高效RIPA组织、细胞裂解液使用说明

WB 实验步骤1 组织蛋白裂解（使用试剂盒：索莱宝高效RIPA 组织细胞裂解液，SIb-R0010；PMSF ） 使用方法：按照说明书，每25mg 组织样本+300uL RIPA+3uL PMSF ,放置于tube 中，使用剪刀剪碎，匀浆机匀浆，离心（4℃，15000 r ，20-30,min ），取上清。

2 蛋白定量（试剂盒：碧云天G250染色液，P0006-1） （1）在96孔板上进行加样。

第一列 第二列（2）加入200ul G250考马斯亮蓝，静置五分钟，使用酶标仪检测。

（3）酶标仪选定，检测吸光设置：波长是595nm ，3-5。

Shaking 设置：duration10s.(4) 根据标准曲线求出蛋白浓度，所有样本的蛋白使用DDW 稀释到同一浓度后与Lane Marker Loading Buffer/5x 蛋白示踪上样缓冲液/还原混合（混合比列按照说明书确定），混匀，掌上离心机离心。

（5）100℃水浴加热8min ，室温放置，冷却后使用或者-20℃储存待用。

3 制胶根据蛋白大小选择分离胶浓度 胶浓度大小 6% 8% 10% 12% 成分 H2O 5.3ml 4.6ml 3.9ml 3.3ml 30%丙烯酰胺 2ml 2.7ml 3.4ml 4.0ml 1.5M Tris 2.5ml 2.5ml 2.5ml 2.5ml 10%SDS 100ul 100ul 100ul 100ul 10%APS100ul100ul100ul100ulDDW(高压灭菌双蒸水) BSA(蛋白标准品) DDW 裂解后的蛋白 孔1 20ul 0ul 5ul 15ul 2 19ul 1ul 5ul 15ul 3 18ul 2ul 5ul 15ul 4 16ul 4ul 5ul 15ul 5 12ul 8ul 5ul 15u[ 6 8ul 12ul 5ul 15ul 7 4ul 16ul 5ul 15ul 80ul20ul5ul15ulTEMED 6ul 6ul 6ul 6ul浓缩胶4%H2O 2ml30%丙烯酰胺0.5ml1.5M TRIS 0.5ml10%SDS 40ul10%APS 30ulTEMED 4ul总体积3ml4 电泳，低电压80V跑至marker分离，后改成大电压（100-120V）电泳液Running bufferTris 3.03g甘氨酸18.77gSDS 1.0gDDW 1000ml5转膜：大电压100V，转膜蛋白是40KD以上蛋白，转膜时间（1.0胶）40min-50min；小电压90V，转膜蛋白小蛋白。

使 用 说 明 书◆RIPA裂解液◆目录号1912◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外RIPA裂解液目录号：1912目录编号包装单位191201 50ml191202 100ml产品介绍：RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。

RIPA裂解液的配方有很多种，本产品RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS 以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA 等多种磷酸酶抑制剂。

产品储存：4℃注意事项：1.裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

2.用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入leupeptin，aprotinin等其它抑制剂。

3.裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出，使用前应该37℃-60℃水浴重新溶解完全后回复到室温使用。

4.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）1.对于培养细胞样品：1)取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

2)对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。

按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。

用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

3)对于悬浮细胞，离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。

按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。

产品编号产品名称规格BL504A RIPA裂解液(强)100ml产品简介：该RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。

RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1%Triton X-100，1%sodium deoxycholate，0.1%SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。

可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。

由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

别名：RIPA Lysis Buffer使用说明：对于培养细胞样品：1、融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。

2、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。

按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。

按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

再用手指轻弹以充分裂解细胞。

充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

RIPA裂解液(强)提蛋白(2007-07-18 11:31:26)转载▼对于培养细胞样品：1. 融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。

按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。

按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

再用手指轻弹以充分裂解细胞。

充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注：裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

)4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。

然后同样离心取上清，用于后续实验。

直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

产品编号产品名称规格BL504A RIPA裂解液(强)100ml产品简介：该RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。

RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1%Triton X-100，1%sodium deoxycholate，0.1%SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。

可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。

由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

别名：RIPA Lysis Buffer使用说明：对于培养细胞样品：1、融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。

2、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。

按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。

按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

再用手指轻弹以充分裂解细胞。

充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

RIPA裂解液(强)产品简介：碧云天生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。

RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

关于不同的RIPA裂解液以及碧云天生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：/lysis-buffer.htm 。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。

可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/ P0012S)测定蛋白浓度。

由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

保存条件：-20℃保存，一年有效。

注意事项：为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。

可以适当分装后使用。

需自备PMSF。

PMSF(ST506)可以向碧云天订购。

裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

关于裂解液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：/lysis-buffer.htm 选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：对于培养细胞样品：1.融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

组织裂解液和细胞裂解液如何配制一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。

2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。

二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。

加入足够的冷的 PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。

在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。

2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。

3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。

4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。

如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。

5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。

4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。

ripa裂解液RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。

1.基本信息组成：50 mM Tris-HCl(pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40,0.1% SDS.(配有一支PMSF).使用RIPA裂解达到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。

由于含有较高浓度的去污剂，不能用Bradford法测定RIPA裂解后的蛋白浓度。

保存：4℃；避光2.简介RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。

RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考附录。

3.使用方法对于培养细胞样品：1. 融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

2.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。

按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。

按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

再用手指轻弹以充分裂解细胞。

充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混匀。

RIPA裂解液(强)产品简介：碧云天生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。

RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

关于不同的RIPA裂解液以及碧云天生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：/lysis-buffer.htm 。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。

可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/ P0012S)测定蛋白浓度。

由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

保存条件：-20℃保存，一年有效。

注意事项：为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。

可以适当分装后使用。

需自备PMSF。

PMSF(ST506)可以向碧云天订购。

裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

关于裂解液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：/lysis-buffer.htm 选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：对于培养细胞样品：1.融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-1683301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：RIPA裂解液(强)产品编号产品名称包装P0013B RIPA裂解液(强) 100ml产品简介：碧云天生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。

本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。

RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

关于不同的RIPA裂解液以及碧云天生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：/support/lysis-buffer.htm。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。

可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/ P0012S)测定蛋白浓度。

由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

包装清单：产品编号产品名称包装P0013B RIPA裂解液(强) 100ml—说明书1份保存条件：-20ºC保存，一年有效。

RIPA裂解液（强）产品简介：多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如去Triton、SDS、NP-40等。

RI PA裂解液（强）(Enhanced RIPA Lysis Buffer )，是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，裂解其强度大于NP-40裂解液(PS0010)、RIPA裂解液(中)(PS0011)。

所获得的蛋白质可以用于Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等，主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

产品组成：主要成分：主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40、sodium deoxycholate以及sodium Orthovanadate, β-glycerophosphate，sodium fluoride等多种酶抑制剂。

自备材料：1、高速离心机2、微量移液器3、PMSF，亦可采购Leagene的苯甲基磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)(PI0011)操作步骤（仅供参考）：(一)贴壁培养细胞1、取Leagene RIPA Lysis Buffer(强) 置于室温溶解混匀后，使用前取适当量的裂解液加入PMSF，使其最终浓度为1mM。

2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

3、按照6孔板每1孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入RIPA LysisBuffer 。

移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。

置于冰上或4℃裂解15～30min，通常裂解液作用于细胞1～3秒内，细胞就会被裂解。

通常6孔板每孔细胞加入150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。

4、10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

RIPA组织细胞裂解液使用说明RIPA（Radioimmunoprecipitation Assay）是一种经典的细胞裂解液，用于体外分析研究。

它通过破坏细胞膜结构和溶解细胞器膜来释放细胞内的蛋白质，并保护这些蛋白质不变性和稳定性。

1. 1 M Tris-HCl (pH 7.4)，这是缓冲液的最重要组分。

pH 7.4是维持蛋白质稳定性的最佳条件。

2.5MNaCl，这是一种高浓度的盐溶液，用于维持细胞内外的渗透平衡。

3.0.5MEDTA(pH8.0)，这是一种螯合剂，可与金属离子结合，防止细胞中的金属离子对蛋白质进行催化氧化。

4.10%NP-40，这是一种阴离子表面活性剂，具有良好的分散和乳化作用，有助于裂解细胞膜。

5.10%SDS，这是一种阴离子表面活性剂，用于溶解膜脂质和保持蛋白质的变性。

6. 1% sodium deoxycholate，这是一种胆汁酸衍生物，有助于裂解释放细胞器。

7. 1% Triton X-100，这是一种非离子表面活性剂，具有裂解细胞膜的能力。

8. 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)，这是一种蛋白质酶抑制剂，可保护蛋白质免受降解。

9. RIPA DTT（dithiothreitol）添加剂，用于还原RIPA缓冲液中的蛋白质和酶。

根据使用的具体实验目的，可以根据实验室的需要对以上配方进行微调。

在使用RIPA组织和细胞裂解液时，需要注意以下几点：1.充分冷藏和避光保存RIPA裂解液，并在使用前将其室温放置30分钟使其恢复到室温。

2.注意裂解液的体积与样本量的比例。

通常情况下，可以根据细胞数目和试管样本的比例使用1mL裂解液，用来裂解10^7个细胞。

3.细胞裂解液的裂解时间取决于样本的类型和使用的装置。

一般情况下，裂解液可以在4°C条件下裂解30分钟至1小时。

在裂解液中加入若干次轻微的震荡也有助于促进细胞的裂解。

4.在细胞裂解液孵育期间必须时常振摇或轻轻颠倒。

ripa裂解液成分RIPA裂解液成分解析RIPA（Radio Immuno-Precipitation Assay）裂解液是常用的细胞和组织裂解液，广泛应用于生化实验中。

它的主要作用是通过破坏细胞膜和核膜，释放细胞内的蛋白质和其他溶解性分子，用于进一步的分析和研究。

本文将对RIPA裂解液的主要成分进行详细解析。

1. 缓冲液RIPA裂解液中的缓冲液是维持裂解液pH值的关键成分。

一般使用Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液，能够在一定程度上稳定细胞裂解过程中的pH值，保证实验结果的准确性。

2. 盐类RIPA裂解液中常添加一定浓度的盐类，如氯化钠和磷酸二氢钠。

这些盐类可以提供离子强度，维持细胞裂解液的渗透压，有利于保持细胞内蛋白质的溶解状态。

3. 表面活性剂RIPA裂解液中通常添加非离子型表面活性剂，如Triton X-100或Tween-20。

这些表面活性剂可以破坏细胞膜的完整性，使细胞内容物释放出来。

同时，它们还能够改善裂解液的渗透性，促进细胞内溶质的扩散。

4. 蛋白酶抑制剂为了保护目标蛋白质免受蛋白酶的降解，RIPA裂解液中常加入蛋白酶抑制剂。

常用的蛋白酶抑制剂包括苯甲烷磺酰氟化物（PMSF）、氯化苯甲基磺酰氟（TPCK）和氯化苯甲基磺酰甲基（TLCK）等，它们能够抑制多种蛋白酶的活性。

5. 螯合剂为了保护目标蛋白质免受金属离子的影响，RIPA裂解液中常添加螯合剂。

EDTA是一种常用的螯合剂，它能够与金属离子形成稳定的络合物，防止金属离子对蛋白质的影响。

6. 胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂（PI）是一种特殊的蛋白酶抑制剂，能够抑制胰蛋白酶的活性。

在RIPA裂解液中加入PI可以有效地抑制细胞裂解液中胰蛋白酶的活性，防止其降解目标蛋白质。

7. 磷酸盐RIPA裂解液中的磷酸盐通常用于调节裂解液的pH值和离子强度。

磷酸盐可以提供缓冲能力，保持裂解液的稳定性，并且能够调节细胞裂解液的渗透压。

8. 辅助成分除了上述主要成分外，RIPA裂解液中还可能包含其他辅助成分，如甘油、甲基磺酰氯（MESNA）等。

高效RIPA组织/细胞裂解液使用说明货号：R0010规格：20ml/100ml本产品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml）保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20℃保存。

使用说明：如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1ml RIPA加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

混匀备用（PMSF现用现加）。

1、样品前处理：a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。

按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。

用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。

按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。

充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。

按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。

(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。

用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

注意事项：本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠：此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量SDS（1%），煮沸后离心测浓度。

本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。

ripa裂解液反复冻融法裂解细胞摘要：I.引言- 介绍ripa 裂解液反复冻融法II.实验原理- 解释ripa 裂解液的作用- 描述反复冻融法的步骤III.实验步骤- 详细描述实验操作流程IV.实验结果- 描述实验中观察到的现象- 分析实验结果V.结论- 总结实验结果- 提出实验的意义和价值正文：I.引言RIPA 裂解液是一种常用于实验室的裂解液，可以有效地裂解细胞，释放细胞内的蛋白质等物质。

而反复冻融法是实验室中常用的一种细胞破碎方法，通过多次冻融循环，使细胞结构破碎，释放出细胞内的物质。

本文将介绍使用RIPA 裂解液进行反复冻融法裂解细胞的方法和步骤。

II.实验原理RIPA 裂解液是一种含有蛋白酶抑制剂和核酸酶抑制剂的裂解液，可以防止细胞内的蛋白质和核酸被降解。

反复冻融法是将细胞先冻存于-20°C，然后再置于室温下进行融解，如此反复冻融多次，使细胞内的冰晶形成和剩余细胞液的盐浓度增高，引起细胞溶胀和细胞结构破碎。

III.实验步骤1.取适量RIPA 裂解液放入冰浴中预冷。

2.将细胞悬液放入冻存管中，并放入-20°C 的冰箱中冻存1 小时。

3.将冻存管取出，放入室温下进行融解，待细胞完全融化后，再次放入冰浴中冷却5 分钟。

4.重复冻融循环3-5 次，直到细胞结构破碎。

5.将细胞裂解液收集到离心管中，离心10 分钟，弃上清，收集沉淀。

IV.实验结果经过反复冻融法处理后，细胞结构已经破碎，细胞内的蛋白质和核酸等物质已经释放到细胞裂解液中。

此时，可以进行后续的实验操作，如Western Blot、RNA 提取等。

V.结论RIPA 裂解液反复冻融法是一种有效的细胞破碎方法，可以快速、高效地裂解细胞，释放细胞内的蛋白质和核酸等物质。