耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌的检测(一)
【摘要】目的研究我院耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌的感染现状和耐药情况，为临床医生合理使用抗生素提供实验依据。方法按照《全国临床检验操作规程》进行常规细菌分离培养，应用湖南天地人生物科技有限公司提供的微生物生化药敏试剂卡片进行菌种鉴定，药敏试验采用纸片扩散（K-B）法，苯唑西林琼脂筛选法确证试验。结果共检测CNS206株，以溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主要菌种，耐苯唑西林株检出率56.9%。结论加强MRCNS的分布及耐药性的监控，对临床治疗及抗生素的合理应用意义重大。
【关键词】耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药
凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）一般认为无致病性，因而对CNS感染的监测不够重视。近年来经过医院感染调研发现耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）造成的医院感染病例显著增多，对苯唑西林和万古霉素的最小抑菌圈（MIC）水平亦逐年增高。MRCNS已经引起人们的关注。通过探讨MRCNS所致医院感染的特点，耐药性以及医院感染的高发区和易感人群，为临床诊治提供依据，指导临床合理使用抗生素。
1材料和方法
1.1标本的来源：
医院感染患者各种标本，包括痰，伤口分泌物，中段尿，血液，泌尿生殖道排泄物中分离出凝固酶阴性的葡萄球菌株260株。
1.2材料：
由湖南天地人生物科技有限公司提供的生化鉴定卡片以及由英国OXOID公司提供的苯唑西林（OXA）药敏纸片。
1.3质控品：
质控标准参考菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923，ATCC29213。
1.4方法：
1.4.1所有送检标本按《全国临床检验操作规程》进行常规细菌培养，应用湖南天地人生物科技有限公司提供的微生物生化，药敏试剂卡鉴定临床标本到种。
1.4.2OXA琼脂纸片扩散（K-B）法：操作按NCCLS规定用头孢西丁药敏纸片（含量30微克/片）做药物敏感性测定，药敏平板放置35度24小时判读结果，执行NCCLS（2001年）标准凝固酶阴性葡萄球菌抑菌环直径=24毫米判定为耐药（R），判读时注意用透射光检查抑菌环内有无耐药菌株或薄菌膜，防止漏检。
1.4.3苯唑西林琼脂筛选法确证试验：选常规细菌培养物中可疑菌落接种到含有1.75微克/毫升OXA并添加4%NaCl的M-H琼脂板上，接种菌液浓度为0.5麦氏比浊标准，接种量为一白金耳置于30-35度之间孵育24小时后观察有无细菌生长。任何形式的菌落生长都表示对苯唑西林耐药，在OXA琼脂平上生长的凝固酶阴性葡萄球菌则为MRCNS。
2结果
2.1MRCNS菌株分离及分布见表1：
菌种共测定CNS260株，其中MRCNS148株，阳性检出率59.6%。菌株分布以溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主。
细菌名称株数构成比（%）
溶血葡萄球菌6845.9
表皮葡萄球菌4530.4
人型葡萄球菌2013.5
模仿葡萄球菌85.4
头部葡萄球菌53.4
孔氏葡萄球菌21.4
2.2MRCNS发生的部位分布见表2:
MRCNS感染的部位最多的是泌尿生殖道，其次是呼吸道、中段尿，伤口分泌物，血液。感染的高发区是外科，其次是呼吸科、老干科、ICU、肿瘤科等。有青霉素过敏史者占相当的比例（45%）。男性患者多于女性患者（男：女=105：43）。年龄分布上来看，各个年龄阶段的患者都有。泌尿生殖道感染患者多见于中青年，占92%；呼吸道感染者以老年人为主，65岁以上者占83%。
凝固酶阳性的葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌。因此凝固 酶试验阳性者不能定为金黄色葡萄球菌，必须再进行有关生化试验如耐热DNA酶、β-半乳 糖苷酶，方可正确鉴定。 中间型葡萄球菌 一、病原学食物中毒的细菌病原众多,可按其致病机制分成三类:①细菌污染食品并在其内 繁...凝固酶阳性的葡萄球菌常为金黄色葡萄球菌，但一些中间葡萄球菌及猪葡萄球菌亦产 生此酶。所有其他葡萄球菌均为凝固酶阴性，其中最主要的是表皮葡萄球菌及腐生葡萄 ... 引发奶牛乳房炎的病菌有哪些？ 全球品牌畜牧网2014-09-18来源：互联网浏览次数：769次评论:（0）字号：【大中小】 在奶牛生活环境中分布着各种各样的的微生物，大多数乳房炎是由链球菌属和大肠菌群引起的，现将乳房炎的病原菌分为以下几类介绍： （一）传染性微生物 1、金黄色葡萄球菌 葡萄球菌属于微球菌科，葡萄球菌属，为革兰氏阳性球菌。本属细菌分布于自然界及动物的饲料及环境中，也存在人和动物的皮肤黏膜。大部分是不致病的腐生寄生菌， 仅少数了引起人和动物的局部炎症感染，甚至发生败血症。能引起奶牛、羊及其他动物 乳房炎的葡萄球菌有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、猪葡萄球菌、中间葡萄球菌、腐 生葡萄球菌、溶血葡萄球菌等。其中金黄色葡萄球菌是主要致病菌，其余为凝固酶阴性 葡萄球菌，它们是牛体的常在菌群。
2、无乳链球菌和停乳链球菌 链球菌种类很多，广泛存在于自然界。常分布在水、乳、尘埃、动物植物的表面、呼吸道、消化道以及泌尿生殖道黏膜。由链球菌所致的奶牛传染性乳房炎，只要是无乳链球菌，该菌常通过挤乳或用具传播而引发乳房炎。停乳链球菌一般归为环境链球菌类。 3、支原体 支原体又称霉形体，是目前发现的最小、最简单的细胞，也是唯一一种没有细胞壁的原核细胞。 （二）环境性微生物 环境性微生物包括环境性链球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、沙雷氏菌、变形杆菌及绿脓杆菌等。通常为非传染性的条件致病菌。 1、环境性链球菌 引起奶牛乳房炎的环境性链球菌有乳房链球菌、化脓链球菌、兽疫链球菌、牛链球菌和犬链球菌，临床上常见的主要为乳房链球菌，其他的较少见。 2、凝固酶阴性葡萄球菌 凝固酶阴性葡萄球菌是葡萄球菌属的一类细菌，由多种凝固酶反应阴性的葡萄球菌所组成，约有20余种，其中表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、木糖葡萄球菌、猪葡萄球菌、模仿葡萄球菌6种菌与奶牛乳房炎有关。它们是牛体的常在菌群。 3、肠球菌 肠球菌为圆形或椭圆形，呈单个、成双，有时呈短链状排列，生长在固体琼脂上的菌呈短球状，无芽孢，革兰氏染色阳性。 4、大肠埃希氏菌 大肠杆菌为无芽孢的直杆菌，大小为0.4---0.7μm×2---3μm，两端钝圆，散在或成对。大多数菌株有周生鞭毛，有些菌株还有性纤毛。除少数具有A型K抗原的菌株外。菌体两端偶尔略深染，革兰氏染色阴性。
1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的?溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡
萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 菌名 凝固 酶触酶溶血 硝酸 盐 海藻 糖 半乳糖 苷酶 金黄色葡萄球菌金黄色亚 种 +++++- 金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+--- 施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND 中间葡萄球菌++d+++ 海豚葡萄球菌++++-ND S.lutrae++++++ 猪葡萄球菌d+-++- 注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
动物性食品中苯唑西林残留检测方法 ———纸色谱筛选法 [文献标识码]C [文章编号]10021280(2004)01001203 [中图分类号]S859.84 农业部于2003年1月22日发布第236号公告,发布12个动物性食品中兽药残留检测方法。方法之十:动物性食品中苯唑西林残留检测方法———纸色谱筛选法。 动物性食品中苯唑西林残留检测方法———纸色谱筛选法 1 范围 本标准规定了动物性食品中苯唑西林残留量检测的制样和纸色谱筛选方法。 本标准适用于牛奶中苯唑西林残留的筛选。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 G B/T1.120001标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则(ISO/IEC Directives,Part 3,1997,Rules for the structure and drafting of In2 ternational Standards,N EQ) 中华人民共和国兽药典 二○○○年版 G B/T66821992 分析实验室用水规则和试验方法 N Y/T××××2001 动物源食品中兽药残留检测方法标准编写规则 农牧发[1999]17号 动物性食品中兽药最高残留限量 3 制样 3.1 样品的制备 取适量冷冻的空白或供试牛奶,于30℃水浴中解冻。 3.2 样品的保存 -20℃以下冰箱贮存备用。4 测定方法 4.1 方法提要或原理 试料中残留的苯唑西林用乙二胺四乙酸二钠的饱和溶液提取,过C18柱净化,洗脱液经纸层析分离,用以嗜热脂肪芽孢杆菌为测试菌的微生物法显影,与对照品的位置比较。 4.2 试剂和材料 以下所用试剂,除特别注明者外,均为分析纯试剂,水为符合《中华人民共和国兽药典》二○○○年版规定的纯化水。 4.2.1 苯唑西林钠标准品 4.2.2 嗜热脂肪芽孢杆菌(B acill us sterother2 mophil us)A TCC10149 斜面培养基(见附录A.1)每月传代一次,置2～8℃冰箱中保存。 4.2.3 青霉素酶 不得少于200万单位/mL。4.2.4 乙腈 4.2.5 25%氯化钠溶液 取氯化钠25g,加水至100mL,溶解,混匀。 4.2.6 2%氯化钠溶液 取氯化钠2g,加水至100 mL,溶解,混匀。 4.2.7 0.9%灭菌氯化钠溶液 取氯化钠0.9g,加水至100mL,溶解,混匀,115℃灭菌30min。4.2.8 乙二胺四乙酸二钠(ED TA2Na)饱和溶液 在室温条件下,量取水100mL,加乙二胺四乙酸二钠适量,使其饱和,放置过夜,过滤,取滤液备用。 4.2.9 乙腈溶液 取乙腈80mL,加水至100mL,混匀。 4.2.10 丙酮溶液 取丙酮50mL,加水至100mL,混匀。 4.2.11 标准溶液的制备 取苯唑西林标准品适量,精密称定,用丙酮溶液溶解并稀释成浓度为1000μg/mL的标准储备液。再用丙酮溶液稀释成1μg/mL的标准溶液。 4.2.12 展开剂 正戊醇-丙酮-水(4+1+3),充分混合,静置,取澄清的上层溶液,备用。 4.2.13 菌悬液的制备 将测试菌种接种至培养 ? 2 1 ?中国兽药杂志 2004,38(1):12～14/农业部畜牧兽医局
部分药品皮试液配制方法 1.注射用盐酸头孢吡肟规格0.5g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液10ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 2.注射用盐酸头孢吡肟规格1g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 3.注射用哌拉西林钠规格0.5g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液10ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 4.注射用哌拉西林他唑巴坦钠规格1.25g（1g：0.25g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 5.注射用哌拉西林舒巴坦钠规格2.5g（2g：0. 5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 6.注射用哌拉西林舒巴坦钠规格1.5g（1g：0. 5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 7.注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠规格2.5g（2g：0.5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 8.注射用头孢哌酮舒巴坦钠规格3g（2g：1g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 9.注射用盐酸头孢替安规格1.0g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 10.注射用盐酸头孢替安规格2.0g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 11.注射用氨苄西林钠舒巴坦钠规格3g（2g﹕1g）（皮试药液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 12..注射用头孢甲肟规格0.5g（皮试药液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液10ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 13.注射用青霉素规格80万U（皮试药液浓度为500U/ml） 取0.9%氯化钠注射液8ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至20ml，抽取0.1ml皮内注射。 14.注射用青霉素规格400万U（皮试药液浓度为500U/ml） 取0.9%氯化钠注射液8ml稀释原药后，抽取0.1ml，用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，
药敏试验方法： K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。 3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科） 头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ） 亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN） 红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素
苯唑西林钠胶囊说明书 请仔细阅读说明书并在医师指导下使用 【药品名称】 通用名称：苯唑西林钠胶囊 英文名称：Oxacillin Sodium Capsules 汉语拼音：Benzuo Xilinna Jiaonang 【成份】 化学名称：(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-(5-甲基-3-苯基-4-异噁唑甲酰氨基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸钠盐一水合物。 化学结构式： 分子式：C19H18N3NaO5S·H2O 分子量：441.44 【性状】 本品内容物为白色粉末或结晶性粉末，无臭或微臭。 【适应症】 用于抗青霉素葡萄球菌引起的肺炎和皮肤、软组织感染等。 【规格】 按C19H19N3O5S 计算0.5g。 【用法用量】 空腹口服。 成人：一般感染，一次0.5～1.0g（2～4粒）；重症患者一次1～1.5g（4～6粒），一日3～4次。 儿童：每日按体重70～100mg/kg，分3～4次。 新生儿：体重2.5kg以下者，一日120mg；体重2.5kg以上者，一日160mg。 轻、中度肾功能减退患者不需调整剂量，严重肾功能减退患者应避免应用大剂量，以防中枢神经系统毒性反应发生。 【不良反应】 主要为胃肠道反应，如恶心、呕吐、腹胀、腹泻、食欲不振等。尚可见药疹、药物热等过敏反应。个别发生血清氨基转移酶升高，停药后症状消失。大剂量应用可出现神经系统反应，如抽搐、痉挛、神志不清、头痛等。偶见中性粒细胞减少症或粒细胞缺乏症，对特异体质者可致出血倾向。急性间质性肾炎伴肾功能衰竭也有报告。少数可发生白色念珠菌继发感染。【禁忌】 有青霉素类药物过敏史者或青霉素皮肤试验阳性患者禁用。 【注意事项】 1．应用本品前需详细询问药物过敏史并进行青霉素皮肤试验。 2．对一种青霉素过敏者可能对其他青霉素类药物、青霉胺过敏，有青霉素过敏性休克史者约5%～7%可能存在对头孢菌素类药物交叉过敏。 3．有哮喘、湿疹、枯草热、荨麻疹等过敏性疾病及肝病患者应慎用本品。 【孕妇及哺乳期妇女用药】 目前缺乏本品对孕妇影响的充分研究，所以孕妇应仅在确有必要时使用本品。少量本品从乳汁中分泌，哺乳期妇女用药时宜暂停哺乳。 【儿童用药】 新生儿尤其早产儿应慎用。
病原生物学实验指导 实验一显微镜的使用及细菌的观察 一、显微镜油镜的使用和保护 目的熟练掌握显微镜油镜的使用和保护，以便能娴熟应用油镜观察细菌材料标本。 原理细菌个体微小，肉眼不能看到，必须使用油镜，将其放大1000倍左右才能看到。如光线直接从标本玻片经空气层进入油镜头时，由于介质密度不同发生折射现象，因此进入物镜中的光线很少，结果视野暗淡，物像不清晰。如在标本玻片上加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），就可避免光线的分散，加强视野的亮度，获得清晰的物像（见图1）。 材料附有油镜头的普通光学显微镜一架，染色标本片，香柏油，擦镜纸，二甲苯，消毒缸。 方法步骤 （一）使用法 1．油镜的识别 油镜头上都有标记，标有90×或100×；镜头前端有黑、白或红色的圆圈：刻有“HI”或“oil”等，其孔径也较其他物镜小，约帽针头大。 2．油镜的使用 (1)用油镜观察标本时应将显微镜直立，勿将镜臂弯曲，以免镜油流散。 (2)以天然光线为光源时，使用平面反光镜，如以灯光为光源，使用凹面反光镜。 (3)将聚光器升到最高位置，再将光圈完全打开，增大射入光线的强度。 (4)标本固定在载物台上，标本面上加镜油1小滴，用标本移动器夹紧标本。 (5)先用低倍镜将视野调至最亮时，并找到标本的适当位置，然后换用油镜。 (6)用眼从侧方看着物镜，缓慢转动粗调节器，使物镜头浸于油滴内，并几
乎与玻片接触为止，但切勿使两者相碰，防止损伤镜头或压碎玻片；然后从目镜观察，轻轻转动粗调节器，看到物像时，再调换细调节器，使物像清晰。未能看到物像时，再重复上述操作。 (7)油镜头使用后立即用拭镜纸擦净镜头上的油。如油已干，可在试镜纸上滴少许二甲苯擦试，并随即用干的试镜纸擦去二甲苯，以防镜片脱落。 （二）油镜的保护 1．显微镜是贵重精密仪器，使用时要精心爱护，不得随意拆散和碰撞。 2．取送显微镜时，应右手持镜臂，左手托镜座，平端于胸前，然后轻放于台面上或柜箱内。 3．防止与强酸、强碱、乙醚、氯仿、酒精等化学药品接触。 4．擦镜头时，用试镜纸擦，切忌使用粗糙的纸片或布片擦试等。擦镜时应顺其直径方向擦，不要转圈擦。 5．不用时，将物镜转开呈八字，使其不正对聚光器，以免物镜与聚光器相碰撞。将聚光器下降，罩上镜套或盖布，对号归位。 思考题 1．怎样操作才能使显微镜的视野最亮？标本最清晰？ 2．使用油镜应注意哪些主要事项？ 二、细菌材料玻片标本制备（操作） 目的细菌材料需涂布固定于玻片上，然后经染色才能观察其形态、结构及染色反应。 原理细菌为胶体原浆蛋白为主，涂布在玻片上经火焰温热后可固定于玻片，再经染色冲洗既可被染上颜色，且不易被水冲洗掉。 材料葡萄球菌、大肠杆菌培养物、玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、火柴、消毒缸。
注射用苯唑西林钠说明书 别名 苯唑青霉素、新青霉素Ⅱ、苯唑青霉素、苯甲异恶唑青霉素钠、苯唑西林钠 【中文名称】 注射用苯唑西林钠 【产品英文名称】 Oxacillin Sodium for Injection 【生产企业】 【功效主治】 本品仅适用于治疗产青霉素酶葡萄球菌感染，包括败血症、心内膜炎、肺炎和皮肤、软组织感染等。也可用于化脓性链球菌或肺炎球菌与耐青霉素葡萄球菌所致的混合感染。 【化学成分】 主要成分：苯唑西林钠 化学名：(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-(5-甲基-3-苯基-4-异唑甲酰氨基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸钠盐一水合物 分子式：C 19H 18 N 3 NaO 5 S.H 2 O 分子量：441.44 【药理作用】 本品是耐酸和耐青霉素酶青霉素。苯唑西林对产青霉素酶葡萄球菌具有良好抗菌活性，对各种链球菌及不产青霉素酶的葡萄球菌抗菌活性则逊于青霉素G。苯唑西林通过抑制细菌细胞壁合成而发挥杀菌作用。 【药物相互作用】 1 本品与氨基糖苷类、去甲肾上腺素、间羟胺、苯巴比妥、维生素B族、维生素C 等药物存在配伍禁忌，不宜同瓶滴注。 2 丙磺舒可减少苯唑西林的肾小管分泌，延长本品的血清半衰期。 3 阿司匹林、磺胺药可抑制本品对血清蛋白的结合，提高本品的游离血药浓度。 【不良反应】
1 过敏反应：荨麻疹等各类皮疹较常见，白细胞减少、间质性肾炎、哮喘发作等和 血清病型反应少见；过敏性休克偶见，一旦发生，必须就地抢救，予以保持气道畅通、吸氧及使用肾上腺素、糖皮质激素等治疗措施。 2 静脉使用本品偶可产生恶心、呕吐和血清氨基转移酶升高。 3 大剂量静脉滴注本品可引起抽搐等中枢神经系统毒性反应。 4 有报道婴儿使用大剂量本品后出现血尿、蛋白尿和尿毒症。 【禁忌症】 有青霉素类药物过敏史者或青霉素皮肤试验阳性患者禁用。 【产品规格】 按C19H19N3O5S计（1）0.5g (2)1.0g 【用法用量】 本品供肌内注射时，每0.5g加灭菌注射用水2.8ml。肌内注射成人一日4～6g，分4次给药；静脉滴注成人一日4～ 8g，分2～4次给药，严重感染每日剂量可增加至12g。 小儿体重40kg以下者，每6小时按体重给予12.5～ 25mg/kg，体重超过40kg者予以成人剂量。新生儿体重低于 2kg者，日龄1～14天者每12小时按体重25mg/kg，日龄15～ 30天者每8小时按体重25mg/kg；体重超过2kg者，日龄1～ 14天者每8小时按体重25mg/kg，日龄15～30天者每6小时按体重25mg/kg。轻、中度肾功能减退患者不需调整剂量，严重肾功能减退患者应避免应用大剂量，以防中枢神经系统毒性反应发生。 【贮藏方法】 密闭，在干燥处保存。 【注意事项】 1 应用本品前需详细询问药物过敏史并进行青霉素皮肤试验。 2 对一种青霉素过敏者可能对其他青霉素类药物、青霉胺过敏，有青霉素过敏性休 克史者约5%～7%可能存在对头孢菌素类药物交叉过敏。 3 有哮喘、湿疹、枯草热、荨麻疹等过敏性疾病及肝病患者应慎用本品。
常用药物的配伍 【青霉素联用】 －四环素类、磺胺类：药理性配伍禁忌，两者合用药效明显降低。 －氯霉素、大环内酯类：可使青霉素降效。 ＋链霉素联合应用协同作用明显，但不宜混合注射（浑浊）。 －氨苄西林：因两者联用时会竞争同一结合点而产生拮抗，甚至导致耐药菌的产生。 ＋丙磺舒：合用可使青霉素的血药浓度上升，半衰期延长。 －对乙酰氨基酚（扑热息痛）：两药联用会影响青霉素的药效。 ＋保泰松：保泰松可明显延长青霉素的半衰期。 －氨茶碱：可使青霉素灭活失效。 －高锰酸钾、碘酊：与青霉素有配伍禁忌。 －碳酸氢钠：使青霉素极快分解、失效，禁止联用。 －维生素B1、维生素B2：对青霉素有灭活作用。 －维生素C：维生素C的强还原性可促使抗生素分解，效价降 低，在0～6℃时96小时青霉素可完全失效。 －葡萄糖：对青霉素的水解有催化作用，且随着葡萄糖浓度的增加分解加速，故最适宜与青霉素静脉滴注的溶媒是生理盐水。 【氨苄西林联用】 －四环素类、氯霉素类、大环内酯类、林可胺类、磺胺类：可降低氨苄西林的疗效。＋头孢菌素类药物：可获得较好的协同作用。 ＋苯唑西林钠：联合用药可相互增强对肠球菌的抗菌活性。 ±氨基糖苷类药物：有协同杀菌作用。 ＋丙磺舒：可提高氨苄西林的血药浓度并延长其半衰期。 －维生素C：维生素C的强还原性，可使氨苄西林失活或降效。 －维生素B族：对氨苄西林有灭活作用，故不宜混合注射。。 ＋阿司匹林：可提高氨苄西林血药浓度并延长半衰期。 －食物：可降低氨苄西林的吸收。 ＋甲硝唑：联用治疗厌氧菌感染有协同作用，但不宜直接与氨苄西林钠溶液配伍（浑浊、变黄）。 －葡萄糖：对氨苄西林钠水解有催化作用，葡萄糖液浓度越高越易使其失效，故两者不宜混合静滴。 ＋柴胡：柴胡皂甙可增加内服氨苄青霉素的吸收。 【阿莫西林联用】 ＋克拉维酸（棒酸）、舒巴坦钠：联用可大大增强其抗菌活性。 ＋美西林：与阿莫西林联用，抗菌范围扩大，对革兰氏阳性菌有良好抗菌活性，对大肠杆菌、药效增加5倍以上。 －大黄：与阿莫西林生成鞣酸盐沉淀物，降低生物利用度。 其它可参见氨苄西林。 【头孢菌素类药物的联用】 ＋青霉素类：有协同抗菌作用，如需联用剂量需小，不能在同一注射器中混用。
【革兰染色和血浆凝固酶实验】血浆凝固酶 可以 革兰染色和血浆凝固酶实验实验目的： 掌握革兰染色法的原理以及实验步骤； 理解血浆凝固酶试验的原理； 掌握血浆凝固酶试验的操作方法以及结果判断。 试验仪器及试剂： 仪器：载玻片、特种铅笔、试管夹、酒精灯、打火机、接种环、染色盘、显微镜试剂：龙胆紫溶液、碘溶液、脱色液、沙黄溶液、生理盐水、蒸馏水、菌种、金黄色葡萄球菌培养物、EDTA抗凝兔血浆等实验原理： 革兰染色：细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物，乙醇能使它溶解，所以染色的前二步结果是一样的，但在G+细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘的复合物分子太大，不能通过细胞壁，保持着紫色。在G-细胞中，乙醇处理不但破坏了胞壁外膜，还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜，于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来，当再用衬托的染色液复染时，显现红色。红
色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，红色显示不出来。 血浆凝固酶试验：致病的葡萄球菌可分泌游离型凝固酶到菌体外，游离型凝固酶能被血浆中的协同因子激活为凝酶样物质，将液态的纤维蛋白原转变为固态的纤维蛋白而使血浆凝固。 实验步骤： 革兰染色：1. 标记：用特种铅笔在载玻片上画一个小圈，用来大致确定菌液滴的位置。 2. 涂片：滴加一小滴无菌生理盐水与洁净载玻片上，用打火机点燃酒精灯灼烧接种环，待接种环冷却后在培养基中取细菌，然后将菌落或菌苔轻轻涂布散开（菌液标本可直接涂在载玻片上），涂片完成消毒接种环，熄灭酒精灯。 3. 干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰（火焰上方15cm左右，可用手背试温，要求以玻片背面触及手背皮肤热而不烫为宜） 4. 固定：用高温进行固定，即用夹子夹取载玻片一端，标本面朝上，在酒精的外焰快速来回移动3~4次，共约3~4秒，放置待冷却后染色 5. 染色：（1）初染：龙胆紫溶液染色10 s 后用蒸馏水冲洗，沥去水分（2）煤染：碘液染色10 s 后用蒸馏水冲洗，沥去水分（3）脱色：脱色剂脱色10-20 s 后用蒸馏水冲洗，沥去水分（4）复染与水洗：沙黄溶液染色10 s 后用蒸馏水冲洗，自然干燥后镜检 6.显微镜观察血浆凝固酶试验：1. 取一张载玻片做好标记，一侧滴加生理盐水作
耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌的检测(一) 【摘要】目的研究我院耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌的感染现状和耐药情况，为临床医生合理使用抗生素提供实验依据。方法按照《全国临床检验操作规程》进行常规细菌分离培养，应用湖南天地人生物科技有限公司提供的微生物生化药敏试剂卡片进行菌种鉴定，药敏试验采用纸片扩散（K-B）法，苯唑西林琼脂筛选法确证试验。结果共检测CNS206株，以溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主要菌种，耐苯唑西林株检出率56.9%。结论加强MRCNS的分布及耐药性的监控，对临床治疗及抗生素的合理应用意义重大。 【关键词】耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药 凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）一般认为无致病性，因而对CNS感染的监测不够重视。近年来经过医院感染调研发现耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）造成的医院感染病例显著增多，对苯唑西林和万古霉素的最小抑菌圈（MIC）水平亦逐年增高。MRCNS已经引起人们的关注。通过探讨MRCNS所致医院感染的特点，耐药性以及医院感染的高发区和易感人群，为临床诊治提供依据，指导临床合理使用抗生素。 1材料和方法 1.1标本的来源： 医院感染患者各种标本，包括痰，伤口分泌物，中段尿，血液，泌尿生殖道排泄物中分离出凝固酶阴性的葡萄球菌株260株。 1.2材料： 由湖南天地人生物科技有限公司提供的生化鉴定卡片以及由英国OXOID公司提供的苯唑西林（OXA）药敏纸片。 1.3质控品： 质控标准参考菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923，ATCC29213。 1.4方法： 1.4.1所有送检标本按《全国临床检验操作规程》进行常规细菌培养，应用湖南天地人生物科技有限公司提供的微生物生化，药敏试剂卡鉴定临床标本到种。 1.4.2OXA琼脂纸片扩散（K-B）法：操作按NCCLS规定用头孢西丁药敏纸片（含量30微克/片）做药物敏感性测定，药敏平板放置35度24小时判读结果，执行NCCLS（2001年）标准凝固酶阴性葡萄球菌抑菌环直径=24毫米判定为耐药（R），判读时注意用透射光检查抑菌环内有无耐药菌株或薄菌膜，防止漏检。 1.4.3苯唑西林琼脂筛选法确证试验：选常规细菌培养物中可疑菌落接种到含有1.75微克/毫升OXA并添加4%NaCl的M-H琼脂板上，接种菌液浓度为0.5麦氏比浊标准，接种量为一白金耳置于30-35度之间孵育24小时后观察有无细菌生长。任何形式的菌落生长都表示对苯唑西林耐药，在OXA琼脂平上生长的凝固酶阴性葡萄球菌则为MRCNS。 2结果 2.1MRCNS菌株分离及分布见表1： 菌种共测定CNS260株，其中MRCNS148株，阳性检出率59.6%。菌株分布以溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主。 细菌名称株数构成比（%） 溶血葡萄球菌6845.9 表皮葡萄球菌4530.4 人型葡萄球菌2013.5 模仿葡萄球菌85.4 头部葡萄球菌53.4 孔氏葡萄球菌21.4
注射用苯唑西林钠说明书 【药品名称】 通用名：注射用苯唑西林钠 英文名：OXACILLIN SODIUM FOR INJECTION 汉语拼音：ZHUSHEYONG BENZUOXILINNA 【成分】苯唑西林钠 化学名为(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-(5-甲基-3-苯基-4-异唑甲酰氨基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸钠盐一水合物 分子式C19H18N3NaO5S.H2O 分子量441.44 【性状】本品为白色粉末或结晶性粉末。 【药理毒理】本品是耐酸和耐青霉素酶青霉素。苯唑西林对产青霉素酶葡萄球菌具有良好抗菌活性，对各种链球菌及不产青霉素酶的葡萄球菌抗菌活性则逊于青霉素G。苯唑西林通过抑制细菌细胞壁合成而发挥杀菌作用。 【药代动力学】苯唑西林耐酸，口服可吸收给药量的30%～33%。肌内注射苯唑西林0.5g，0.5小时达到血药峰浓度(Cmax)，为16.7mg/L；剂量加倍，血药浓度亦倍增。静脉滴注苯唑西林0.25g，滴注结束时血药浓度为9.7mg/L，2小时后为0.16mg/L。出生8～15日和20～21日的新生儿肌内注射20mg/kg后，血药峰浓度分别为51.5mg/L和47.0mg/L。苯唑西林蛋白结合率为93%。在肝、肾、肠、脾、胸腔积液和关节腔液中均可达到有效治疗浓度，在腹水和痰液中浓度较低。苯唑西林难以透过正常血脑屏障，可透过胎盘进入胎儿体内，亦有少量分泌至乳汁。本品健康成人消除半衰期为0.4～0.7小时；出生8～15日和20～21日的新生儿的消除半衰期分别达1.6天和1.2天。苯唑西林约49%在肝脏代谢，肌内注射后约40%以原型药在尿中排泄，约10%药物经胆道排泄。血液透析和腹膜透析均不能清除本品。【适应症】本品仅适用于治疗产青霉素酶葡萄球菌感染，包括败血症、心内膜炎、肺炎和皮肤、软组织感染等。也可用于化脓性链球菌或肺炎球菌与耐青霉素葡萄球菌所致的混合感染。【用法和用量】本品供肌内注射时，每0.5g加灭菌注射用水2.8ml。肌内注射成人一日4～6g，分4次给药；静脉滴注成人一日4～8g，分2～4次给药，严重感染每日剂量可增加至12g。小儿体重40kg以下者，每6小时按体重给予12.5～25mg/kg，体重超过40kg者予以成人剂量。新生儿体重低于2kg者，日龄1～14天者每12小时按体重25mg/kg，日龄15～30天者每8小时按体重25mg/kg；体重超过2kg者，日龄1～14天者每8小时按体重25mg/kg，日龄15～30天者每6小时按体重25mg/kg。轻、中度肾功 【不良反应】1．过敏反应：荨麻疹等各类皮疹较常见，白细胞减少、间质性肾炎、哮喘发作等和血清病型反应少见；过敏性休克偶见，一旦发生，必须就地抢救，予以保持气道畅通、吸氧及使用肾上腺素、糖皮质激素等治疗措施。2．静脉使用本品偶可产生恶心、呕吐和血清氨基转移酶升高。3．大剂量静脉滴注本品可引起抽搐等中枢神经系统毒性反应。4．有报道婴儿使用大剂量本品后出现血尿、蛋白尿和尿毒症。 【禁忌】有青霉素类药物过敏史者或青霉素皮肤试验阳性患者禁用。 【注意事项】1．应用本品前需详细询问药物过敏史并进行青霉素皮肤试验。2．对一种青霉素过敏者可能对其他青霉素类药物、青霉胺过敏，有青霉素过敏性休克史者约5%～7%可能存在对头孢菌素类药物交叉过敏。3．有哮喘、湿疹、枯草热、荨麻疹等过敏性疾病及肝病
精品文档 常见抗生素的分类 1. 青霉素类：青霉素、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林、苯唑西林钠、氯唑西林、普鲁卡因青 霉素、苄星青霉素、哌拉西林、美洛西林、替卡西林、阿洛西林钠、美西林、羧苄西林、磺苄西林、呋布西林钠、萘夫西林钠、双氯西林、匹氨西林、阿帕西林、阿扑西林、匹美西林、甲氧西林、仑氨西林、福米西林、氟氯西林 2. 青霉素类复方制剂：阿莫西林/ 氟氯西林、阿莫西林/双氯西林、氨苄西林/ 氯唑西林 3. 青霉素类+酶抑制剂（舒巴坦、克拉维酸、他唑巴坦）氨苄西林/ 舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、阿莫西林/舒巴坦、替卡西林/克拉维酸、美洛西林/ 舒巴坦、哌拉西林/ 他唑巴坦、哌拉西林/ 舒巴坦 4. 头孢菌素类：第一代头孢菌素类：头孢氨苄、头孢唑林、头孢羟氨苄、头孢拉定、头孢噻 吩、头孢噻啶、头孢硫脒、头孢乙氰、头孢替唑钠、头孢匹林钠第二代头孢菌素类：头孢呋辛钠、头孢克洛、头孢孟多、头孢替安、头孢丙烯、头孢雷特、头孢尼西钠第三代头孢菌素类头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶、头孢克肟、头孢泊肟、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢磺啶、头孢唑喃、头孢唑肟、头孢咪唑、头孢他美酯、头孢特伦酯、头孢布坦、头孢地尼、头孢匹胺第四代头孢菌素类头孢吡肟、头孢克定、头孢匹罗头孢菌素类+酶抑制剂头孢哌酮/ 舒巴坦、头孢哌酮/ 他唑巴坦、头孢噻肟/舒巴坦、头孢曲松/舒巴坦（头孢三代+酶抑制剂） 5. 碳青酶烯类硫霉素、亚胺培南/ 西司他丁钠、美罗培南、帕尼培南、厄他培南 6. 其他B -内酰胺类拉氧头抱、氟氧头抱、头抱米诺、头抱西丁、头抱美唑、头抱替坦、头抱拉 宗、氨曲南 7. 氨基糖苷类链霉素、卡那霉素、阿米卡星、核糖霉素、妥布霉素、庆大霉素、西索米星、奈替米星、小诺米星、异帕米星、阿司米星、依替米星、大观霉素、地贝卡星、巴龙霉素、新霉素 8. 四环素类四环素、土霉素、多西环素、米诺环素、金霉素、胍甲环素、地美环素、美他环素 9. 大环内酯类红霉素、琥乙红霉素、罗红霉素、克林霉素、阿奇霉素、泰利霉素、地红霉素、吉他霉素、乙酰吉他霉素、麦迪霉素、乙酰麦迪霉素、交沙霉素、麦白霉素、罗他霉素、螺旋霉素、乙酰螺旋霉素、竹桃霉素、依托红霉素、氟红霉素 10. 糖肽类万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁 11. 磺胺类磺胺嘧啶、复方新诺明、磺胺甲噁唑、柳氮磺砒啶、磺胺米隆、磺胺二甲嘧啶、磺 胺二甲异嘧啶、磺胺异唑、磺胺苯吡唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺脒、酞磺醋胺、琥磺胺噻唑、磺胺林、甲氧苄啶 12. 喹诺酮类吡哌酸、诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、芦氟沙星、司氟沙星、莫西沙星、萘啶酸、氟罗沙星、格帕沙星、曲伐沙星、淋沙星、吉米沙星、加替沙星、妥舒沙星、帕珠沙星、司帕沙星 13. 硝咪唑类甲硝唑、替硝唑、奥硝唑 14. 林克胺类林可霉素、克林霉素 15. 磷霉素类磷霉素 16. 酰胺醇类氯霉素、甲砜霉素 17. 其它类利奈唑胺、多粘菌素B、粘菌素、杆菌肽、夫西地酸钠、新生霉素 18. 抗真菌类两性霉素B、两性霉素B脂质体、制霉菌素、灰黄霉素、克念菌素、咪康唑、酮康 唑、益康唑、伊曲康唑、氟康唑、噻康唑、伏立康唑、泊沙康唑、克霉唑、联苯苄唑、氟胞嘧啶、特比萘芬、卡泊芬净、阿莫罗芬、萘替芬、环吡酮胺、托萘酯、美帕曲星 精品文档
实验五病原性球菌 目的 (一) 掌握致病性葡萄球菌的特征；抗链球菌溶血素“O”试验；甲型链球菌与肺炎链球菌区别。 (二) 熟悉三种链球菌在血平板上的区分；肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌的形态特征。 (三) 了解病原性球菌的形态、染色性。 内容 (一) 病原性球菌的形态及染色性(示教)。 (二) 葡萄球菌培养及生化特性(示教)。 (三) 致病性葡萄球菌的鉴定(操作)。 (四) 链球菌的培养与抗链球菌溶血素“O”试验(示教与操作)。 (五) 肺炎链球菌与甲型链球菌的区别(示教)。 (六) 脓汁或咽拭子分离培养(操作)。 一、病原性球菌的形态及染色性(示教) 1．葡萄球菌的形态及染色性(示教) 【材料】 金黄色葡萄球菌革兰染色示教片。 【方法】 油镜观察细菌的形态、排列及染色性。 2．链球菌的形态及染色性(示教) 【材料】 乙型链球菌血清肉汤培养物制作的革兰染色示教片。 【方法】 油镜观察链球菌的形态、大小、排列及染色性。 3．肺炎链球菌的形态结构及染色性(示教) 【材料】 肺炎链球菌革兰染色示教片、肺炎链球菌荚膜示教片。 【方法】 油镜观察二张示教片中肺炎链球菌的形态结构特点及其染色性。 4．脑膜炎奈瑟菌的形态及染色性(示教) 【材料】
脑膜炎奈瑟菌革兰染色示教片。 【方法】 油镜观察注意形态、大小、排列以及染色性。 5．淋病奈瑟菌的形态及染色性． 【材料】 淋病性尿道、阴道脓汁涂片（革兰染色）。 【方法】 油镜观察细菌形态、排列、在细胞内或外及染色性。 二、葡萄球菌培养及生化特性(示教) 【材料】 1．金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌血琼脂平板培养物 2．金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌甘露醇管 【方法】 1．取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的血琼脂平板培养物，观察二种葡萄球菌单个菌落的形态、大小、表面、边缘、透明度、颜色及溶血性(如颜色不易区别时，可用滤纸片揩抹菌落观察)。 2．取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的甘露醇发酵管，观察二者对甘露醇的分解情况。 三、致病性葡萄球菌的鉴定 致病性葡萄球菌的鉴定，一般实验室都根据以下特征，其中尤以血浆凝固酶试验意义最大。 1．产生金黄色色素。 2．对家兔或羊红细胞有溶血作用。 3．分解甘露醇，产酸不产气。 4．血浆凝固酶试验阳性。 5．耐热DNA酶试验阳性。 血浆疑固酶试验：试管法(示教) 【材料】 见实验四。 【方法】 见实验四 耐热DNA酶试验(示教)
For personal use only in study and research; not for commercial use 部分药品皮试液配制方法 1.注射用盐酸头孢吡肟规格0.5g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液10ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 2.注射用盐酸头孢吡肟规格1g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 3.注射用哌拉西林钠规格0.5g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液10ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 4.注射用哌拉西林他唑巴坦钠规格 1.25g（1g：0.25g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 5.注射用哌拉西林舒巴坦钠规格2.5g（2g：0. 5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 6.注射用哌拉西林舒巴坦钠规格1.5g（1g：0. 5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 7.注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠规格 2.5g（2g：0.5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 8.注射用头孢哌酮舒巴坦钠规格3g（2g：1g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 9.注射用盐酸头孢替安规格1.0g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 10.注射用盐酸头孢替安规格2.0g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 11.注射用氨苄西林钠舒巴坦钠规格3g（2g﹕1g）（皮试药液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 12..注射用头孢甲肟规格0.5g（皮试药液浓度为500ug/ml）
氧化酶试验(oxidasetest)氧化酶又名细胞色素氧化酶、细胞色素氧化酶C或呼吸酶。试验用于检测细菌/是否有该酶存在。原理是氧化酶在有分子氧或细胞色素C存在时，可氧化四甲基对苯撑二胺出现紫色反应。假单胞菌属、气单胞菌属等阳性，肠杆菌科阴性，可区别。 血浆凝固酶：由金黄色葡萄球菌致病性菌株产生。能使含有抗凝剂的人或兔血浆发生凝固。在感染部位由于凝固酶的产生，使体液中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，沉积于细菌表面，可阻碍吞噬细胞对细菌的吞噬和杀灭作用。 凝固酶试验(coagulase test)原理： 致病性葡萄球菌→ 凝固酶→ 血浆中纤维蛋白原(液态) 纤维蛋白(固态) → 血浆凝固方法： ①玻片法：检测结合凝固酶 ②试管法：检测游离凝固酶 应用： 作为鉴别葡萄球菌致病性的重要指标。 一、名词解释 汹涌发酵”现象——在牛乳培养基中，产气荚膜梭菌能分解乳糖产酸使酪蛋白凝固，同时产生大量气体将凝固的酪蛋白冲散形成蜂窝状，并将液面上的凡士林向上推挤，甚至冲开棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵”现象，为本菌特征之一 肥达反应——用已知伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验。 外斐试验——变形杆菌属的X19,X2.Xk菌株的菌体O抗原与斑疹伤寒立克次体和恙虫病立克次体有共同抗原，故可用OX19，OX2，OXk代替立克次体作为抗原与相应患者血清进行交叉凝集反应，此称外斐试验，辅助诊断立克次体病。 SPA——葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白成分，称为葡萄球菌A蛋白。英文缩写为SPA MRSA—是能产生β—内酰胺酶而破坏青霉素的β—内酰胺环而使青霉素失效而表现出耐药性的一类葡萄球菌。 胆汁溶菌试验——胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。 血浆凝固酶试验——血浆凝固酶能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质, 葡萄球菌中致病株大多数能产生, 是一种主要致病物质，是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。也是区别金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌的主要指标，该酶可分结合凝固酶与游离凝固酶，前者可用玻片法检测，后者可用试管法检测 Nagler（奈格尔）试验：产气荚膜梭菌在卵黄琼脂平板上，菌落周围出现乳白色浑浊圈，是由细菌产生的卵磷脂（α-毒素）分解卵黄中的卵磷脂所致，若在培养基中加入α毒素的抗血清，则菌落周围不出现浑浊，为本菌特征之一，可用于产气荚膜梭菌的鉴定。 L型菌?——是细菌、真菌等微生物的细胞壁缺陷型。大多数细菌可在某些因素的影响下失去细胞壁变为L 型 氧化酶实验——氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。常用有三种方法；细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。 渺茫(413417227) 21:47:37 X因子----是一种耐热的存在于血红蛋白中的一种血红素及其衍生物，含铁卟啉，是细菌合成过氧化氢酶，过氧化物酶与细胞色素氧化酶的辅基