGACG 56.4 SSR007 (CTT)11 FE537066 165 CTCCGCTTCGCTCCTCTT 57.7TGCTCGCTTCGTCGTCTT 57.2 SSR008 (GCT)6 FE536370 181 AGGTTACTACCGATGAAGCAG 54.1AGTTGAGTGGTGATGGAAGAT 53.2 SSR009 (AAG)6 FE536230 145 GACTTTGGATGCCTGCTC 52.9GACGCCGCTACTTTCTAT 50.2 SSR010 (TATGC)5 FE536872 136 AATAAGGCAATACAGGGTC 49.2CTTTACACGCATAACACG 47.4 SSR011 (TC)18 FE536561 162 AACTTGGCAATGTTCGCTAT 55.2GCTTGTTCTTGACAGGCTTC 54.9 SSR012 (TC)8tatct(AC)8 FE536456 161 GGTCCATTCCTCTTATTTCC 52.9GCCATCAAGTGGTCGTCT 55.6 SSR013 (AGC)6 FE536096 162 CAGTCCAACAGCCCGACCAG 63.4ATCATCATCGCCAGCATCCC 62.4从NCBI数据库下载鼠尾草属EST 序列11747条,其中包括丹参EST 序列10228 条和Salvia fruti-cosa 1519 条,应用Active Perl5.6.1.628对含有SSR的序列进行搜索。