大豆蛋白的提取与含量测定

黄豆中蛋白质含量测定——凯氏定氮法一、仪器和试剂主要仪器:定氮仪。

试剂（除注明外均为分析纯）：1. 浓硫酸。

2. 30%氢氧化钠溶液。

3. 2～4%硼酸溶液。

4. 0.1mol/L 盐酸溶液。

5. 催化剂：硫酸钾——硫酸铜的混合物（K 2SO 4:CuSO4·5H 2O=3.5g:0.1g ）。

二、操作步骤1. 消化准确称取粉碎均匀的黄豆粉0.5g 左右，小心移入干燥的消化瓶中（注意用称量纸将样品加入到消化管底部，勿粘附在瓶壁上），加入适量催化剂及10mL 浓硫酸，按要求安装好消化装置后,设置好消化程序,打开冷凝水, 开始消化程序。

(160℃, 40min; 250℃, 20min; 350℃, 60min; 420℃, 30min)消化程序结束后，消化至溶液透明呈蓝绿色，冷却至室温。

同时做空白对照。

2． 蒸馏、吸收及滴定按要求安装好UDK142蒸馏仪，并将蒸馏仪与自动电位滴定仪连接好。

将所需试剂装到相应的试剂瓶中。

设置好蒸馏程序及滴定程序后，将冷却好的消化管装到蒸馏仪上，打开冷凝水，然后开始程序。

三、结果计算X ——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g ）C —— HCl 标准溶液的浓度mol/LV 1 —— 滴定样品吸收液消耗的HCl 标准溶液的体积mLV 2 —— 滴定样品空白液消耗的HCl 标准溶液的体积mL0.0140——1.0mL 盐酸（C(HCl)＝1.000mol/L ）标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（g ）m ——试样的质量或体积，单位为克或mL1000140.0)(21⨯⨯⨯⨯-=F mc V V XF ——氮换算为蛋白质的系数。

一般食物为6.25，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵5.30。

计算结果保留三位有效数字。

大豆蛋白的功能性测定专业：生物工程班级：08一班学号：060508131 姓名：戴璐成绩：摘要：利用考马斯亮蓝G250测定样品中蛋白含量为百分之十左右远不及样品包装上所说的82%的含量；紫外分光光度计测定大豆蛋白紫外吸收特征，其紫外光谱显示含较多无法除尽的杂质，荧光光度计观察其荧光效应，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其相对分子质量关键词：大豆蛋白蛋白含量测定紫外吸收电泳功能性1.概述蛋白质是组成人体的重要物质。

是人体生命活动的物质基础，是食品的第一大营养素。

大豆是重要的粮油兼用作物，它富含蛋白质、脂肪，是一种营养平衡的食物。

其籽粒含蛋白质一般为40%左右，比一般谷物高2-4被，也比牛奶、鸡蛋和瘦猪肉的蛋白质含量高。

大豆是豆科植物中最有营养而又易于消化的食物，是蛋白质最丰富最廉价的来源。

另外，大豆蛋白不含淀粉，氨基酸也组成比较平衡。

所以，目前许多蛋白质营养品都是用的大豆蛋白。

2.材料与方法1.考马斯亮蓝G250测定蛋白含量【材料】标准蛋白液，样品蛋白，722型分光光度计【方法】1>.标准曲线的制作取7支干净试管，按表一进行编号并加入试管混匀，室温静置3分钟，以第1管委空白，于波长595nm处比色，读取吸光度，以吸光度为纵坐标，各标准浓度作为横坐标作图的标准曲线2>.样液的测定另一支干净试管，加入样液1.0ml及考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀，室温静置3min，于波长595nm处比色，读取吸光度，由样液的吸光度查标准曲线即可求出蛋白含量2.大豆蛋白质的紫外吸收特征【材料】标准蛋白液，样品蛋白，UV-9100型紫外分光光度计【方法】将大豆蛋白溶于1mol/L PH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成2.0mg/mL的蛋白质溶液，以对应的Tris-HCl作参比，做紫外-可见扫描，速度10nm/s，范围200-400nm 之间3.大豆蛋白质的疏水性及荧光光谱【材料】标准蛋白液，样品蛋白，日本岛津RF-5310PC型荧光光度计，离心机，100mL 烧杯2个，玻璃棒1个【方法】将大豆蛋白溶于1mol/L PH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成0.5，1.0，2.0mg/mL的蛋白质溶液，3000r/min离心10min，以以相对应的Tris-HCl作参比，采用日本岛津RF-5310PC型荧光光度计进行荧光测定，激发波长280nm,发射波长300-800nm之间4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳【材料】直流稳压电泳仪，垂直平板电泳槽⑴分离胶缓冲液 1.5mol/L Tris-HCl (pH8.8)取18.15g Tris, 加80ml重蒸水，用1mol/L的HCL调pH至8.8，用重蒸水稀释至最终体积为100ml，4℃冰箱保存。

大豆蛋白的提取、干燥、性质测定实验摘要：以大豆为原料，采用碱提酸沉法提取大豆蛋白，以蛋白质提取率为指标，通过查阅文献确定了提取大豆蛋白的最佳工艺：35摄氏度下，pH 10 ，浸提时间40 min, 液料比20：1( mL/g）。

将提取出来的大豆蛋白用真空冷冻干燥装置进行干燥，通过前后称重，计算大豆蛋白的提取率。

利用提取出来的大豆分离蛋白进行大豆蛋白的性质测定实验。

食品体系中的大豆蛋白所具有的功能性如下：功能性质作用方式食品体系溶解度蛋白质溶解性能，与pH等相关饮料类乳化性脂肪乳状液的形成以及稳定肉类、酱类、汤类持水性游离脂肪的吸附肉类、酱类起泡性形成稳定膜、固定气体搅打奶油、甜食粘度增稠作用汤类、肉汁凝胶蛋白质基质的形成凝乳、乳酪凝聚-粘附性蛋白质作为粘附剂香肠、焙烤制品粘弹性面筋中的疏水键，凝胶中的二硫键肉类、焙烤本组决定利用提取的大豆分离蛋白测定大豆蛋白的持水性。

关键词：大豆蛋白、碱提酸沉、真空冷冻干燥、持水性正文：实验材料仪器：天平、烧杯、量筒、玻璃棒、pH试纸、Sigma离心机、4℃冰箱、1号离心管、20ml离心管、50ml离心管、真空冷冻干燥箱材料：大豆粉、蒸馏水、氢氧化钠溶液、盐酸溶液实验步骤一、大豆蛋白的提取原理：大豆分离蛋白的生产方法常见的有: 超滤膜法、离子交换法、碱溶酸沉法, 其中碱溶酸沉法是我国普遍采用的生产工艺。

此法能够有效地提高产品得率,能充分利用蛋白资源。

生产的分离蛋白不仅除去了可溶性糖类, 还除去了不溶性聚糖, 因而蛋白质含量高。

该种工艺主要是基于调解溶液的p H 值, 从而调解蛋白质的溶解度, 在pH 值调至4. 5 左右时, 由于蛋白质处于等电点状态而凝集沉淀下来, 经分离后得到蛋白沉淀物, 再经洗涤、中和、灭菌、干燥即得分离蛋白产品。

1、用电子天平称取大豆粉末10.01g，加入200ml蒸馏水，即液料比为20:1，搅匀.2、取40％的氢氧化钠10ml，加入100ml蒸馏水进行稀释，配制成稀碱溶液待用。

大豆中蛋白质含量的测定实验报告大豆是一种富含蛋白质的植物，因此对大豆中蛋白质含量的测定非常重要。

本实验旨在通过化学方法测定大豆中蛋白质的含量，并对结果进行分析和讨论。

实验材料和仪器：1. 大豆样品2. 硫酸钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 酸性消化液5. NaOH溶液6. 氮气吹扫装置7. 精密天平8. 恒温水浴9. 离心机10. 紫外分光光度计实验步骤：1. 准备大豆样品：将大豆磨成粉末，并将其过筛以获得均匀的颗粒大小。

2. 水解反应：取一定量的大豆样品加入酸性消化液中，放入恒温水浴中进行水解反应，使蛋白质完全水解为氨基酸。

3. 碱解反应：将水解后的溶液中加入适量的NaOH溶液，使溶液呈碱性，以便将其他干扰物质转化为不溶性沉淀。

4. 沉淀处理：将碱解后的溶液进行离心处理，将沉淀分离出来。

5. 沉淀洗涤：用硫酸钠溶液对沉淀进行洗涤，去除杂质。

6. 干燥：将洗涤后的沉淀放入烘箱中干燥，直至恒定质量。

7. 称重：使用精密天平称取干燥后的沉淀质量。

8. 光度计测定：将一定量的沉淀溶解于适量的NaOH溶液中，使用紫外分光光度计测定溶液的吸光度。

9. 蛋白质含量计算：根据标准曲线，计算出大豆中蛋白质的含量。

实验结果与分析：根据实验测定，我们得到了大豆样品中蛋白质的含量。

通过对标准曲线的分析，我们可以得知大豆样品中蛋白质的浓度。

从实验结果中可以看出，大豆中蛋白质的含量较高，这也符合我们对大豆富含蛋白质的认识。

在实验中，我们采用了水解和碱解的方法，这是常用的蛋白质测定方法之一。

水解反应将蛋白质水解为氨基酸，使其更容易测定；碱解反应则将其他干扰物质转化为不溶性沉淀，方便后续步骤的进行。

为了准确测定大豆中蛋白质的含量，我们进行了沉淀处理和洗涤步骤，以去除杂质。

这些步骤的目的是提高测定的准确性和精确度。

同时，干燥步骤的进行可以保证质量的恒定，进一步提高测定结果的可靠性。

通过紫外分光光度计的测定，我们可以得到溶液的吸光度，进而计算出蛋白质的浓度。

一、实验目的1. 掌握凯氏定氮法的原理和操作步骤。

2. 学会使用凯氏定氮仪进行蛋白质含量的测定。

3. 了解大豆蛋白质含量的测定方法及其在食品分析中的应用。

二、实验原理凯氏定氮法是一种经典的蛋白质含量测定方法，其原理是将样品中的蛋白质与浓硫酸共热，使蛋白质中的氮元素转化为无机氮，即硫酸铵。

通过测定硫酸铵中的氮含量，即可计算出样品中蛋白质的含量。

实验过程中，样品的消化、蒸馏、吸收和滴定是关键步骤。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：大豆样品、浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.1M HCl、蒸馏水等。

2. 实验仪器：凯氏定氮仪、凯氏烧瓶、电炉、锥形瓶、100mL容量瓶、酸式滴定管、电子天平、移液管等。

四、实验步骤1. 样品消化：准确称取0.5g大豆样品（精确至0.0001g），置于凯氏烧瓶中，加入5mL浓硫酸，再加入2g硫酸钾、0.1g硫酸铜和0.5mL过氧化氢，充分混合后，置于电炉上加热消化，直至样品完全消化。

2. 蒸馏：将消化后的溶液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，加热蒸馏，使氨气释放。

3. 吸收与滴定：将蒸馏出的氨气导入装有2%硼酸溶液的锥形瓶中，待吸收完全后，用0.1M HCl标准溶液滴定，直至溶液由蓝紫色变为红紫色为止。

4. 计算蛋白质含量：根据滴定消耗的HCl标准溶液的体积，计算出样品中氮含量，再根据氮含量计算出蛋白质含量。

五、实验结果与分析1. 实验结果：本次实验测得大豆样品中的蛋白质含量为37.2%。

2. 结果分析：凯氏定氮法是一种准确、可靠的蛋白质含量测定方法。

实验过程中，样品的消化、蒸馏、吸收和滴定等步骤严格按照操作规程进行，确保了实验结果的准确性。

本次实验测得的大豆蛋白质含量与文献报道基本一致，表明实验方法可靠。

六、实验总结1. 凯氏定氮法是一种经典的蛋白质含量测定方法，具有操作简便、结果准确等优点。

2. 实验过程中，严格遵循操作规程，注意样品的消化、蒸馏、吸收和滴定等步骤，确保实验结果的准确性。

大豆分离蛋白标准大豆分离蛋白是一种优质的植物蛋白，其蛋白含量高，氨基酸组成均衡，且易于消化吸收。

在食品加工行业中，大豆分离蛋白被广泛应用于肉制品、调味品、乳制品等产品中，以提高其蛋白质含量，改善口感和营养价值。

本文将对大豆分离蛋白的标准进行介绍，以便生产加工企业和相关研究人员了解其质量要求和技术规范。

一、外观特征。

大豆分离蛋白的外观呈淡黄色至浅棕色粉末状，无异物和明显气味。

其颜色应均匀，无结块和异物，符合食品卫生标准要求。

二、蛋白含量。

大豆分离蛋白的蛋白含量应不低于90%，通过蛋白质测定方法进行检测，确保产品的蛋白质含量符合标准要求。

三、氨基酸组成。

大豆分离蛋白的氨基酸组成应符合国家食品安全标准，特别是必需氨基酸的含量要达到一定比例，保证产品的营养价值和生理功能。

四、水分含量。

大豆分离蛋白的水分含量应控制在一定范围内，一般不超过8%，以确保产品的稳定性和保存期限。

五、微生物指标。

大豆分离蛋白产品应符合国家相关的微生物指标标准，包括总菌落数、大肠菌群和霉菌、酵母菌等指标，保证产品的卫生安全。

六、重金属和有害物质。

大豆分离蛋白产品中的重金属和有害物质含量应符合国家相关标准，特别是铅、镉、汞等重金属的含量要符合食品安全标准，保证产品的安全性和可持续发展。

七、储存和包装。

大豆分离蛋白产品在储存和包装过程中，应采取适当的措施，防止产品受潮、变质和污染，保证产品质量的稳定性和持久性。

综上所述，大豆分离蛋白作为一种重要的植物蛋白资源，在食品加工行业中具有广阔的应用前景。

生产加工企业在生产过程中，应严格按照相关标准和技术规范进行生产，确保产品质量符合国家食品安全标准，为消费者提供安全、营养、健康的食品产品。

同时，相关研究人员也应加强对大豆分离蛋白的质量研究和控制技术，推动行业的可持续发展和创新。

希望本文所述的大豆分离蛋白标准能够为相关行业提供参考，促进行业的健康发展和科技进步。

实验八大豆蛋白的提取及浓度测定实验目的1．掌握大豆蛋白提取的原理和方法。

2．学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理及方法。

3.制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。

4．学习计算蛋白质收率。

实验原理榨油工业的副产品——豆粕中含有丰富的蛋白质，依其性质的不同，可分为水溶蛋白，盐溶蛋白，碱溶蛋白，醇溶蛋白。

将豆粕依次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的干粉。

Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。

甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜及酒石酸钾钠组成。

蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。

乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成。

此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与蛋白质含量成正比。

此法也适用于测定酪氨酸、色氨酸含量。

用Folin酚法可测出蛋白制品的含量，已知原料的重量，可以求出蛋白质的收率。

本法可测定范围是25—250µg蛋白质试剂和器材（一）、试剂1.标准蛋白质溶液结晶牛血清蛋白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮的含量，根据其纯度配制成150µg/mL蛋白溶液。

2.Folin—酚试剂（见Folin-酚法测蛋白质）3．其他试剂(1)10％NaCl (2)0．2％ NaOH (3)75％乙醇(4)丙酮(5)6mol／L HCl (6)蒸馏水4测试样品使用前稀释100倍。

（二）、器材试管及试管架，0.5，1及5mL吸量管，恒温水浴，722型分光光度计电动搅拌器，离心机，烧瓶，水泵，吸滤瓶， pH试纸，研钵操作方法（一）大豆蛋白的提取1．将豆粕掰成小块，用研钵磨碎。

2．水的抽提将磨碎之豆粕20g用5～6倍的蒸馏水浸泡，调pH为7．0，在10℃下搅拌抽提15min，离心15min，3500r／min，取上清液，如上清液不清澈再经吸滤(沉淀留下步抽提)。

清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用6mol／L HCl调pH4．5～5．0，3000r／min，离心15min，收集沉淀物，反复用丙酮洗涤，得到粉末状蛋白质干粉，待用。

大豆蛋白提取方法的比较总结1、酸沉碱提法大豆分离蛋白是一种传统的分离提取方法。

大豆分离蛋白法是利用大豆中大多数蛋白质在等电点(pH415)时沉淀的特性,与其他成分分离，沉淀的蛋白质经调节pH后溶解，因此称之为酸沉碱提法。

酸沉碱提的缺陷是：耗酸、耗碱量大，废水处理费用高，产品收率低。

该分离提取方法有待改进。

但目前仍然是工业化生产的基本方法。

2、膜分离法根据大豆蛋白的分子量大小、形状及膜与大豆蛋白的适应性，选择膜材料和不同截留分子量的膜，对大豆蛋白提取液超滤分离，超滤净化，使非截留组分排除，达到符合标准的分离大豆蛋白液，接着将净化后的大豆蛋白提取液超滤浓缩到所需的浓度后出料，喷雾干燥成粉状大豆分离蛋白。

3、反胶束萃取分离法反胶束是表面活性剂在有机溶剂中形成的一种聚集体，其中表面活性剂的非极性尾在外，与有机溶剂接触，极性头在内，形成极性核，该核具有包含水溶液和溶解蛋白质的能力，因而可以用此含有反胶束的有机溶剂从水相中萃取蛋白质。

利用反胶束技术从全脂豆粉萃取大豆蛋白，可一次萃取50%左右。

大豆蛋白萃取过程非常快，用非扩散模型解释较为合理。

该法需要的主要仪器有：自动水分测定仪、气浴恒温震荡器、离心机、凯氏定氮仪、分析天平、恒温磁力搅拌器和微量进样棒等。

影响反胶束萃取过程的主要因素有表面活性剂的种类及浓度、水相的pH值、离子强度、温度等。

反胶束萃取技术的优点是：选择性高、操作方便、放大容易、萃取剂(反胶束)相可循环利用、分离和浓缩同步进行。

其缺点是:蛋白质在现有反胶束体系中稳定性不高,导致萃取前后蛋白质的活性损失较大，因而制约其工业化应用。

4、反相高效液相色谱法这是对大豆蛋白中7S和11S球蛋白进行快速分离的一种方法。

在分离条件为40℃、流速1mL/min的条件下,9min可完成相应球蛋白的分离。

具体方法为:(1)试剂与试样。

乙腈(CAN) (HPLC级)、三氟乙酸(TFA) (HPLC级)、HPLC级水用于移动相的制备。

大豆蛋白质检测方法1.引言1.1 概述概述部分的内容可以按照以下方式进行编写：在此文中，我们将关注大豆蛋白质的检测方法。

大豆蛋白质是一种重要的植物蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用领域。

因此，准确、快速地检测大豆蛋白质的含量和质量对于农业生产、食品工业以及药品生产等领域非常关键。

随着科学技术的不断发展，大豆蛋白质检测方法也得到了不断完善和创新。

文章将介绍两种主要的大豆蛋白质检测方法，并详细阐述它们的原理和步骤。

在第一种方法中，我们将了解到它基于某种特定的原理来进行大豆蛋白质的检测，通过特定的步骤来获取准确的结果。

而在第二种方法中，我们将探讨它采用的另一种不同原理来进行大豆蛋白质的检测，并且与第一种方法进行对比，分析它们各自的优缺点。

通过对这两种方法的介绍和比较，我们希望能提供给读者们一个全面了解大豆蛋白质检测方法的视角，以便在实际应用中选择最适合的方法。

文章的结论部分还将总结分析这两种方法的优缺点，以及它们在实际应用中的可能应用前景。

通过深入研究大豆蛋白质检测方法，我们可以更好地了解大豆蛋白质的特性和含量，为大豆相关产品的研发和质量控制提供科学依据。

同时，这也为食品安全领域和农业生产提供了重要的支持，促进了行业的健康发展。

总而言之，本文旨在探讨大豆蛋白质检测方法，既介绍了两种常用的方法，又对它们的原理和步骤进行了详细说明。

通过对这两种方法的分析和比较，我们可以更好地理解并选择最合适的方法来进行大豆蛋白质的检测。

这对于大豆相关产业的发展和食品安全具有重要意义。

1.2文章结构文章结构是指文章整体的框架和组织，它决定了文章的逻辑性和连贯性。

本文的目的是介绍大豆蛋白质检测方法，为了使读者能够清晰地了解这个主题，本文将分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分将首先对大豆蛋白质检测方法进行概述，介绍大豆蛋白质在食品工业和农业中的重要性以及对其质量检测的需求。

随后，将说明本文的结构和各部分的内容，以使读者对文章有一个整体的了解。

实验一大豆分离蛋白的提取1．实验目的学习掌握大豆分离蛋白的碱提酸沉法。

2．分离原理：大豆分离蛋白的制取方法，按工艺特点主要有三种：第一种是碱提酸沉法；第二种是离子交换法；第三种是超滤法。

碱提酸沉法生产大豆分离蛋白的原理，是将脱脂大豆内的蛋白质溶解在稀碱溶液中，分离除去豆粕中的不溶物，然后用酸将大豆蛋白质提取液的pH值调至大豆蛋白的等电点，使大豆蛋白质沉淀析出，再经分离清洗，回调pH，得到粉状大豆分离蛋白。

3. 试剂材料：豆粕，5%NaOH，2N HCl（17ml浓盐酸，缓慢用水稀释至100ml）。

4. 提取方法：将2g大豆磨碎，得到可通过80目筛的豆粕。

用重量10倍于豆粕的蒸馏水与脱脂豆粉混合，用5%NaOH 水溶液将豆粉悬浮液的pH调节到8.5，室温或40℃搅拌1.5h。

然后将提取液离心除渣4000rpm×15min，得上清液。

用2N的HCl将上清液的pH值调到4.5，同时轻度搅拌均匀，可见开始出现沉淀，室温静置30min，然后以4000rpm×15min离心，用蒸馏水清洗沉淀2次，将蛋白沉淀物溶于20 ml水中，并调节pH到7.0，考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度，计算蛋白提取率。

5. 产品测定指标：（1）可溶性蛋白质的浓度：采用考马斯亮蓝法。

（2）蛋白质的提取率计算公式：可溶蛋白质的浓度(ug/ml) ×稀释度×体积(ml)提取率（%）＝×100%原料质量(g) ×106（附）考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度一、实验目的掌握考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度的原理和方法，掌握离心机和移液器的正确使用方法。

二、实验原理考马斯亮蓝G-250是一种甲基取代的三苯基甲烷，在465nm处有最大吸收值。

考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质-考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收λmax的位置发生转移，在595nm处有最大吸收值。

大豆蛋白质含量的测定实验方案1 原理试样在催化剂存在下用硫酸消解,反应产物用碱中和后蒸馏。

释放出的氨被硼酸溶液吸收,吸收液用硫酸溶液滴定,测定氮含量并计算粗蛋白质含量。

2试剂除参考物质外,只使用经确认无氮的分析纯试剂,试验用水为蒸馏水或去离子水或同等纯度水.警告:2.4、2.8、2.ll和 2.12中提到的试剂应谨慎使用。

2.1 硫酸钾 (K2SO4)。

2.2 五水硫酸铜 (CuSO4·5H20)。

2.3 二氧化钛 (TiO2)。

2.4 硫酸(H2SO4):c(H2SO4)=18mol/L,ρ20(H2SO4)=1.84g/mL。

2.5 石蜡油。

2.6 N-乙酰苯胺 (C8H9NO):熔点114℃,氮含量10.36g/100g。

2.7 色氨酸(C11H12N22):熔点282℃,氮含量13.72g/100g。

2.8 五氧化二磷(P205 )。

2.9 硼酸:水溶液 ,ρ20(H3BO3)=40g/L,或所使用仪器推荐的浓度。

2.10 指示剂:按照所使用仪器的推荐,加入一定体积的溶液A(2.10.1）和溶液B(2.10.2 )(例如:5体积溶液A和1体积溶液B)。

注1:有可能准各使用的硼酸溶液中含有指示剂（2.9+2.10）。

注2:溶液A和溶液B的比例可根据仪器进行调整。

也可以使用pH电极进行电位滴定，PH电极需要每天校准。

5.10.1溶液A:200mg溴甲酚绿（C21H14Br4O5S）溶于体积分数为95%的乙醇（C2H5OH），配制成100mL溶液。

5.10.2溶液B:200mg甲基红（C15H15N3O2）溶于体积分数为95%的乙醇（C2H5OH）,配制成100mL溶液。

5.11 氢氧化钠水溶液（NaOH）:质量分数33%或40%，含氮量少于或等于0.001%。

也可以使用含氮量少于或等于0.001%的工业级氢氧化钠。

5.12 硫酸:标准滴定溶液，c（H2SO4）=0.05mol/L因为硫酸在连接管中不产生气泡，所以推荐用硫酸代替盐酸。

豆渣蛋白的提取及含量测定作者：李夏来源：《科学与财富》2011年第04期[摘要] 大豆富含植物蛋白，可以增强体质和机体的抗病能力，还有降血压和减肥的功效，并能补充人体所需要的热量，可以治疗便秘，极适宜老年人食用。

目前，饮用豆浆逐渐成为一种时尚，但是打磨豆浆会产生大量豆渣，一般都用作饲料或者丢弃，造成了浪费。

对此，本课题主要以水溶剂法提取的富含大豆蛋白的豆渣为原料，进一步提取水溶、酸溶、碱溶性大豆蛋白同时采用考马斯亮蓝法对大豆蛋白的含量进行了分析，以期为将来的工业生产及科研提供科学依据。

[关键词] 大豆蛋白，提取，测定1、材料与设备1.1实验原料：市售大豆1.2实验试剂：蒸馏水(实验室自制)，HCL（分析纯），无水丙酮（分析纯），NaOH（分析纯），考马斯亮蓝G250，无水乙醇，浓硫酸1.3实验仪器：FY130型药物粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司。

真空冷冻干燥仪，北京松源华兴公司。

1610型离心机，北京康瑞名科技有限公司。

JA2003型分析天平，上海衡平仪器仪表厂。

Unic()-UV21202PC紫外一可见分光光度计。

电热恒温水浴锅，江苏常熟医疗器械厂。

2、实验方法2.1大豆蛋白的粗提将市售大豆浸泡过夜，研磨后过滤，取豆渣，冷冻干燥至恒重。

精确称取干燥为恒重的豆渣60克，过60目筛，置圆底磨口烧瓶中，用10倍蒸馏水浸提，三层纱布过滤后，4℃下于高速离心机中15 000 g离心20 min，取出的上清液即为大豆蛋白粗提液[1]．浓缩，用无水丙酮脱水，冷冻干燥，所得白色固体即为粗提大豆蛋白质。

2.2水溶性蛋白的提取精确称取干燥为恒重的豆渣60克，过60目筛，置圆底磨口烧瓶中，加入10倍体积的蒸馏水，用玻璃棒搅拌2小时。

15 000 r／rain离心15分钟，取上清液，残渣再次用10倍体积蒸馏水浸泡按上述法重复一次。

将两次上清液合并，用盐酸调酸碱值至5．0，用玻璃棒搅拌，静止过夜，15 000 r／rain 离心15分钟，取沉淀，用无水丙酮脱水，冷冻干燥，得水溶性大豆蛋白[2]。

超滤法生产大豆分离蛋白的研究本研究采用超滤法对大豆蛋白进行分离纯化，探究了超滤膜孔径、压力、pH值、温度等因素对大豆蛋白分离效果的影响。

结果表明，超滤膜孔径为10kDa时，分离效果最好；超滤压力越高，分离效果越好；pH值为7.0时，分离效果最佳；温度对分离效果影响不大。

通过分析分离蛋白的含量和纯度，得出最佳条件为：超滤膜孔径为10kDa，超滤压力为0.5MPa，pH值为7.0，温度为20℃。

在此条件下，大豆蛋白的分离率达到了95.2%，纯度为87.3%。

关键词：大豆蛋白；超滤法；分离纯化；孔径；压力；pH值；温度引言：大豆是我国传统的农作物之一，含有丰富的营养成分，其中蛋白质含量较高，是一种优质的植物蛋白。

大豆蛋白具有良好的营养价值和功能特性，在食品、医药、化妆品等领域有着广泛的应用。

但是，大豆蛋白的生产和应用受到其复杂的组成和结构的限制，需要经过分离和纯化，以提高其品质和功能性。

目前，常用的大豆蛋白分离方法包括盐析法、凝胶过滤法、离子交换法、凝胶电泳法等。

然而，这些方法存在着操作复杂、分离效率低、分离纯度不高等问题。

因此，探究一种高效、简便、经济的大豆蛋白分离纯化方法具有重要意义。

超滤法是一种利用超滤膜进行分离的方法，具有操作简便、分离效率高、分离纯度好等优点。

本研究旨在探究超滤法对大豆蛋白的分离纯化效果，并寻找最佳的超滤条件，为大豆蛋白的生产和应用提供参考。

材料与方法：1.材料大豆粉（质量分数为90%）、超滤膜（分子量截留率分别为10kDa、20kDa、30kDa）、pH计、超滤装置2.方法（1）大豆蛋白的提取将大豆粉加入磨碎机中，加入适量的水，按比例调节搅拌器的转速，使其成为糊状物。

将糊状物倒入离心管中，离心5min，去除上层油脂和杂质，得到大豆蛋白的上清液。

（2）超滤法的分离纯化将大豆蛋白上清液加入超滤装置中，调节超滤膜孔径、压力、pH 值、温度等因素，进行分离纯化。

收集分离得到的大豆蛋白溶液，测定其含量和纯度。

大豆中蛋白质含量大豆中蛋白质含量是大豆质量评价的重要指标之一，也是制备豆制品的重要指标。

大豆是一种非常营养丰富的植物，其中有蛋白质的含量非常丰富，含量的精确测定是进行大豆质量评价和加工处理的基础。

大豆蛋白质含量的测定，根据表面特征可以分为：理化指标法、紫外光谱法、超声波技术、火焰原子吸收法等。

现今使用最多的方法就是火焰原子吸收法，也称Kjeldahl，是一种根据氮的定量测定方法，在经过Kjelrdahl实验后，把原始的大豆样品中氮含量转换为单位重量的蛋白质含量。

由于大豆自身品质变化差异大，蛋白质含量的测定受到因素的影响也较大，比如受品种、栽培环境、生长周期、收获日期等影响。

此外，大豆蛋白质含量在加工过程中也会受到影响，比如烘焙、提取程序等都会影响最终的蛋白质含量。

要准确测定大豆蛋白质含量，还需要考虑采用的采样方法，采样容量，以及采样方法的准确性，确保样品的准确性以及准确测定结果。

此外，实验环境也是非常重要的因素，室内温度、湿度以及实验器材等都会影响测定结果的准确性。

Kjelrdahl是目前用来测定大豆蛋白质含量常用的一种方法，但也有一些其他的测定方法，如紫外光谱测定法，它把大豆中的底物分解成蛋白质，用紫外光谱仪测定吸收率，并转换为蛋白质含量。

测定大豆蛋白质含量的另一种方法是放射免疫法，这种方法是利用山羊抗体抗原反应的原理，来测定大豆中的蛋白质含量。

这种方法有很强的特异性，能够较为准确地测定大豆中蛋白质含量，但它的操作较为复杂，也比较昂贵。

大豆蛋白质含量的准确测定对于大豆加工产品质量、生产效率和结构的研究有重要的意义，同时也是大豆制品产品品质的关键因素之一。

因此，要正确测定大豆中蛋白质含量，需要选择合适的实验方法，同时在实验过程中要做到操作正确，控制各准确性，以确保最终测定结果的准确性。