吴楠

1全球通信产业现状分析经济全球化背景下，世界各生产要素及企业间竞争日趋激烈，企业生存发展必须拓展国际市场，华为这样的电信制造企业更是如此，面对竞争日趋激烈的国际、国内市场及同类企业的激烈竞争，华为更需要精确自身定位与现状，明确自身发展的优劣势，不断调整策略，不断地培养和挖掘自身全球竞争力，才能在全球市场上获得长足发展。

1.1我国通信产业发展现状国家层面，我国对通信产业发展始终持鼓励和支持态度，推行一系列互联网国家政策，提升互联网相关产业的竞争力，为通信技术产业提供了更加广阔的发展空间和更加便利的发展条件。

到去年底，我国乡村移动通讯普及率达98%以上，网络应用超4.5亿户，手机通讯规模居世界之首，上网人数已达9.04亿，占总人口的65%，并呈不断上升态势，对通信产业的覆盖与应用提出了更高要求。

同时，相关设备供应公司全球竞争地位进一步攀升，在不断发展中成功构建了全球化产业体系，创新研发能力也显著提升，以华为为代表的中国优势跨国公司正在崛起。

1.2国际通信产业发展现状据iResearch 统计，全球通信产业和电子商务交易总额到2022年将会达到27.4万亿美元。

当前，无论是七国集团还是20国集团国家，都积极出台政策鼓励各自通信企业的发展投资，支持各自公司加入行业全球化竞争。

华为主导的5G 时代来临，全球竞争力迅速上升，国际市场竞争日益加剧，加紧市场培育与拓展。

1.3华为在全球通信产业发展现状华为目前在我国甚至世界通信产业也位居前列，这得益于华为持续不断的科技创新、产品创新、制度创新，还有重要原因是华为对5G 技术的先导，具备强势竞争力，能够优先抢占国内国际市场，并且推出自主研发的“海思”芯片、“鲲鹏”系统，但同时由于国家对通信产业的大力支持，小米、vivo 、oppo 等品牌强势出击并瓜分国内市场，国内竞争加剧；国际上三星、微软、苹果等老牌通信企业巨头拥有稳定市场、领先独特的科技以及客户忠诚度。

华为在全球通信行业中机遇与挑战并存，但总体来讲机会大于挑战。

49 MEDIA MANAGEMENT 媒介经营与管理作者简介：吴 楠，湖南大学新闻传播与影视艺术学院研究生，研究方向为媒介经营管理。

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收稿日期：2010-03-29录用日期：2010-05-12基金项目：中国科学院知识创新工程重要方向项目（No.KZCX 2-YW -Q 02-05）；国家重点基础研究发展计划（No.2007CB 407304）；中国科学院知识创新工程重大项目（No.KZCX 1-YW -06-03）作者简介：吴楠（1984—），女，硕士研究生，E -mail:wunan 07@;*通讯作者（Corresponding author ），E -mail:minqiao@土壤环境中四环素类抗生素残留及抗性基因污染的研究进展吴楠，乔敏*中国科学院生态环境研究中心城市与区域生态国家重点实验室，北京100085摘要：近年来，致病菌耐药性的增加和扩散已成为全世界关注的热点问题，而人类医疗和畜禽养殖业抗生素的滥用正不断加剧这一问题.众多研究表明土壤环境作为一个巨大的抗性基因储存库，在抗性微生物和抗性基因的传播中起重要的作用，具有潜在的生态与健康风险.在总结国内外最新研究基础上，对土壤环境中典型抗生素-四环素类抗生素的主要污染源以及其在土壤中的基本环境行为等进行了分析，并探讨了土壤中四环素类抗性基因的来源、迁移和扩散及分子检测手段等问题.我国作为抗生素的生产和消费大国，抗生素污染问题较其他国家更为严重，而国内相关研究才刚刚起步，迫切需要开展有关环境中抗生素和抗生素抗性基因污染的系统研究.关键词：四环素；四环素类抗性基因；土壤；耐药性文章编号：1673-5897（2010）5-618-10中图分类号：X 503文献标识码：ATetracycline Residues and Tetracycline Resistance Gene Pollution in Soil:A ReviewWU Nan ，QIAO Min *State Key Laboratory of Urban and Regional Ecology,Research Center for Eco -Environmental Sciences,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100085Received 29March 2010accepted 12May 2010Abstract ：In recent years,the increasing prevalence of antibiotic -resistant pathogens has become a global hotspot which is exacerbated by the overuse of antibiotics in human medicine and livestock production systems.Soil plays an important role in the spread of antibiotic resistance.As a huge antibiotic -resistance gene pool,soil suffers from the potential risk of antibiotic resistance.This review summarized the pollution sources of one type of typical antibiotics -tetracyclines and their residue levels in soil environment.The potential sources,survival,fate and dissemination of tetracycline resistance genes in soil,as well as the molecular methods used to detect resistance genes have been discussed based on recent published literatures.In China,large quantities of various antibiotics are widely produced and used,however,little is known about the antibiotic resistance in environment.Consequently,it is urgent to carry out a systematic research on environmental pollution of antibiotics and antibiotic resistance.Keywords ：tetracyclines ；tetracycline resistance genes ；soil ；resistance to drug2010年第5卷第5期，618-627生态毒理学报Asian Journal of EcotoxicologyVol .5,2010No .5,618-627吴楠等：土壤环境中四环素类抗生素残留及抗性基因污染的研究进展第5期近年来，由于抗生素在医疗和畜禽养殖业的大量使用所导致的环境污染问题日趋严重，已成为国内外研究的热点之一.进入环境中的抗生素除了会造成化学污染外，还可能会诱导环境中抗性微生物和抗性基因的产生，并加速抗生素抗性的传播和扩散.这些抗性微生物可能会通过直接或者间接接触（如食物链）等途径进入人体，增加人体的耐药性，从而给人类公共健康带来威胁.目前致病菌耐药性的增加和扩散已经成为全球疾病治疗所面临的一个巨大问题.据报告，美国每年有超过两百万人受到抗性病原体感染，14000人最终死亡（Pruden et al.,2006）.而越来越多的证据显示，致病菌耐药性的扩散与环境抗性微生物和抗性基因紧密相关（Zhang et al.,2009c），因此尽快开展环境中微生物抗性的研究工作是十分必要的.早在2004年，Rysz和Alvarez（2004）就将环境中抗生素抗性基因列为环境污染物，之后Pruden等（2006）也将抗生素抗性基因作为一种新型污染物提出.这些抗性基因广泛分布在各个环境介质中，如土壤、表层水环境、沉积物、畜禽养殖场的污水池、畜禽粪便、污水处理厂、地下水及饮用水中，并可通过基因横向转移（HGT）等机制在各环境介质中的微生物之间传播，而环境中拥有HGT这种内在机制的微生物成为一个巨大的抗性基因储存库（antibiotic resistance gene pool）.更重要的是，这些媒介生物体一旦获得抗性基因，特别是那些土著微生物因其能更好的适应本地环境而存活，很可能以超过亲代菌株的效率来扩散这种抗生素抗性（Chee-Sanford et al.,2009）.目前有许多针对各种土壤环境中抗生素抗性微生物和抗性基因的研究（Schmitt et al.,2006;Allen et al.,2009;Chee-Sanford et al.,2009），揭示了土壤环境作为一个巨大的潜在的抗性基因储存库（Schmitt et al., 2006），以及抗性基因扩展和演化的媒介，在抗性微生物和抗性基因的传播和扩散上起了重要的作用.四环素类抗生素（Tetracyclines,TCs）是目前使用最广泛、用量最大的抗生素种类之一，关于其在土壤中的迁移转化等环境行为及抗性的研究在国外已经有文献报道，而在我国这方面工作才刚刚起步，还有待于更加系统深入的研究.本文在总结国内外相关研究基础上，对土壤中四环素类抗生素的污染源、基本环境行为，以及土壤中四环素类抗性微生物和抗性基因的分布、迁移、扩散和分子检测手段等进行了分析和讨论.1四环素类抗生素的概况和消费状况四环素类抗生素是最为常见的一类抗生素，通过阻碍氨酰tRNA与核糖体结合位点的结合来抑制菌体蛋白合成，从而达到抑菌作用，具有较广的抗菌谱和良好的治疗效果，对革兰氏阳性、革兰氏阴性菌、支原体、立克次体和衣原体之类的微生物都具有活性（Chopra and Robertsm,2001）.自上世纪40年代，从链霉菌（Streptomyces aureofaciens）中提取发现了四环素家族的首个成员金霉素（Chlortetracycline,CTC），随后陆续发现的其他四环素类药物也被广泛应用于治疗人和动物的细菌性感染，常用的主要包括四环素（Tetracycline, TC）、土霉素（Oxytetracycline,OTC）、多西环素（Doxycycline,DXC）、美他环素（Methacycline, MTC）等（Jia et al.,2009）.四环素类抗生素除了广泛应用于医疗外，还作为兽药和促生长剂大量用于畜禽养殖业和水产养殖业（Chopra and Robertsm,2001）.据统计，欧共体每年抗生素的消耗量达5000吨，其中四环素类抗生素用量高达2300吨（Hirsch et al.,1999）；90年代中期在美国，每年仅用于养殖业的四环素类抗生素大约有3500吨（Chopra and Robertsm,2001）；在肯尼亚约有14.6吨抗生素用于畜禽生产，其中四环素类抗生素约占总用量的56%（Sarmah et al., 2006）；而在中国，四环素类抗生素已经成为在畜禽饲养业和临床中使用量最大的抗生素之一，以1999年为例，中国一年使用的四环素类抗生素约有9413吨（Hu et al.,2008）；而2003年，中国生产土霉素约10000吨，占当年世界土霉素生产总量的65%（Zhang et al.,2009b）.2四环素类抗生素在土壤环境中的行为2.1土壤中四环素类抗生素的来源四环素类抗生素进入土壤环境的途径有多种，其主要途径按照抗生素用途不同，大体可分为人用和兽用两种：第一，兽用抗生素被认为是土壤环境中抗生素污染的一个主要来源，其进入土壤的途径主要包括：将来自养殖场的含有未分解兽药或兽药中间代谢产物的粪尿直接施入土壤作为有机肥料；养殖场堆粪池、污水池的泄露；兽药生产过程中流失619生态毒理学报第5卷和废弃的药品及容器等（Chee-Sanford et al., 2009）；另外由于抗生素在水产养殖业也被广泛使用，未被水产养殖生物吸收的，以及随粪便排泄的抗生素可能聚积于底泥沉积物，而水产养殖业（如渔场）的底泥常被用作土壤调节剂，其中残留的抗生素也会进入土壤环境（Sarmah et al.,2006）.畜禽粪便施肥被认为是抗生素进入土壤的最主要途径（Mueller et al.,2003）.研究证明由于大部分抗生素难以被动物吸收利用，约25%~75%的抗生素未经代谢而以母体化合物形式随粪尿排出体外（Chee-Sanford et al.,2001），从而在施用粪肥的土壤中长期存在（Hamscher et al.,2005）.目前许多研究都在畜禽粪便中检测到了高含量的四环素类药物残留，一般在mg·kg-1级：Hamscher等（2002）在液体粪肥中检测到四环素含量为4.0mg·kg-1，金霉素为0.1mg·kg-1；张树清等（2005）对我国7省、市、自治区的典型规模化养殖场畜禽粪便的主要成分进行了分析，结果表明猪粪中土霉素平均含量为9.09mg·kg-1，四环素为5.22mg·kg-1，金霉素为3.57mg·kg-1；而在北京地区，万头养猪场猪粪样品的检测结果表明，这3种四环素均有不同程度的检出,其中土霉素浓度范围10.5~513.4mg·kg-1 DW（干重，dry weight），四环素浓度范围12.53~ 77.10mg·kg-1DW，金霉素浓度范围0.0~19.22mg·kg-1DW（沈颖等，2009）.我国是世界上畜禽养殖大国，每年添加到动物饲料中的抗生素超过8000吨（Ben et al.,2008），畜禽粪便的产生量也是相当可观：1998年~2001年全国畜禽粪便产生量分别为18.84亿吨、19.00亿吨、20.10亿吨、21.70亿吨，但在2003年却迅速增加到31.90亿吨，据估算到2010年，全国畜禽粪便的排放量将达45.00亿吨（鲍艳宇，2008）.由于畜禽粪便产生量很大，而80%以上的畜禽粪便没有经过综合处理，直接被施于农田，其生态与环境安全的风险很大，是构成我国抗生素面源污染的主要原因之一（李兆君等，2008）.第二，医用抗生素被认为是土壤中抗生素污染的另一个主要来源，其中医用抗生素主要包括经由病人粪便和尿液排出的抗生素，医院丢弃的过期抗生素及残留在药瓶和器械上的抗生素，医药企业在生产过程中流失的抗生素等（王冉等，2006）.大部分残留的抗生素最终进入医院污水、城市生活污水或医药工厂污水中，但由于现有的水处理技术对污水中的相当一部分抗生素没有明显去除效果，因此无论是否经过处理，只要实施排放，均可导致对地表水，地下水及农田土壤环境的污染（周启星等，2007）.另外来自于污水处理厂残留有抗生素的污泥作为肥料施入土壤，也是土壤中抗生素污染的一个来源（Golet et al.,2002）.据世界卫生组织调查显示，目前我国住院患者抗生素药物使用率高达80%，其中使用广谱抗生素和联合使用两种以上抗生素的占58%，远远高于30%的国际水平；而家庭自备抗生素的也已达80%，与世界其它国家比，我国已成为世界上滥用抗生素最为严重的国家之一（王兰，2006）.2.2四环素类抗生素在土壤中的迁移与降解目前对四环素类抗生素在土壤中环境行为的研究主要集中在几个方面：独立的土壤组分（如土壤粘粒矿物含量、有机质、氧化物等）以及影响因素（如pH、温度、离子强度等），对四环素类抗生素的吸附解吸过程影响的分析（鲍艳宇，2008）.研究表明在广泛的环境条件下，四环素类抗生素在土壤，粘粒，包括沉积物中都有很强的吸附性（Chee-Sanford et al.,2009），其吸附机理主要是离子交换作用，这主要与四环素类抗生素的性质有关（Figueroa et al.,2004）.由于四环素类抗生素较强的吸附性，其在环境中的移动性可能会与肥料和土壤胶体等在环境中的迁移相关（Chee-Sanford et al.,2009）.四环素类抗生素在土壤环境中的降解主要分为生物降解和非生物降解，在一些情况下降解产物还会转化回母体化合物（Sarmah et al.,2006）.一般来说，抗生素在环境中的降解与其化学特性（如水溶性、pH、挥发性和吸附性）、环境条件（如温度、土壤类型、pH等）和剂量有关（王冉等，2006）.四环素类抗生素的非生物降解（如光降解）主要取决于pH值、氧化还原状况和光照，其降解产物的形成主要通过差向异构化，脱水化，质子转移等方式（Halling-Sorensen et al.,2003）.据报道，四环素可在环境中残留超过20天，而土霉素和金霉素因被吸附到粘土矿物和土壤上，受到保护避免了生物降解，因此半衰期相对更长（Kulshrestha et al., 2004）；田间试验结果表明，土霉素能够以超过25μg·mL-1的浓度在土壤中保持生物活性至少40天（Gonsalves and Tucker,1977）；Halling-Sorensen620吴楠等：土壤环境中四环素类抗生素残留及抗性基因污染的研究进展第5期等（2003）研究了土壤间隙水中土霉素的非生物降解，除了差向土霉素（EOTC）外，大部分降解产物的含量相对于母体化合物很少（低于2%），且降解过程中并非所有的土霉素降解产物都会产生，根据降解产物的不同，土霉素在土壤间隙水中的半衰期从2天（EOTC）到270天（beta-apo-OTC）不等.与其他抗生素相比，四环素类抗生素在土壤中持久性强，难于降解，因此也将更容易在土壤中累积，对生态系统和人体健康形成潜在威胁（鲍艳宇，2008）.2.3土壤中四环素类抗生素的检测由于土壤环境基质成分复杂，干扰物质多，而目标化合物的残留浓度通常很低，因此给土壤样品中四环素类抗生素的测定带来很大难度，在测定之前往往需要前处理过程.前处理主要包括提取和净化：从固体基质中提取目标分析物通常采用极性有机溶剂或其混合物或水溶液作为提取剂（如EDTA-McIlvaine提取液）进行超声提取或简单的混合/搅拌；提取液的净化常用固相萃取（SPE）、液-液萃取（LLE）、凝胶渗透色谱及半制备LC等，但大多数情况下采用SPE（李瑞萍等，2008）.在动物源性食品中四环素类抗生素残留的检测方法的基础上，研究者开发了基于环境样品的分析检测方法，绝大多数采用了高效液相色谱与紫外联用（HPLC-UV）、液相色谱与质谱联用（LC-MS）、高效液相色谱与串联质谱联用（HPLC-MS/MS）、及超高液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）等.这些技术的应用使得环境样品中四环素类抗生素的分析具有较高灵敏度及选择性，有的可达ng·L-1水平（Jia et al.,2009）.然而这些技术作为筛选及鉴定未知物的能力还较低，因此目前主要用于测定已知的目标化合物，且大多数工作集中于环境中母体化合物的测定，对其代谢物的测定较少（李瑞萍等，2008）.2.4四环素类抗生素在土壤中的残留国内外众多研究表明，土壤中四环素类抗生素残留浓度范围从μg·kg-1级到mg·kg-1级不等.早在1981年，Warman和Thomas（1981）就在施用过鸡粪的土壤中发现了金霉素.随后四环素类抗生素在不同土壤，肥料，污泥及沉积物中被相继检出：Hamscher等（2002）在长期施用猪粪尿的土壤中检测残留的抗生素，其中四环素在0~10cm土壤中平均浓度为86.2μg·kg-1，10~20cm为198.7μg·kg-1，20~30cm为171.7μg·kg-1，金霉素在这三层土壤中浓度为4.6~7.3μg·kg-1；在德国的另一项研究表明，在施用过液体肥料的表层土壤中（0~30cm），检测到土霉素，四环素，金霉素的最高浓度分别为27μg·kg-1，443μg·kg-1，93μg·kg-1，在14个取样点中至少有3个样点四环素类含量超过欧盟医药产品排放基准值（100μg·kg-1）（Sarmah et al.,2006）；Aga等（2005）在连续5个月每天喂给牛75mg土霉素后，将牛粪便作为氮肥施入土壤，结果表明粪便施入土壤22天后0~5cm土壤中四环素类抗生素及其代谢产物总浓度为281.34mg·kg-1，70天后总浓度为67.25mg·kg-1，144天后为3.60mg·kg-1；而在水产养殖场的沉积物中土霉素含量竟高达285mg·kg-1（周启星等，2007）.3土壤环境中四环素类抗性基因的污染3.1四环素类抗性基因种类及其耐药机制到目前为止，至少有40多种四环素类抗性基因被发现和命名，包括近40种四环素类抗性基因tet和3种土霉素抗性基因otr（Brown et al.,2008; Roberts,2005;Thompson et al.,2007），标准是如果两个抗药基因编码的氨基酸序列相似性超过80%则被认为是同一种基因（Chopra and Robertsm, 2001）.大约60%的四环素类抗性基因编码泵外排蛋白（efflux pump proteins），可将四环素排出细胞外，从而降低细胞内药物浓度起到保护作用，如tetA、B、C、D、E、G、H、J、K、L、V、Y、Z、A/P等；少数编码核糖体保护蛋白（Ribosomal protection proteins,RPPs），保护蛋白与核糖体结合引起核糖体构型改变，使四环素不能与其结合，如tetM、O、Q、S、T、W、B/P等；另外一些基因编码修饰或钝化四环素类分子的酶（Enzymatic inactivation of tetracyclines），如tetX等；还有个别基因目前尚不清楚其耐药机制，如tetU（Chopra and Robertsm, 2001;Roberts,2005）.3.2土壤中四环素类抗性基因的来源土壤中抗生素抗性基因的来源主要有两种：（1）土壤中固有的抗生素抗性微生物所携带的抗性基因.研究表明，土壤中一些土著微生物本身就能够产生低浓度的抗生素，而其目的是为了帮助621生态毒理学报第5卷微生物更好的适应环境，在环境中生存，比如产生的抗生素可以抑制竞争者的生长等（Martinez, 2008）.然而人为活动的干扰会加速固有抗性微生物和抗性基因的扩散.如四环素类抗生素随畜禽粪便，污水，污泥等进入土壤中，并在土壤中残留，对土壤微生物的耐药性产生选择压力，携带有四环素类抗性基因的具有抗性的微生物存活下来并逐渐成为优势微生物，并不断地将抗性基因传播给其他微生物.研究发现抗生素使用频繁或是受人为活动干扰多的环境中，抗生素抗性基因的浓度要明显高于那些抗生素使用少或是受人类活动干扰少的环境中抗性基因的浓度（Pei et al., 2006）；而且一些研究还发现，环境中抗性基因的水平与抗生素的含量之间往往存在良好的相关性（Peak et al.,2007;Smith et al.,2004）；最近的一项研究发现，自1940年四环素类抗生素被广泛使用以来，土壤中的四环素类抗性基因水平显著增加，2008年土壤中部分基因的含量甚至是70年代土壤中的基因含量的15倍（Knapp et al.,2010）.（2）由外源进入土壤中的抗性微生物所携带的抗性基因.由于畜禽粪便，污水，污泥等通常都残留有较高浓度的抗生素，可能会诱导自身介质中抗性微生物的产生，因此当四环素类抗生素随着这些媒介进入土壤时，这些媒介中所包含的四环素类抗性微生物也一并被带入土壤中，这些抗性微生物可能通过基因横向转移等机制，将携带的抗性基因传播到土著微生物内.例如，四环素在养殖业常被作为促生长剂，长期以亚治疗剂量添加入饲料投喂给动物，由于大部分抗生素都不能被动物吸收，留在体内的四环素会诱导动物胃肠道内抗性微生物的产生，这些抗性微生物会随粪便一起排出体外，并通过施肥等途径最终进入土壤（Chee-Sanford et al.,2009）.如Schmitt等（2006）检测了猪粪中，以及施用猪粪前后的土壤中的四环素类抗性基因，通过对比发现有一部分抗性基因是施肥前的土壤中所没有的，而是猪粪中特有的，因此可以推断这部分抗性基因是由猪粪带入土壤中的；其他一些研究也从动物粪便中分离出四环素类抗性菌株（如粪肠球菌、大肠杆菌等），并检测到四环素类抗性基因（Kobashi et al.,2007; Rizzotti et al.,2009），另外在其他媒介，如污水中（Chee-Sanford et al.,2001;Koike et al.,2007; Peak et al.,2007），污泥中（Zhang et al.,2009a）也都有四环素类抗性菌株和抗性基因的存在.3.3环境中四环素类抗性基因的检测环境中特定的四环素类抗性基因和其宿主细菌的检测，对于进一步评估抗性基因在环境中残留和扩散的模式以及最终对人类公共健康所带来的影响具有非常重要的意义.近年来发展迅速的分子生物学技术因其快速，灵敏，特异性高而被广泛应用于抗生素抗性基因的检测，由于这种技术不需要依赖于微生物的筛选培养过程，因此不只局限于可培养微生物抗性的研究，还能直接对环境微生物中的主体—不可培养微生物的抗性进行检测.目前许多研究主要利用DNA杂交，普通及多重PCR，实时荧光定量PCR，以及DNA芯片等方法对各种环境样品（土壤，水体，沉积物，动物粪便，活性污泥等）进行四环素类抗性基因及抗性微生物的检测.3.3.1DNA杂交DNA杂交技术用于检测特定抗生素抗性基因已有近30年的历史，并且在探针设计和合成方面还在不断改进完善中，一些研究现在仍利用核酸杂交技术（Southern blot）区分同一家族不同种类的四环素类抗性基因，来进行系统命名或识别特定环境中存在的四环素类及其他抗生素抗性基因（Zhang et al.,2009c）.如Agerso和Sandvang （2005）利用该技术证实四环素类抗性基因和class 1整合子可从土壤分离菌株中共转移到大肠杆菌和/或Pseudomonas putida中.另外作为一种重要的非放射性标记方法，荧光原位杂交（FISH）技术也已经成功用于医学上检测抗生素抗性微生物，但关于其用于环境样品中抗性微生物的检测却鲜有报道（Zhang et al.,2009c）.3.3.2PCR方法PCR方法目前被广泛应用于纯菌株和环境样品中各种抗生素抗性基因的检测，如检测肥料中和施肥后土壤中的四环素类抗性基因（Schmitt et al.,2006）.但由于P CR检测中可能会有假阳性结果的出现，因此常常还需配合DNA测序的方法来识别特定的抗性基因.为节省更多时间和精力，有些研究采用多重PCR（multiplex PCR）方法，即应用多对引物在同一个PCR反应体系内，扩增多个不622吴楠等：土壤环境中四环素类抗生素残留及抗性基因污染的研究进展第5期同的抗性基因片段.但这种方法也存在一些缺点，如可能出现假阴性结果，引物间配对造成对反应的干扰，导致特异性差等，尽管如此，多重PCR仍被认为是一种快速简捷的检测各种抗性基因的方法（Zhang et al.,2009c）.Ng等（2001）就利用多重PCR的方法，分4组检测了共14种四环素类抗性基因.3.3.3实时荧光定量PCR近年来越来越多的研究采用实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR）技术作为研究手段，从数量上更为直观的探讨环境中抗性基因的变化，而且由于这种方法不依赖于微生物培养，因此也能检测不可培养微生物所携带的抗性基因，使最终得到的量化结果更为全面和可信（Smith et al.,2004）.目前使用最多的是基于SYBR Green 荧光染料的定量PCR方法，已被用于多种环境介质中的四环素类抗性基因的定量，如畜禽养粪便（Yu et al.,2005）、猪场周围的土壤（吴楠等，2009）、地下水（Mackie et al.,2006）、底泥沉积物（Pei et al.,2006）、污水处理厂等（Auerbach et al., 2007;Zhang et al.,2009a）；另外一种基于Taqman 荧光探针的定量PCR方法也是常用方法，如用于畜禽养殖场污水池中四环素类抗性基因的定量（Peak et al.,2007;Smith et al.,2004）.3.3.4DNA芯片作为新一代基因诊断技术，DNA芯片（DNA Microarray）的突出特点在于快速、高效、自动化等，在一块芯片上就可同时快速检测出大量基因的存在与否，目前被广泛应用于医学上检测人类致病菌中的抗生素抗性基因（Zhang et al.,2009c）.但DNA芯片技术用于检测环境样品中的抗性基因的报道较少，这主要是由于环境样品基质复杂，一些污染物的存在可能会干扰目标基因的检测，因此样品在检测前还需要复杂的前处理过程（Call, 2005）；另外由于该技术的检测限较低，因此在检测环境样品中抗性基因时，往往还要配合PCR检测方法（Zhang et al.,2009c）.Patterson等（2007）利用DNA芯片技术，从来自欧洲不同国家的土壤和动物粪便样品提取的DNA中检测出23种四环素类抗性基因和10种红霉素抗性基因.3.4四环素类抗性基因在土壤中的传播抗生素抗性基因在微生物之间的传播主要是通过一种叫做基因水平转移（Horizontal gene transfer，HGT）的机制，又称基因横向转移（Lateral gene transfer），是指在不同生物个体之间或单个细胞内部细胞器之间所进行的遗传物质的交流.抗性基因可以整合到一些可移动基因元件（mobile genetic elements）上，如质粒（plasmids）、整合子（integrons）、转座子（transposons）、插入序列（insertion sequences）等，进而能够在共生微生物之间，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌之间，甚至致病菌和非致病菌之间相互传播（Gogarten and Townsend,2005;Pruden et al.,2006）.基因水平转移机制主要包括（Chee-Sanford et al.,2009）：（1）接合：通过质粒、整合子或转座子等介导的基因片段转移，需要受体细胞和供体细胞的接触.许多研究证实了位于这些可移动基因元件上的抗性基因可以在土壤环境中同属及不同属的微生物之间传播，也可以由来自其他环境的外源微生物进入土壤中的土著微生物内.（2）转导：是DNA经包装进入噬菌体分子内，再通过噬菌体的吸附和注射过程进入其它宿主细胞.由于噬菌体在环境中分布广，数量多（据报道存在于农田根际土壤的噬菌体密度约为1.1×109g-1干土），因此转导可能是土壤系统中重要的基因转移机制.（3）转化：是指细菌细胞从环境中吸收裸露的DNA并通过同源重组等方式将其整合到自身基因组的过程.关于裸露的DNA在环境中的稳定性的研究尽管较少，但已有研究表明裸露的DNA可以吸附到土壤颗粒上，保护其避免受到脱氧核糖核酸酶的降解，在土壤中持留时间从数月到2年不等.这也意味着即便携带抗生素抗性基因的微生物已经死亡，其携带抗性基因的DNA还可释放到环境中并可能在环境中长期存在，并在适当的条件下转移到其他微生物体内（Pruden et al.,2006）.由于基因横向转移机制的存在，使得环境中的抗生素抗性往往难以去除，这一现象也被通俗的称为“来的容易，去的难”（easy-to-get，hard-to-lose）（Salyers et al.,1997）.因此许多研究在很少或者没有抗生素残留的地区也检测到抗性基因（Allen et al.,2009;Rahman et al.,2008），造成这一现象的原因除了可能是环境中固有的抗性微生物携带的抗性基因之外，还可能是历史污染遗留的问题623。

郭敏与吴楠齐彬等民间借贷纠纷二审民事判决书【案由】民事合同、无因管理、不当得利纠纷合同纠纷借款合同纠纷民间借贷纠纷【审理法院】内蒙古自治区呼和浩特市中级人民法院【审理法院】内蒙古自治区呼和浩特市中级人民法院【审结日期】2020.06.23【案件字号】(2020)内01民终167号【审理程序】二审【审理法官】郭丰愷洪齐艳张雪杨【审理法官】郭丰愷洪齐艳张雪杨【文书类型】判决书【当事人】郭敏;吴楠;齐彬;王煜;王志超【当事人】郭敏吴楠齐彬王煜王志超【当事人-个人】郭敏吴楠齐彬王煜王志超【法院级别】中级人民法院【字号名称】民终字【原告】郭敏【被告】吴楠;齐彬;王煜;王志超【本院观点】债务应当清偿。

【权责关键词】撤销合同合同约定新证据诉讼请求开庭审理【指导案例标记】0【指导案例排序】0【本院认为】本院认为，债务应当清偿。

履行期限不明确的，债务人可以随时向债权人履行义务，债权人也可以随时要求债务人履行义务。

吴楠向郭敏出具的借条未写明还款期限，郭敏可以随时主张还款。

根据《最高人民法院关于适用<中华人民共和国担保法>若干问题的解释》第三十三条规定，主合同对主债务履行期限没有约定或者约定不明的，保证期间自债权人要求债务人履行义务的宽限期届满之日起计算。

2016年7月9日，吴楠向郭敏出具的借条，齐彬、王煜、王志超作为保证人在借条上签字按手印，借条上未约定保证时间，保证期间应自主债务履行期届满之日起六个月内要求保证人承担保证责任。

主债务履行期限应自郭敏提起诉讼起算，故齐彬、王煜、王志超承担的保证责任时效未过。

郭敏的上诉请求，本院予以支持。

综上所述，郭敏的上诉请求成立，本院予以支持。

依照《中华人民共和国合同法》第二百零六条、《中华人民共和国担保法》第二十六条、《最高人民法院关于适用<中华人民共和国担保法>若干问题的解释》第三十三条规定、《中华人民共和国民事诉讼法》第一百七十条第一款第二项规定，判决如下【裁判结果】一、撤销呼和浩特市玉泉区人民法院（2019）内0104民初1202号民事判决第二项；二、变更呼和浩特市玉泉区人民法院（2019）内0104民初1202号民事判决第一项为：吴楠于判决生效之日起十日内偿还郭敏借款16万元，齐彬、王煜、王志超承担连带清偿责任。

0引言随着经济全球化与新技术革命发展，国际竞争力的提升成为企业发展的客观要求和必然选择。

作为中国通信制造业的先锋企业，华为积极拓展国际市场、参与日益激烈的国际竞争，表现出较强的竞争力；但也遭遇一系列风险和危机。

华为全球竞争力的研究，既可扬长避短，也为我国企业国际竞争力的提升提供借鉴。

1波特竞争力钻石模型被称为“竞争力之父”的美国哈佛商学院学者迈克尔·波特（M.E.Porte ），通过国际化和全球化企业竞争力的研究，从系统地分析和观察中，创立了“波特四要素”竞争力分析模型，构建了一套国际学术界比较公认的比较优势分析评估系统，被用于分析研究和评估企业的竞争优势和全球竞争力。

该模型的核心内容，主要表现为制约和驱动企业竞争优势的四个核心要素，其一是指供给要素，包括基于生产运营的生产资料、土地等基础因素，以及新技术、高级人力资源等创新类因素，用于分析解释企业内部的生产和创新等核心因素；二是需求因素，主要指企业对国内外市场空间的满足度和匹配度，即市场对企业产品和服务的接受和需求度，是约束企业产品市场大小的重要指标；三是关联性产业和支持产业，包括企业的上下游产业，配套商的合作度，以及关联性产业，及其行业影响力，该因素用于分析评估企业的产业合作能力和环境；四是企业行业竞争状况，即同类企业间的竞争对手、显性或隐性竞争者等因素，用于分析企业国际化市场空间中，所处的竞争地位、竞争优势和竞争威胁。

该模型中，四个因素是互相关联、相互影响、相互约束的，共同构成一个产业内部竞争力关联机制，一个因素的变化，会导致其他因素的波动，从而引起整个系统的变化。

另外，还有外部环境的两个重要因素不可或缺，一个是“机遇”要素，偶发性或不确定的政治、经济、社会等环境变化，往往蕴含着市场和企业发展机会，如果好好利用，最终也可以转化为企业竞争力优势，反之也会导致企业失去竞争优势；另一个是“政府”要素，政府可用借助补贴、战略调整、市场监管、反垄断、产品标准与法规、政府采购等等，对上述企业内部系统形成约束性或激励，使四个因素随之发生变化，这些要素相互作用，构成完整的“钻石模型体系”（如图1）。

52□刘兰兰为了涨粉，她未经闺蜜同意，将闺蜜的隐私信息公布到网上，还歪曲事实“爆料”闺蜜是第三者。

闺蜜报警后，她受到行政处罚，删除了相关视频与文字，但并未澄清事实，闺蜜仍持续遭受网络暴力。

闺蜜愤而起诉，以侵犯名誉权、隐私权为由，要求她赔礼道歉并支付精神损害抚慰金—擅自公开他人隐私信息，被行政处罚后仍要承担民事责任恋爱遭遇渣男，女孩向网红闺蜜求助，却被闺蜜利用2021年7月，大学毕业的何婷入职陕西省延安市一家广告公司，不久便和上司肖伟成了恋人。

但因公司禁止办公室恋情，两人没有公开关系。

恋爱3个月后，一个偶然的机会，何婷发现肖伟并非单身，气得大骂他是骗子，并提出分手。

肖伟承认自己已婚，但哄骗何婷：“我和她早就没感情了，早晚会离婚。

你别胡闹，让单位知道了很麻烦。

”何婷怒不可遏：“你欺骗了我的感情，还说我胡闹，简直无耻！”肖伟见软的不行，便开始威胁：“你别忘了自己的身份。

还有，你的这些照片也不想让别人看到吧！”说着把手机伸到何婷面前，上面有她的不雅照。

那天晚上，何婷失魂落魄地去找闺蜜吴楠，向她倾诉自己“被小三”的事。

吴楠是一名网络主播，征得何婷同意后，在直播中讲述了何婷的遭遇，还将何婷与肖伟的微信聊天记录以及何婷手持工作证的照片抹去隐私信息后在直播中做了展示。

不少网民对何婷的遭遇既同情又愤慨，直播一结束就有人转发了直播视频。

事件迅速发酵，网民根据何婷工作证上的标志检索到何婷所在公司，纷纷在公司网站留言，要求公司彻查此事，开除肖伟。

迫于舆论压力，公司最终以肖伟严重损害公司形象为由将他辞退。

但此事对何婷也造成了不良影响：同事认为她不好相处，拒绝与她合作；领导认为她影响了公司声誉，对她的工作百般挑剔。

见识了网络暴力的可怕之后，何婷恳求吴楠：“你帮我把事情解决了，我很感谢。

以后就不要再发布有关我的信息了。

”没想到吴楠当场拒绝，还指责何婷没良心：“你刚利用完我，就想把我一脚踢开？”何婷感觉莫名其妙，两人不欢而散。

胡峰与吴楠房屋买卖合同纠纷二审判决书【案由】民事合同、无因管理、不当得利纠纷合同纠纷房屋买卖合同纠纷【审理法院】山东省济南市中级人民法院【审理法院】山东省济南市中级人民法院【审结日期】2020.05.08【案件字号】(2020)鲁01民终3570号【审理程序】二审【审理法官】闫振华亓雪飞尹逊航【审理法官】闫振华亓雪飞尹逊航【文书类型】判决书【当事人】胡峰;吴楠【当事人】胡峰吴楠【当事人-个人】胡峰吴楠【代理律师/律所】孙冰山东金仑律师事务所;孔祥开山东金仑律师事务所【代理律师/律所】孙冰山东金仑律师事务所孔祥开山东金仑律师事务所【代理律师】孙冰孔祥开【代理律所】山东金仑律师事务所【法院级别】中级人民法院【字号名称】民终字【原告】胡峰【被告】吴楠【本院观点】本案系房屋买卖合同纠纷，二审争议焦点是胡峰与吴楠之间的房屋买卖行为是否为虚假交易。

【权责关键词】合同诚实信用原则证据不足自认新证据证明责任（举证责任）诉讼请求维持原判发回重审【指导案例标记】0【指导案例排序】0【本院查明】二审中，当事人没有提交新证据。

本院对一审查明的事实予以确认。

【本院认为】本院认为，本案系房屋买卖合同纠纷，二审争议焦点是胡峰与吴楠之间的房屋买卖行为是否为虚假交易。

胡峰主张涉案房屋买卖为虚假买卖，其为涉案房屋的实际产权人，吴楠则主张涉案房屋买卖协议合法有效，其已支付了全部房款并取得了房屋产权证书。

根据《最高人民法院关于适用〈中华人民共和国民事诉讼法〉的解释》第九十条规定，“当事人对自己提出的诉讼请求所依据的事实或者反驳对方诉讼请求所依据的事实，应当提供证据加以证明，但法律另有规定的除外。

在作出判决前，当事人未能提供证据或者证据不足以证明其事实主张的，由负有举证证明责任的当事人承担不利的后果"，本案中，胡峰虽主张涉案的房屋买卖为虚假交易，但未能提交证据予以证实，故胡峰应承担举证不能的不利后果，一审法院对此认定并无不当，本院予以确认。

吴楠、沈阳庞大弘盛置业有限公司商品房销售合同纠纷民事二审民事判决书【案由】民事合同、无因管理、不当得利纠纷合同纠纷房屋买卖合同纠纷商品房销售合同纠纷【审理法院】辽宁省沈阳市中级人民法院【审理法院】辽宁省沈阳市中级人民法院【审结日期】2022.05.23【案件字号】(2022)辽01民终4433号【审理程序】二审【审理法官】杨帆谢宏吕长辉【审理法官】杨帆谢宏吕长辉【文书类型】判决书【当事人】吴楠;沈阳庞大弘盛置业有限公司【当事人】吴楠沈阳庞大弘盛置业有限公司【当事人-个人】吴楠【当事人-公司】沈阳庞大弘盛置业有限公司【代理律师/律所】李明哲辽宁卓政律师事务所;张桐溪辽宁卓政律师事务所;路畅辽宁联胜律师事务所;韩冬虹辽宁联胜律师事务所【代理律师/律所】李明哲辽宁卓政律师事务所张桐溪辽宁卓政律师事务所路畅辽宁联胜律师事务所韩冬虹辽宁联胜律师事务所【代理律师】李明哲张桐溪路畅韩冬虹【代理律所】辽宁卓政律师事务所辽宁联胜律师事务所【法院级别】中级人民法院【原告】吴楠【被告】沈阳庞大弘盛置业有限公司【本院观点】上诉人与被上诉人签订的《商品房买卖合同》系双方当事人的真实意思表示，且内容未违反国家法律、行政法规的强制性规定，合法有效，双方均应按合同约定履行各自义务。

【权责关键词】撤销合同合同约定证据不足新证据诉讼请求缺席判决维持原判发回重审【指导案例标记】0【指导案例排序】0【本院查明】本院对一审查明的事实予以确认。

【本院认为】本院认为，上诉人与被上诉人签订的《商品房买卖合同》系双方当事人的真实意思表示，且内容未违反国家法律、行政法规的强制性规定，合法有效，双方均应按合同约定履行各自义务。

上诉人主张案涉房屋属于标准户型，实际“窗体大小”与合同约定不符，即主卧宽和高应为1.8米，实际宽为2.1米，高为1.4米。

经查，有上诉人签字确认的中央学府高层特殊户型告知确认单明确载明案涉房屋主卧设备平台处有造型壁柱，北侧次卧与连廊距离为4米左右，可能会产生视线遮挡等影响，合同中对于“窗台高度”标注的特殊户型亦包括案涉房屋，且双方签订的商品房买卖合同及附件中并未明确约定案涉房屋的窗户及外延部分的内容，故上诉人提交证据不足以证明案涉房屋属于标准户型，一审对上诉人要求被上诉人对案涉房屋的窗户及外延部分与合同约定不符部分进行整改并据此要求赔偿损失的诉讼请求未予支持并无不当。

国乒现在有6对情侣
近几年，中国国乒队的成就可谓举世瞩目，几乎以一种实力碾压的方式成为羽毛球世界强队。

然而，他们身后的故事却很少被提及，而那就是他们背后的爱情戏。

国乒现在有6对情侣，他们的爱情故事听起来总是那么华丽，值得我们一起来回顾。

1. 陈梦与林丹：
这对情侣由2008年东京奥运会冠军陈梦和奥运会冠军林丹组成，在2006年相识，他们在国家队一起进行训练，此后相恋。

据报道，2012年他们结婚，2019年他们的女儿出生。

2. 张帅与蔡晔：
这对情侣最早在南昆山训练中结识，他们历经时间的考验，最终在2016年交往，2018年10月正式登记结婚，他们现在正在建立他们的家庭。

3. 赵芸蕾与马龙：
这对情侣于2006年首次认识，赵芸蕾于2013年加入国家队，马龙于2014年被国家队录取，他们在 2016年11月正式宣布恋爱，2018年举
办了传统的中国婚礼，现在他们有一只可爱的女儿。

4. 吴楠与丁宁：
这对情侣在国家队的比赛场中相识，他们以朋友的关系实现故事的开始，2018年他们恋爱成家后开始了他们的家庭生活。

5. 龚雪与刘成：
这对情侣在2008年认识，他们都是来自重庆的乒乓球运动员。

2017年3月，他们正式宣布了恋爱，2018年举行了仪式，成为一对家庭。

6. 钱清晨与赵芸蕾：
这对情侣在2013年认识，他们都是有才华的乒乓球高手，2016年正式登记结婚，目前他们已有一只可爱的女儿。

总的来说，众多的国乒情侣的爱情故事，令我们感受到两位爱侣间的真挚和爱情。

这些故事也鼓舞着他们在国家队更加坚强，希望他们再接再厉，在国乒走向更高峰。