基金项目：新疆维吾尔自治区科技计划项目（２０１２３３１３５ ）作者简介：丁 楠（１９８８－） ，女，硕士，研究方向：新疆地产资源新药开发研究。通信作者：高晓黎，女，教授，博士生导师，研究方向：药物传递系统研究与新药开发，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｌｉ＿ｇ ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。ＨＰＬＣ法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量 丁 楠，高晓黎 （新疆医科大学药学院药剂／物化教研室，乌鲁木齐 ８３００１１ ）摘要：目的 建立石榴皮提取物中鞣花酸含量的ＨＰＬＣ测定方法。方法 色谱条件：色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ－Ｃ１８（２）（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙酸乙酯∶磷酸（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）∶磷酸二氢钾（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）∶甲醇（０．０５∶２０∶２０∶６０）；流速１ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２５４ｎｍ；柱温２５℃。结果 鞣花酸在５．３６～１７１．４０μｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为９７．８２％，ＲＳＤ为１．４１％（ｎ＝９）。结论 ＨＰＬＣ法简便，准确，重复性好，可用于石榴皮提取物中鞣花酸的含量测定。 关键词：石榴皮；鞣花酸；ＨＰＬＣ 中图分类号：Ｒ９１４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－５５５１（２０１２）０６－０７７０－ ０３Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ Ｐｅｅｌ ｂｙ ＨＰＬＣＤＩＮＧ Ｎａｎ，ＧＡＯ Ｘｉａｏ－ ｌｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒ－ｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎａｎ Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ－Ｃ１８（２）ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ，０．０１ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４－Ｈ３ＰＯ４，ｍｅｔｈａｎｏｌ（０．０５∶２０∶２０∶６０）ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５４ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ａｔ ２５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄｗａｓ ５．３６～１７１．４０μｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９７．８２％ａｎｄ ＲＳＤ ｗａｓ １．４１％（ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｐｏｍｅ－ｇｒａｎａｔｅ ｐ ｅｅｌ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ；ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ；ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ） 石榴皮为石榴科植物石榴（Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍＬ． ）的果皮，性温，味酸、涩，归大肠经，具有涩肠止泻、杀虫、收敛止血的功效。石榴皮富含多酚类物 质， 主要含有没食子酸、鞣花酸、安石榴林、安石榴苷等。鞣花酸是没食子酸的二聚衍生物，呈反式没食 子酸单宁结构，其具有抗氧化［１］、抗癌变［２］、抗诱 第３５卷 第６期新疆医科大学学报 Ｖｏｌ．３５ Ｎｏ．６ ２０１２年６月Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＪｕｎ．２０１２
对鞣花酸的抗氧化作用探索 甜茶是蔷薇科悬钩子属植物的一个品种，主产于广西的柳州、桂林、梧州等地区。甜茶具有祛痰止咳、清热、润肺等功效，广泛用于保健品、食品和化妆品等领域中有关研究表明，鞣花酸具有多种生物活性功能，例如抗氧化功能、抗癌、抗突变性能、抑制人体免疫缺陷病毒（HIV）的增生等；鞣花酸还是一种有效的凝血剂旧，对多种细菌及病毒都有很好的抑制作用，能防止感染抑制溃疡。除此之外，鞣花酸还具有降压、镇静，预防骨质疏松等多种生理作用¨鞣花酸作为一种新型的药物原料和食品添加剂日益受到人们的重视。李小萍、贝玉祥、周本宏、王予祺等分别对红树莓果、诃子、石榴皮和蛇莓中的鞣花酸含量进行了测定，其中诃子中鞣花酸含量最高，达到了573mg／kg。李小萍等发现红树莓果中的鞣花酸提取物具有较强的还原能力。因此，开展甜茶中鞣花酸的研究，对甜茶植株的化学成分分布、开发甜茶系列产品、甜茶的推广应用具有重大意义。近年来，甜茶的研究重点均局限于对甜茶素、黄酮苷及其苷元的提取和测定以及甜茶粗体物药理的研究，而关于甜茶中鞣花酸的研究鲜见报道。因此，试验采用DPPH·法、BHT法和磷钼酸盐法对甜茶中鞣花酸的抗氧化活性进行了研究，以期为以甜茶为原料的保健品、天然抗氧化剂的开发利用提供理论依据。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1研究对象。甜茶，经鉴定为RubusSuavissmusS.Lee。 1.1.2主要仪器。722型光栅分光光度计，购自上海分析仪器三厂；
GDC.TQ／ZS／3中试型智能控制连续化多功能超声波提取组件，购自济宁金百特电子有限责任公司；红外光谱仪（5-DX），购自美国Nicolet公司。 1.1.3主要试剂。甲醇（cP）、蒸馏水、无水Na：SO。、石油醚（AR）、氯仿（CP）、乙酸乙酯（CP）、二苯代苦味酰自由基（DPPH），购于SIGMA公司；2，6一二叔丁基对钾酚（BHT）、pH=6.6的磷酸缓冲溶液、l％的铁氰化钾水溶液、七钼酸铵、硫酸、磷酸钠，市售；LsA一10大孔吸附树脂，购自西安蓝深交换吸附材料有限责任公司。 1.2方法 1.2.1鞣花酸的制备。取甜茶根2kg，碾碎后置入40L超声波提取罐，加20L水，加热至80℃，超声提取1h，膜过滤，重复1次，合并滤液，浓缩，滤液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，萃取液用无水NazSO。脱水，再用旋转蒸发仪回收部分溶剂，放置，乙酸乙酯萃取液得到黄色颗粒结晶，将得到的结晶用碱溶解后，加入酸溶液进行沉淀，经水洗、醇洗后，放入红外干燥仪中干燥，得黄色颗粒结晶化合物A（约2.00g）。、1.2.2仪器工作条件。FHR光谱分辨率0.4cm～，光谱范围为4000～400em～，峰峰噪声值<1.24X10～AU。 1.2.3检测方法。采用KBr压片法。将固体化合物A研成细粉末，分散在固体介质KBr中，并用压片器压成透明的薄片后测定。在波数为4000～400em‘1范围分别对鞣花酸对照品（标准样品）和样品A进行扫描。 1.2.4鞣花酸抗氧化试验。 1.2.4.1清除自由基能力的测定。分别取0.2、0.4、0.5、1.0ml质量浓度为1.0mg／rnl的各样品甲醇溶液，加入到8rnl浓度为0.004％的