河蚌多糖提取工艺的优化
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蚌肉多糖的研究进展• 邵胜荣田华孙俊浙江康恩贝健康产品有限司摘要:蚌肉多糖是一种具有多种生物活性的贝类多糖,具有重要的研究开发价值。
本文从蚌肉多糖的分子结构、提取纯化工艺.生物活性、应用前景等方面进行了综述,为蚌肉多糖的开发和利用提供更多的理论依据。
关键词:蚌肉多糖分子结构提取纯化生物活性蚌肉多糖来源于三角帆蚌,又称三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)多糖,河蚌多糖,属于贝类多糖,研究表明,贝类多糖具有抗肿瘤H]、抗病毒u_41、免疫调节w、杭氧化卜71、抗炎w、降血脂卜1111等多种生物学功能。
而三角帆蚌是我国特有品种,国内分布范围较广lu- ul, a是最主要的淡水珍珠养殖母蚌,在我国很多省份大规模养殖,蚌肉作为珍珠产业的下脚料,资源是十分可观的[+_161。
但由于蚌肉肉质粗韧,土腥味重,不易烹饪食用,多丢弃或用作饲料或肥料1利用率低,其价值未得到充分体现,但三角帆蚌中多糖含量丰富U81,且具有多种生物活性118_251,具有很髙的研究和开发价值,逐渐成为近年来研究的热点之一。
卫生部于2012年第2号公告批准“蚌肉多糖”为新资源食品,这为蚌肉多糖在食品领域的开发和应用提供了更好的依据和研究空间。
本文从蚌肉多糖的分子结构、提取纯化工艺、生物活性、应用前景等几个方面综述了蚌肉多糖的研究和应用进展。
1蚌肉多糖分子结构蚌肉多糖中均一多糖有6种,包括鼠李糖、阿拉伯糖. 岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖wl。
相对分子量最小为2.65xl05Da1251,最大为1741.8 kDa[27】。
由于多糖的分子结构比较复杂,三角帆蚌多糖分子结构研究尚有待深人。
2蚌肉多糖的提取纯化工艺2.1蚌肉多糖的提取蚌肉多糖的提取最常采用水浸提的方法。
水提的提取率与提取的温度、提取时间、水料比、提取次数有关。
乔德亮12(11运用热水浸提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白、乙醇再沉淀的方法提取蚌肉多糖,得出最优提取条件为提取温度80€、提取时间4.5h、水料比8mL/g,提取次数2 次,粗多糖的得率为3.73%。
基于人工神经网络法优化河蚌多糖超高压提取工艺
张斌;孙兰萍;施颖;屠康
【期刊名称】《食品与机械》
【年(卷),期】2016(032)011
【摘要】以取珠后的蚌肉为原料,采用超高压方法提取河蚌多糖。
利用响应面试验设计获取神经网络所需的训练样本,利用训练成熟的神经网络进行训练和仿真,分析因素(压力强度、料液比和保压时间)以及因素间的交互作用对河蚌多糖得率的影响,并对超高压得河蚌多糖的工艺进行优化。
结果表明:人工神经网络法比响应面法的优化准确性高,预测值的可信度较强;超高压提取河蚌多糖最佳工艺条件为:压力强度340 MPa、料液比1︰42(g/mL)、保压时间10 min,该条件下的多糖得率预测值为7.18%,实测值为7.12%,相对误差为0.84。
该工艺具有短时、高效、环保等优点,为河蚌多糖的开发利用提供技术依据。
【总页数】6页(P148-153)
【作者】张斌;孙兰萍;施颖;屠康
【作者单位】蚌埠学院生物与食品工程系,安徽蚌埠 233030;蚌埠学院生物与食品工程系,安徽蚌埠 233030;蚌埠学院生物与食品工程系,安徽蚌埠 233030;南京农业大学食品科技学院,江苏南京 210095
【正文语种】中文
【相关文献】
1.基于神经网络-模拟退火算法的超高压嫩化河蚌肉的工艺优化 [J], 张斌;孙兰萍;钱时权;许晖;屠康
2.黑蒜多糖的超高压提取工艺优化及抗氧化活性研究 [J], 宿时;李宗泽;王贺
3.金花葵多糖的超高压提取工艺优化及抗氧化活性研究 [J], 王雪竹;李梵;赵一真
4.香菇多糖超高压提取工艺条件的优化研究 [J], 郝慧敏
5.河蚌多糖提取工艺的优化 [J], 沈鸿;窦昌贵
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多糖的工艺优化怎么做
多糖的工艺优化包括以下几个方面的考虑:
1. 原料选择:选择优质的原料,如新鲜的果蔬、高纤维食材等,以确保产品品质和口感。
2. 提取工艺:选择合适的加工方式,如机械碎磨、酶解、超声波提取等,以提高多糖的提取率和纯度。
3. 提纯工艺:通过膜分离、离子交换、溶剂萃取等方法进行多糖的进一步提纯,去除杂质和其他组分,提高产品纯度。
4. 反应条件优化:调整反应温度、pH值、反应时间等反应条件,以确定最佳反应条件,提高多糖的产率和质量。
5. 工艺流程优化:对整个生产流程进行综合考虑和调整,优化各个环节之间的协调性,提高生产效率和产品品质。
6. 储存和包装:选择适合的储存条件和包装材料,以保持多糖的稳定性和口感。
7. 质量控制和标准化:建立完善的质量控制体系,制定严格的产品标准和检测方法,确保产品质量的稳定性。
以上是多糖工艺优化的一般步骤和考虑因素,具体的优化方法和策略需要根据不同的多糖类型和生产条件进行具体分析和探索。
响应面法优化高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺高压脉冲电场辅助酶解是一种新型的食品加工技术,能够有效提高食品加工的效率和质量。
在目前的研究中,许多学者利用响应面法优化高压脉冲电场辅助酶解的工艺参数,以达到更好的加工效果。
本文将探讨响应面法优化高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺的研究现状、优化方法和未来展望。
一、高压脉冲电场辅助酶解技术的优势高压脉冲电场辅助酶解是指在酶解过程中加入高压脉冲电场技术,利用电场对生物体内的细胞结构和酶活性产生影响,促进酶解过程的进行。
相比传统的酶解工艺,高压脉冲电场辅助酶解在短时间内能够提高酶解效率和产物的品质,降低酶解过程中的能耗和资源消耗,具有明显的优势。
目前,高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺的研究还处于初步探索阶段。
中国的许多研究机构和高校开展了相关的研究工作,主要集中在高压脉冲电场参数对酶解效果的影响、酶种类选择、河蚌肉质构性变化等方面。
在这些研究中,采用响应面法对工艺参数进行优化已成为一种常见的方法。
响应面法是一种统计分析方法,可以通过实验设计和数据分析,确定影响工艺品质和效果的多个参数的最优组合。
在高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺中,研究者可以利用响应面法确定高压脉冲电场参数、酶解时间、酶剂用量等对产品质量的影响,并建立预测模型进行优化。
通过该方法,可以在较短的时间内得到较好的工艺参数组合,提高产品的品质和产率。
四、未来展望随着高压脉冲电场辅助酶解技术的不断发展,对河蚌肉等食品资源的加工利用也将更加深入。
未来的研究中,可以将响应面法与其它优化方法相结合,探索更加精确的工艺参数优化方式,提高产品的品质和加工效率。
还可以结合工程实际,建立更加完善的高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺流程,推动该技术在食品加工工业中的应用。
专利名称:一种蚌肉多糖的提取方法
专利类型:发明专利
发明人:陈海军,李小龙,谢乾程,黄德年,王晶,雷秋平申请号:CN200810162630.3
申请日:20081127
公开号:CN101503721A
公开日:
20090812
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明提供了一种蚌肉多糖的提取方法,所述方法是以蚌肉斧足部分为原料,经碱提-离心-酶解-离心-超滤-活性炭去色素-醇沉-干燥,得到较高纯度的蚌肉多糖。
本发明的有益效果主要体现在:利用本发明方法,加工而成的蚌肉多糖不仅外观漂亮而且纯度高,具有较好的保健功能和一定的药用功能,无毒性,安全性高,而且制备工艺成熟,设备投资少,利于工业化生产,在食品、药品和保健品领域具有广阔前景。
申请人:浙江珍世堂生物科技有限公司
地址:311804 浙江省诸暨市山下湖镇珍珠工业园区
国籍:CN
代理机构:杭州天正专利事务所有限公司
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河蚌多糖生物活性与提取、纯化工艺研究进展
蒋洁莹;史万忠;刘瑾;元唯安;朱蕾蕾
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2024(33)8
【摘要】目的为河蚌多糖的提取工艺研究和临床应用提供参考。
方法计算机检索维普、中国知网、PubMed数据库1995年1月至2023年9月与河蚌多糖相关的文献,归纳河蚌多糖的生物活性及其提取、纯化工艺,比较不同提取、纯化工艺参数下河蚌多糖提取物的差异。
结果河蚌多糖具有免疫调节、抗肿瘤,镇痛、抗炎,抗乙型肝炎病毒、保肝等生物活性。
河蚌多糖多以热水(80~100℃)提取法为基础,辅以微波或超声等提取方法,但工艺参数差异较大;提取液多以醇沉方式获得粗提物;纯化后的河蚌多糖在单糖组成(葡萄糖占比较大)、分子量(400~1700kDa)等方面存在一定差异。
结论需加强河蚌多糖提取工艺-药效关系、活性成分构效关系、化学修饰-药效关系等研究,为相关药物和功能性食品的开发奠定基础。
【总页数】4页(P125-128)
【作者】蒋洁莹;史万忠;刘瑾;元唯安;朱蕾蕾
【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院
【正文语种】中文
【中图分类】R965;R943
【相关文献】
1.大枣多糖提取纯化工艺及其生物活性研究进展
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5.海参多糖的提取纯化、化学分析方法和生物活性研究进展
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专利名称:一种河蚌多糖及其制备方法和应用专利类型:发明专利
发明人:陆方明,吴恒
申请号:CN200910055551.7
申请日:20090729
公开号:CN101985480A
公开日:
20110316
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明提供一种河蚌多糖,经紫外分光光度计检测多糖含量,以葡萄糖(CHO)计算其多糖含量为55%-90%。
经高效液相色谱检测其中的单糖组分有葡萄糖、葡萄糖醛酸、氨基葡萄糖等。
本发明河蚌多糖通过醇处理,水提取、压滤和干燥等工艺制得。
临床验证结果认为本发明河蚌多糖治疗阴虚内热证及阴虚内热证伴癌痛者疗效确切,且服用方便、安全、无毒副作用,可用于制备滋阴清热、消肿止痛和癌症止痛药物。
申请人:浙江华圣生物药业有限公司
地址:313000 浙江省湖州市大钱路2666号
国籍:CN
代理机构:上海新天专利代理有限公司
代理人:王巍
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响应面法优化高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺高压脉冲电场辅助酶解是一种新型的食品加工技术,可以有效提高食品品质和提取效率。
在河蚌肉的酶解过程中,传统的方法对于酶解效果和工艺参数的优化存在一定的局限性。
采用响应面法对高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉的工艺进行优化是非常必要的。
响应面法是一种通过实验设计和统计分析来评估和优化复杂系统的方法。
它通过建立数学模型来描述输入因素与输出响应之间的关系,并通过确定最佳的操作条件来实现优化。
在高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺中,响应面法可以用于优化酶解时间、酶解温度和酶解浓度等影响酶解效果的参数。
需要确定响应面实验的设计因素和水平。
在高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉的实验中,可以选择酶解时间、酶解温度和酶解浓度作为设计因素,分别设定不同的水平。
然后,利用设计因素和水平设计一个合适的正交实验矩阵。
正交实验矩阵的设计可以使得实验数据能够尽可能地反映设计因素和水平的变化对酶解效果的影响。
在实验中,将不同水平的设计因素组合进行河蚌肉的高压脉冲电场辅助酶解,得到一系列实验数据。
接下来,利用实验数据建立数学模型。
可以选择二次多项式回归模型作为数学模型,用于描述设计因素和水平与酶解效果之间的关系。
通过回归分析,可以获得各个设计因素的主效应、交互作用和二次效应的大小和显著性。
通过数学模型进行优化。
可以使用响应面法中的gridsolution命令来找到最佳的操作条件。
这种方法可以通过最小化输出响应(酶解效果)来找到最佳的设计因素和水平组合。
在实际操作过程中,可以使用软件工具来实现响应面法的优化计算。
丹东河蚌多肽成分的提取研究摘要:以丹东地区河蚌(褶纹冠蚌)的蚌泪和蚌肉为原料,对多肽提取工艺进行了研究。试验结果表明,在2 450 MHz、750W微波功率下提取5 min,滤液经MW10 000 D的透析袋用去离子水透析,于80℃以下真空浓缩。浓缩液冷至4℃,加5倍体积-20℃的丙酮,静置,过滤,滤饼于80℃以下真空干燥得到多肽。其纯度可达92.1%,收率0.602%ʍpAbstract:Conditions of multi-peptides extraction was studied from tears and meat of mussel(Cridtaria plicata Lea)in Dandong.The results indicated that multi-peptides were extracted with the process as follows:in 2 450 MHz,750W microwave power the raw materiels was extracted for 5 minutes,deionized water were dialysised from filtrate with MW10000D dialysis bag,then the filtrate was concentrated in vacuum under 80℃,concentrated liquid was cooled to 4℃,-20℃acetone which size was 5 times as cooled liquid was added,concentrated liquid was filtered,filtering cake was dried under80℃in vacuum .The purity of multi-peptides was 92.1%,the yield was 0.602%.Key words:mussel;exucate of mussel;multi-peptides河蚌(Mussel)又名河蛤蜊,为蚌科动物,包括背角无齿蚌、褶纹冠蚌、三角帆蚌,生活于江河湖泊中,不同部位所含的成份不同,其作用不同[1]。全国大部分地区都有分布,丹东地区尤为丰富。从江苏褶纹冠蚌(Cridtaria plicata Lea)提取的混合液(KAL),制成静脉注射剂和口服液,对动物抗肿瘤作用及免疫药理作用十分明显,对小鼠S180实体癌的生长口服抑制率在41%~60%,对接种的S180瘤株及EAC瘤株腹水型癌小鼠的生存期延长率平均在40%,可提高免疫力,对DTH、PFC、MΦ、IL—2有明显影响[2,3]。国内陆续有河蚌提取物的镇痛、抗炎作用观察,蚌肉提取物及河蚌多糖对免疫系统的影响和抗肿瘤作用的观察[4,5]。KAL的成分之一是多肽,作者用本地区盛产的河蚌(褶纹冠蚌)提取多肽(Polypeptide),以与同品种的河蚌提取物KAL作抗癌活性对比,选择具抗癌作用的有效成分。1材料与方法1.1材料①河蚌:褶纹冠蚌(丹东宽甸)。②仪器:WT1升微波动态提取设备(甘肃天水华圆制药设备科技有限责任公司),722S可见分光光度计。③试剂[6]:标准酪蛋白溶液500 μg·mL-1,Folin-酚试剂甲,Folin-酚试剂乙。化学试剂(化学纯或分析纯)。1.2方法1.2.1工艺路线1.2.2多肽提取取新鲜河蚌的蚌泪和蚌肉共500 g,加水100 mL,匀浆,经2 450 MHz、750 W微波处理5 min,控制80~85℃加热10 min,过滤,滤液装MW10 000D的透析袋用去离子水透析3次,每次24 h,测出每次透析外液的肽含量,分别于80℃以下真空浓缩。浓缩液冷至4℃,加5倍体积-20℃的丙酮,静置24 h,过滤,滤饼于80℃以下真空干燥,即得每次实收的多肽重量。所得多肽总重量为3.01 g,收率0.602%。1.2.3单因素试验对河蚌匀浆后的微波提取条件进行优化。先固定微波提取时间和温度,找出最佳微波功率;再固定微波功率及时间,找出最佳提取温度;然后固定微波功率和提取温度,找出最佳提取时间。用同样的方法分别考查透析次数、透析时间、浓缩液的pH值、沉淀剂的温度和用量及静置沉淀温度对收率的影响。1.2.4提取物的检验及纯度的测定①提取物的检验:产品与Folin-酚试剂甲作用显紫红色,与Folin-酚试剂乙作用显蓝色,证明为多肽。②标准曲线绘制:取6支试管,按表1剂量加入各试剂,先加入酪蛋白标准溶液、0.90%NaCl溶液和Folin-酚试剂甲,摇匀,室温下放置10 min,再加入Folin-酚试剂乙和相当于多肽酪蛋白浓度(g·L-1)。每管加入酚试剂后立即摇匀,30 min后,于波长650 nm下测吸光度。得线性方程■=0.005 3x+0.005(r2=0.999 2)。③多肽样品绝度测定:准确称取多肽产品0.25 g,配成2.5×10-4 g·L-1的0.9%NaCl溶液,取该液1.0 mL,加Folin-酚试剂甲5.0 mL及Folin-酚试剂乙0.5 mL,测吸光度,求得多肽产品的纯度为92.1%。2结果与分析1)微波功率、提取温度和时间对提取率的影响我们考查了微波功率、提取温度及时间对多肽提取效率的影响,试验证明,当微波功率750 W、温度控制在80~85℃时提取10 min,提取效率最高。2)多肽收率与透析次数的关系试验证明,多肽收率随着透析次数的增多而增大,以多肽总收率为纵坐标,透析次数为横坐标作图(图1)。3)浓缩液的pH值对沉淀的影响不同pH值的浓缩液对沉淀的影响表明,当浓缩液的pH值为5.5时,加入冷冻的丙酮液,保持沉淀液温度为4℃时静置,产物的收率较高。4)沉淀剂用量对收率的影响沉淀剂丙酮的用量直接影响到多肽的收率,分别考查了不同量的沉淀剂与浓缩液的体积比对产品收率的影响,结果见图2。由图2可知,产品收率随沉淀剂用量(倍数)的增大而增加,当沉淀用量(倍数)达到5时,产品收率最高,再增大倍数,产品收率不再增加。5)沉淀剂温度对产品收率的影响沉淀剂丙酮的温度影响多肽的收率,当加入量为同种相同体积浓缩液5倍时,分别考查了不同温度对产品收率的影响,结果见表2。由表2可知,当加入的沉淀剂温度为-20℃时,产品收率最高。6)静置温度对产品收率的影响静置温度对产品收率有较大影响,分别考查了不同温度条件下静置沉淀产品的收率(图3)。由图3可见,当静置温度大于5℃时,产品收率明显减少。3小结通过试验确定了河蚌中多肽的最佳提取工艺为2 450 MHz、750 W微波处理5 min,控制80~85℃加热10 min,滤液用MW10000 D透析袋对去离子水透析3次。浓缩液pH值为5.5时,用浓缩液5倍量的-20℃丙酮为沉淀剂,沉淀液温度控制在4℃。参考文献:[1]江苏新医学院.中药大词典(下册)[M] 上海:上海科学技术出版社,1991.1849-1850.[2]李卫东,袁亚非,王艳辉.KAL抗肿瘤作用及对三种状态下小鼠迟发性过敏反应的影响[J].承德医学院学报,1996,13(3):179-182.[3]袁亚非,王艳辉,刘豫安.河蚌提取物KAL增强环磷酰胺造成免疫低下模型小鼠DTH及PFC的作用[J].承德医学院学报,2007,17(3):18-20.[4]蔡华芳,刘雪莉,陈珏.河蚌制剂痛克的镇痛抗炎作用[J].中国海洋药物杂志,1997(3):32-36.[5]崔悦礼,李开源,赵翠兰.河蚌多糖(MPa)对巨噬细胞细胞吞噬能力的影响与抗炎作用[J].云南大学学报(自然科学版),1998,20(3):185-186.北京大学生物系生物化学教研室.生物化学实验指导[M].北京:高等教育出版社,1979.30-31.。
响应面法优化高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺
高压脉冲电场(PPEF)辅助酶解是一种新兴的高效能食品加工技术,在提高产量和改善产品质量方面具有巨大潜力。
为了实现最佳效果,工艺参数需要进行优化。
响应面法是一种常用的工艺优化方法,可以确定最佳工艺条件。
河蚌肉是一种有着丰富营养和美味口感的食材,但其肉质较为坚硬,不易酶解。
通过PPEF辅助酶解可以提高产品的可口性和食用价值。
在进行PPEF辅助酶解河蚌肉工艺的优化时,首先需要确定响应变量或者目标,如酶解率、酶解时间等。
然后建立一个数学模型,其中工艺参数(如电场强度、脉冲频率和酶的添加量)作为自变量。
通过设计一系列实验,包括不同电场强度、脉冲频率和酶的添加量组合,然后测量响应变量。
根据实验数据,可以通过响应面法拟合出一个二次多项式回归模型。
然后利用该模型进行参数优化,确定最佳工艺条件。
PPEF辅助酶解河蚌肉工艺的优化可以通过各种统计软件来完成。
可以使用
Design-Expert软件进行回归分析和响应面法的建模。
该软件可以自动生成实验设计,拟合模型,并通过数值优化算法确定最佳参数组合。
通过响应面法进行优化后,可以得到最佳工艺参数组合,以提高高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉的效果。
这些最佳条件可以在实际生产中应用,从而提高产品的产量和质量。
响应面法是优化高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺的一种有效方法。
通过建立数学模型,设计实验并分析实验数据,可以确定最佳的工艺参数组合,提高产品的质量和产量。
该方法为高压脉冲电场辅助酶解工艺的优化提供了科学依据。
收稿日期:2005 06 16; 修订日期:2005 12 20作者简介:沈 鸿(1974 ),女(汉族),浙江湖州人,现任南京脑科医院主管药师,硕士学位,主要从事临床药理工作.河蚌多糖提取工艺的优化沈 鸿1,窦昌贵2(1.南京脑科医院,江苏南京 210029; 2.中国药科大学中医药研究所,江苏南京 210038)摘要:目的对河蚌多糖的提取工艺进行优化,从而提高多糖的含量。
方法采用正交设计的方法,以硫酸蒽酮法测定总糖含量为评价指标,从提取温度、N a OH 浓度、提取次数等因素入手,进行正交优化实验。
结果提取温度、N aOH 浓度为有极显著意义的因素,提取次数对多糖的含量影响不大,综合考虑,最佳提取工艺为A 1B 2C 1,即在4 时,N a OH 浓度为5%,提取1次。
结论优选得到的工艺经济,简单、稳定、可行。
关键词:河蚌多糖; 正交设计中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008 0805(2006)03 0380 01Opti m u m Extraction Process ofM ussel P olysaccharideS HEN H ong 1,DOU C hang gui2(1.N anji n g Brain H os p ital ,Nanjing 210029,Ch i n a;2.Trad itional Ch i n ese M e d icine Institute ,Ch inese Phar m aceutical University ,N anji n g 210038,China )Abst ract :O bjective O pti m ize the ex tracti on process o fM usse l Po l ysaccharide(M P a),and then ga i n h i ghe r content o f po l ysaccharide .M ethod s Invo lved i n the three factors ,te m perature and ti m es o f ex tracti on ,concentra ti on of N aOH so l uti ons ,do t he ex peri m ent by orthogonal design un if o r m desi gn and t he m ethod o f anthrone .R esults The result sho w that the mo st i m portant fac t o rs a re te m pe rature of ex tracti on and concentra ti on o f N aOH so l u tions .The opti m u m ex tracti on conditi ons we re A 1B 2C 1,4 ,5%N aOH so l uti ons and extracti ng only once.Conc l u si on T his opti m i zed process i s econo m ica ,l si m p l e ,stab l e and e fficient .K ey w ords :M usse l Po lysacchar i de ; O rthogonal desi gn 河蚌在传统医学记载,河蚌清热消炎功能,民间常用来治疗眼疾、热症烫伤等。
现代研究发现,河蚌中的重要有效成分为河蚌多糖(M usse l Po lysacchar i de ,M P a),该多糖具有对心血管系统的作用,抑制肿瘤细胞生长的活性,增强巨噬细胞(M )的吞噬作用,以及抗炎的作用[1]。
本工艺从提取温度、N aOH 浓度、提取次数等因素入手,采用硫酸蒽酮法测定总糖含量为评价指标,对河蚌多糖的提取工艺进行正交优化试验。
选用正交表L 9(34)进行方差分析,以确定各因素的显著性水平,从而得出最佳的工艺参数。
1 仪器、药材与试剂电光分析天平(上海天平仪器厂),KQ 250数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),721分光光度计(上海第三分析仪器厂);市售角背无齿蚌(A uodonta W oodiana)样品,经过专家鉴定;N a OH,HC,l H 2S O 4(南京化学试剂厂),无水葡萄糖(汕头市光华化学厂,批号000926)、蒽酮(上海五联化工厂,批号990408),均为分析纯。
2 实验方法与结果2.1 多糖的含量测定2.1.1 对照品溶液与供试品溶液的制备对照品溶液:精密称取干燥至恒重的葡萄糖200m g ,置100m l 容量瓶中加水溶解并稀释至刻度,摇匀。
精密量取该溶液5m ,l 至100m l 容量瓶中加水稀释至刻度,摇匀,备用。
供试品溶液:精密量取河蚌多糖20mg ,置10m l 容量瓶中加水稀释至刻度,摇匀。
精密量取该溶液5m ,l 置100m l 容量瓶中加水稀释至刻度,摇匀,备用。
2.1.2 标准曲线的绘制精密量取对照溶液0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5m l 分别置于10m l 离心管中,采用硫酸蒽酮法[2]测定于620n m 处吸收度。
计算求得标准曲线回归方程:y =6.4609x -0.0024,r =0.9997。
2.1.3 精密度实验精密量取对照品溶液0.3m l 3份,按2.1.2项操作,分别加0.2%蒽酮硫酸溶液4.0m ,l 摇匀。
测定于620n m 处吸收度。
得RS D =0.79%(n =3)。
2.1.4 溶液稳定性实验将同一供试品溶液在1d 内重复测定5次,并连续测定5d 。
吸取对照品溶液0.5m ,l 按2.1.2项下操作,加0.2%蒽酮试剂4.0m ,l 测定于620nm 处吸收度。
日内与日间变异系数(RSD )分别为1.97%,3.85%。
2.1.5 加样回收率实验精密量取对照品溶液0.5m l 数份,分别加入一定量对照品溶液,按2.1.2项下操作,分别加入0.2%蒽酮硫酸溶液4.0m ,l 于620n m 处分别测其吸收度,并计算其回收率。
结果见表1。
表1 回收率实验结果标准品m / g 加样量m / g 检测值m / g 回收率(%)平均回收率(%)RSD (%)48.6610.0458.78100.1248.6610.0459.31101.0448.6610.0459.52101.46100.830.4148.6629.7476.3697.4048.6629.7477.1998.4648.6629.7477.4098.7298.250.572.2 提取工艺研究2.2.1 方法2.2.1.1 提取工艺过程按正交设计表分成9个实验组。
取蚌肉1.8kg ,匀浆,平均分成9分,每份为200g ,分别加水600m l 。
各组分别按正交设计表各因素,同时在250W (26.5 1)k H z 超声条件下进行平行提取,每次提取1h 。
各组提取液分别加入HC l 调p H 至p I ,加热90 恒温10m i n ,去蛋白,3000r /m i n 离心7m i n ,弃沉淀,取上清,减压浓缩至浓度为1g 蚌肉/m ,l 加两倍体积的95%乙醇沉淀,静置24h ,离心取沉淀,48 干燥。
称重,用水定容,即得。
2.2.1.2 正交实验设计设计考察提取温度(因素A )、N a OH 浓度(因素B),以及提取次数(因素C)对河蚌多糖含量的影响。
每因素取3水平,设计L 9(34)正交实验[3]。
结果见表2。
表2 正交设计的因素和水平水平提取温度T /N a OH 溶液浓度(%)提取次数1401225523501032.3 含量测定分别精密吸取供试品溶液0.5m ,l 按照2.1.2!380!时珍国医国药2006年第17卷第3期L IS H I ZHEN M ED I C I NE AND M ATER I A M EDICA RE SEARCH 2006VOL .17NO.3项操作,测定按正交设计表实验提取的多糖供试品溶液,计算多糖含量,进行方差分析。
结果见表3~4。
表3 L 9(34)正交实验水平A BC(%)111165.21212292.74313337.84421249.92522377.60623121.76731342.91832158.09933215.32K 1195.79158.04145.02K 2149.28228.39157.98K 3116.2874.92158.35R 79.51153.4713.33D 26.5051.164.44S 2702.432617.0019.74表4 方差分析结果方差来源总变异SS 自由度均方M SFPA 702.432351.2140.00<0.01B 2617.0021308.50148.86<0.01C 19.7429.871.12>0.05Error 70.2988.79F 0.01(2,8)=8.85,F 0.05(2,8)=4.46由方差分析可知,因素A 与B 为有极显著意义的因素,C 因素对多糖的含量影响不大,综合考虑,最佳提取工艺为A 1B 2C 1,即在4 时,N a OH 浓度为5%,提取1次。
2.4 验证实验取蚌肉200g ,匀浆,加水600m l 。
4 时,N a OH 浓度5%,在250W (26.5 1)k H z 超声条件下提取1次,提取时间1h 。
提取液加入HC l 调p H 至pI ,加热90 恒温10m i n ,去蛋白,3000r /m in 离心7m i n ,弃沉淀,取上清,减压浓缩至浓度为1g 蚌肉/m ,l 加2倍体积的95%乙醇沉淀,静置24h ,离心取沉淀,48 干燥。
称重,制备供试品溶液。
精密吸取供试品溶液0.5m ,l 按照含量测定方法测定多糖含量为90.51%。
3 讨论通过采用正交设计的方法,以硫酸蒽酮法测定总糖含量为评价指标,从提取温度、N aOH 浓度、提取次数等因素入手,进行正交优化实验。
方差分析结果表明:提取温度、N a OH 浓度为有极显著意义的因素,提取次数对多糖的含量影响不大,综合考虑,最佳提取工艺为A 1B 2C 1,即在4 时,N aOH 浓度为5%,提取1次。
经过优化的工艺经济,简单、稳定、可行,使多糖的含量升高。
该研究结果为河蚌多糖的工业化提取,以及进一步的精制提供了依据。
参考文献:[1] 崔悦礼,李开源,赵翠兰,等.河蚌多糖(M Pa)对巨噬细胞吞噬能力的影响与抗炎作用[J].云南大学学报自然科学,1998,20(3):185.[2] 徐秀兰.生物化学实验与指导[M ].北京:中国医药科技出版社,1994:231.[3] 周怀梧.医药应用概率统计[M ].上海:百家出版社.1990:433.收稿日期:2005 07 01; 修订日期:2005 12 16作者简介:易 军(1970 ),女(汉族),湖南邵阳人,现任广东药学院药科学院讲师,硕士学位,主要从事药物新制剂工作.超声法制备石菖蒲挥发油! 环糊精包合物易 军1,李晓芳1,苏建湘2,谭文军2(1.广东药学院,广东广州 510006; 2.广东药学院药学本科2004届毕业生,广东广州 510006)摘要:目的研究!环糊精(! CD )包合石菖蒲挥发油的制备工艺。