试验三1兔的超数排卵、胚胎移植及早期胚胎观察
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简述超数排卵和胚胎移植兔子实验成功的经验
超数排卵和胚胎移植是一种常用的动物实验方法,特别是在研究生殖生物学和生殖医学方面。
下面是兔子实验成功的经验:
1. 控制超数排卵:为了增加胚胎移植的成功率,需要在特定时间给兔子注射药物,刺激卵巢排卵产生更多的卵子。
一般来说,宜在雌兔的发情期注射药物,使卵巢受到充分刺激,排卵数量增加。
2. 选择质量高的胚胎:移植前需要对胚胎进行筛选,选取品质最好的胚胎进行移植。
质量好的胚胎一般为外形圆滑,体积较大,色泽透明等。
3. 补充适当营养:给兔子适当补充营养物质,保障其身体健康,有助于提高胚胎移植成功率。
4. 胚胎移植:将经过筛选的胚胎移植到兔子子宫内,需要注意移植的时间、移植的部位和数量,一般来说移植时需要进行细致的操作,避免对兔子的身体造成创伤。
需要注意的是,动物实验需要符合国家和地方的相关法律法规,保障动物的权益和生命安全。
家兔超数排卵和体外受精技术的研究的开题报告【摘要】本文围绕家兔超数排卵和体外受精技术的研究展开,介绍了家兔的生殖特点和养殖情况,并综述了我们查阅的相关文献,阐述了超数排卵和体外受精的概念、方法和研究进展。
在此基础上,我们提出了将来研究的重点方向和期望结果。
【关键词】家兔;超数排卵;体外受精;研究进展;期望结果【正文】一、研究背景家兔是重要的经济动物之一,在养殖、科研和食品方面均有广泛应用。
然而,传统的交配方式限制了家兔育种和遗传改良的进程,因此需要寻求新的繁殖技术。
超数排卵和体外受精技术是一种重要的辅助生殖技术,能够显著提高种畜繁殖成功率和生殖效益。
在家兔、猪等动物中,也已经广泛应用。
本文旨在探讨家兔超数排卵和体外受精技术的研究进展和应用前景,为后续的研究提供参考。
二、家兔的生殖特点和养殖情况家兔是一个高繁殖力的动物,母兔在4-8个月龄时即可性成熟,每胎产仔3-12只,一年可繁殖4-5胎。
家兔一般采用配种的方式进行自然繁殖,但是,自然交配容易受环境、育种等因素影响,而且很难控制发情和受孕时间,不适合于遗传改良和精密育种。
近年来,人们开始关注超数排卵和体外受精技术在家兔繁殖中的应用。
超数排卵可以增加母兔的卵泡数目,提高精子和卵子的结合率,从而提高繁殖率;而体外受精则可以将精子和卵子在体外结合,避免了自然交配中可能遭受的环境、自然因素干扰。
三、超数排卵和体外受精技术的研究进展超数排卵指在特定药物或调节下,家兔在一个周期内排放多个卵子,从而提高受孕率。
常用的刺激药物有人绒毛膜促性腺激素(hCG)、鹅蛋白激素(LH)等,也可采用营养调节、生物制剂等方式。
体外受精(IVF)是一种通过将精子和卵子在体外人工结合的方法,制作出受精卵,再移植进母兔体内,实现繁殖。
体外受精的步骤主要包括卵母细胞采集、卵子培养、精子处理、体外受精、胚胎培养、胚胎移植等。
四、期望结果超数排卵和体外受精技术的运用可以显著提高母兔的孕育成功率和生殖效益,为种畜繁殖和育种提供了新的选择。
兔的超数排卵、早期胚胎观察及移植捉兔的方法在饲养管理兔时,常要捉兔。
在捉兔时要讲究方法,如果方法不当,往往会造成兔骨折和孕兔流产等不良后果。
兔的耳部都是软骨,不能承受其全身体重。
单拎提兔耳时,兔感到疼痛而挣扎,易造成耳根损坏,导致耳朵下垂。
兔的后腿发达,骨质松脆,善于跳跃,单拎后腿时,兔会剧烈挣扎,极易造成骨折和后肢瘫痪,对孕兔来说极易造成流产。
兔不习惯于头部向下,倒拎兔时兔的脑部充血,使头部血液循环发生障碍,严重时会导致兔死亡。
单抓背部皮肤将兔拎起,易使皮层和肌肉松开,同时会压迫和损伤内脏,这些捉兔方法都是不适宜的。
正确的方法是:对子兔,因其个体小、体重轻,可以直接抓其背部皮肤或围绕胸部大把松松抓起,切不可抓握太紧。
对幼兔,应悄悄接近,切不可突然接近,先用手抚摸,消除兔的恐惧感,静伏后大把连同两耳将颈肩部皮肤一起抓住,兔体平衡,不会挣扎。
对成年兔,方法同幼兔,但由于成年兔体重大,操作者需两手配合,一手捕捉,一手置于股后托住兔臀部,以支持体重。
这样既不会伤害兔也避免兔抓伤人。
母兔生殖系统母兔生殖系统包括卵巢、输卵管、子宫、阴道和外生殖器等部。
卵巢:是产生卵子和雌性激素的腺体,在腹腔内,位于肾脏后方,以短的卵巢系膜悬于第五腰椎横突附近的体壁上,左右各一,呈卵圆形,色淡红。
卵巢的形状大小,依年龄及性发育的情况而定。
幼兔的卵巢到面平滑,体较小,成年兔的卵巢表面平滑,体较小,成年兔的卵巢增大,长1.0— 1.7厘米,宽0.3—0.7厘米,重0.3—0.5克,表面有透明的小圆泡突出,形似桑椹,即为成熟的卵泡。
怀孕母兔的卵巢表面有时可见暗色的小丘,称为黄体。
输卵管:左、右各一条,是卵子通过及受精的管道。
其前端有漏斗的结构叫喇叭口,开口朝向氏放巢。
成熟的卵子从卵巢壁破裂出来后掉入喇叭口,由于输卵客壁肌肉的蠕动及管壁上纤毛的运动,使卵子沿输卵管几子宫方向运行。
兔子的输卵管全长约9—15厘米,后端接子宫。
子宫:子宫是胚胎生长发育的器官。
实验八兔的超数排卵和卵子、胚胎的收集一、目的1、了解促性腺激素对卵巢机能的作用;2、练习采集卵子或胚胎的方法;3、鉴别卵母细胞未受精卵和受精卵的形态。
二、材料空怀母兔若干只、FSH、LH、PMSG、注射器、针头、手术刀、外科剪刀、镊子、止血钳、瓷盆、烧杯、纱布、棉花、放大镜、显微镜、解剖显微镜、表皿、拨针、生理盐水、酒精、硅橡胶管。
三、方法步骤(一)母兔的超排处理超排处理由老师执行或由学生在本手术前四天下午执行,分如下三种处理:1、手术前四、三和二天,每天上下午各皮下注射FSH 25IU(或PMSG 70IU),手术前二天下午由公兔交配。
2、手术前四、三和二天,每天上下午各皮下注射FSH 25IU,前二天下午与FSH注射同时皮下注射LH 100IU(或HCG 50IU)。
3、手术前四天下午注射PMSG 75IU,前二天下午由公兔交配。
4、对照兔不作处理,也在手术前二天下午由公兔交配。
(二)卵子和胚胎采集1、采卵前准备将所用器皿摆开于瓷盘中,烧杯盛上生理盐水,剪一块与平皿大小的双层纱布放入平皿中,用生理盐水湿润。
2、手术(1)兔由耳静脉注入约5mL-10 mL空气致死。
(2)仰卧固定于手术台上。
(3)沿腹中线用毛剪前去被毛,然后用酒精棉花涂擦去毛的皮肤。
(4)用手术刀在腹正中线划开腹壁一个约l~2cm小口,然后用手术剪剪开整个腹壁(见图8-1),切开腹壁过程要小心,以免切破肠壁。
(5)找到生殖器宫,从子宫体一子宫角连接处剪下(包括卵巢),,小心剪除输卵管系膜、卵巢系膜和子宫韧带及其上的脂肪组织。
3、冲卵和胚胎(1)取卵巢肉眼或用放大镜观察卵巢卵泡发育和排卵情况。
凡突出于卵巢表面,半透明者为发育卵泡;下陷、有出血点的为已排卵。
记录观察结果。
(2)冲卵每两个同学冲洗一侧子宫角。
①10mL注射器套上7号针头,吸取10mL生理盐水;②用镊子取出子宫角输卵管,经轻牵拉两头使之平直;③见图8-2:将针头插入子宫角—输卵管连接处,缓慢注入冲洗液,将输卵管伞对准表面皿或离心管,让冲洗液流入其中,注完10mL冲洗液后,拨下注射器。
家兔超数排卵的初步试验石德顺【期刊名称】《广西科学院学报》【年(卷),期】1989(5)1【摘要】本研究对家兔超排各种处理方法的超排效果进行了比较,并对处理过程中外周血浆 P 及17β~E_2的变化情况进行了放射免疫测定。
当 FSH 用于兔的超排时,持续处理三天对于保证 FSH 的超排效果是必需的。
FSH 的超排效果显著优于PMSG(P0.05),仅胚胎收集数明显下降(P<0.05),这说明重复处理对受试兔的超排反应的影响不明显,胚眙收集数下降可能是由于手术后的粘连所致。
胚胎收集数与处理瞬前及输精瞬前的 P 浓度成负相关(r=-0.3616,-0.4334,P<0.05),与17β—E_2浓度成正相关(r=0.5036,0.5055,P<0.01);且受试兔经 PMSG 处理后的 P 升高幅度远较FSH 处理后为大(P<0.01)。
由此说明:PMSG 超排效果较差的原因可能是其LH的活性较高,引起卵泡的黄体化及带血卵泡的形成所致。
【总页数】7页(P95-101)【作者】石德顺【作者单位】无【正文语种】中文【中图分类】S829.1【相关文献】1.不同超排方法对家兔超数排卵效果的影响 [J], 王田娟;章志国;邢琼;周平;曹云霞2.不同促性腺激素对家兔超数排卵效果的研究 [J], 夏永强;徐国胜;付丽3.超数排卵对家兔早期胚胎体外发育的影响 [J], 曹君君4.家兔超数排卵与早期胚胎发育研究 [J], 林峰;孙克宁;陈玉霞;杨婷;高汉婷;高腾云5.FSH和PMSG对家兔超数排卵、胚胎收集率和回收率的影响 [J], 郭志杰;张永春因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
母兔的同期发情及超数排卵
实验内容:
1.实验方法:选一只成年母兔,肌肉注射氯前列烯醇。
2.实验材料及药品:碘酒棉球注射器氯前列烯醇(PG)
3.实验药物剂量:
氯前列烯醇(每只含量0.2mg/2ml ,每只兔肌肉注射0.02mg)4.发情鉴定:
使用氯前列烯醇对母兔进行催情在用药37~48h母兔开始发情,一般在49~72h期间,发情比较明显。
(发情症状:外阴部“老红”为发情盛期。
一般症状表现为食欲下降,情绪不稳,常用下巴摩擦食盆和笼门,有时会咬毛。
)
5.配种及鉴定:
在发情盛期将母兔与公兔合笼,间隔10个小时可换另一只同品种公兔重配一次。
配种10天以后可进行人工查胎。
※附加:
(氯前列烯醇:氯前列烯醇具有较强的溶解雌性动物卵巢黄体的作用,促使雌性动物按人类要求进行发情与排卵,从而达到人工控制磁性发情,实现同期化的目的。
)。
《胚胎移植技术》学历案一、学习目标1、了解胚胎移植技术的概念和发展历程。
2、掌握胚胎移植的基本操作流程和关键技术要点。
3、理解胚胎移植技术在畜牧业和人类生殖医学中的应用及意义。
4、分析胚胎移植技术可能带来的伦理和法律问题。
二、学习重难点1、重点(1)胚胎移植的生理基础和操作流程。
(2)胚胎移植技术在畜牧业和医学领域的应用。
2、难点(1)胚胎移植过程中的同期发情和超数排卵处理。
(2)对胚胎移植技术所涉及的伦理和法律问题的思考。
三、知识链接1、生殖细胞的形成和受精过程。
2、动物的生殖生理和内分泌调节。
四、学习过程(一)胚胎移植技术的概念胚胎移植技术是指将雌性动物体内的早期胚胎,或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内,使之继续发育为新个体的技术。
(二)胚胎移植技术的发展历程胚胎移植技术的发展可以追溯到 19 世纪末。
早期的研究主要集中在实验动物上,随着技术的不断进步,逐渐应用于家畜和人类生殖医学领域。
20 世纪 30 年代,胚胎移植技术在绵羊和山羊上获得成功。
50 年代以后,牛、猪等家畜的胚胎移植也相继取得成功。
近年来,随着生物技术的飞速发展,胚胎移植技术不断完善,应用范围越来越广泛。
(三)胚胎移植的生理基础1、同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的,为供体胚胎移入受体提供了相同的生理环境。
2、早期胚胎在一定时间内处于游离状态,为胚胎的收集提供了可能。
3、受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应,为胚胎在受体内的存活提供了可能。
4、供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。
(四)胚胎移植的基本操作流程1、供体和受体的选择供体:遗传性能和生产性能优秀,健康、繁殖机能正常的雌性个体。
受体:健康、繁殖机能正常,有良好的孕育环境和饲养管理条件的雌性个体。
2、同期发情处理使供体和受体在相同的生理时期,常用的方法是使用孕激素等药物。
一、实验目的1. 掌握兔子胚胎移植的基本操作技术。
2. 理解胚胎移植在繁殖科学中的应用及其重要性。
3. 分析胚胎移植过程中可能遇到的问题及解决方法。
二、实验原理胚胎移植是指将雌性动物体内的早期胚胎移植到同种或异种雌性动物的体内,使其继续发育成为新个体的技术。
该技术广泛应用于畜牧业和生物科学研究领域,有助于提高繁殖效率、保存珍贵基因资源等。
三、实验材料1. 实验动物:兔2. 仪器设备:显微镜、解剖显微镜、离心机、移液器、培养皿、酒精灯、剪刀、镊子、注射器等3. 药品:生理盐水、抗生素、激素等4. 试剂:胚胎培养液、消化酶等四、实验方法1. 选取健康的兔作为供体和受体。
2. 采集供体兔的卵母细胞和精子,进行体外受精。
3. 将受精卵培养至桑椹胚或囊胚阶段。
4. 将培养好的胚胎移植到受体兔的子宫内。
5. 观察胚胎移植后的发育情况。
五、实验步骤1. 采集供体兔的卵母细胞和精子,进行体外受精。
- 将供体兔麻醉,采集卵母细胞和精子。
- 将卵母细胞和精子分别进行培养,使其成熟。
- 将成熟卵母细胞与精子进行体外受精。
2. 将受精卵培养至桑椹胚或囊胚阶段。
- 将受精卵置于培养皿中,加入胚胎培养液。
- 在显微镜下观察胚胎发育情况,适时更换培养液。
3. 将培养好的胚胎移植到受体兔的子宫内。
- 将受体兔麻醉,进行手术操作。
- 在显微镜下观察受体兔的子宫,选择合适的部位进行胚胎移植。
- 将胚胎轻轻放入受体兔的子宫内。
4. 观察胚胎移植后的发育情况。
- 定期观察受体兔的行为和生理指标,判断胚胎移植是否成功。
- 在胚胎移植后一段时间,观察胚胎发育情况,如妊娠、分娩等。
六、实验结果与分析1. 实验成功地将供体兔的胚胎移植到受体兔的子宫内。
2. 观察到受体兔成功妊娠,并顺利分娩。
3. 分析胚胎移植过程中可能遇到的问题及解决方法:- 胚胎培养过程中,注意培养液的温度、pH值、气体成分等,确保胚胎正常发育。
- 选取健康的供体和受体,避免因个体差异导致胚胎移植失败。
一、实验目的1. 掌握兔胚胎移植的基本操作技术。
2. 了解胚胎移植在动物繁殖中的应用及重要性。
3. 分析影响胚胎移植成功率的关键因素。
二、实验原理胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎(原代胚胎或经过早期胚胎培养的胚胎)移植到同种、生理状态相同的其他雌性动物体内,使之继续发育为新个体的技术。
胚胎移植技术广泛应用于家畜、野生动物的繁殖,对于提高繁殖效率、保护濒危物种具有重要意义。
三、实验材料1. 实验动物:成年雌性兔、成年雄性兔。
2. 胚胎:取自雌性兔的早期胚胎。
3. 实验仪器:显微镜、移胚胎针、移植枪、消毒液、无菌手术器械等。
4. 实验试剂:生理盐水、抗凝剂、抗生素等。
四、实验步骤1. 胚胎采集与检查(1)将雌性兔麻醉后,进行手术取出早期胚胎。
(2)将采集到的胚胎进行镜检,确保其发育正常。
2. 供体母兔的准备(1)选择合适的雌性兔作为供体母兔,进行麻醉和消毒。
(2)在无菌条件下,将移植枪插入供体母兔的子宫内。
3. 胚胎移植(1)将胚胎用生理盐水冲洗干净,放入移胚胎针。
(2)将移胚胎针通过移植枪插入供体母兔的子宫内,将胚胎植入。
(3)将移植枪拔出,检查子宫内是否有胚胎残留。
4. 术后处理(1)对供体母兔进行抗生素注射,预防感染。
(2)观察供体母兔术后恢复情况,定期检查胚胎发育情况。
五、实验结果与分析1. 成功率:本次实验共移植胚胎10枚,成活8枚,成活率为80%。
2. 影响因素分析(1)胚胎质量:胚胎质量是影响移植成功率的关键因素。
本实验中,采集到的胚胎发育正常,保证了移植成功率。
(2)操作技术:操作技术熟练程度直接影响移植成功率。
本实验中,操作者经过严格培训,保证了操作质量。
(3)供体母兔生理状态:供体母兔的生理状态也是影响移植成功率的重要因素。
本实验中,供体母兔处于最佳生理状态,有利于胚胎移植。
六、实验结论1. 兔胚胎移植技术是一种有效的繁殖方法,可以提高繁殖效率。
2. 影响胚胎移植成功率的关键因素包括胚胎质量、操作技术和供体母兔生理状态。
实验一、人工授精器械的认识与假阴道的安装一、目的和要求1.熟悉人工授精所用的采精和输精器械,了解其用途及使用方法。
2.练习安装假阴道。
二、材料和仪器设备〔一〕采精器材牛羊猪马的采精用假阴道,牛羊电刺激采精棒,猪手握法采精用的橡胶手套〔二〕输精器材牛羊猪马输精器,阴道开张器,额灯和手电筒〔三〕辅助器材高压灭菌器,酒精灯,长柄钳,镊子,玻璃棒,棒状温度计〔四〕药品灭菌凡士林,75%和95%酒精棉球,滑石粉,来苏儿,洗衣粉三、方法和步骤先由老师讲解人工授精器材的构造、各部分名称和用途,并作假阴道安装的示范。
然后学生分组观察并作假阴道的安装练习。
〔一〕人工授精器材的认识1.假阴道为长筒状,由外壳、内胎和集精杯〔管〕三个主要部分组成。
其粗细和长短因畜种而异,不同国家不同时期的设计形式也不尽相同。
〔1〕外壳牛、羊和猪的假阴道外壳一般为硬橡胶或塑料制成的圆筒,中部装有可吹气、注水和排水的开关。
猪用假阴道则在此处连接一个可向假阴道内打气的双链球,以调节压力。
马的假阴道的外壳由镀锌铁皮或金属制成,分头、颈和体三部分。
筒体的中部装有把柄,其侧面有吹气和注水、排水孔,并有封闭塞或橡胶带。
〔2〕内胎由优质橡胶制成的胶筒,目前有些国家将其内胎面制成粗糙面,以增强采精时对阴茎的刺激,利于采精。
〔3〕集精杯〔管〕牛、羊用双层的棕色集精杯〔苏式〕或有刻度的离心管〔美式〕。
马用黑色橡皮杯〔苏式〕。
猪用棕色有刻度的广口瓶。
当用手握法对公猪进行采精时,只需备一只乳胶手套和收集精液的容器即可。
集精杯〔管〕可借橡皮圈直接固定于假阴道的一端或借橡胶漏斗与假阴道连接。
2.输精器苏式牛、羊输精器为一长颈玻璃注射器。
目前常用的为金属或塑料制成的输精管,其后连接一个橡皮球。
冷冻细管精液输精则使用金属制成的输精枪。
对牛羊等家畜的输精需借助阴道开张器和额灯或手电筒照明进行。
开张器的种类和大小因畜种而异。
〔二〕假阴道的准备1.假阴道外壳及内胎的检查〔1〕检查假阴道外壳两端是否光滑,外壳有否裂隙或开焊之处〔特别是马用外壳〕。
兔子冲胚的实验报告摘要:本实验旨在探究兔子冲胚技术的应用与发展,并对其进行实验验证。
实验选取了一组健康的雌性兔子,通过注射人工合成的细胞因子来刺激其卵巢发育并促使胚胎的成熟。
通过观察兔子的发育情况和取卵以及移植胚胎的过程,验证了兔子冲胚技术的可行性和有效性。
实验结果表明,兔子冲胚技术能够成功促使兔子的卵巢发育,使其产生可移植的成熟卵子。
关键词:兔子冲胚,卵子发育,细胞因子,实验验证,可行性1. 引言兔子冲胚是一种应用于畜禽繁殖的重要技术,通过人工控制细胞因子和生长因子的注射,能够促使动物的卵巢发育并获得成熟的胚胎,对提高兔群的繁殖效果具有重要意义。
本实验旨在验证兔子冲胚技术的可行性和有效性。
2. 材料与方法2.1 实验材料本实验选取了一组健康的雌性兔子,年龄在6个月至1岁之间,体重在2-3kg之间。
2.2 实验方法2.2.1 注射细胞因子选取一个细胞因子,用于刺激兔子的卵巢发育。
将细胞因子用生理盐水稀释至适当浓度,通过皮下注射的方式给予兔子。
2.2.2 观察兔子的发育情况在注射细胞因子后,观察兔子的卵巢发育情况,包括卵巢大小、卵泡的发育情况等。
2.2.3 取卵在兔子的卵泡成熟之后,通过微创手术的方式取出兔子的卵子进行离体培养。
2.2.4 胚胎移植将成熟的兔子卵子移植到其他健康的母兔子宫内进行妊娠。
3. 结果与讨论3.1 注射细胞因子后的兔子发育情况观察发现,注射细胞因子后,兔子的卵巢明显增大,卵泡的数量和大小也有所增加,表明细胞因子的注射能够促进兔子的卵巢发育。
3.2 卵子的取卵和胚胎移植成功取得了卵子,并顺利进行了胚胎移植实验。
移植后的兔子在适当的环境和条件下,顺利妊娠并产下了健康的仔兔。
4. 结论通过本实验的验证,兔子冲胚技术具有可行性和有效性。
通过注射合成的细胞因子,能够促使兔子的卵巢发育并使产生成熟的卵子,这对于兔子的繁殖效果的提高具有重要意义。
然而,由于实验规模和条件的限制,本实验只是初步的探究性研究,还需要进一步的实验和验证来完善该技术。
试验三兔的超数排卵、胚胎移植及早期胚胎观察
☐一、目的和要求
☐通过实验了解促卵泡素(FSH),孕马血清促性腺激素(PMSG),人绒毛膜促性腺激素(hCG)的作用。
☐了解卵子的正常和异常形态结构,认识受精卵和未受精卵之区别。
☐初步掌握冲卵、检卵技术,为掌握胚胎移植技术打下基础。
二、材料和仪器设备
☐1.动物:
⏹选择健康的成年未孕母兔。
⏹分组后,用作超排处理的供体。
⏹另外,准备两只母兔,作胚胎移植受体。
⏹实验母兔最好用产过仔的母兔,效果较好。
⏹需公兔2~3只。
☐2.药品:
⏹FSH、PMSG、hCG、0.9%NaCl、75%酒精、碘酒、新洁而灭、冲卵液、846
麻醉药。
☐3.器材:
⏹玻璃注射器(20ml、10ml、1ml),兔用手术台、创巾、止血纱布、药棉、缝
针、缝线、消炎粉、青霉素、链霉素、剪毛剪、止血钳、镊子、手术刀、剪、
塑料细管(冲卵管)、表面皿、移卵管、连续变倍实体显微镜。
三、供体兔超排分组及操作步骤
☐FSH处理组:
⏹先用碘酒棉球消毒母兔颈部皮肤,每只颈部皮下注射FSH10~15IU或
0.15mg(动物所产品)。
连续注射6次,每次相隔10~14h。
总量为0.9mg/
只。
最后一次注射FSH后12h,从耳静脉注射hCG75IU(先用酒精棉球消
毒耳朵边缘)。
⏹随即放置于公兔笼中,观察是否配种。
⏹超排处理后,母兔阴部表现出发情症状,能成功地配种。
☐PMSG处理组:
⏹母兔颈部皮肤消毒同上。
于颈部皮下一次注射PMSG150IU。
之后48~72h
时,同上述方法注射同量hCG。
即同公兔交配。
☐对照组:
⏹颈部皮下注射生理盐水。
其它处理同上。
四、手术冲胚方法
☐于注射hCG并与公兔交配后24、36或48h,进行冲胚。
☐1.应用乙醚、乌拉糖、846麻醉药(耳静脉注射0.3ml/只)等麻醉后,再按外科手术要求打开腹腔。
☐2.将母兔背朝下方固定于兔手术台上。
☐3.在兔腹部最后两对乳头的腹中线部剪毛,用沾满肥皂液的纱布清洗局部,再用剃须刀片刮毛,先后用碘酒和酒精棉球由内向外进行消毒。
然后盖上创巾并固定。
☐4.用手术刀在腹部正中线处皮肤切开2~3cm长的术口,再在腹壁肌白线上切一小口,用中指垫着以手术剪来扩大剪口。
☐ 5.冲卵时,注意止血,随时用温生理盐水纱布保温术部。
☐ 6.打开腹腔后,沿着子宫轻轻引出输卵管及卵巢。
与卵巢下脂肪组织处,用长夹夹住以固定卵巢。
仔细观察卵巢的变化。
记录排卵点(卵巢排过卵后的小红点)。
☐7.先在卵巢附近找到输卵管伞,从伞部插入冲卵管并用手指或夹子固定,另一端接表面皿。
另一人用10ml注射器配上9号针头,吸一管冲卵液(也可用生理盐水代替)。
☐8.从子宫向输卵管方向,于子宫角末端和输卵管交界的无血管处插入针头,使针头伸入输卵管内并用手指固定。
然后慢慢的推动注射器,将冲卵液注入输卵管,使冲卵液由伞部收集到表面皿内。
一般每次5ml即可。
注意冲卵液不得流失。
五、胚胎观察
☐将接有冲卵液的表面皿置于实体显微镜下,检查胚胎的数量和发育形态。
☐正常兔受精卵为卵圆形,直径约140µm,在透明带外围有一厚层粘蛋白层(为兔胚胎特有结构)。
卵黄颗粒很细,分布很均匀。
容易看到核的变化。
在卵黄周隙内可见两个极体。
☐未受精的卵母细胞中,粗细不一的卵黄颗粒清楚可见,且分布不均。
不能看到细胞核。
在卵黄周隙内只有一个极体。
☐一般在交配后24h,受精卵已发育成2-细胞胚胎。
48h即发育成16-细胞胚胎(早期桑椹胚)。
六、胚胎移植
☐1.受体的选择:
⏹选择与供体发情时间一致(相差不超过一天)的受体(自然发情或超排处理
诱发发情)。
☐2.麻醉、保定及开腹手术:
⏹参照供体处理方法。
☐3.胚胎分装:
⏹先向移卵管内吸进少量PBS,接着吸入一点空气,然后再将胚胎连同少量
PBS吸入,接着再吸入一点空气和PBS, 在移卵管尖端需保留一端空隙。
这
样就可防止胚胎丢失。
☐4.移植部位:
⏹将胚胎移入排卵侧的生长道内。
凡从供体输卵管内得到的胚胎应移植到受体
输卵管内。
从输卵管伞部插入2~3cm深,轻轻地注入胚胎,然后慢慢地抽
出移卵管。
一般一侧输卵管可移植5~10枚胚胎。
如从供体子宫内收集的胚
胎也应移植到受体母兔相应的部位。
☐5.按外科手术要求分别缝合肌层和皮肤。
并进行消毒。
注意术后护理。
七、作业
☐简述实验过程和结果,根据结果进行分析。