微生物限度检查仪操作规程

1.目的建立微生物限度检查法操作规程。

2.适用范围本规程适用于原辅料、包装材料、制剂（非规定灭菌）、药妆、空气洁净℃等各类微生物限度检查。

3.编制依据《中国药品检验标准操作规范》2010年版《中华人民共和药典》2010年版二部药品微生物学检验手册4.责任4.1 QC质检员对本规程的实施负责。

4.2 QC主管对本规程的有效执行承担监督检查责任。

5.正文5.1微生物限度检查系指非规定灭菌制微生物污染限度的一种检查方法，包括活菌数及控制菌的检查。

5.2药品生产洁净室（区）的空气洁净℃划分为四个级别，不同级别间微生物最大允许数、尘粒最大允许数不同。

5.3微生物限度检查室和操作人员的一般原则5.3.1检查的全部过程均应严格遵循无菌操作，防止再污染。

5.3.2进入微生物限度检查室的操作人员，面部暴露部位不得化妆；患传染病及体表有伤口人员禁止入内。

5.3.3操作人员进微生物限度检查室前应在缓冲间用规定的消毒液进行手部消毒，更衣，戴帽，戴口罩及换鞋，进入微生物限度检查室后，再用75%酒精消毒手部。

5.3.4使用净化工作台前，应先用规定的消毒液（3月轮换一次）擦工作台与各操作开关，然后开紫外灯及空气过滤器30分钟后，方可使用。

物品通过传递窗进入。

5.4培养基及供试液的制备5.4.1培养基的制备方法5.4.1.1细菌培养基：称取营养琼脂培养基34g，加1L纯化水溶解，115℃灭菌，40分钟后，备用。

5.4.1.2霉菌培养基：称取虎红琼脂培养基30g，加1L纯化水溶解，115℃灭菌，40分钟后，备用。

5.4.1.3控制菌的培养（详见中华人民共和国药典2010版二部）。

5.4.2器皿的准备：直径90ml的平皿，10ml、1ml的刻℃吸管，200ml的三角烧瓶及胶塞等，均应包扎好后，再经121℃高压蒸气灭菌30分钟。

5.4.3供试液的制备方法：5.4.3.1液体供试品：取供试品10ml，加入90ml的稀释剂中，混匀，作为供试液；5.4.3.2固体、半固体或粘稠液供试品：称取供试品10g，置pH7.0蛋白胨-氯化钠无菌缓冲溶液100ml中，混匀后，作为供试液。

SOP/QC(09)001－01纯化水微生物限度检查法操作规程文件类别：标准操作规程审批表江西中兴汉方药业有限公司1.目的规范纯化水微生物检查的操作方法，确保药品检验的准确性。

2.适用范围适用于纯化水的微生物检查。

3.责任人QC：负责按此规程执行。

4.程序4.1 概述本规程是以营养琼脂培养基作为细菌培养基，采用平板表面涂布法测定纯化水菌落总数。

其操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。

4.2 仪器与用具电热恒温培养箱（30～35℃）霉菌培养箱（23～28℃）超净工作台无菌双碟移液管0.45μm微孔滤膜过滤器抽滤泵4.3 试药与试剂营养琼脂培养基玫瑰红钠培养基pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液4.4 纯化水的取样4.4.1取样时，须先开启取样阀门，用工艺用水本身冲冼取样口，约冲水1升以上，而后以无菌具塞10ml试管取水，取水量约为试管高度的1/2～2/3。

4.4.2检测周期：见“工艺用水监测规程（SMP-ZL-016-）”规定。

4.4.3取样后的水样应立即检验。

4.5 检查方法量取9ml纯化水置盛有90ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的锥形瓶中混匀，作为供试液；量取供试液10 ml供试液置安装好的无菌抽滤装置，进行过滤。

用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板上，盖好，倒置培养皿，分别将营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板置电热恒温培养箱（30～35℃）及霉菌培养箱（23～28℃）中培养。

细菌培养3天后进行菌落计数，霉菌培养5天后进行菌落计数。

计数结果即为每ml水中含细菌及霉菌的菌落数。

4.6 结果判定每1ml纯化水中的细菌数及霉菌数之和应不得过100个。

5 相关记录6变更履历表。

微生物限度检测是对产品中微生物数量进行定量或定性检测的过程。

以下是一般的微生物限度检测操作步骤：
1. 准备工作：
-清洁和消毒实验室设备、试剂瓶和工作台等。

-准备所需的培养基、培养基平板和培养基管等。

2. 样品处理：
-取得待检样品，确保样品的采集和保存符合规范和要求。

-如果需要，将样品稀释到适当的浓度，以便在培养基上形成可数的菌落。

3. 培养基制备和接种：
-准备所需的培养基，并按照说明书的要求进行制备。

-将适量的培养基倒入无菌平板或管中，并在适当温度下固化。

-在培养基表面均匀涂布待检样品，或将待检样品滴于培养基管中。

4. 培养和孵育：
-将培养基平板放置在恒温培养箱中，按照规定的时间和温度进行培养。

-监控培养过程中的温度和湿度，确保适宜的条件。

5. 菌落计数和鉴定：
-培养结束后，观察培养基上的菌落情况。

-使用显微镜进行菌落计数和鉴定，根据形态、颜色、大小等特征确定菌落类型。

6. 结果分析和报告：
-根据菌落计数和鉴定结果，判断样品的微生物限度是否符合规定的标准。

-撰写检测报告，将结果详细记录并汇总，包括样品信息、检测方法、结果和结论等。

以上是一般微生物限度检测的操作步骤。

具体的操作可能会因实验室和产品类型而有所不同，需要根据相关标准和方法进行调整和执行。

在进行微生物限度检测时，应严格遵守实验室的操作规程和安全要求，确保检测结果的准确性和可靠性。

1 目的规范微生物限度检查操作。

2 适用范围适用于微生物限度的检查。

3 职责质量检定部人员严格按本SOP操作。

4 工作程序4.1 仪器4.1.1 超净工作台4.1.2 微生物检测系统4.2 试剂所用培养基及缓冲液均按《中华人民共和国药典》2005版三部要求进行配制。

玫瑰红钠培养基、营养琼脂培养基4.3 试验方法采用薄膜过滤法4.4试验前准备试验过程中所有用的器材都应进行灭菌后方可使用；超净工作台使用前需进行紫外灭菌30min。

4.5 试验步骤4.5.1 将样品加入薄膜过滤器的滤杯中4.3.1.3 供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响4.3.1.4 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。

4.3.1.5 检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告。

4.3.2 检验量4.3.2.1 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。

4.3.2.2 除另有规定外，一般供试品的检查量为10g或10ml；化学膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。

4.3.3 供试液的制备供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。

供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。

4.3.3.1液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。

油剂可加入适量的无菌聚山梨脂80使供试品分散均匀。

水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

4.3.4 细菌、霉菌及酵母菌计数4.3.4.1 检查法薄膜过滤法采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45um，直径约为50mm。

选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。

滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。

使用时，应保证滤膜再过滤前后的完整性。

微生物限度检查标准操作规程一、引言。

微生物限度检查是指在制药生产过程中，对原料药、辅料、中间体、制剂等药品进行微生物检查的一项重要工作。

微生物限度检查的目的是为了保证药品的质量和安全，防止因微生物污染而引起的药品变质和危害患者健康的风险。

本操作规程的目的是规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果准确可靠。

二、适用范围。

本操作规程适用于制药企业进行微生物限度检查的操作人员，包括检验员、操作人员等。

三、术语和定义。

1. 微生物限度，指药品中允许存在的微生物的最大数量，通常以菌落形成单位（CFU）或细菌总数来表示。

2. 微生物限度试验，是指对药品中的微生物进行检查的一种实验方法，包括细菌总数、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌等指标。

3. 标准菌株，指已经鉴定并保存在实验室中的具有代表性的微生物菌株。

四、操作流程。

1. 样品准备。

（1）取样品，按照规定的取样方法，从所检查的药品中取得代表性样品。

（2）样品处理，根据检测要求，对样品进行必要的处理，如稀释、均质等。

2. 培养基制备。

（1）准备培养基，根据检测要求，准备所需的培养基，包括琼脂培养基、液体培养基等。

（2）灭菌处理，对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，确保培养基的无菌状态。

3. 菌种接种。

（1）接种方法，根据检测要求，选择适当的接种方法，包括平板法、涂布法等。

（2）接种数量，根据微生物限度试验的要求，按照规定的接种数量接种标准菌株。

4. 培养条件。

（1）温度控制，根据不同的微生物菌种，控制培养的温度，通常为30-35摄氏度。

（2）培养时间，根据微生物限度试验的要求，培养一定的时间，通常为24-48小时。

5. 菌落计数。

（1）观察菌落，根据培养基上的菌落形成情况，进行菌落计数。

（2）结果判定，根据菌落计数的结果，判定样品中微生物的数量是否符合规定的限度要求。

五、质量控制。

1. 内部质量控制，每批次微生物限度试验前，进行内部质量控制，确保实验条件的稳定性和可靠性。

建立微生物限度检查法标准操作规程，规范操作，保证结果的准确性。

成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。

微生物限度检验人员本检验操作规程依据中国药典 2022 年版四部《通则 1105 非无菌产品微生物 限度检查：微生物计数法》和《通则 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查 法》进行检查。

1、微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

2、计数方法 本法包括平皿法、薄膜过滤法。

3、计数培养基合用性检查和供试品计数方法合用性检查 供试品微生物计数中所 使用的培养基应进行合用性检查。

供试品的微生物计数方法应进行方法合用性试验， 以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。

4、菌种及菌液的制备4.1 试验用菌株的传代次数不得超过 5 代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第 0 袋)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。

计数培养基合用性检查和计数方法合用 性试验。

4.2 菌液制备 按规定培养各试验菌株。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽 孢杆菌、 白色念珠菌的新鲜培养物， 用 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或者 0.9%无菌 氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入 3-5ml 含 0.05% (ml/ml )聚山梨酯 80 的 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或者 0.9%无菌氯化钠溶液， 将孢子洗脱。

采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含 0.05% (ml/ml )聚xxxxxxx 中药饮片厂ZL ·SOP ·05 ·062-01 页 数 制定日期 年 月 日 修订日期 审核日期 年 月 日 颁发部门 批准日期 年 月 日 生效日期 质量管理部、质量控制科 编号制定人审核人批准人分发部门 共 9 页 年 月 日 年 月 日质量管理部山梨酯80 的PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或者0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程1 目的明确微生物限度检查-控制菌检查法的过程，保证产品质量。

2 适用范围检查非无菌制剂及其原、辅料等是否存在特定的微生物（如：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）, 从而判断是否符合相应的微生物限度标准。

3 定义无。

4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。

负责人：监督执行情况，审批最终结果。

5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。

5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

5.1.3 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。

5.2 检验量从一批中随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合后，从中抽取10g或10mL。

5.3 实验材料与用具5.3.1 混合后的待检品（供试品）、TSB培养基（9mL/管）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；5.3.2 铜绿假单胞菌实验用材料：铜绿假单胞菌菌悬液（≤100cfu/mL）、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、1%二盐酸N,N-二甲基对苯二胺试液（即用即配）；5.3.3 金黄色葡萄球菌实验用材料：金黄色葡萄球菌菌悬液（≤100cfu/mL）、甘露醇氯化钠琼脂培养基；5.3.4 用具：培养皿、接种环、洁净滤纸片、无菌玻棒。

5.4 供试液制备5.4.1 取供试品和pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以1:10稀释成供试液。

5.4.2 必要时，用统一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释；也可用混合的供试品原液作为供试液。

5.5 增菌培养5.5.1 供试品组：取1mL供试液，接种至9mL的TSB中，混匀，共接种2管。

5.5.2 阳性对照：取1mL菌液，与供试液同法操作，接种至9mL的TSB中，混匀，接种1管。

5.5.3 阴性对照：取1mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，与供试液同法操作，接种至9mL 的TSB中，混匀，接种1管。

微生物限度检查操作规程（ISO13485-2016/YYT0287-2017）1.0目的规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限检查符合ChP2015规定。

2.0适用范围适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。

3.0引用/参考文件ChP2015实用药品微生物检验检测技术指南《取样及留样管理规程》4.0职责质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS 调查。

5.0程序5.1仪器用具高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、三角瓶、培养皿、胶塞、移液枪、微型台秤或电子天平、微限检查虑架、酒精灯、镊子、0.22μm 滤膜等。

5.2培养基、稀释液及试剂（均已经121℃，15min灭菌处理）胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、pH7.0NaCl-蛋白胨缓冲液、无菌生理盐水、R2A琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基（TSB）、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基等。

5.3检查5.3.1纯化水微生物限度检查5.3.1.1样品准备微生物QC手用75%酒精消毒后，将采样口周围进行消毒，打开采样口阀门使水自流至少5秒后用灭菌三角瓶或者无菌取样袋快速取样至少10ml。

打开阀门后在需要时仍可以使用消毒剂进行再次消毒后取样。

取样结束后，迅速用胶塞将三角瓶封口，装于取样箱内转移至微生物实验室进行检验，样品转移过程中特别注意污染防护。

样品如不能立即检测，可以在2-8℃条件下最长保存8h。

5.3.1.2实验室准备实验前将相关试剂、仪器、设备、耗材等转移进超净工作台或者传递窗内，开启实验室与超净台送风，调节超净台风速达到0.36-0.54m/s后开启超净台、微限室、更衣间、缓冲间、传递窗紫外灯，保持30min。

5.3.1.3微限检查操作微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进行更衣、消毒后进入实验室关闭紫外灯后准备开始试验。

——————————文件类别：技术标准 1/25文件名称微生物限度检查法(二部)检验标准操作规文件编号：09T-I636-01 起草人审核人批准人日期：日期：日期：颁发部门：质量管理部生效日期：分发部门：质量控制科1.目的：建立微生物限度检查法(二部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。

2.依据：2.1.《中华人民共和国药典》2010年版二部。

3.范围：适用于所有用微生物限度检查法(二部)测定的供试品。

4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。

5.正文：5.1.简述：5.1.1. 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。

检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

5.1.2. 微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

5.1.3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。

5.1.4.除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃。

5.1.5.检验结果告以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。

5.2. 检验量。

5.2.1.检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml 或cm2）。

5.2.2.除另有规定外，一般供试品的检验量为10 g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。

要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。

5.2.3.检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。

微生物限度检查标准操作规程1 目的与适用范围本规程规定了微生物限度检查方法和操作要求。

本规程适用公司所需进行微生物限度的检查。

2 职责质量保证部负责本规程的实施。

3 内容3.1 引用标准：《中国药典》2010年版二部。

3.2 药品微生物限度检查法总则3.2.1 抽样3.2.1.1 供试品一般按批号随机抽样。

3.2.1.2 一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。

3.2.1.3 抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应选有疑问的样品，但因机械损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。

3.2.2 供试品保存供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损伤或繁殖。

3.2.2.2 供试品在检验之前，应该保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。

3.2.3 检验3.2.3.1 供试品检验项目按《中国药典》2010年版二部微生物限度标准确定。

3.2.3.2 检验的全过程，均应严格遵守无菌操作，严防再污染。

3.2.3.3 除另有规定外，供试品制备成供试液后，应在均匀状态取样。

3.2.3.4 制成供试液后，应该在60分钟内注皿操作完毕。

3.2.4 培养3.2.4.1 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为36℃±1℃。

3.2.5 复检3.2.5.1 菌数测定不合格者应复检，控制菌检查以一次检出为准，不再复试，但应保留检出菌株一个月备查。

3.2.5.2 复试项目以不合格项目为准，作单项复试。

3.2.5.3 复试需另取同批号样品，复试2次。

3.2.5.4 复试报告，以3次测定结果的平均值报告。

3.2.6 检验报告3.2.6.1 检验报告以1g、1ml或10cm2为单位。

3.2.6.2 测定菌数报告，依3.10.2.4菌数报告规则报告。

微生物限度检查操作规程1.0目的规范微生物限度检查所用的培养基、检查方法、操作步骤、结果分析，以便对检品作出正确的微生物学评价。

2.0范围本公司检品的微生物限度检查。

3.0职责QC主管和QC检验员对本标准负责。

4.0参考或引用文件《中华人民共和国药典》(2015年版)《药品生产质量管理规范》2010年版5.0内容5.1简述：微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

5.2药品微生物限度检查法总则：5.2.1抽样：5.2.1.1供试品一般按批号随机抽样。

5.2.1.2抽样量一般为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。

5.2.2供试品保存：5.2.2.1供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件不当而引起致死、损伤或繁殖。

5.2.2.2供试品在检验之前，应该保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。

5.2.3 培养基及其制备方法：5.2.3.1 胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基等照各自说明书上配制方法制备。

5.2.4 供试品的检验量：5.2.4.1 一般供试品检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重的或微量包装的供试品检验量可酌减。

要求检查沙门氏菌的供试品，其检验量为20g。

5.2.4.2 供试品须取自2个以上的包装单位。

5.2.5 计数培养基适用性检査和供试品计数方法适用性试验5.2.5.1 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

5.2.5.2 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。

5.2.5.3 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。

5.2.5.4 菌种：5.2.5.4.1 试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

1. 目的：建立微生物限度检查法标准操作规程2. 范围：适用于原辅料及成品的微生物限度检查。

3. 责任人：QC负责实施，QC主管负责监督。

4. 程序：4.1 检验依据《中华人民共和国药典》2005年版一部附录P704.2 检验规程4.2.1 微生物限度检查法总则4.2.1.1微生物限度检查法系指检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的方法。

检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌的检查。

4.2.1.2微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

4.2.1.3供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。

4.2.1.4除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23℃～28℃，控制菌培养温度为35～37℃。

4.2.1.5检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告。

4.2.2 供试品的检验量：检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。

除另有规定外，一般供试品检验量为10g 或10ml ；中药膜剂为50cm2,贵重药品、微量包装药品检验量可以酌减。

要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加10g或10ml。

检验时，应从2 个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4 丸，膜剂还不得少于4片。

一般应随机抽取不少于检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。

4.2.3供试液的制备按供试品的理化特性与生物学特性可采取适宜的方法制备供试液。

供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。

供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。

4.2.3.1液体供试品取供试品10ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。

油剂可加适量无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。

水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

纯化水微生物限度检查标准操作规程1目的规定纯化水微生物限度检查操作。

2适用范围本文件适用于纯化水微生物限度检查操作。

3职责微生物限度检查操作人员。

4微生物限度检查方法纯化水采用薄膜过滤法进行检查。

滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。

5内容5.1设备洁净工作台、恒温培养箱（30~35℃）、恒温水浴锅、电热干燥箱（250~300℃）、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。

5.2仪器及器皿5.2.1薄膜过滤器、放大镜、显微镜。

5.2.2玻璃器皿：蓝盖试剂瓶（250ml）、培养皿（90mm）、吸管（l0ml分度0.l）、载玻片、盖玻片。

玻璃器皿用前应洗涤干净无残留抗菌物质。

吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管桶内或用牛皮纸包好。

玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。

5.3用具5.3.1大、小橡皮胶头（放于干净带盖的容器中，并应定期用75%乙醇溶液浸泡）。

纯化水微生物限度检查标准操作规程5.3.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。

也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。

5.3.3酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、试管架、无菌滤杯、无菌滤膜、打火机、记号笔、接种环、灭菌抹布等。

5.4消毒液5.4.10.1%苯扎溴铵溶液（供洗手、擦拭操作台面用）。

5.4.275%乙醇溶液5.4.33~5%来苏尔溶液5.5培养基R2A琼脂培养基5.5.1灭菌前后应对培养基的pH值进行校验。

5.5.2配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤灭菌后使用。

5.5.3培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。

包装时，塞子必须塞紧以免松动或脱落造成染菌。

5.5.4培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。

5.5.5灭菌后的培养基在2~8℃处保存备用，放置时间不能过长，以免水分散失及染菌。

已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用。

1. 主题内容为了保证水的微生物限度检查法的正确操作，特制订本文件。

2. 适用范围适用于水的微生物限度检查法的操作。

3.责任本文件由QC负责起草，QC主管负责审核，质量部长负责批准。

QC人员负责本文件的执行。

4.内容4.1.简述微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受微生物污染程度的方法。

检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

细菌、霉菌和酵母菌计数除另有规定外均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一。

4.2. 设备要求4.2.1. 微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统，应在洁净度100级的单向流空气区域内进行，其环境的洁净度为10000级。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。

4.2.2.阳性菌试验应另设单独的净化工作台，不得在供试品检验用的无菌室内或净化工作台上操作。

4.3. 取样4.3.1. 在各取水口用已灭菌好的封闭的250ml 空三角瓶取水，并将瓶子做上标记或贴上标签，标明日期和取样点名称。

4.3.2. 取样前洗手并消毒。

4.3.3. 将取样阀消毒。

4.3.4. 打开阀门，放水3~5分钟。

4.3.5. 已灭菌好的封闭的空三角瓶在取水前用75％的酒精棉球擦拭外壁。

4.3.6. 用待检测的水淋洗检验用取样瓶和瓶塞3次，每取样点取2瓶,共约1000ml.4.3.7. 微生物检验应在取样后的1h内，进行，否则将样品冷藏并在4h内进行检验。

4.3.8. 待检验的水在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。

包装已开启的样品不得作为供试品。

4.4. 试验准备4.4.1.将供试品及所有已灭菌的玻璃器皿经传递窗移至无菌室内。

编号后将全部外包装（牛皮纸）去掉。

4.4.2. 开启紫外杀菌灯后，操作人员用肥皂洗手，进入缓冲间，换工作鞋。

再用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。

1目的规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。

2依据《中国药典》2015版。

3范围本标准适用于微生物限度检验。

4责任中心化验室负责人：对本规程的实施负责。

中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作。

5程序5.1执行标准：《中国药典》2015版。

5.2抽样：照《取样标准操作规程》进行。

6内容6.1需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（MPN法）。

检查时，按已验证的计数方法进行供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。

6.1.1设备、仪器及用具6.1.1.1设备微生物限度检测室、净化工作台、生化培养箱（30〜35£）、生化培养箱（20〜25£）、电热恒温水浴锅、烘箱、脉动真空灭菌柜、紫外灯等。

6.1.1.2仪器及器皿显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液枪及吸头、薄膜过滤器等。

6.1.1.3用具大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。

6.1.2试液6.1.2.1消毒液A.0.1%新洁尔灭溶液B.75%乙醇溶液6.1.2.2稀释液、试剂及配制A. pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、无水磷酸氢二钠5.77g、氯化钠4.3g、蛋白胨1.0g,加纯化水1000ml，微温溶解，滤清，分装，1210C灭菌15分钟。

B.聚山梨酯80C.无菌十四烷酸异丙酯D. pH6.8无菌磷酸盐缓冲液6.1.3培养基胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基6.1.4操作方法6.1.4.1试验前准备6.1.4.1.1将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、移液枪吸头（1ml、10ml）、量筒、稀释液、培养基等移至传递窗内。

每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。

6.1.4.1.2开启微生物检测室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于30min。

1目的建立一个药品微生物限度检查的标准操作规程2范围用于本院制剂微生物的检验3责任药检人员、检验负责人4程序4．1准备无菌操作设备4.1.1无菌操作室：要求所有缓冲间应有盛有消毒液洗手盘，没有纤维脱落的光滑绸布及衣架挂勾，消毒鞋等，无茵室内应放置净化操作台及必要工作台，缓冲间也放置必要工作台，缓冲间及内间要安置紫外灯和照明灯。

无菌室内应备有盛0.1%新洁尔灭液或其它适宜消毒剂的吸管筒，酒精灯，消毒棉球及火柴等。

无菌程度要求：无菌室除定期用消毒剂消毒外，每次操作前用0.1% 新洁尔灭擦拭台面及一些可能污染的死角，用紫外灯杀茵，无菌室消毒完毕进行实验时应检查空气中沉降菌落数。

4.1.2无茵帽衣裤4.2制备培养基要求4.2.1制备好的培养基使用期限半个月，置冷暗处保存。

4.2.2培养基质量应符合微生物限度检查法规定。

4.3人员进无菌室前准备事项4.3.1在进入缓冲间前需将手洗净，以0.1%新洁尔灭或其它消毒剂浸漫泡数分钟，吹干，消毒液每次实验前新鲜配制。

4.3.2严格穿戴无菌衣、口罩与帽子、头发不得暴露，两袖口扎紧不露农袖，再用消毒液洗手，吹干。

4.3.3进入无菌室换二次消毒鞋。

4.4实验前准备工作4.4.1根据试验程序，在无菌室消毒前将用具物品移入无菌室。

样品在进入无菌室前应除去外包装，并用75%酒精棉球擦拭，消毒处理后携入净化台。

4.4.2无菌室开启紫外灯消毒30分钟。

4.4.3实验人员按4.3要求进入无菌室进行操作。

4.4.4凡进入无菌室后不应再外出取物品。

因此，在每次试验中所用物品必须计划好，并准备好备用物品。

微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

4.4.5对照菌液制备大肠杆菌CMCC(B)44102菌液，金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003菌液。

绿脓杆菌CMCC (B)10104菌液。

4.5操作方法4.5.1供试液的制备除另有规定外，每次最少应从分取两瓶(盒)以上取样共lOg或10m1。

1.目的：建立微生物限度检查法标准操作规程，规范微生物限度检查法检验操作，保证检验的质量。

2.范围：适于本公司原辅料、成品的微生物限度的检查操作。

3.责任：质量管理科、中心化验室、检验员。

4.检验依据：《中国药典》2015年版四部非无菌产品微生物限度检查法操作方法。

5.内容:需氧菌、霉菌和酵母菌计数及大肠埃希菌检测5.1 简述◆需氧菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污染程度的方法。

也是用于评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者的卫生状况的重要手段和依据。

◆需氧菌、霉菌和酵母菌计数均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一，也是目前国际上许多国家常用的一种方法。

以在琼脂平板上的需氧菌、霉菌和酵母菌形成一个独立可见的菌落为计数依据。

该法测定结果只反映在该规定条件下所生长的需氧菌、霉菌和酵母菌的菌落数。

不包括对营养、氧气、温度、pH 和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。

◆一个需氧菌、霉菌和酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而成。

因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数（colony forming unity，cfu），不应理解为需氧菌、霉菌、酵母菌的个数。

5.2 设备、仪器◆设备◆洁净实验室●微生物限度检查应有单独的洁净实验室，每个洁净实验室应有独立的净化空气系统。

●结构和要求洁净实验室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。

操作间与缓冲间之间应有样品传递舱，出入操作间和缓冲间的门不应直对。

洁净实验室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。

墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。

操作间内不应安装下水道。

洁净实验室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300LX。

●温度、湿度洁净实验室内的温度应控制在18～26℃，相对湿度最好在40％～60％。

●操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。

洁净度不应低于 C 级，局部洁净度为 A 级（或放置同等级净化工作台）。