幽门螺旋杆菌尿素酶抗体检测操作程序(胶体金法)

幽门螺杆菌鉴定生化鉴定：(1) 尿素酶试验（自己配置）用灭菌的接种环挑取适量菌落接种于尿素酶琼脂中，放入恒温培养箱中37℃培养约5min 后观察，幽门螺杆菌尿素酶阳性，可以分解周围试剂中的尿素，使培养基由酸性变成碱性，指示剂酚红由黄色变成红色。

(2) 氧化酶试验（公司购买试纸条）用牙签刮取适量菌落轻轻涂抹于白色的氧化酶试纸条上，幽门螺杆菌阳性则在接触部位出现深蓝或黑色的反应。

(3) 触酶试验在载玻片中央滴加1~2 滴3%H2O2溶液，用牙签挑取适量菌落，幽门螺杆菌阳性则立即可见连续气泡产生，反应剧烈形成持久的泡沫。

革兰染色镜检（革兰染液可购买）(1) 涂片：滴加1 滴生理盐水于洁净的载玻片上，用接种环挑取固体培养上生长的可疑菌落少许，在生理盐水中均匀涂开。

(2) 固定：待水分完全挥干后，在酒精灯火焰处来回通过2~3 次固定标本。

(3) 初染：在玻片上滴加革兰染液1 至覆盖菌膜，染色1min，用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去，沥去水分。

结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟。

(4) 媒染：滴加革兰染液2 至覆盖菌膜，染色1min，用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去，沥去水分。

滴加卢哥氏碘液，媒染1min。

(5) 脱色：滴加革兰染液3，并轻轻晃动约30s，用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去，沥去水分。

连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。

(6) 复染：滴加革兰染液4，染色1min，用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去，用吸水纸吸掉水滴。

滴加蕃红复染5min。

(7) 观察：待标本干燥后置于光学显微镜下，观察细菌的染色特征以及形态特征。

从临床标本分离的Hp形态往往很典型，呈细长，弯曲，S型或海鸥展翅状，革兰染色阴性。

研究认为当菌液的OD660=1 时，此时幽门螺杆菌菌液浓度约为108cfu/ml[19]，测得实验所用原菌液OD660=1.12，粗略推算原菌液菌液浓度≈1.12×108 cfu/ml。

幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的检测标准操作规程【目的】体外检测血清幽门螺旋杆菌尿素酶抗体（HP）。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任【标本类型及实验前准备】1.由静脉抽取全血，将全血放入试管里（内无任何抗凝剂），等待血液凝固，大约室温30分钟，离心分离血清。

2.取出试剂盒、检测样本及对照等，待恢复室温后方可使用。

待一切准备就绪之后撕开水平台面上试剂盒的铝箔袋，取出试剂盒放置在【检验原理】本品系用胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗原及其单克隆抗体分别固定于硝酸纤维素膜,并和包被有胶体金标记的胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的玻璃纤维纸片及其他试剂组成。

应用胶体金免疫层析技术，采用双抗原夹心的原理检测人血清血浆全血中的胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体。

检测过程中，血液标本加到试剂盒的加样孔中，样品首先和玻璃纤维纸片上的HP尿素酶抗原混合，接着再往硝酸纤维素膜上层析。

如果样本中含有胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体,这些抗体首先与包被HP尿素酶抗原的胶体金结合,这样混合物往硝酸纤维膜上层析时，便会被固定有HP尿素酶抗原的检测线（T线）捕获而形成胶体金标记抗原-抗体抗原的双抗原夹心免疫复合物，因而在T线出现一条红色线条,为阳性结果。

如果被检者血液中没有胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体存在，则不会在检测线（T线）上形成红色线条，为阴性结果。

在试剂盒上的质控线（C线）包被有抗HP尿素酶单克隆抗体无论任何情况下在检测时质控线上都应有红色线条出现以证明试剂盒工作正常。

【主要组成成分】1.胃幽门螺旋杆菌（HP）尿素酶抗体检测试剂盒:每人份试剂盒用铝箔袋单独包装；每人份试剂盒由一个试剂条组成试剂条的检测区（T线）包被有HP尿素酶抗原，质控区（C线）包被有抗HP尿素酶抗体，检测试纸的另一端是包被7HP尿素酶抗原-胶体金的纸片2.每人份1支加样吸管样只稀释液3.每盒1瓶样品稀释液【储存条件】430C避光储存,有效期24个月。

幽门螺杆菌抗体检测试剂盒(胶体金法)标准操作规程1.产品名称:幽门螺杆菌抗体检测试剂盒(胶体金法)2.包装规格:24人份/盒 48人份/盒3.预期用途:用于检测试验血清中的幽门螺杆菌抗体(IgM/IgG)4.检验原理:用幽门螺杆菌抗原固相硝酸纤维素膜，应用渗滤式间接法原理，检测血清中幽门螺杆菌抗体。

5.主要组成成份:反应板 24份或48份试剂Ⅰ 1瓶 0.02mol/L PH 7.4 PBS试剂Ⅱ 1瓶胶体金标记物6.储存条件及有效期:产品应储存在2℃～8℃条件中，不能冷冻；有效期24个月。

7.样本要求:血清样品不能溶血，应为新鲜血清或2℃～8℃条件保存不超过一周。

高脂血症血清不能使用。

8.检验方法:滴入二滴试剂Ⅰ于反应板中央孔中，待完全渗入；滴入100μl血清于反应板孔中，待完全渗入；滴加三滴试剂Ⅱ于反应板孔中，待完全渗入；渗入三滴试剂Ⅰ于反应板孔中，待完全渗入。

9.结果解释:阳性：反应板孔中C端出现红色圆斑，T端出现红色圆斑，为幽门螺杆菌抗体阳性；阴性：反应板孔中C端出现红色圆斑，T端不出现红色圆斑，为幽门螺杆菌抗体阴性。

失效：反应板孔中C端不出现红色圆斑，或C端、T端均不出现红色圆斑，为试剂盒失效。

10.检验方法的局限性:本试剂试验仅用于检测幽门螺杆菌抗体而非直接检测幽门螺杆菌，因而阳性结果并不能确诊是幽门螺杆菌感染。

对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和试验结果的综合分析。

抗体含量低的血清样品，不能被检测出来是可能的。

部份幽门螺杆菌感染的患者，不产生抗体或产生少量的抗体。

此时，可能显示阴性结果。

试验结果可疑时，应用培养基进行培养确诊。

11.产品性能指标:批内精密度：阳性符合率和阴性符合率均应≥95%，反应斑点颜色深浅程度应接近。

批间精密度：阳性符合率和阴性符合率均应≥95%。

12.注意事项:本产品尚未获得产品注册证号，仅供研究，不用临床诊断。

试验一旦开始操作，应按操作步骤连续进行，直至结束。

ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．１１．１７·临床实验研究·幽门螺杆菌感染的医联体内医学检验分级诊疗路径林燕平ａ，李自顺ａ，杨清梅ａ，纪官治ａ，林万雄ａ，陈明红ｂ，顾海滨ｂ（厦门市第三医院ａ．检验科，ｂ．药学部，福建厦门３６１１００）摘要：目的　探讨厦门市同安区医联体社区患者幽门螺杆菌（ＨＰ）感染检测的医学检验分级诊疗路径。

方法　收集２０１８年１月至２０１９年１２月就诊于厦门市同安区医联体内社区卫生服务中心的１１８例可疑ＨＰ感染患者的血液样本和临床资料。

所有患者均在社区卫生服务中心用胶体金法行ＨＰ初筛检测后，由社区中心外送标本至区总医院医学检验中心进行免疫印迹法检测。

所有患者均进行１３Ｃ 尿素呼气试验作为对比实验，以超基准值４．０倍为ＨＰ阳性。

分析胶体金法和免疫印迹法单独诊断及联合诊断ＨＰ感染的诊断价值；分析胶体金法和免疫印迹法联合检测与１３Ｃ 尿素呼气试验结果的一致性。

结果　胶体金法联合免疫印迹法诊断ＨＰ的敏感性、特异性和阳性符合率均显著高于胶体金法、免疫印迹法单独检测。

两项联合检测结果与１３Ｃ 尿素呼气试验结果相比的Ｋａｐｐａ值为０．９２０，诊断一致性较好。

结论　胶体金法联合免疫印迹法可作为大规模筛查农村人口ＨＰ感染的有效手段；医联体联动模式下医学检验分级诊疗可为社区ＨＰ感染的检测提供一个新的思路和方向，对提高本地区医疗服务水平，实现检验资源共享具有重要意义。

关键词：幽门螺杆菌；胶体金法；免疫印迹法；１３Ｃ 尿素呼气试验；分级诊疗中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标志码：Ａ 幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，ＨＰ）感染是导致慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌的重要因素［１］。

流行病学调查数据显示，我国ＨＰ感染率较高，农村地区尤甚。

对ＨＰ进行全民普查，特别是在农村地区及外来人口聚集地进行普查至关重要。

目前，厦门一些大型医疗机构（三甲／三乙医院）已具备ＨＰ感染的临床实验室检诊水平，但基层医疗卫生机构（如卫生院、卫生所、二甲医院等）无法开展ＨＰ个性化检验或者检验周期较长，厦门城乡检验资源仍存在差距。

胃幽门螺旋杆菌（HP）抗体检测的标准操作程序【目的】本方法利用体外定性检测人血清、血浆或全血中胃幽门螺旋杆菌的特异性抗体，辅组诊断有胃炎症状的患者是否感染了胃幽门螺旋杆菌。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【标本的采取和保存】（1）指尖采血:常规采集指尖末梢血，拭去第一滴血，直接让第二、三滴血滴入加样空内，或用尖吸管吸取40微升以上的新鲜全血加在加样空内，立即检测。

（2）全血:EDTA，枸橼酸钠及肝素抗凝全血均可用于检测，若不能及时检测应放置2〜8C，但一般不应超过3天（3）血清及上述抗凝血浆均可用于本检测，若不能及时检测应放置2〜8.但一般不应超过2周。

【方法原理】利用胶体金技术检测人血清、血浆或全血中胃幽门螺旋杆菌的特异性抗体。

在检测条中硝酸纤维素膜的测试区包被有胃幽门螺旋杆菌抗原，质控区标有胃幽门螺旋杆菌抗体，在样品端的玻璃纤维纸上固定有胃幽门螺旋杆菌胶体金颗粒。

检测时，加入的样品首先与包被抗原的胶体金混匀，并因毛细管作用混合液沿膜向检测区移动。

当病人样品中含有胃幽门螺旋杆菌抗体时，即与检测线上的抗原形成抗原-抗体-抗原胶体金颗粒混合物，并显示红线；质控区总会因胶体金颗粒的结合出现一条红线。

【试剂盒组成】(1)反应板：由包被有胃幽门螺旋杆菌抗原和固定有胃幽门螺旋杆菌胶体金颗粒玻璃纤维纸组成。

(2)缓冲液：0.05MTris缓冲液，添加剂和0.1%叠氮钠。

(3)其它：一次性长吸管和说明书。

【检测步骤】(1)测试前，将试剂盒、缓冲液、患者样品及阴阳性对照液恢复至温室(20 - 30°C)。

(2)待一切准备就绪之后再打开检测盒的密封袋。

标明患者姓名或对照。

(3)加样：血清或血浆样品:用所提供的尖吸管往加样孔内垂直滴加1滴(大约20ul )血清或血浆、或者使用定量加样器滴加20ul血清或血浆。

全血样品:用尖吸管往加样孔内垂直滴加2滴(大约40ul )全血，或者使用定量加加样器滴加40ul全血。

幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒的生产(胶体金法)摘要目的:建立一种快速检测抗H.pylori IgG抗体的幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒(胶体金法)。

方法:以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,组装胶体金免疫层析快速诊断试纸条。

结果:用柠檬酸还原法制备的胶体金溶液呈亮红色,以此试纸条检测临床血清标本。

受检血清中抗Hp血清抗体IgG胶体金法中出现1条红色(对照)沉淀线,为血清学诊断阴性;出现2条红色(样品和对照)沉淀线,为血清学诊断阳性。

关键词幽门螺杆菌胶体金材料与方法实验材料:幽门螺杆菌菌种、氯金酸、柠檬酸三钠、牛血清白蛋白、聚乙二醇,以上试剂均为分析纯。

厌氧培养罐AnaeroPack Rectangular Jar。

实验方法:①玻璃器皿的清洁:制备胶体金的所用容器均应反复清洗,并硅化处理玻璃容器的内表面,最后用MQ超纯水冲洗晾干备用。

②胶体金颗粒的制备:取2%氯金酸溶液5ml,加1000ml超纯水,加热沸腾后,取1%柠檬酸三钠17.5ml一次性迅速加入煮沸的氯金酸溶液中,继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色,颜色稳定后继续加热3分钟,室温冷却,补充失水至原体积。

③免疫胶体金复合物的制备:目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量比例,用0.1mol/L的碳酸钾溶液调节胶体金溶液的pH至5.9～6.2,取5个洁净锥形瓶分装胶体金溶液。

将待标记蛋白质逐级稀释后(由2～10μg另设对照管),各取等体积顺序加入一系列装有胶体金的锥形瓶中,混匀;④胶体金复合物的纯化:超速离心法纯化免疫胶体金复合物。

先以15000rpm离心60分(4℃),弃上清,用保存液悬起较疏松的红色沉积物;即为初步纯化的免疫胶体金复合物。

⑤胶体金标记蛋白质的检定:以保存液作对照测530nm处OD值,4℃避光保存。

⑥金标垫的制备:纯化的胶体金不同程度稀释后,使用划膜仪均匀喷于同样大小的玻璃纤维素膜制成金标垫。

保存液稀释胶体金标记SPA复合物原液至工作浓度,按比例均匀浸于玻璃纤维素膜,-20℃冻存,冷冻真空干燥后,密封保存。

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幽门螺杆菌尿素酶抗体检测的临床应用
作者：刘红军赵振军聂凤英等
来源：《中国当代医药》2010年第05期
[摘要]目的：研究幽门螺杆菌尿素酶抗体的检测在诊断胃炎、胃溃疡等疾病中的应用。

方法：收集门诊、住院患者血清标本。

采用胶体金法做血清中幽门螺杆菌尿素酶抗体检测。

同时做c呼气试验作为对HpU金标试剂盒的临床考核试验。

结果：被验证试剂盒检测结果与未用抗幽门螺杆菌药物受检者呼气试验的结果具有较高的符合率(85.67％)。

结论：尿素酶抗体检测(胶体金法)灵敏度高，特异性强。

结果更加直观、快速，操作简便，无需专用仪器和设备，另外，还具有价格低廉、患者无痛苦、可单人份检测、也可多人份操作等优点，可用于健康体检、社区门诊或医院床边检验等。

[关键词]幽门螺杆菌；尿素酶抗体；胃炎；胃癌。

幽门螺杆菌尿素酶抗体胶体金法测定1【目的】定性测定人血清（浆）中的幽门螺杆菌尿素酶抗体2【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准：专业主管，科主任。

3原理本品系用基因工程幽门螺杆菌尿素酶抗原包被的醋酸纤维素膜、胶体金标记的基因工程幽门螺杆菌尿素酶抗原及其它试剂，基于膜免疫层析原理，应用双抗原夹心制成。

4标本采集与处理：4.1受检者准备：4.1.1受检者的状态：a.不可变的生物因素：年龄，性别，生活环境遗传；b.可变的生物因素：A）情绪：原则上患者应在平静，休息的状态下以晨起空腹时采集标本，患者对采集标本时的恐惧、紧张会造成标本采集的失败。

B）运动：受检者应处于平静状态下采集标本，可减少由于运动带来的影响。

C）生理节律变化：昼夜的生理变化可能使测定结果不恒定，晨起固定时间空腹血尽可能减少昼夜节律带来的影响。

4.2采取标本时：A）体位：除非是卧床的病人，一般采血时取坐位。

B）止血带：一般从肘静脉采血使用止血带的时间不宜超过1min，穿刺成功后立即松开止血带，静脉阻滞也可影响。

4.3受检者的饮食：餐后采集的标本，易发现乳糜状，影响检验测定的正确性，故应嘱受检者采晨起空腹血为宜。

4.4药物的影响：目前文献尚无发现对其影响的报道，有待进一步完善。

4.5输血及输液的影响：标本采集应避开输血及输液侧。

4.6标本的采集、保存、送检及处理。

4.6.1标本的采集：A：种类：新鲜血清或血浆。

B：时间：原则上以晨起空腹时采集标本。

C：静脉采血：首选肘静脉，必要时采集其它静脉。

D：采集方法：按照常规标本采集方法采集。

E：容器要求：标本应采集至真空管（含或不含分离胶的普通生化管）管上应标有病人姓名、床号、科室、住院号或条形码唯一标识。

F：标本采集量：一般常3ml全血，无需抗凝防腐，血清或血浆至少需600ul。

4.6.2标本拒收标准：A:严重的溶血、脂血标本。

B：血量不足。

胶体金毒检操作流程
胶体金毒检操作流程如下：
1.准备试剂，查看试剂盒有效期，将待测样本、测试卡、样本提取
液及其他检材放在室温下平衡至室温。

2.采集样本，一般使用试剂盒附带的采样拭子，将采集样本后的拭
子插入样本提取液管内，紧靠管壁旋转约10次后（确保拭子头与提取液充分接触），在断点处折断拭子，将拭子头留在样本提取液管内，拧紧提取管盖子，静置1分钟（尽量配置试管架，将提取管顶部向上垂直固定在试管架上）。

3.加样检测，把采集完毕的鼻咽拭子放入有试剂的提取管内，旋转
挤压约15秒，使样本完全浸入试剂中，以便保证检测的有效性，把融合样本的试剂滴入检测卡上3—4滴。

4.读取结果，检测卡静置十分钟左右读取结果。

若对照区C、T处均
出现横杠即两条杠，可能为阳性；若T处有横杠但不明显，可能为弱阳性；若只有C处出现一条横杠可能为阴性；若C处没有出现横杠则检测结果无效，需按步骤重新规范操作。

幽门螺旋杆菌尿素酶抗体检测操作程序(胶体金法)1、目的用于定性检测人血液样本中的胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体,可用于临床辅助诊断消化道胃幽门螺旋杆菌感染。

2、范围适用于临床对幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的检测。

3.检验原理试剂盒应用渗滤式间接法原理,将幽门螺旋杆菌尿素酶固定在硝酸纤维素膜载体上,待检血清中幽门螺旋杆菌尿素酶抗体IgGY与抗原结合形成抗原抗体复合物,加入胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体与复合物结合,根据就是否形成肉眼可见的红色圆斑(T端),判断结果。

硝酸纤维素膜上的质控区固定有兔抗鼠IgG,加入胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体后与之结合形成红色圆斑(C端)。

4、主要组成成分4、1 反应板:4、2cm×2、8cm×0、7cm上下对合、中央有直径为0、9±0、05cm 小孔的塑料小盒,其内主要为固定有油门螺旋杆菌尿素酶抗原的硝酸纤维素膜与吸水材料4、2 试剂Ⅰ:0、02mol/L PH 7、4 PBS溶液,内含吐温-20、4、3 试剂Ⅱ:主要含有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体、稳定剂与防腐剂。

5、储存条件及有效期产品应储存在2℃-8℃条件中,不能冷冻;有效期9个月。

拆封后未用完的反应板应放入密封袋2℃-8℃保存,应在一个月内用完。

6.样本要求6、1 样本采集:按照临床采血技术规范操作采集静脉血,采集的静脉血置室温30分钟或37℃水浴15-20分钟后,低速离心(2000转/分-3000转/分)5-10分钟,分离血清。

6、2 样本保存:若分离后的血清不能及时检测,应将样本保存在2℃-8℃条件下,若保存时间超过7天,则需将样本保存在-20℃以下并避免反复冻融,以免抗体效价降低。

6、3 当明显溶血(血红蛋白浓度＞1、96g/L)、黄疸(胆红素浓度＞40、1umol/L)、高血脂(甘油三酯浓度＞7、0mmol/L),影响血清的渗透性并明显增加反应膜的背景颜色,对结果的判断有影响,此类标本不宜使用。

比浊法定量检测血清胃幽门螺杆菌血清抗体的临床意义目的討论比浊法定量检测血清胃幽门螺杆菌抗体（HP-Ab）的临床意义。

方法通过用比浊法和胶体金法分别检测血清HP-Ab，进行比较，并对比浊法定量检测的测定值> 60 AU/mL的32位体检患者进行HP的分离培养鉴定。

结果用比浊法和胶体金法分别检测300份体检标本的HP-Ab，比浊法定量检测的阳性、阴性例数分别是100例（33.33%）和158例（52.67%），与胶体金法定性检测的阳性率（107例，35.67%）和阴性率（172例，57.33%）比较，无明显差异（P > 0.05）；比浊法定量检测的可疑例数是42例（14.00%），与胶体金定性检测的弱阳性率（21例，7.00%）比较，差异有统计学意义（P 60 AU/mL的32位体检患者组相比，差异无统计学意义（P > 0.05）；对照组HP的分离培养鉴定阳性例数、阳性率（2例，6.67%）与比浊定量检测的测定值介于“15～60 AU/mL”的30位体检患者组相比，差异有高度统计学意义（P 60 AU/mL时，高度提示属于HP现症感染。

[Abstract] Objective To discuss the clinical significance of turbidimetry in the quantitative detection of serum helicobacter pylori antibodies (HP-Ab). Methods Turbidimetry and colloidal gold method were compared in the detection of serum HP-Ab. 32 patients receiving physical examination whose measured values were larger than 60 AU/mL as detected by the turbidimetry received HP separate culture identification. Results The turbidimetry and the colloidal gold method were used to detect the HP-Ab of 300 copies of physical examination specimens respectively. The positive and negative cases of the quantitative turbidimetric detection were 100 cases (33.33%) and 158 cases (52.67%), which were not significantly different from the positive rate (107 cases, 35.67%) and negative rate (172 cases, 57.33%) of the colloidal gold method (P > 0.05). The number of suspicious cases detected by the turbidimetry was 42 (14.00%), which was significantly different from the weak positive rate (21 cases, 7.00%) detected by the colloidal gold method (P 0.05). The number of positive cases and the positive rate (2 cases, 6.67%) of HP separate culture identification of the control group were significantly different from those of the 30 patients receiving physical examination whose measured values were between 15-60 AU/mL as detected by the turbidimetry (P 60 AU/mL的32位体检患者进行HP的分离培养鉴定。

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