甲氧滴滴涕对小鼠卵母细胞体外成熟的影响【摘要】目的：观察甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响. 方法：实验组小鼠未成熟卵用7.25, 14.5，29 mg/L MXC 不同浓度培养液培养；对照组小鼠未成熟卵直接用合成人输卵管培养液培养，两组培养时间均为24 h. 观察各组生发卵泡破裂(GVBD)和第一极体(PB1) 的形成, 出现PB1的卵母细胞视为核成熟. 结果：培养24 h时，卵母细胞GVBD发生率7.25 mg/L MXC组为80.4%，14.5 mg/L MXC组为78.8%，29 mg/L MXC组为78.4%，与对照组的86%相比较并没有明显改变. 培养过程中不同浓度MXC试验组GVBD发生较同期对照组相比较也没有明显延迟. 但在培养液培养24 h时PB1的排出率7.25 mg/L MXC组为52.8%，14.5 mg/L MXC组为44.4%，29 mg/L MXC组为22%，明显低于对照组的71.2%，差异具有统计学意义(P<0.05). 结论： MXC对体外培养的小鼠卵母细胞GVBD发生没有影响，但能抑制其卵母细胞的核成熟. 【关键词】甲氧氯；卵母细胞；体外研究; 细胞培养技术 【Abstract】AIM: To investigate the effect of Methoxychlor (MXC) on in vitro maturation of mouse oocytes. METHODS： The oocytes in experimental groups were cultured in hunan tubal fluid(HTF) medium supplemented with 7.25，14.5，29 mg/L MXC and the oocytes in the unexposed control group were
创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王* 有丝分裂减数分裂曲线图 第一题 如某动物细胞中DNA含量为2个单位(m)。下图分别为雌性动物生殖细胞减数分裂DNA 含量变化的曲线图和细胞示意图。请回答： (1)细胞A是，与之相对应的曲线段 是。(以横轴上的数字段表示) (2)该动物体细胞中最多可有_____条染色体。 (3)与细胞C相对应的曲线段。C细胞最终能形成个成熟生殖细胞。 (4)曲线2-3时期DNA含量变化是由于的结果，减数第一次分裂DNA含量变化是由于的结果。减数第二次分裂时分离，成为染色体。 第二题 某动物细胞中DNA含量为2个单位(m)。下图分别为雌性动物生殖细胞减数分裂DNA 含量变化的曲线图和细胞示意图。请回答：
(1)细胞A是___________，与之相对应的曲线段是___________(以横轴上数字段表示)。 (2)细胞B的名称是___________，与之相对应的曲线段是___________。 (3)细胞C的名称是___________，与之相对应的曲线段是___________。C细胞最终能形成___________个成熟的生殖细胞。 (4)曲线段2~3时期DNA含量变化是由于___________的结果，减数第一次分裂后DNA 含量变化是由于___________的结果。减数第二次分裂时___________分离，成为两条染色体。 第三题 (12分)某动物细胞中DNA含量为2个单位(m)。下图分别为某雌性动物减数分裂过程中DNA含量变化的曲线图和细胞分裂示意图。请据图回答： (1)细胞A是细胞，与之相对应的曲线段 是。(以横轴上的数字段表示) (2)细胞B的名称是，与之相对应的曲线段 是。 (3)细胞C的名称是，与之相对应的曲线段 是。 C细胞最终能形成个成熟生殖细胞。 (4)曲线2～3时期DNA含量变化是由于的结果，减数第一次分裂DNA含量变化是由于的结果。减数第二次分裂 时分离，成为染色体。 (5)A、B、C三细胞中染色体数目依次是，染色单体数依次 是。 第四题
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在小鼠卵母细胞成熟过程中的表达及作用 杨彩荣 魏延昌张 岩郑可佳 李 宁严云勤* (东北农业大学动物细胞与发育生物学教研室，哈尔滨150030) 摘要哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin ，mTOR)是一种Ser/Thr 激酶，属于PIKK 超家族，对调节细 胞周期、蛋白质合成等具有重要作用，是细胞生长、增殖、分化、凋亡的中心调控器，但在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道．以小鼠卵母细胞为研究对象，采用免疫荧光为主要研究方法，对mTOR 在小鼠卵母细胞中的表达进行研究，并通过mTOR 的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin ，RAPA )对卵母细胞进行处理，对mTOR 在卵母细胞成熟过程中的作用进行研究．结果显示：小鼠卵母细胞成熟过程中，生发泡(germinal vesicle ，GV )期mTOR 主要集中在核膜处表达，生发泡破裂(germinal vesicle breakdown ，GVBD )后mTOR 伴随染色体分布，第二次减数分裂中期(second metaphase ，M Ⅱ期)mTOR 伴随纺锤体分布；雷帕霉素处理后，小鼠卵母细胞的成熟受到抑制，且这种抑制作用具有浓度依赖性，同时其mTOR 的表达部位和形态也发生变化．研究表明，在小鼠卵母细胞成熟过程中，mTOR 在各个时期的表达及分布具有阶段特异性，并对小鼠卵母细胞GVBD 的发生和第一极体的排放都具有重要作用． 关键词雷帕霉素靶蛋白(mTOR)，小鼠卵母细胞，雷帕霉素，免疫荧光学科分类号 Q2 DOI:10.3724/SP.J.1206.2009.00446 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2009,36(10):1334~1339 https://www.doczj.com/doc/eb6403262.html, 研究报告 Research Papers *通讯联系人. Tel:0451-********,E-mail:yanyunqin@https://www.doczj.com/doc/eb6403262.html, 收稿日期：2009-07-23，接受日期：2009-09-04 雷帕霉素靶蛋白(mTOR)结构与功能上高度保守，是一种存在于哺乳动物细胞中的Ser/Thr 激酶，属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶(phosphatidylinositol kinase-related kinase ，PIKK)家族成员．mTOR 信号通路可以汇聚和整合来自于营养、生长因子、能量和环境胁迫对细胞的刺激信号[1～3]，通过其下游的靶蛋白核糖体蛋白S6激酶1(ribosomal protein S6kinase 1，S6K1)和蛋白质翻译起始因子eIF4E 结合蛋白1(eIF4E binding protein 1,4EBP1)调控蛋白质的翻译，加快细胞G1期/S 期的转换，促进细胞生长和增殖，抑制细胞凋亡[4～6]．mTOR 信号通路紊乱与肿瘤的形成及细胞的恶性转化密切相关[7]． 雷帕霉素(rapamycin ，RAPA ，RPM)是一种大环内酯类抗生素和免疫抑制剂，它进入体内后与胞浆受体FKBP12结合形成复合物，此复合物能够结合在mTOR 蛋白羧基端的FRB 结构域内，形成三元复合物，使得mTOR 的激酶催化域失去接近并磷酸化下游靶蛋白的能力，从而抑制mTOR 的生物学功能[8～10]． mTOR 在卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的研究较少，且大多集中在海星、海胆等动物中[11,12]， 而在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道．以往的研究表明，mTOR 与一些蛋白质的合成有关[12]，而特定蛋白质的合成对卵母细胞成熟具有重要的作用，因此我们推测，mTOR 可能在哺乳动物卵母细胞成熟过程中有重要作用．所以本研究以小鼠卵母细胞为研究对象，观察了mTOR 在卵母细胞成熟各个阶段的表达及分布情况，同时通过雷帕霉素的处理观察mTOR 对卵母细胞成熟的重要作用，为进一步探索mTOR 在小鼠卵母细胞成熟过程中的分子机制提供实验依据． 1材料与方法 1．1 实验材料 本实验选用昆明白品系6～8周龄性成熟雌鼠，购自哈尔滨肿瘤医院实验动物中心． 1．2 主要试剂 α-MEM 购自Gibco 公司；雷帕霉素购自江苏碧云天生物技术研究所；孕马血清(pregnant mare
猪卵母细胞体外成熟培养时间及去核方法的研究* 朱秀萍1，蒋伟娟2，艾晓杰1，徐动1，朱淑文1 1上海交通大学农业与生物学院，上海 (200240) 2上海市兽医卫生监督所，上海 (200335) E-mail：xpzhu@https://www.doczj.com/doc/eb6403262.html, 摘要：本研究对不同体外成熟培养时间的猪卵母细胞进行盲吸法去核及利用脱羧秋水仙碱(DC)和放线菌酮(CHX)的化学诱导法去核效率进行了比较研究。结果显示，用盲吸法去核，体外成熟培养（IVM）39-41h组卵母细胞去核率与IVM 36-38h组差异显著（P<0.05），与42-44h 组差异不明显（P>0.05），但三组显著高于IVM45-48h组（P<0.05）。化学诱导法去核结果表明，IVM 42-44h组去核率最高，但与IVM 39-41h组差异不显著（P>0.05），其他各组间均差异显著（P<0.05）。在相同的体外成熟培养时间内，盲吸法的去核率比化学诱导法的去核率要高。本实验证明：猪卵母细胞IVM在39-44h内去核率较高，且盲吸法去核效率高于化学诱导去核。 关键词：猪卵母细胞，盲吸法去核，化学诱导去核，去核率 中图分类号：Q 968.1 1 前言 近年来，体细胞核移植在多种哺乳动物获得成功，相继产生克隆羊、牛、小鼠、山羊、猪、猫、兔、骡子和大鼠，为生命科学、医学制药等诸多领域提供了一个崭新的研究手段。卵母细胞核物质的去除是克隆技术成败的关键环节之一，卵母细胞的体外成熟是决定克隆胚胎能否最终发育成正常个体的关键。去核效率的高低与卵母细胞所处的成熟时期及采用的去核方法有密切关系。因此掌握卵母细胞体外成熟时间，快速而准确的去核，对提高去核成功率有重要意义。 目前动物克隆中普遍使用是机械去核法（盲吸法），该方法对细胞的机械损伤较大、耗时、技术要求高。如何既能完全去掉卵母细胞的核，又不致对细胞造成更大的损伤是研究者们一直在探索的问题。“化学诱导去核法”去核首次建立于小鼠卵母细胞，用脱羰秋水仙碱（DC）处理激活的卵母细胞，使染色体和极体牢固结合，然后用诱导第二极体排出的放线菌酮(CHX)处理卵母细胞，成功得到克隆小鼠[1~3]。Yin等把该法也应用于猪卵母细胞的去核[4]。在我国，杜卫华等首次利用化学诱导去核法用于小鼠卵母细胞的去核研究[5]，但对体外成熟培养的猪卵母细胞化学诱导去核研究目前国内尚未见报道。 本研究使用盲吸法和化学诱导去核对不同成熟培养时间的猪卵母细胞进行去核，旨在确定最佳的去核时间；建立猪卵母细胞化学诱导去核方法；同时，通过两种方法的去核效率的比较，为克隆技术研究中卵母细胞去核这一关键环节提供理论依据。 2 材料和方法 2.1 猪卵母细胞的采集 实验所用卵巢均来自于上海市闵行区纪王镇屠宰场屠宰的初情期前小母猪。将获取宰场屠废弃的猪卵巢，置于37℃灭菌生理盐水中，2h内送回实验室。以生理盐水清将卵巢洗两次 *本课题得到上海市科委国际交流项目（015407005）的资助。
《动物胚胎工程实验教程》 王子玉自编 南京农业大学动科院 2005年8月
实验一小鼠卵母细胞的体外成熟实验 一、实验目的 熟悉雌鼠的生殖器官的结构特点；掌握小鼠的超数排卵方案；掌握从卵巢上扎取未成熟卵母细胞的方法、卵母细胞的分类方法、体外成熟培养方法及核成熟情况和卵丘扩展程度的观察。 二、实验器材和材料 1. 器材及药品 体视显微镜，手术器械（眼科剪，眼科镊），1mL注射器，胶头滴管，口吸管，CO2培养箱，水浴锅，移液器，枪头，塑料培养皿，记号笔。 操作液（M2），成熟培养液（M－199），激素（PMSG和HCG），石蜡油。 2．实验动物： 3-4周龄昆明系雌性小白鼠，自由采食饮水。 三、实验内容 1.小鼠的超数排卵 注射剂量皮下或腹腔注射PMSG 10 IU/只小鼠。 注射方法 皮下注射：用手指捏住小鼠的头及尾部固定（图1-1），以酒精棉球消毒其背部，提起皮肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头微向上挑起不露出针尖时，再注入药物。随着药物的推入，在皮下可看到鼓起一个小泡，即证实药物确已注入皮下部位。皮下注射时防止药液从针孔处逸出。 腹腔注射：针头刚进入腹腔后向上挑，防止损伤小鼠腹腔内器官。注射针头宜选用小号细针头。注射药物后的小鼠自由饮水、采饲，自然光照。 2.卵巢的采集方法 在注射PMSG后46h利用颈椎脱臼法处死小鼠（将供体鼠置于饲养笼上，鼠爪自然抓紧笼上铁支架，此时一只手拉紧鼠尾，另一只手食指与拇指压紧鼠颈部，或用镊子压紧颈部即可致死，此为引颈法。用75%酒精喷湿鼠全身以消毒并防止毛发飞扬）。将小鼠头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱臼的振动；也可用食指和拇指直接掐断颈椎致死。然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上或鼠解剖台上。
卵母细胞的孤雌激活 将体外成熟卵母细胞（COCs要提前脱卵丘）分别用M2液及含10mM SrCl2的无钙无糖CZB液洗3遍，然后将卵母细胞置于含10mM SrCl2的无钙无糖CZB液中培养2.5小时，之后转入不含SrCl2的无糖CZB液中继续培养3.5小时，即在激活处理6小时后观察原核统计激活率。为了维持孤雌激活胚胎的二倍性，激活液和6小时检查原核前短期培养的培养液中均添加5μg/ml的CB。 激活的判定：2原核或2-细胞各具一原核的卵母细胞判断为激活；卵质膜破裂者判断为死亡；胞质分裂一次或多次但不出现原核者判断为碎裂（fragmentation）。本实验将碎裂卵均归为未激活卵。对照组为未经激活处理，但与激活组培养相同时间的卵母细胞。每次实验，只有当对照组卵母细胞无一激活时，实验组数据才有效。 实验原理：利用氯化锶抑制第二极体的排出 实验用品：培养12小时并老化12小时，即24小时后的卵【要提前脱卵丘】，透明质酸酶，M2操作液，10摩尔每毫升的氯化锶，含钙CZB, 孤雌激活实验步骤 1,，第一天上午杀鼠取卵，培养卵。假设只有一个培养孔的卵，一个孔里最好有20至30个卵，留置第二天孤雌激活。 2,，第二天上午，算好时间，用紫外线照射两个培养孔，15分钟后加液，一个孔里放激活液，【激活液的组成是CB加氯化锶加无钙CZB】，
配置激活液的方法问师兄。另一个孔里放培养液【含钙的CZB】。3，注意激活液不能预热太长时间，CB热时间长会影响效果，【君佐师兄的加法是无钙CZB450微升加上氯化锶50微升平衡20分钟，然后加上氯化锶做滴平衡20分钟就可以放卵了】，在配置激活液时最后应该用枪打一打，好充分混匀。至于放培养液的孔可以以后考虑，激活需要6个小时。把握好时间，脱卵丘后就马上激活。同时预热上需要的药品，包括M2，含钙的CZB，再照上两个中平皿。 4，开始做时先用透明质酸酶处理培养的卵1至3分钟，脱卵丘。再用M2洗3至4遍，再用激活液洗3至4遍，再移入含有激活液的培养孔中。移入培养箱中激活6个小时。 5，假设上午9点做完，下午3点就可以观察。激活的判断方法是2原核或2细胞各具一原核的卵母细胞判断为激活。卵质膜破裂者判断为死亡。胞质分裂一次或多次，但不出现原核者判断为碎裂，本实验将碎裂卵均归为未激活卵。 6，将激活成功的卵母细胞用含钙的CZB培养液洗5至6遍，再转移如含钙CZB的培养孔中培养，理论上48小时后就可以看到4细胞期，此时再转入含糖含钙CZB胚胎培养液中培养，即可以到达囊胚期。
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 卵子发生 原始卵泡 初级生长卵泡 次级生长卵泡 成熟中的卵泡 成熟卵泡（滤泡）和成熟卵 卵母细胞和卵泡细胞的关系 卵的结构 细胞核 染色体 核仁 细胞质 色素 皮层颗粒 环层板 卵黄 卵的类型 卵膜 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 动物成熟的雌性生殖细胞，亦称卵子。一般呈球形或椭球形，较大，多不能活动。它除具有一般细胞所共有的细胞核、细胞质、细胞器和质膜外，还有一些专供受精后发育所需的营养物质。以哺乳类为例，性成熟后，在神经和激素调控下自卵巢中排出的成熟卵，其外有透明带和放射冠包围，在透明带和质膜之间为充满液体的卵周隙（图1）。 卵（动物） 卵子发生
在性成熟之前卵巢皮层中有相当数量的卵原细胞。卵原细胞是在胚胎时期原始生殖细胞迁移到生殖嵴内分裂繁殖而产生的。卵原细胞之间存在着细胞间桥，所以发育的同步化程度较高。但同步化只限于这一时期，卵原细胞转变为初级卵母细胞时，细胞间桥消失，彼此分开，这点与精子发生不同。哺乳类在胎儿出生前或出生后不久，卵原细胞全部发育为初级卵母细胞。在个体性成熟之前初级卵母细胞不生长。性成熟后卵巢皮层中的、被卵泡细胞包围着的初级卵母细胞在激素刺激下生长，细胞核进行DNA复制,然后进入成熟分裂的前期变化。生长到一定的体积后，初级卵母细胞进行第一次成熟分裂，产生一个次级卵母细胞和第一极体；次级卵母细胞再进行第二次成熟分裂，产生卵子和第二极体。这些变化都是在卵泡中进行的(图2)。卵子和卵泡的发育大致可以划分为： 卵（动物） 原始卵泡尚未开始发育的卵泡，位于卵巢的皮层，由一个卵原细胞和外围一层扁平的卵泡细胞组成，数量很多，但在各类动物中差别很大。 初级生长卵泡卵泡细胞由扁平变为立方形，从一层增殖为几层，卵母细胞也开始增大，细胞核发生一系列成熟分裂前期的变化，产生大量核液，形似球状；在卵母细胞周围开始出现透明带。在透明带中有从卵母细胞和卵泡细胞的表面伸出的微绒毛，它们相互接触，构成卵泡细胞给卵母细胞输送物质的通道。 次级生长卵泡卵泡不断增大，外围的卵泡细胞有几层到十几层，在卵泡细胞之间出现充满透明液体的不规则腔隙，其中的液体即卵泡液。这时卵母细胞也长到最大的体积，并为一层较厚的透明带所包裹。 成熟中的卵泡卵原细胞过渡到卵母细胞，已长到最大体积，并准备成熟分裂；它周围的腔隙逐渐合并越来越大，卵泡仍可继续生长。 成熟卵泡（滤泡）和成熟卵此时体积到达最大限度。初级卵母细胞渐位于卵泡一侧，向腔内突出，仍为卵泡细胞包围，此即卵丘。人的卵泡直径可达1厘米,并从卵巢表面突出。卵泡中的卵母细胞已完成第一次成熟分裂并停止于第2次成熟分裂的中期，等待排卵（图3）。
有丝分裂减数分裂曲线图 第一题 如某动物细胞中DNA含量为2个单位(m)。下图分别为雌性动物生殖细胞减数分裂DNA含量变化的曲线图和细胞示意图。请回答： (1)细胞A是，与之相对应的曲线段是。(以横轴上的数字段表示) (2)该动物体细胞中最多可有_____条染色体。 (3)与细胞C相对应的曲线段。C细胞最终能形成个成熟生殖细胞。 (4)曲线2-3时期DNA含量变化是由于的结果，减数第一次分裂DNA含量变化是由 于的结果。减数第二次分裂时分离，成为染色体。 第二题 某动物细胞中DNA含量为2个单位(m)。下图分别为雌性动物生殖细胞减数分裂DNA含量变化的曲线图和细胞示意图。请回答： (1)细胞A是___________，与之相对应的曲线段是___________(以横轴上数字段表示)。 (2)细胞B的名称是___________，与之相对应的曲线段是___________。 (3)细胞C的名称是___________，与之相对应的曲线段是___________。C细胞最终能形成___________个成熟的生殖细胞。 (4)曲线段2~3时期DNA含量变化是由于___________的结果，减数第一次分裂后DNA含量变化是由于___________的结果。减数第二次分裂时___________分离，成为两条染色体。 第三题 第四题 下图一是表示某种生物的细胞核内染色体及DNA相对量变化的曲线图，根据此曲线回答下列问题：(注：横坐标各个区域代表细胞分裂的各个时期，区域的大小和各个时期所需的时间不成比例。) (1)图一中代表DNA相对数量变化的曲线是____________。 (2)图一中0～8时期表示细胞的_____________分裂过程。 (3)细胞内含有同源染色体的区间有______________。 (4)若该生物体细胞中染色体数为20条，则一个细胞核中的DNA分子数在1～4时期为________条。 (5)着丝点分裂分别在横坐标数字的____________处进行。 (6)图二所示细胞分裂图对应于图____________区间。
高中生物人教版必修2 第2章第1节减数分裂和受精作用卵细胞的形成过程（I） 卷 姓名:________ 班级:________ 成绩:________ 一、单选题 (共12题；共24分) 1. （2分） (2019高一下·江门月考) 下列关于同源染色体和四分体“一定”的叙述，正确的是（） A . 同源染色体在细胞分裂过程中一定能够配对 B . 含有四条姐妹染色单体的一定是四分体 C . 一个四分体一定是一对同源染色体 D . 一对同源染色体一定是一个四分体 【考点】 2. （2分）(2019·浙江会考) 图①~④表示人类精子产生过程中染色体的部分行为。下列叙述错误的是（） A . 图中各行为出现的先后顺序是①③②④ B . 图①中的交叉现象在精子产生过程中常有发生 C . 图③所示行为发生的同时，非同源染色体自由组合 D . 发生图④所示行为的细胞是初级精母细胞 【考点】 3. （2分） (2017高一下·成都期中) 下列说法正确的是（）
A . 研究两对相对性状时，每一对相对性状的遗传都遵循分离定律，那么两对之间就一定遵循自由组合定律 B . 某奶牛的一个精原细胞，减数分裂后可能产生4种或2种精子 C . 子代性状的多样性导致的原因只与配子形成时的多样性有关 D . 某生物测交后代只有两种表现型，则该生物一定只含一对等位基因 【考点】 4. （2分） (2015高二上·余杭期末) 图表示细胞分裂和受精作用过程中，核DNA含量和染色体数目的变化，据图分析，正确的是（） A . a表示有丝分裂，b表示减数分裂，c表示受精作用和有丝分裂 B . DE、HI和PQ段均发生了着丝粒分裂 C . GH段和OP段的细胞中含有的染色体数目是相等的 D . MN段和AB段的细胞中核DNA含量相同 【考点】 5. （2分）同一生物细胞分裂图解，在动物卵巢中见不到的是（） A .
创作编号：BG7531400019813488897SX 创作者：别如克* 有丝分裂的过程（以动物细胞为例） 示意图主要特点 分裂间期完成组成染色体的DNA分子的复制和有关蛋白质的合成， 结果每个染色体都形成两个完全一样的姐妹染色单体；DNA 分子的数量加倍 分 裂 期 前 期 ①出现染色体，每个染色体包括并列着的两个染色单体由一 个共同的着丝点连接着 ②核膜解体，核仁消失 ③中心体周围发出星状射线形成纺锤体 ④染色体着丝点散乱分布在纺锤体上 中 期 纺锤丝牵引染色体运动，使每个染色体的着丝点排列在赤道 板上，是观察染色体数目和形态最佳时期 后 期 ①每个着丝点一分为二，每个染色体的两个姐妹染色单体分 开，成为两个染色体 ②纺锤丝收缩牵引染色体向两极移动，形成两套数目和形态 完全相同的染色体 末 期 ①两组染色体分别到达两极后，又变成细长盘曲的丝 ②核膜，核仁重新出现 ③纺锤丝消失 ④赤道板处细胞膜向内凹陷，缢裂成两个子细胞 植物细胞分裂图象如下图所示： 间期前期中期后期末期
创作编号：BG7531400019813488897SX 创作者：别如克* 减数分裂
创作编号： BG7531400019813488897SX 创作者： 别如克* 图2-1-7 卵细胞的形成过程图解
各时期的图像如下图 三、细化图像判断方法
按先后顺序把有关有丝分裂图的号码排列起来__________________；按顺序把有关减数分裂图的号码排列起来__________________ ①是减Ⅰ前期，②是有丝中期，③是减Ⅰ中期，④是减Ⅱ中期，⑤是有丝后期 ⑥是有丝后期，⑦是有丝后期，⑧是减Ⅰ后期，⑨是减Ⅱ后期，⑩是减Ⅱ前期 ?是精细胞， ?有丝前期 有丝分裂顺序为：②⑤⑥⑦；减数分裂顺序为：①③⑧⑩④⑨? 例2、如右图所示是什么时期的分裂图像
有丝分裂和减数分裂图像识别及有关题型的分析归类 一、有丝分裂和减数分裂图像的识别的误区 1、染色体数目的确定 染色体形态可分为单线型和双线型（如下图），当染色体复制完成后，就有单线型变为双线型，无论哪一种形态，染色体的数目都等于着丝点的个数。只要数清着丝点的个数，染色体的个数就知道了。 2、同源染色体的确定 同源染色体的判断依据下面几点： ①形态相同，即染色体上的着丝点的位置相同。 ②大小相同，即两条染色体的长度相同。
③来源不同，即一条来源于父方，一条来源于母方（通常用不同的颜色来表示）。 ④能够配对，即在细胞内成对存在。对常染色体而言，只有当这四点同时满足时细胞中才含有同源染色体。 但应注意：姐妹染色单体经着丝点分裂形成的两条子染色体不是同源染色体，而是相同染色体。 二、联系图像应明确有丝分裂和减数分裂各个时期的特点 各时期的特点如下表 各时期的图像如下图
三、细化图像判断方法
四、与有丝分裂和减数分裂图像相关的题型 1、一般图像识别问题----利用上面的识别方法即可 例1、下图是某种动物细胞进行有丝分裂和减数分裂部分图，据图回答问题：
按先后顺序把有关有丝分裂图的号码排列起来__________________；按顺序把有关减数分裂图的号码排列起来__________________ 解析：此类题目对于学生来说是图像题中最难得分的，学生不仅要把各个图像准确的识别出，而且还要把它们按正确的顺序排列起来，只要其中一个序号排错，这一步就不得分。根据上面的视图方法可得： ①是减Ⅰ前期，②是有丝中期，③是减Ⅰ中期，④是减Ⅱ中期， ⑤是有丝后期 ⑥是有丝后期，⑦是有丝后期，⑧是减Ⅰ后期，⑨是减Ⅱ后期，⑩是减Ⅱ前期
哺乳动物的减数分裂与有丝分裂的图形对比（及精子和卵细胞的形成对比）
重点掌握 1.概念：细胞名称、(非)同源染色体、(非)姐妹染色单体、联会(即配对)、四分体、交叉互换（以减Ⅰ四分体时期为例）。 2.理解：各期有无同源染色体，染色体的单双线、奇偶数、形态种数、染色体组数，单个细胞核中的染色体-DNA-染色单体数目变化柱形图和曲线图、每条染色体的DNA数目变化曲线图，精子和卵细胞的种类数。 ⑴染色体形态数的计算依据：同源染色体和姐妹子染色体视为同一种形态，非同源染色体视为不同形态。 ⑵染色体组数的计算依据：一般地，相同形态的染色体条数等于染色体组数，因为同一个染色体组内的染色体要求是不同形态的非同源染色体，以保证染色体组具有全能性。 3. 画细胞分裂图——以2n=6为例。 项目 类别 重要图形 染色体条数有无同源染色体 有无联会成四分体 和同源染色体分离 有无着丝点分裂前期中期后期 有丝分裂偶数有无有减Ⅰ分裂 减Ⅱ分裂
4.画每个细胞核中染色体、核DNA 、染色单体的数目变化曲线图——以2n 为例。 有丝分裂 有 性生殖 过 程 数目 第一次分裂 第二次分裂 有丝分裂的第一个细胞周期
5.画每条染色体的DNA 数目变化曲线图。 有丝分裂 有 性生殖 过 程 数目 第一次分裂 第二次分裂 有丝分裂的第一个细胞周期
6.画每个细胞核中染色体、核DNA 、染色单体的数目变化柱形图——以2n 为例。 有丝分裂 有性生殖过程
练习：⑴绘制：人体精原细胞的增殖和成熟的染色体曲线图。 ⑵下图A 、B 、C 、D 分别表示某哺乳动物细胞（2n ）进行减数分裂的不同时期，其中a 表示细胞数目。请判断b 、c 、d 依次代表（ ） A ．DNA 分子数、染色体数、染色单体数 B ．染色体数、DNA 分子数、染色单体数 C ．DNA 分子数、染色单体数、染色体数 D ．染色单体数、染色体数、DNA 分子数 ⑶下图中甲～丁为某动物（染色体=2n ）睾丸中细胞分裂不同时期的染色体数、染色单体数和DNA 分子数的比例图，下列关于此图的叙述，不正确的是（ ） A.甲图可表示减数第一次分裂的联会期 B.乙图可表示减数第二次分裂着丝点未分裂时期 数目 A B C D
小鼠体外受精标准化程序 雌鼠（8－10周龄）体外促排卵: 1.4点左右腹腔注射尿促性素针剂(10U/只),； 2.48hr后腹腔注射绒促性素针剂(10U/只); 培养液预平衡: 雌鼠注射绒促的当天，准备如下液体 1.Quinn’s 1023（HEPES-HTF培养基）：使用时添加10％SPS，共 5ml； 2.Quinn’s 1020：使用时添加10％SPS，共5ml； 3.Quinn’s 1026：使用时添加10％SPS，共2ml； 以上液体配置后，HEPES-HTF培养基需要拧紧离心管口，Quinn’s 1020与Quinn’s 1026则半旋口，均放置于CO2培养箱内，孵育过夜。 卵子的获得： 1. 前准备：用昨日预平衡的10％SPS Quinn’s 1020做四个微滴的三个培养皿，盖油，置于CO2培养箱内，孵育备用； 2. 于超净台中，取昨日预平衡的10％SPS Quinn’s 1023液2-3ml与35mm的平皿中； 3. 用颈椎脱臼法处死促排卵雌鼠，取其卵巢及输卵管于上述平皿中； 4. 在解剖显微镜下，用1ml空针剖开小鼠输卵管的壶腹部，即见粘附有大量颗粒细胞的卵子粘液团流出，用拉过的巴斯德吸管吸取置于预先孵育的10％SPS Quinn’s 1020微滴中； 5. 反复冲洗2-3次后，将卵子转入新鲜的10％SPS Quinn’s 1020微
滴中孵育。 精子的获得： 1.于超净台中，取昨日预平衡的10％SPS Quinn’s 1023液2-3ml与 35mm的平皿中； 2.用颈椎脱臼法处死雄鼠，取其附睾上体尾部，除去脂肪与血迹后， 置于上述平皿中； 3.在解剖显微镜下，用1ml空针剖开附睾上体尾部，稍加震荡后即 见成团精子游出； 4.用拉过的巴斯德吸管吸取后轻轻加入到含2ml 10％SPS Quinn’s 1020液的离心管底部，放入CO2培养箱内使精子上游15-25min； 5.吸取上游液于另一离心管中，室温3000rpm离心15min； 6.小心吸取沉淀，加入到另一含1ml 10％SPS Quinn’s 1020液的圆 底管中，混匀，置于CO2培养箱内备用。 体外受精： 1. 用处理过的精液做几个50μl左右的微滴，盖油，吸取各卵子粘液团分别放置于各微滴中，置于CO2培养箱内受精5－6hr； 胚胎培养： 1. 前准备：用昨日预平衡的10％SPS Quinn’s 1026做10－15个微滴，盖油，置于CO2培养箱内，孵育备用； 2. 用拉过的巴斯德吸管分别吸取受精卵，于新鲜的10％SPS Quinn’s 1020微滴中反复吹打数次后，转入预平衡的10％SPS Quinn’s 1026微滴中，培养并观察分裂情况；
卵母细胞的核相分为：待成熟受抑制状态的生发泡(Germinalvesicle，GV)期(根据发育程度进一步细分为GⅥ期-GVⅣ期)、进入成熟状态的生发泡破裂（Germinalvesiclebreakdown，GVBD)和之后的减数分裂(Meiosis，M)期(分为MⅠ期和MⅡ期，MⅠ进一步细分为中期Ⅰ、后期Ⅰ、末期Ⅰ)。 生发泡破裂是卵细胞发育过程中的一步，它标志着卵细胞的成熟，此时卵细胞由GV 期（germinal vesicle）进入GVBD期（germinal vesicle breakdown）。[1]主要特征是染色质高度凝集，核仁消失，核膜破裂，卵母细胞将从M1期进入M2期，排出第一极体达到成熟状态。 GV期特征：GV期卵母细胞是卵原细胞成为初级卵母细胞之后,经细线期、偶线期、粗线期发育到双线期。在双线期后期,卵母细胞的核很大,染色质高度疏松,外包完整的核膜,此时的细胞核又称GV M1期特征：染色体浓缩成清楚的单体，并整齐的排列在赤道板上。 后期1：染色体向卵子两极移动，有些可隐约看到纺锤体。 末期1：课件两团染色体存在，并未完全分离。 M2期：卵周隙中见到第一极体排出，另一团染色体呈分散状态。 众所周知, 卵泡的发育经历了始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡、窦卵泡、排卵前卵泡阶段。初级卵泡阶段, 卵母细胞周围开始围绕一层颗粒细胞, 颗粒细胞供给卵母细胞生长发育所需的85%的营养[6]。随后, 颗粒细胞开始出现突起, 卵母细胞也出现微绒毛, 两者之间以桥粒和缝隙连接相连, 很快卵母细胞产生一层富含糖蛋白的物质形成透明带。发展到窦状卵泡阶段, 颗粒细胞增殖到6~12层, 窦腔形成, 颗粒细胞开始分化为功能及解剖上不尽相同的2 类细胞: 壁层颗粒细胞(granulosa cells,GCs)和卵丘细胞(cumulus cells, CCs)卵泡中的缝隙连接使GCs、CCs 与卵母细胞共同形成一个结构和功能上的合胞体。 卵细胞胞质中游离钙的升高时受精过程中启动卵子激活的一个重要因素 卵受精之前，代谢水平很低，无DNA的合成活动，RNA和蛋白质的合成都极少。因此排出的卵子，如果未受精，很快就夭折。当精子与卵子表面融合时，卵子的代谢速率迅速提高，并开始合成DNA。有关卵子激活的详细机理还不清楚，只知精子仅起到打开程序开关的作用。除了精子，一些其他非专一的化学的或物理的处理，也能使卵激活，例如针刺蛙卵，也能使之激动。激动的起始无需任何新蛋白质的合成。 排卵期成熟的卵细胞由卵巢排出﹐进入输卵管的壶腹部﹐此时宫颈粘液稀薄﹐适宜精子进入。性交时﹐精液射到阴道后穹窿﹐部分精子通过宫颈管﹑宫腔﹑输卵管口﹐到输卵管峡部与壶腹部交界处。穿进卵细胞前必须经过形态﹑生理及生物化学的变化﹐称为精子获能﹐获能后的精子头部入卵细胞﹐尾部留在卵细胞外(精子的头部几乎不含细胞质，所以受精卵的细胞质遗传物质可认为全部来自卵子，称为细胞质遗传)﹐精子与卵细胞融合成为一个新的合体细胞﹐此过程称为受精。已受精的卵细胞称为受精卵或孕卵。人类的孕卵含有46个染色体(来自父母的各23个)。
大鼠体外受精技术研究进展 张春燕1, 2，刘丽均2，徐平2，芮荣1* 1南京农业大学动物医学院，南京210095； 2中国科学院上海实验动物中心，上海201615 摘要：目前，体外受精技术在多种哺乳动物已取得成功并获得广泛应用。大鼠由于其本身的特殊性，体外受精及随后的胚胎培养一直比较困难，国内关于大鼠体外受精方面的研究更是少有报道。文章主要从卵母细胞体外培养、精子获能、受精、受精卵体外培养及胚胎移植等方面着手，对国外大鼠体外受精的研究现状作一简要综述。 关键词：大鼠；体外受精；胚胎培养；胚胎移植 体外受精（IVF）是指在体外环境完成精卵结合的过程。体外受精研究的深入开展，不仅加深了人们对受精机制的认识，也为动物繁育、治疗人类不孕症提供了有力的手段。目前，该项技术在小鼠、兔、山羊、猪和牛等动物及人类已日趋成熟，并得到广泛应用；但在国内少有大鼠体外受精的报道。现将该领域的研究现状作一综述，以供参考。 1. 大鼠体外受精研究简史 事实上，大鼠是较早用于体外受精研究的实验动物之一。早在1968年，Toyoda 和Chang 就开始了大鼠体外受精技术的研究，但只能使去除透明带的卵子和精子在体外受精[1]。1973年，Miyamoto和Chang利用从交配雌鼠子宫内收集的精子进行体外受精时发现，子宫内收集的精子可以使透明带完整的卵子受精[2]。从而用实验证明，以前的体外受精之所以不成功，关键是精子在体外培养时没有获能，不具备穿过透明带使卵子受精的能力。1974年，Toyoda 等研制出适合于大鼠精子体外获能的培养液，由此逐步建立起大鼠体外受精技术[3]。 近年来，研究者在精子获能液、胚胎培养液及提高体外受精胚胎质量方面做了大量研究，目的是尽量模拟体内受精和胚胎发育环境，探索大鼠体外受精的最适条件，以提高其胚胎体外生产效率。 2. 研究方法及进展 完整的体外受精技术包括：卵母细胞的体外成熟（IVM）；精子获能；体外受精；早期胚胎培养和移植。而胚胎移植结果仍是鉴定体外受精胚胎质量的最有效证据。 2.1 卵母细胞的来源与体外成熟 2.1.1收集卵巢未成熟卵母细胞 哺乳动物的卵巢上有大量未成熟、处于不同发育阶段的卵母细胞，这部分卵母细胞需经IVM培养后，方可用于体外受精。获得卵巢卵母细胞的方法主要有两种：（1）机械分离法－利用穿刺针将卵巢表面的卵泡刺破，释放出卵母细胞；或是采用切割法，将整个卵巢切碎后收集卵母细胞。穿刺法采卵数量少，切割法获卵数较多，但切割法会产生更多裸卵或造成卵丘细胞损伤。（2）胶原酶消化法－该方法主要用于腔前卵泡卵母细胞的分离。 大鼠大卵泡（直径>350um）卵母细胞的体外培养，通常使用含15％灭活血清的MEM (Eagle’s Minimum Essential Medium)作为培养液，培养12 h后检查成熟发育情况，以生发泡破裂或第一极体排出作为成熟的判断标准。 *通讯作者，Email：rrui@https://www.doczj.com/doc/eb6403262.html,。
小鼠胚胎培养方法的研究 摘要 目的：探讨小鼠早期胚胎在不同的体外培养液中生长发育的状况，从而寻找胚胎培养的最佳培养体系，为人类胚胎培养方法的改善提供理论依据，以提高临床体外受精一胚胎移植（ＩＶＦ．ＥＴ）的成功率。 方法：配制不同的培养液，对１００例小鼠超排卵共取卵子１６７８枚，分别在不同的培养液中进行体外授精，并将２一细胞鼠胚放入各组培养液中进行培养，其中，血清组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清：卵泡液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加ｌＯ％人卵泡液；蜕膜细胞条件培养液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加ｌＯ％条件培养液：血清加卵泡液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清和５％人卵泡液：血清加条件培养液组为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清和５％条件培养液。每日在显微镜下观察小鼠胚胎的发育情况，分析受精率、卵
山西医科大掌 裂率、卵裂速度及桑椹胚与囊胚形成率，采用ｘ２分割检验进行统计分析。 结果： 一、１、小鼠胚胎在蜕膜细胞条件培养液中有７２．９％发育到８．细胞期，６６．０％发育到桑椹胚，６１．６％形成囊胚，３２．１％胚胎孵化。而对照组有４３．６％发育到８．细胞期，３０．９％发育到桑椹胚，１９．１％到初级囊胚，５５％孵化的胚胎。两组比较有显著性差异。２、卵泡液的胚胎有７１．３％到８．细胞期，５８８％发育到桑椹胚，５０．Ｏ％形成囊胚，２５７％孵化。与对照组比较有差显著性异。３、血清组有５３，４％发育到８．细胞期，４０．５％到桑椹胚，２９．３％形成囊胚，仅有７．８％孵化。与对照组无显著性差异。 二、鼠卵在不同培养液中受精率无显著性差别，而对于卵裂率和优质胚胎的形成率，鼠卯在蜕膜细胞条件培养液组和卵泡液组中均与对照组有显著性差异，而血清组与对照组比较无差异。鼠胚在蜕膜细胞条件培养液和卵泡液中培养发育速度快，碎片率明显低于对照者。 三、小鼠早期胚胎在卵泡液组、蜕膜细胞条件培养液组
文章编号：1003－6946（2015）02－115－05 鼠胚实验在新建体外受精胚胎培养室质量控制中的作用 王辉田，李涛，黎伟豪，欧建平 （中山大学附属第三医院生殖医学中心，广东广州510630） 【摘要】目的：检测新建体外受精实验室培养体系的可靠与否，是否符合人类胚胎体外培养的要求。方法：对昆明白小鼠进行超促排卵，手术获取昆明白小鼠雌雄配子进行体外受精和体内受精的胚胎；并进行体外培养观察两组鼠胚的受精率、2-细胞率、囊胚率及采用密度梯度离心法和上游法两种精液处理方法对小鼠体外受精胚胎发育情况的影响。结果：进行了30个周期的体内受精体外培养实验，共获卵1136枚；进行了35个周期的体外受精实验，共获卵1486枚。体内受精组获得的受精率（93.13?1.46）%和2-细胞率（94.52?1.67）%高于体外受精组的受精率（84.39?2.87）%和2-细胞率（87.80?3.21）%，两组间差异有统计学意义（P＜0.05）。密度梯度离心法处理精液后，其受精率（90.32?3.14）%和2-细胞率（88.54?2.28）%高于上游法的受精率（76.46?2.35）%和2-细胞率（82.67?2.62）%，两者差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：小鼠卵母细胞体内受精和体外受精后均有高的成胚率，体内受精后进行体外培养优于体外受精后培养，采用密度梯度离心处理精液实施体外受精优于上游法，鼠胚实验可对新建胚胎培养室的培养体系进行评估。 【关键词】鼠胚实验；体外受精；质量控制；胚胎培养 中图分类号：Ｒ332文献标志码：A 通讯作者：欧建平，Email：oujianping@hotmail．com 于被患者接受。操作简便、设备要求相对较低，具备超声介入条件的基层医院均可以推广。 研究认为，聚桂醇注射液主要是使绒毛附着处肌层血管闭塞，故主要适用于病灶累及肌层，子宫肌层连续性尚存在的CSP患者［9］。CSP处肌层菲薄，行B 超监护下胚囊清除术联合清宫术，可将不可视的清宫术变为相对可视的，减少子宫穿孔及残留。 本技术开展时间尚短，查阅文献联盟（万方数据库），国内外尚未见聚桂醇硬化剂广泛用于CSP治疗的报道。尚有诸多问题值得进一步探讨：瘢痕部位血供恢复情况，聚桂醇使用的最高剂量、最佳浓度，胚囊清除术联合清宫术的最佳时机，再次妊娠时子宫下段的伸展情况等尚需进一步随访观察。但超声介入下注入聚桂醇硬化剂治疗CSP成功率高，未出现明显副反应以及并发症，符合CSP治疗的原则，即最大限度地保留了女性的生育功能，不失为临床治疗CSP的又一适合部分女性患者和疗效满意的治疗方案，可供借鉴。 参考文献 ［1］张淑珍，童水娟，寿坚．超声介入下注射硬化剂治疗剖宫产子 宫切口妊娠10例初探［J］．现代实用医学，2014，26（3）：274－ 275． ［2］徐栋，李明奎，徐佳英，等．超声造影指导下聚桂醇硬化治疗子宫切口妊娠的临床价值［J］．中国超声影像学杂志，2014，23（2）： 162－164． ［3］蔡薇，杨太珠，罗红，等．剖宫产后瘢痕处妊娠经阴道超声图像分析的临床意义［J］．实用妇产科杂志，2009，25（10）：622－ 624． ［4］郑艳，徐春丽．聚桂醇400临床应用进展［J］．药学进展，2012，31（2）：190－192． ［5］邓新粮，何小丽，肖松舒．剖宫产术后子宫切口部位妊娠保守治疗16例疗效分析［J］．实用妇产科杂志，2008，24（6）：372－373．［6］陈春林主编．妇产科放射介入治疗学［M］．北京：人民卫生出版社，2003：393－395． ［7］邵华江，马建婷，徐丽萍．剖宫产瘢痕妊娠治疗方法与疗效综合分析［J］．中华医学杂志，2012，92（31）：2191－2194． ［8］汪芳，石珍，朱亚飞，等．高强度聚焦超声治疗子宫切口妊娠临床分析［J］．中国超声医学杂志，2013，29（2）：177－179． ［9］倪雪君，谢阳桂，吴超，等．超声引导下瘤内注射聚桂醇硬化治疗子宫肌瘤的临床研究［J］．南通大学学报（医学版），2012，32 （5）：414－415，封2． （收稿日期：2014-10-12；修回日期：2014-12-15）