肠杆菌科Enterobacteriaceae
1.肠杆菌科：①是一大群寄居于人和动物肠道中的革兰阴性无芽胞杆菌（40种）, 常随人与动物粪便排出，广泛分布于水、土壤或腐物中。
②大多为正常菌群或条件致病菌，部分强致病菌。
2 分类：
（1）埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、耶尔森菌属：胃肠道感染、增殖、引起症状
（2）枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属、欧文菌属、哈夫尼菌属、爱德华菌属
（3）其它：肥杆菌属、致病杆菌属、克吕沃尔菌属、拉恩菌属、西地西菌属、塔特姆菌属3. 肠道杆菌的共同特性
（1）形态与结构：G-杆菌，多数有鞭毛，大多有菌毛，少数有荚膜或包膜，无芽胞。（2）培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，常用肠道选择培养基分离培养。
（3）生化反应：生化反应活泼，乳糖发酵试验在初步鉴别肠道致病和非致病菌时有重要意义，生化反应与致病性成反比。
（4）Ag构造：菌体（O）Ag、鞭毛（H）Ag、表面（K、Vi）Ag、粘附因子（F）Ag （5）变异现象：S-R、H-O、Ag、耐药性、毒素产生、生化反应等
（6）传播方式：污染的饮水及食物、经消化道传播。
（7）致病性：菌毛、表面Ag、内毒素、肠毒素等，以肠道症状为主。
（8）抵抗力：不强，加热60℃经30分钟即死亡。
4. 肠道杆菌分离鉴定程序
5.肠道选择鉴别培养基
（2）其他选择鉴别培养基
A. EMB(伊红美兰): 含乳糖，伊红和美蓝是抑菌剂和pH指示剂，可抑制革兰氏阳性菌，在酸性条件下产生沉淀，形成紫黑色菌落或具黑色中心的外围无色透明的菌落。
B. HE培养基：含乳糖、蔗糖和水杨素，胆盐、去氧胆酸钠、溴麝香草酚兰和酸性复红可抑制革兰氏阳性菌；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为蓝色。选择鉴别培养基
C. 麦康凯琼脂
MacConkey：含乳糖，牛胆盐可抑制G+菌，中性红是pH指示剂，细菌发酵乳糖产酸时菌落呈粉红色，并在菌落周围出现胆盐沉淀的浑浊圈。
（3）在SS琼脂平板上，大肠杆菌产生较大、红色菌落；伤寒沙门菌产生较小、黑色菌落。
在CB选择培养基上，大肠杆菌产生较大、蓝色菌落。
（4）双糖铁培养基：指示剂为酚红，酸性为黄色，碱性为红色。上层为固体琼脂斜面，含乳糖，指示剂为酚红。下层为半固体琼脂，含葡萄糖，含硫酸亚铁。
6. 抗原构造
（1）O-Ag：菌体抗原，为细胞壁LPS最外侧的重复寡糖单位，决定O抗原的特异性。（2）H-Ag：鞭毛抗原，蛋白质成分，不耐热，特异性强；可发生H-O变异。
（3）K/Vi-Ag：为荚膜成分，如大肠杆菌的K抗原、伤寒杆菌Vi抗原，能阻抑O凝集（4）F-Ag：菌毛抗原，是细菌表面的黏附结构，能阻断O凝集
（5）肠道杆菌共同抗原：抗原决定簇位于LPS的核心多糖上，在细菌鉴定和分类中有一定的意义
7. 三种菌属比较
大肠细菌Escherichia
1. 大肠细菌（E. coli）：为埃希菌属(Escherichia)代表菌。为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染，统称病普通大肠杆菌。某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称病致病大肠杆菌。
2. 普通大肠杆菌：为正常菌群成员，具有刺激免疫系统、提供营养成分、构成肠道生物屏障、解毒等作用。
（1）作为水源是否被污染的依据：
我国饮水；细菌总数≤100 个/ml, 大肠菌群数≤3个/L;
饮料：细菌总数≤100 个/ml, 大肠菌群数≤5个/100ml。
（2）普通大肠杆菌所致疾病
A. 肠道外感染：多为内源性感染，泌尿系感染为主，如尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎、
上行性尿道感染多见于已婚妇女。也可引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎等。
B. 婴儿、年老体弱、慢性消耗性疾病、大面积烧伤患者，大肠杆菌可侵入血流，引起败血症。
C. 早产儿，尤其是生后30天内的新生儿，易患大肠杆菌性脑膜炎。
3.致病性E.coli
（1）肠产毒性大肠杆菌（ETEC）：引起婴幼儿和旅游者腹泻，出现轻度腹泻，也可呈严重的霍乱样症状即大量的米泔水样便。腹泻常为自限性，一般2～3天即愈。营养不良者可达数周，也可反复发作。致病因素是LT或ST，或两者同时致病。有些菌株具有定居因子，常见者为O6:K15:H16、O25:K7:H42。鉴定ETEC主要测定大肠杆菌肠毒素，血清型有一定参考意义。
（2）肠致病性大肠杆菌（EPEC）：是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性，严重者可致死；成人少见。细菌侵入肠道后，主要在小肠大量繁殖。发热、恶心、呕吐、非血性便。切片标本中可见细菌粘附于绒毛，导致刷状缘破坏、绒毛萎缩、上皮细胞排列紊乱和功能受损，造成严重腹泻,作用与志贺毒素相似，具有神经毒素、细胞毒素和肠毒素性。常见者为O26、O55、O86。鉴定EPEC可根据临床表现、生化反应与血清型。
（3）肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：为粪—口途径感染，与菌痢的发病机理相似，临床症状也类于菌痢即里急后重，且无动力故易误诊为细菌性痢疾。常见者为O28 、O124等。鉴定EIEC可根据内毒素与定居因子。
（4）肠出血性大肠杆菌（EHEC)：引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺毒素样细胞毒素（Vero毒素）。EHEC的主要菌型是O157：H7，还可有O26、OⅢ等。鉴定EHEC 可根据临床表现、生化反应志贺毒素与血清型。
（5）肠集聚性大肠杆菌（EAEC）：引起婴儿持续性腹泻，脱水，偶有血便，不侵袭细胞。毒素为肠集聚耐热毒素（enteroaggregative heat-stable toxin, EAST）；另一类毒素似大肠埃稀菌的α溶血素。
4. 致病物质及其作用
5.LT 、ST性质比较
6. 致病物质
（1）定居因子（Colonization factor,CF）：也称粘附素(Adhesin)，即大肠杆菌的菌毛。具有较强的免疫原性，能刺激机体产生特异性抗体。
（2）胞壁脂多糖的类脂A具有毒性。
（3）O特异多糖有抵抗宿主防御屏障的作用。
（4）大肠杆菌的K抗原有抗吞噬作用。
（5）肠毒素：外毒素（只有肠产毒性大肠杆菌产生）
A. 不耐热肠毒素（Heat labile enterotoxin, LT）：对热不稳定，65℃经30分钟即失活。为蛋白质，有免疫原性。由A、B两个亚单位组成。LT的免疫原性与霍乱弧菌肠毒素相似，两者的抗血清交叉中和作用。
B. 耐热肠毒素（Heat stable enterotoxin ,ST）：对热稳定，100℃经20分钟仍不被破坏，免疫原性弱。ST可激活小肠上皮细胞的鸟苷酸环化酶，使胞内cGMP增加，在空肠部分改变液体的运转，使肠腔积液而引起腹泻。ST与霍乱毒素无共同的抗原关系。
7. 微生物学检查法
（一）卫生细菌学检查
1．细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。我国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
2．大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。我国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。
大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
8.临床微生物学检查
（1）形态学特征：G-杆菌，大小0.4～0.7×1～3μm, 大多数菌株有动力，有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，无芽胞。
（2）培养特性：在血琼脂平板上，有些菌株β溶血。
在SS或CB选择性培养基上形成有颜色、直径2～3mm的光滑型菌落。（3）生化反应：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，IMViC试验为“++--”，即为大肠菌群。
C(IMVIC)++--、KIA AA+-、MIU ++-、
9. 抗原构造：较复杂，有O、K、H、F四种抗原。表明大肠杆菌血清型的方式是按O：K：H排列，例如O111:K58:H2。
（1）O 抗原为脂多糖，H鞭毛抗原。
（2）K抗原为荚膜脂多糖抗原。从病人新分离的大肠杆菌多有K抗原，有抗吞噬和补体杀菌作用。
（3）F抗原至少有5种，与大肠杆菌的粘附作用有关。
10. 抵抗力：
（1）该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，
（2）55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。
（3）在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。
（4）胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。
（5）对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。
11. 临床微生物学检查：肠内感染、ETEC 分离培养+生化+血清分型+毒素、
毒素检测、乳鼠灌胃试验ST、CHO LT。
（1）标本：血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。
（2）分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基(s-s琼脂)。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。
（3）EPEC：分离培养+生化+血清学试验(ELISA)
（4）EIEC：①分离培养+生化反应+血清分型+毒力试验；②赖氨酸脱羧酶阴性；③无动力；
④不发酵或迟缓发酵乳糖（O152 O124 乳糖阴性）；
上述与志贺菌相似，鉴别试验为醋酸钠、葡萄糖铵利用和粘质酸盐产酸试验
EIEC 阳性；志贺菌阴性
（5）EHEC：山梨醇麦康凯琼脂，不发酵山梨醇，为无色菌落，次代培养后用胶乳凝集试验决定抗原为O157。
12. 防治原则：在肠产毒性大肠杆菌的免疫预防研究中，发现其菌毛抗原在自然感染和人工自动免疫中是一种关键性抗原。治疗可选用庆大霉素、丁胺卡那霉素等。
沙门菌属（Salmonella）
1. 目前至少有67种O抗原和2000个以上血清型，所致疾病称沙门菌病。根据其对宿主的致病性，可分为三类：①对人致病；②对人和动物均致病；③对动物致病。
与人类关系密切的沙门菌有：伤寒沙门菌（S. typhi），甲、乙、丙型副伤寒沙门，鼠伤寒沙门菌，猪霍乱沙门菌，肠炎沙门菌等十余种。
2. 致病物质：
（1）侵袭力：沙门杆菌侵入小肠粘膜上皮细胞，穿过上皮细胞层到达上皮下组织。细菌虽被细胞吞噬，但不被杀灭，并在其中继续生长繁殖。菌毛的粘附作用也是细菌侵袭力的一个因素。
（2）内毒素：引起发热、白细胞减少。大剂量时可发生中毒性休克
（3）肠毒素：有些沙门杆菌，如鼠伤寒杆菌可产生肠毒素，性质类似肠产毒性大肠杆菌的肠毒素。
3. 人类的沙门菌病：肠热证、急性胃肠炎、败血症
（1）肠热症：
①是伤寒病和副伤寒病的总称，主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。
②第1周，细菌在肠系膜淋巴结及其他淋巴组织中繁殖，经胸导管进入血流，引起第一次菌血症。称前驱期。
③第2～3周，细菌随血流至骨髓、肝、脾、肾、胆囊、皮肤等并在其中繁殖，再次进入血流，引起第二次菌血症。部分病例皮肤出现玫瑰疹。
④第4周，部分菌可再次侵入肠壁淋巴组织，出现超敏反应，进入恢复期，患者逐渐康复。
⑤典型伤寒的病程约3～4周。病愈后部分患者可自粪便或尿液继续排菌3周至3个月，称恢复期带菌者。约有3%的伤寒患者成为慢性带菌者。
⑥副伤寒病与伤寒病症状相似，但一般较轻，病程较短，约1～3周即愈。
（2）急性胃肠炎(食物中毒)：是最常见的沙门杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌等引起。系因食入未煮熟的病畜病禽的肉类、蛋类而发病。潜伏期短，病程较短，一般2～4天内可完全恢复。
（3）败血症：常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。病菌进入肠道后，迅速侵入血流，导致组织器官感染，如脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎、肾盂肾炎、心内膜炎等。出现高热、寒战、厌食、贫血等。
4. 免疫性：①伤寒或副伤寒病后有牢固的免疫性，很少再感染。主要依靠细胞免疫。
②体液免疫方面，局部抗体较重要，尤其是SlgA具有特异性防止伤寒杆菌粘附
于肠粘膜表面的能力。
5. 微生物学检查
6.病原学检查
7. 形态与染色：大小0.6～1.0×2～3um，无芽胞，一般有鞭毛，无荚膜，多数有菌毛，革兰阴性杆菌。
8. 培养特性：兼性厌氧菌，在普通琼脂平板上形成中等大小、半透明的S型菌落。在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。
9. 常见沙门菌的主要生化特性
菌种
KIA MIU
甲基红
（Mr）
枸橼酸盐
（C）
苯丙氨
酸
斜面底层产气
硫化
氢
动力吲哚脲酶
大肠埃希菌 A A + - + + - + - -
福氏志贺菌K A -/+ - - +/- - +/- - -
宋内氏志贺菌K A -/+ - - - - +/- - -
伤寒沙门氏菌K A - +/- + - - + +/- -
甲型副伤寒菌K A + -/+ + - - + - -
乙型副伤寒菌K A + + + - - + + -
肺炎克雷伯菌 A A + - - - + - + - 变形杆菌K A + + + + + + +/- +
10. 生化反应特点：大多产生硫化氢。发酵1、3、4，不发酵2、5，除伤寒杆菌产酸不产气外，其他沙门菌均产酸产气。
11. 抗原结构
表面抗原Vi抗原（伤寒、PC）、M抗原、S抗原
O抗原分群依据，A~F群(IgM)
H抗原分型依据，分2个相：第一相---特异相；第二相---非特异相（IgG) 12. 噬菌体分型：有些沙门菌在血清学分型的基础上，可借噬菌体进一步分型。分为96个噬菌体型。我国常见者有12个型。伤寒杆菌的噬菌体分型在追踪传染源及发现新型菌株上有实际意义。
13. 抵抗力：
（1）对热抵抗力不强，60℃1小时或65℃经15～20分钟可被杀死。
（2）在水中能存活2～3周，类便中可活1～2个月，可在冰冻土壤中过冬。
（3）胆盐、煌绿等对本属细菌的抑制作用较对其他肠道杆菌为小，故可用其制备肠道杆菌选择性培养基，利于分离粪便中的沙门菌。
14. 变异
（1）H-O变异：
（2）S-R变异：失去O抗原变为R型菌落，细菌的毒力也随之消失。
（3）位相变异：是第1相、部分是第2相的不同菌落。
（4）V-W变异：指有Vi抗原的菌株（V型）失去Vi抗原（W型），即细菌与抗O血清凝集而不再与抗Vi血清凝集，称为V-W变异。
（5）位相变异：将具有第1相和第2相H抗原的沙门杆菌接种于琼脂平板上，所得单个菌落，有些是第1相，有些是第2相。如任意挑选一个菌落（第1相或第2相），在培养基上多次移种后，其后代又出现部分是第1相，有些是第2相。
15. 肥达反应（Widal test）：
（1）用伤寒杆菌O抗原和伤寒杆菌、甲、乙型副伤寒杆菌的H抗原与待检血作定量凝集试验。根据抗体含量多少及其增长情况，辅助临床诊断肠热症。
判定结果时必须考虑下述情况：O≥1:80感染急性期; H≥1:160 确定感染细菌;
（2）Widal test：
（3）Widal test解释
A. 正常抗体水平：正常人因隐性感染或预防接种，血清中可含有一定量抗体，其效价随各地区情况而不同。一般说来，O凝集价≥1:80、H凝集价≥1:160时才有诊断价值。
B. 动态观察：判断肥达反应结果须结合临床症状、病期等。单次凝集效价增高，有时不能定论。如间隔数天重复采用，若效价随病程延长而逐渐上升4倍以上，有诊断意义。（4）Widal test结果分析
O与H抗体在诊断上的意义：
①若H、O凝集效价均超过正常值，则感染伤寒、副伤寒的可能性大；
②H与O效价均低，则患肠热症的可能性甚小；
③若H效价高而O不高，可能系预防接种或非特异性回忆反应；
④如O效价高而H不高，可能是感染早期或其他沙门菌感染。
其他：少数病例在整个病程中，肥达试验始终呈阴性。可能是
①发病早期曾用大量或多种抗生素治疗；
②患者免疫功能低下。故本试验阴性时，不宜匆忙地否定诊断。
16. 防治原则
（1）采用皮下多次接种死菌苗，虽有一定的保护作用，但常引起局部和全身反应。
（2）可采用氯霉素、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素等，中药白花蛇舌草，穿心莲等有效。
志贺菌属（Shigella）
1. 志贺菌属是一类革兰阴性杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌。
2. 临床特征
（一）致病物质
（1）侵袭力：志贺菌的菌毛能粘附于回肠末端和结肠粘膜的上皮细菌表面，继而在侵袭蛋白作用下穿入上皮细胞内，一般在粘膜固有层繁殖形成感染灶。
（2）内毒素：各型痢疾杆菌都具有强烈的内毒素，作用于肠壁，使其通透性增高，促进内毒素吸收，引起发热，神志障碍，甚至中毒性休克等。能破坏粘膜，形成炎症、溃汤，出现典型的脓血粘液便。内毒素还作用于肠壁植物神经系统，至肠功能紊乱、肠蠕动失调和氢挛，尤其直肠括约肌痉挛最为明显，出现腹痛、里急后重（频繁便意）等症状。
（3）外毒素——志贺毒素：为蛋白质，不耐热，75～80℃1小时被破坏。该毒素具有三种生物活性：
神经毒性，作用于中枢神经系统，引起四肢麻痹、死亡；
细胞毒性，对人肝细胞、猴肾细胞和HeLa细胞均有毒性；
肠毒性，具有类似大肠杆菌、霍乱弧菌肠毒素的活性，可以解释疾病早期出现的水样腹泻。
（二）所致疾病
（1）细菌性痢疾：最常见的肠道传染病,夏秋两季患者最多。人类对志贺菌易感，10～200个细菌可使10～50%志愿者致病。传染源为病人和带菌者，粪口途径传播，潜伏期1-3天。（2）急性细菌性痢疾：发病急，常在腹痛、腹泻未出现，呈现严重的全身中毒症状。（3）慢性细菌性痢疾：急性菌痢治疗不彻底，或机体抵抗力低、营养不良或伴有其他慢性病时，易转为慢性，病程多在二个月以上。部分患者可成为带菌者，带菌者不能从事饮食业、炊事及保育工作。
（4）急性中毒型菌痢：以小儿多见，在消化道症状未出现前，内毒素从肠道吸收入血，引起全身严重的中毒症状，高热、休克、昏迷、呼吸衰竭。死亡率高。
3. 免疫性：病后免疫力不牢固，机体对菌痢的免疫主要依靠肠道的局部免疫，即肠道粘膜细胞吞噬能力的增强和SlgA的作用。SlgA可阻止痢疾杆菌粘附到肠粘膜上皮细胞表面，病后三天左右即出现，但维持时间短，由于痢疾杆菌不侵入血液，故血清型抗体（lgM、lgG）不能发挥作用。
4. 微生物学检查
（1）形态与染色：大小为0.5～0.7×2～3μm，无芽胞，无荚膜，无鞭毛。多数有菌毛。革兰阴性杆菌。
（2）抗原构造与分类：:有K和O抗原。
K抗原在血清学分型上无意义，但可阻止O抗原与相应抗血清的凝集反应。
O抗原分为群特异性抗原和型特异性抗原，根据志贺菌抗原构造的不同，可分为四群48个血清型（包括亚型）。
（3）变异：
S-R型变异：当菌落变异时，常伴有生化反应、抗原构造和致病性（毒到无毒）的改变。耐药性变异：由于广泛使抗生素，志贺菌的耐药菌株不断增加，给防治工作带来多困难。营养缺陷型变异：南斯拉夫Mel（1963年）首创的依赖链霉素的志贺菌株（依链株，Sd），作为口服菌苗可预防志贺菌痢疾。
（4）培养特性：
兼性厌氧菌，能在普通培养基上生长，形成中等大小，半透明的光滑型菌落。在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。宋内志贺菌形成粗糙型菌落
（5）生化反应：分解葡萄糖，产酸不产气。VP试验阴性，不分解尿素，不形成硫化氢，不能利用枸橼酸盐作为碳源。宋内志贺菌能迟缓发酵乳糖（37℃3～4天）。
志贺菌属生化反应分类：
志贺菌属的分类
A群:又称痢疾志贺菌(Sh. dysenteriae), 通称志贺痢疾杆菌。
B群：又称福志贺菌（Sh. flexneri），通称福痢疾杆菌。
C群：又称鲍志贺菌（Sh. boydii），通称鲍痢疾杆菌。
D群：又称宋内志贺菌（Sh. sonnei），通称宋内痢疾杆菌。
根据志贺菌的菌型分布调查，我国一些主要城市在过去二、三十年中均以福菌为主。其次为宋内菌；志贺菌与鲍菌则较少见。但近年来，志贺菌Ⅰ型的细菌性痢疾已发展为世界性流行趋势。了解菌群分布与菌型变迁情况，对制备菌苗，预防菌痢具有重大意义。
5. 抵抗力：①本菌对理化因素的抵抗力较其他肠道杆菌为弱。②不耐热，一般56～60℃经10分钟即被杀死。③较耐寒，在冰块中存活96天。④对化学消毒剂敏感，1%石碳酸15～30分钟死亡。
耶尔森菌属Yersinia
1. 革兰阴性小杆菌，包括11个菌种；鼠疫耶尔森菌；小肠结肠炎耶尔森菌；假结核耶尔森菌；
2. 鼠疫的发生：自然疫源性
3. 致病性与免疫性：①贮存宿主：啮齿类动物（野鼠、家鼠、黄鼠）；②传播媒介：主要是鼠蚤；③传播方式：鼠→蚤→人；④致病物质：内毒素、鼠疫毒素；⑤毒力决定因子: F1、VW、Pgm、PI-C-F；⑥所致疾病：鼠疫(腺型、败血症型、肺型）；⑦免疫性：感染后能获得牢固持久免疫力，再次感染罕见。
4. 抗原构造：F1抗原（封套抗原）: 抗原性强, 特异性高, 不耐热；V/W毒力抗原：抗吞噬作用；T抗原(鼠疫毒素)；外膜抗原；
5. 防治原则：灭鼠灭蚤，消灭疫源、切断传播途径；鼠疫菌苗预防接种；早期足量使用抗菌药物治疗；
6. 微生物学检查法：①法定报告疾病；②标本：血液、痰液、淋巴结穿刺液；③直接涂片镜检；④分离培养与鉴定：BAP R型菌落；⑤生化反应、血清学试验；⑥检测核酸；⑦动物试验：检查毒力；
鼠疫耶尔森菌Yersinia pestis
1. 鼠疫(Plague)是引起烈性传染病的病原菌。也是帝国主义使用的致死性细菌战剂。
革兰阴性短粗杆菌
2. 兼性厌氧；肉汤培养基48h后“钟乳石现象”；触酶+；IMViC－＋－－；
3. 抵抗力：对理化因素抵抗力较弱；自然环境在痰液中能存活36天，在蚤粪、土壤中能存活1 年左右。
小肠结肠炎耶氏菌(Y. enterocolitica)
1. 革兰阴性短粗杆菌；O抗原分>50型；培养：低温（22～25℃）生长，BAP溶血型菌落，NyE无色菌落；生化反应：脲酶＋；
2. 临床特征：人畜共患疾病；致病物质：耐热肠毒素；小肠结肠炎【胃肠炎（或小肠结肠炎）型；回肠末端炎、阑尾炎和肠系膜淋巴结炎型；结节性红斑与关节炎型（自身免疫病）；败血症型；】
3. 微生物学检查法
（1）标本：粪便；
（2）冷增菌培养：按1/10接种量接种到胰蛋白胨水，置26℃4h～6h进行预增菌，然后再取1.0mL预增菌液转种专用培养基；（3）分离培养与鉴定：MAC、NyE、CIN；（4）生化反应：KIA、MIU、脲酶；（5）血清学试验：分型；
假结核耶氏菌(Y. pseudotuberculosis)
1. 结核样肉芽肿；引起的疾病与小肠结肠炎耶氏菌相似【胃肠炎；肠系膜淋巴结肉芽肿；回肠末端炎；】
克雷伯菌属Klebsiella
1.本菌存在于人体肠道、呼吸道。多为条件致病菌，可引起肺炎、支气管炎、泌尿系和创伤感染，甚至败血症、脑膜炎、腹膜炎等。其代表是肺炎杆菌(K. pneumoniae)。
2.肺炎克雷伯菌的形态，细胞表面具有宽阔的皱褶负染，×85 000。
3.培养特性与生化反应：肺炎杆菌形成灰白色粘液型菌落，以接种环挑之，易拉成丝，有助鉴别。发酵乳糖。KIA（AA--）；MIU（-dd）；IMVIC（d-++）；
肠杆菌属Enterobacter
1. 本菌广泛存在于自然界,为人体肠道正常菌群。可引起泌尿系和创伤感染，甚至败血症、脑膜炎等。发酵乳糖，形成粘液型菌落，
沙雷菌属Serratia
1. 本菌存在于人体肠道，常引起医院内感染，可引起肺炎、泌尿系和创伤感染，甚至败血
症等。产生红色色素，发酵乳糖，形成红色粘液型菌落。
变形杆菌属（Proteus）
1. 本菌广泛存在于自然界，为人体肠道正常菌群。可引起泌尿系和创伤感染，甚至败血症、脑膜炎等。
（1）形态特征：革兰阴性菌，呈多形性，周鞭毛菌，运动活泼。
（2）培养特征：形成迁徒生长现象，0.1%石碳酸或0.4%硼酸可以抑制其扩散生长，形成单个菌落，即发生H-O 变异。
（3）生化反应：葡萄糖＋，乳糖—，快速分解尿素，KIA（KA++）；MIU（+d+）；
IMVIC（d+--）；苯丙氨酸脱氨酶（+）；
（4）抗原性：此属细菌X19、XK、X2菌株的O抗原与某些立克次体的部分抗原有交叉，可替代立克次体抗原与患者血清作凝集反应，此反应称为外斐试验（Weil-Felix test）,用于某些立克次体病的辅助诊断。
其他肠道菌
1.该类细菌寄居于肠道，但常作为条件致病菌，移居于肠外部分引起感染，并可引起菌血症和内毒素血症，它们可引起持续感染，对抗生素的使用很快产生耐药性，在临床上有重要意义。（哈夫尼菌属、泛菌属、枸橼酸杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属、欧文菌属、爱德华菌属；）
2019第十四章肠杆菌科及 检验 一、A1 1、下列关于肠道感染大肠埃希菌的病原群，说法错误的是 A、ETEC引起霍乱样肠毒素腹泻 B、E PEC主要引起婴儿腹泻 C、E IEC引起黏液脓血便 D、E HEC可引起严重的腹痛、痉挛，严重者可发展为急性肾衰竭 E、E AggEC其中0157:117可引起出血性大肠炎 2、肠杆菌科细菌的鞭毛抗原是 A、0抗原 B、H抗原 C、V i抗原 D、K抗原 E、V i抗原和K抗原 3、肠杆菌科细菌的菌体抗原是 A、0抗原 B、H抗原 C、V i抗原 D、K抗原 E、V i抗原和K抗原 4、志贺菌属分群、分型的依据是 A、0抗原 B、H抗原 C、K抗原 D、V抗原 E、0抗原和K抗原 5、无鞭毛的细菌是 A、埃希菌属 B、沙门菌属 C、志贺菌属 D、变形杆菌属 E、枸椽酸杆菌属 6、宋内志贺菌 A、为A群志贺菌 B、为B群志贺菌 C、包括10个血清型
D、培养中常有扁平的粗糙型菌落 E、快速发酵乳糖 7、下列细菌中，引起细菌性痢疾症状最轻的是 A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都不对 8、大肠埃希菌与沙门菌、志贺菌具有鉴别性的生化反应是 A、发酵乳糖 13、发酵山梨醇 C、发酵葡篇糖 D、硫化氢试验 E、明胶水解试验 9、根据0抗原，志贺菌属分为多个群，其中A群为 A^痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、痢疾杆菌 10、志贺菌属是主要的肠道病原菌之一，包括哪些血清群（型） A、痢疾志贺菌 福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都是 11、下列为沙门菌分群依据的抗原是 A、菌体抗原 B、鞭毛抗原 C、Vi抗原 D、M抗原 E、5抗原 12、辅助诊断伤寒病的实验是 A、肥达试验 B、汹涌发酵试验 C、抗溶血素“0”试验 D、Weil-Felix 试验
第十九章肠杆菌科及检验 本章考点： 1.概述 （1）概念 （2）命名与分类原则 （3）共同特点 （4）自然与人体内的分布 （5）微生物学检查方法 （6）临床意义 2.埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属 （1）生物学性状 （2）微生物学检查法 （3）临床意义 一、概述和通性 （一）概念 肠杆菌科是由多个菌属组成，其生物学性状相似，均为革兰阴性杆菌。大多数肠道杆菌属于正常菌群，作为条件致病菌而引起疾病。其中包括常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属）和常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属），以及一些在一定条件下偶可引起临床感染的细菌。 （二）分类 根据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌屑、耶尔森菌属等。 （三）生物学特性 1.形态与染色 革兰阴性杆菌，其菌体大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。多数有周鞭毛，除外志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC无鞭毛。均不形成芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。 2.培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长并形成中等大小的S型菌落，液体培养基中呈混浊生长。 3.生化反应：发酵葡萄糖产酸、产气，乳糖发酵试验: 肠道非致病菌（＋），肠道致病菌（－）（除外变形杆菌）。肠杆菌科定科试验主要项目是革兰阴性杆菌、触酶阳性，氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阳性。 4.抗原构造：包括菌体（O）抗原，鞭毛（H）抗原和表面抗原（如Vi抗原、K抗原）3种。 5.变异：包括菌落S～R变异，鞭毛H～O变异和耐药性或生化反应性质的改变。 6。抵抗力：不强。加热60℃，30分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。 （四）致病性 肠杆菌科细菌种类多，可引起多种疾病： 1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻及肠热症等。
第十四章肠杆菌科及检验 概述和通性——分类 根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。大多数属于正常菌群（条件致病菌）。 引起腹泻和肠道感染：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属等。 导致院内感染：枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属等。 概述和通性——生物学特性 形态与结构 形态：杆菌。 染色：G-。 特殊结构： 多数有周鞭毛，能运动。 志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛。 均不形成芽胞，少数菌属（埃希菌属和克雷伯菌属）可形成荚膜。 培养特性 营养要求：不高。
气体环境：需氧或兼性厌氧。 菌落特征：普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长，并形成中等大小的菌落，湿润光滑。 抗原 变异： 包括菌落S-R变异和鞭毛H-O变异。 表现为耐药性或生化反应性质的改变。 抵抗力： 不强。加热60℃，30分钟即被杀死。 不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。 对低温有耐受力，能耐胆盐。 概述和通性——微生物检验及鉴定 标本采集 形态学检查：革兰阴性杆菌。 分离培养： 将粪便或肛拭标本立即接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离。 克氏双糖铁琼脂（KIA）培养基：葡萄糖/乳糖发酵；产气；硫化氢试验。 动力-吲哚-尿素（MIU）培养基 生化反应： ①用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌鉴别； ②用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应三个类群； ③选择生化反应进行属种鉴别； ④用诊断血清做凝集反应。 埃希菌属——分类 包括5个种，即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。 临床最常见的是大肠埃希菌，俗称大肠杆菌，是人类和动物肠道正常菌群。 埃希菌属——生物学特性 形态与结构
一、概述 1.多数有周鞭毛，志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC无鞭毛。无芽孢，少数有荚膜 2.需氧或兼性厌氧，在普通培养基或麦康凯培养基上均能生长形成中等大小的菌落，表面光滑，液体培养基中呈浑浊生长。 3.发酵葡萄糖，产酸产气，H2S试验阳性（志贺菌、大肠埃希菌等为阴性） 4.定科试验：触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性、乳糖发酵试验（非致病菌+，致病菌-，变形杆菌除外） 5.抗原结构包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原（Vi、K等） 二、埃希菌属 1.革兰阴性杆菌，兼性厌氧，多数有周鞭毛、菌毛、荚膜及微荚膜 2.发酵葡萄糖、乳糖麦芽糖和甘露醇，产酸产气 3.氧化酶（-）、IMViC（++--）、MIU（++-） 4.主要引起疾病胆囊炎、泌尿系感染等。 5. ①肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：霍乱样肠毒素腹泻 ②肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴儿腹泻（血清学鉴定试验为血清凝结试验） ③肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：志贺样腹泻（脓血便） ④肠出血型大肠埃希菌（EHEC）：其中O157：H7可引起出血性大肠炎和出血性尿毒综合征。临床特征为严重的腹痛、痉挛，反复血性腹泻，伴发热、呕吐 ⑤肠黏附型大肠埃希菌（EAggEC）：腹泻 三、志贺菌 1.志贺菌属分为痢疾、福氏、鲍氏、宋内四群。可引起人类细菌性痢疾 2.取粪便或肛拭标本接种GN肉汤增菌，再进行分离培养。可选择SS培养基、麦康凯培养基、中国蓝培养基。 3.KIA：K/A（宋内志贺菌可迟缓分解乳糖）、产气-/+、硫化氢（-）、MIU：-、+/-、-、氧化酶（-）、IMVIC（-+--） 4.在普通平板和SS培养基上形成中等大小、半透明的光滑性菌落 5.可引起人类细菌性痢疾，小儿易引起急性中毒性痢疾 四、沙门菌 1.革兰阴性直杆菌，周身鞭毛，多数有菌毛。为胞内寄生菌，寄生于肠道 2.可导致疾病 ①肠热病（伤寒、副伤寒）：为法定传染病②食物中毒③慢性肠炎④败血症 3.肥达试验：由已知的伤寒沙门菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒菌的H抗原与不同稀释度的病人血清做定量凝集实验。属于直接凝集试验，来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热病并判断沙门菌种类 4.发酵葡萄糖，产酸产气（伤寒沙门菌产酸不产气） 5.在SS培养基中产H2S，菌落中心呈黑色 6.抗原结构包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原（Vi、M、5） 7.为提高检出率，血液1-2周采集，粪便与尿液（2-3周采集）。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高 8.沙门菌属最后鉴定是通过血清学鉴定
第十四章肠杆菌科及检验 一、A1 1、吲哚试验阳性的组合 A、大肠埃希菌、普通变形杆菌、霍乱弧菌 B、大肠埃希菌、鼠伤寒沙门菌、产气肠杆菌 C、痢疾志贺菌、霍乱弧菌、肺炎克雷伯菌 D、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌 E、产气肠杆菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌 2、能利用含硫氨基酸生成硫化氢的细菌是 A、大肠埃希菌 B、奇异变形杆菌 C、产气肠杆菌 D、肺炎克雷伯菌 E、宋内志贺菌 3、从腹腔感染患者腹腔液中出分离一革兰阴性杆菌，氧化酶阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性，在血平板上有迁徙生长，H2S阳性，它可能是 A、变形杆菌 B、摩根菌 C、普罗威登斯菌 D、伤寒沙门菌 E、枸橼酸杆菌 4、用于粪便污染检测指标的是 A、霍乱弧菌 B、产气肠杆菌 C、阴沟肠杆菌 D、变形肠杆菌 E、大肠杆菌 5、主要流行的肠出血性大肠埃希菌的O血清型是 A、O6 B、O25 C、O157 D、O111 E、O158 6、致病性大肠埃希菌的致病特点是 A、只引起肠道感染 B、不引起泌尿生殖器感染 C、腹泻可由两种肠毒素引起 D、外毒素可引起严重的毒血症
E、不引起败血症 7、下列除哪项外，均为肠道菌的主要抗原 A、O抗原 B、H抗原 C、荚膜抗原 D、芽胞抗原 E、菌体抗原 8、典型的大肠埃希菌的生化反应结果是 A、乳糖（－），IMViC（＋、－、－、－） B、乳糖（＋），IMViC（＋、＋、－、－） C、乳糖（－），IMViC（＋、＋、－、－） D、乳糖（－），IMViC（＋、＋、＋、－） E、乳糖（－），IMViC（＋、－、－、－） 9、肠杆菌科中，表面抗原是 A、O抗原 B、H抗原 C、K抗原 D、以上都是 E、以上都不是 10、IMViC试验不包括 A、糖发酵试验 B、V-P试验 C、甲基红试验 D、枸橼酸盐利用试验 E、吲哚试验 11、H-O变异属于 A、毒力变异 B、菌落变异 C、鞭毛变异 D、形态变异 E、耐药性变异 12、目前筛选伤寒带菌者的方法是检测血清中的 A、O抗体 B、H抗体 C、K抗体 D、Vi抗体 E、M抗体 13、属于直接凝集反应的是 A、抗“O”试验
食品安全国家标准《食品微生物学检验肠杆菌科检验》 （征求意见稿） 编制说明 一、标准起草的基本情况: （一）任务来源 受国家卫生与计划生育委员会食品安全标准与监测评估司（原卫生部食品安全综合协调与卫生监督局）委托，根据《食品安全国家标准管理办法》、《食品安全国家标准制（修）订项目管理规定》，按照食品安全国家标准审评委员会的工作安排，对本标准进行制定。 （二）简要起草过程 2011年7月，卫生部食品安全综合协调与卫生监督局下达《食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验》标准制定任务，项目编号为spaq-2011-61。随即成立标准制定专家组，确立标准制定的基本原则，比较与研究我国及国际标准相关内容，并结合方法的研究工作，形成《食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验》标准的征求意见稿。 （三）起草单位、协作单位、主要起草人 参与本标准的起草单位有辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、山东出入境检验检疫局、浙江出入境检验检疫局及河南出入境检验检疫局。 （四）主要起草人 本标准主要起草人为：刘淑艳、卢行安、蒋丹、赵守成、王刚、姜英辉、程洁、苗丽、吕佳、柳媛、宋慧君、马惠蕊。起草人员负责标准制定工作的组织、协调，相关资料的查阅、收集，标准文本及编制说明的起草、撰写，通过电子邮件、传真等方式，征集、整理和归纳相关的意见和建议。 二、标准的重要内容及主要修改情况 本标准研究对比了国际标准ISO 21528-1：2004 食品和动物饲料微生物学肠杆菌科检测和计数方法第1部分：带前增菌的MPN法和ISO 21528-2：2004食品和动物饲料微生物学肠杆菌科检测和计数方法第2部分：菌落计数法；并依据伯杰细菌鉴定手册第八版，肠杆菌科的分类，选择肠杆菌科12个属及其它对照菌株，共25株进行了本标准方法的检验，确定了肠杆菌科检验的MPN法及菌落计数法。
实验三：肠杆菌科的检验 一、接种细菌： MAC培养基接种大肠埃希菌和变形杆菌，SS培养基接种福氏志贺菌和乙型副伤寒沙门菌，采用分区划线法，放在35℃温箱中培养18—24h。 二、观察肠道杆菌在MAC和SS平板上的菌落形态。 1、SS平板： 1）福氏志贺菌形成无色、半透明、光滑、湿润、突起、直径为1—2mm大小的菌落；2）乙型副伤寒沙门菌为中心带黑褐色，其余部分为半透明、光滑、湿润、突起的小菌落2、MAC平板： 1）大肠埃希菌形成红色、圆形、凸起、边缘整齐、多数为光滑型的菌落。中等大小。2）变形杆菌为圆形、扁平、无色、半透明的菌落。 三、涂片、革兰染色 将玻片分为四个区域，并分别标记，将四种肠道杆菌分别在四个区域内的生理盐水中研磨，待其自然干燥后固定，采用“改良快速法”进行染色，结果如图所示： 福氏志贺菌乙型副伤寒沙门菌变形杆菌大肠埃希菌 G-杆菌G-直杆菌，较细长G- 杆菌G-直短杆状 显微镜检查特征为革兰阴性杆菌，肠杆菌科多数细菌的形态及染色性相似，根据形态及染色性难以相互鉴别。 四、生化试验： 1、氧化酶试验（纸片法）：在滤纸条上滴一滴氧化酶试剂，用无菌接种环挑取待测菌落在滤纸条上滴了试剂的部位研磨，；滤纸变为红色则为阳性，不变色为阴性，结果表明，以上四种肠道杆菌的氧化酶试验均为阴性。 2、接种KIA、MIU上。 五、 2、微量生化：
六、沙门菌、志贺菌的血清学鉴定： 1、在洁净载玻片上两端分别滴加一滴志贺菌四种多价血清和福氏四价血清，各取一环志贺菌在两种血清上研磨10S，观察两组结果均出现肉眼可见的凝集物，提示该菌为福氏志贺菌。 2、采用同上方法，在洁净玻片上分别在其两端滴加一滴沙门菌多价O（A—F）和Hd血清，各取一环待测菌与之混合，研磨10S，几分钟后观察两组结果，出现肉眼可见的颗粒状凝聚物表示该菌为乙型副伤寒沙门菌。 七、讨论： 1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。 2、接种细菌过程中，因为MAC培养基和SS 培养基成分不同。故应看清菌种后再接种，以免影响实验结果。 3、志贺菌属和大肠埃希菌的鉴别：志贺菌无动力，赖氨酸阴性、发酵糖产酸不产气。 4、志贺菌属和伤寒沙门菌鉴别：伤寒沙门菌在KIA培养基上的表现和志贺菌相似，鉴别点是伤寒沙门菌硫化氢和动力阳性，能与沙门菌因子血清（OA-F）凝集而不与志贺菌属因子血清凝集。
实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定 课程名称:兽医微生物学实验学时:6学时 一、目的要求 1.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性; 2.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法; 3.掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理; 4.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现; 5.熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。 二、知识背景 肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌,运动者周身鞭毛;在普通培养基上生长好;发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气;在麦康凯琼脂上生长;细胞色素氧化酶阴性;还原硝酸盐为亚硝酸盐等。碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。 大肠埃希氏菌(E.coli简称大肠杆菌,作为原发和继发病原可引起多种动物疾病:犊牛的肠道感染和水泻;幼猪的水泻和腹泻,二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病;狗的尿道感染;鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿(Coligranuloma。 沙门氏菌(Salmonella,虽然沙门氏菌血清型超过2200个,但承认的种为数不多,在O抗原的基础上,沙门氏菌血清组(群用字母A、B、C…表示,然后根据它的H抗原(鞭毛抗原再分,用阿拉伯数字1、2、3…等表示,沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病,是肠杆菌科重要的致病菌,如鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium可引起动物流产,胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎,这个菌常形成厚的荚膜。变形杆菌(proteus引起动物的尿道和胃肠道疾病。耶尔森氏菌(yersinia引起鼠疫、胃肠炎等。 生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。 三、实验材料 每6人一组,每组所需材料: 1.普通琼脂斜面培养物2管:分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌(提供实验用菌种; 2.普通肉汤2管:分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌; 3.普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌; 4.生化试验用培养基2套,包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质,M.R、V.P试验、 柠檬酸盐利用,硝酸盐还原试验等; 5.三糖铁琼脂斜面培养基2管; 6.选择性培养基2个,如:麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板; 7.各种生化试验试剂:靛基质试剂,M.R试剂,V.P试剂,硝酸盐还原试剂; 8.沙门氏菌因子血清。 四、操作程序 1.观察大肠杆菌和沙门氏菌在琼脂平板上的菌落特征并作描述;
肠杆菌科 【器材】 一、SS平板培养基：选择性培养基，有促进目的菌生长的物质和鉴别用指示剂. 1、煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等能抑制G+菌及大多数大肠生长，胆盐促进伤寒生长。 2、大肠分解乳糖产酸：中性红（6.8红－8.0黄）变红，与胆盐结合合成胆酸，因而形成中心混浊的深红色菌落，病原菌不分解乳糖，故菌落呈透明微黄色。 3、枸橼酸铁能指示硫化氢产生，硫化铁呈黑色 4、硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺、沙门菌的毒害作用，并中和煌绿、中性红染料的毒性，使大肠红色鲜明 二、KIA斜面培养基：用酚红作指示剂（6.8黄－8.4红）。上层为固体琼脂斜面，含乳糖。下层为半固体琼脂，含葡萄糖，含硫酸亚铁。 1、细菌如能发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则斜面及底层均呈黄色，且有气泡。非致病菌（如大肠埃希菌）一般既可利用乳糖也可利用葡萄糖，但肺克也是如此。 2、如细菌只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡:乳为1:10，斜面所产生的少量的酸可因接触空气而氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层则是在相对缺氧的状态下，所生成的酸不被氧化挥发而保持黄色。致病菌一般不能利用乳糖，可用于区别致病/非致病菌。 3、如细菌分解蛋白质产生硫化氢，则与硫酸亚铁反应生成硫化亚铁（黑色沉淀物），使培养基变黑。 左：不发酵乳糖，强产硫化氢。中：不发酵乳糖，不产硫化氢。右：发酵乳糖，不产硫化氢 4、接种方法：先穿刺到底，再在斜面划线。 【实验内容】 一、氧化酶试验 原理：见奈瑟菌属部分 操作：取氧化酶纸片，刮去KIA或普通平板或普通平板上的较大菌落，观察纸片颜色的变化，呈蓝紫色为阳性，不变为阴性（如试剂为盐酸二甲基对苯二胺，阳性者则为红色）。肠杆菌科多为阳性（但变形杆菌为阴性）。 注意事项：因SS培养基中的化学成分和生化反应复杂，其菌落可使滤纸变为紫红色，故对肠道杆菌进行触酶和氧化酶试验时，宜从普通平板或KIA斜面上取菌，以保证试验结果正确。 二、动力试验： 原理：有动力的细菌在半固体培养基中沿穿刺线扩散生长。 培养基：半固体培养基 方法：分别穿刺接种大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，37 ℃孵育16-18h 结果：穿刺线扩散，培养基透明度减低为动力阳性；穿刺线清晰，培养基透明为动力阴性。本试验，大肠为（+），肺杆为（-） 三、吲哚试验：（靛基质试验）
肠杆菌科 【器材】 一、 SS 平板培养基：选择性培养基，有促进目的菌生长的物质和鉴别用指示齐U 1煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等能抑制 G+菌及大多数大肠生长，胆盐促进伤寒生长。 2、 大肠分解乳糖产酸：中性红（ 6.8红—8.0黄）变红，与胆盐结合合成胆酸，因而形成中心混浊的 深红色菌落，病原菌不分解乳糖，故菌落呈透明微黄色。 3、 枸橼酸铁能指示硫化氢产生，硫化铁呈黑色 4、 硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺、沙门菌的毒害作用，并中和煌绿、中性红染料的毒性，使大肠红 色鲜明 二、 KIA 斜面培养基：用酚红作指示剂（6.8黄—8.4红）。上层为固体琼脂斜面，含乳糖。下层为半 固体琼脂，含葡萄糖，含硫酸亚铁。 1细菌如能发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则斜面及底层均呈黄色，且有气泡。非致病菌（如大肠埃 希菌）一般既可利用乳糖也可利 用葡萄糖，但肺克也是如此。 2、 如细菌只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因 葡:乳为1:10，斜面所产生的少量的酸可因接触空气而氧化 挥发，从而使斜面 部分保持原来的红色；底层则是在相对缺氧的状态下，所生成的酸不被氧化挥发而 保持黄色。致病菌一般不能利用乳糖，可用于区别致病 /非致病菌。 3、 如细菌分解蛋白质产生硫化氢，则与硫酸亚铁反应生成硫化亚铁（黑色沉淀物） 左：不发酵乳糖，强产硫化氢。中：不发酵乳糖，不产硫化氢。右：发酵乳糖，不产硫化氢 4、接种方法：先穿刺到底， 【实验内容】 一、 氧化酶试验 原理：见奈瑟菌属部分 操作：取氧化酶纸片，刮去 紫色为阳性，不变为阴性 变形杆菌为阴性）。 注意事项：因SS 培养基中的化学成分和生化反应复杂，其菌落可使滤纸变为紫红色，故对肠道杆菌 进行触酶和氧化酶试验时，宜从普通平板或 KIA 斜面上取菌，以保证试验结果正确。 二、 动力试验： 原理：有动力的细菌在半固体培养基中沿穿刺线扩散生长。 培养基: 半固体培养基 方法：分别穿刺接种大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌， 37 C 孵育16-18h 结果：穿刺线扩散，培养基透明度减低为动力阳性；穿刺线清晰，培养基透明为动力阴性。本试验, 大肠为（+）,肺杆为（-） 三、吲哚试验：（靛基质试验） 原理：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚，与对二甲基氨基苯甲醛形成红色 化合物。 培养基：蛋白胨水 方法：将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水培养基中， 37 C 孵育16-18h 结果：取出后，滴加吲哚试剂 2d ，混匀，可见培养物上层呈玫瑰红色为 +，不变色为-。本试验，大肠 为（+）,伤寒为（-） ，使培养基变黑。 再在斜面划线。 KIA 或普通平板或普通平板上的较大菌落，观察纸片颜色的变化，呈蓝 （如试剂为盐酸二甲基对苯二胺， 阳性者则为红色）。肠杆菌科多为阳性（但
2019 第十四章肠杆菌科及检验 一、A1 1、下列关于肠道感染大肠埃希菌的病原群，说法错误的是 A、ETEC引起霍乱样肠毒素腹泻 B、EPEC主要引起婴儿腹泻 C、EIEC引起黏液脓血便 D、EHEC可引起严重的腹痛、痉挛，严重者可发展为急性肾衰竭 E、EAggEC其中O157:H7可引起出血性大肠炎 2、肠杆菌科细菌的鞭毛抗原是 A、O抗原 B、H抗原 C、Vi抗原 D、K抗原 E、Vi抗原和K抗原 3、肠杆菌科细菌的菌体抗原是 A、O抗原 B、H抗原 C、Vi抗原 D、K抗原 E、Vi抗原和K抗原 4、志贺菌属分群、分型的依据是 A、O抗原 B、H抗原 C、K抗原 D、V抗原 E、O抗原和K抗原 5、无鞭毛的细菌是 A、埃希菌属 B、沙门菌属 C、志贺菌属 D、变形杆菌属 E、枸橼酸杆菌属 6、宋内志贺菌 A、为A群志贺菌 B、为B群志贺菌 C、包括10个血清型 D、培养中常有扁平的粗糙型菌落 E、快速发酵乳糖 7、下列细菌中，引起细菌性痢疾症状最轻的是 A、痢疾志贺菌
B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都不对 8、大肠埃希菌与沙门菌、志贺菌具有鉴别性的生化反应是 A、发酵乳糖 B、发酵山梨醇 C、发酵葡萄糖 D、硫化氢试验 E、明胶水解试验 9、根据O抗原，志贺菌属分为多个群，其中A群为 A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、痢疾杆菌 10、志贺菌属是主要的肠道病原菌之一，包括哪些血清群（型） A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都是 11、下列为沙门菌分群依据的抗原是 A、菌体抗原 B、鞭毛抗原 C、Vi抗原 D、M抗原 E、5抗原 12、辅助诊断伤寒病的实验是 A、肥达试验 B、汹涌发酵试验 C、抗溶血素“O”试验 D、Weil-Felix试验 E、锡克试验 13、属于直接凝集反应的是 A、抗“O”试验 B、肥达试验 C、病毒的血凝抑制试验 D、病毒血细胞凝集试验 E、锡克试验
肠杆菌科及检验 本章考点： 1.概述 （1）概念 （2）命名与分类原则 （3）共同特点 （4）自然与人体内的分布 （5）微生物学检查方法 （6）临床意义 2.埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属 （1）生物学性状 （2）微生物学检查法 （3）临床意义 一、概述和通性 （一）概念 肠杆菌科是由多个菌属组成，其生物学性状相似，均为革兰阴性杆菌。大多数肠道杆菌属于正常菌群，作为条件致病菌而引起疾病。其中包括常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属）和常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属），以及一些在一定条件下偶可引起临床感染的细菌。 （二）分类 根据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌屑、耶尔森菌属等。 （三）生物学特性 1.形态与染色 培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长并形成中等大小的S型菌落，液体培养基中呈混浊生长。 3.生化反应：发酵葡萄糖产酸、产气，乳糖发酵试验: 肠道非致病菌（＋），肠道致病菌（－）（除 4.抗原构造：包括菌体（O）抗原，鞭毛（H）抗原和表面抗原（如Vi抗原、K抗原）3种。 5.变异：包括菌落S～R变异，鞭毛H～O变异和耐药性或生化反应性质的改变。 6。抵抗力：不强。加热60℃，30分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。 （四）致病性 肠杆菌科细菌种类多，可引起多种疾病： 1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻及肠热症等。
项目二肠杆菌科的检验 分数:55.0 错误的试题数:9 试题1 单项选择题 (5.0分 得分:5.0 难度:水平题) 下列哪种生化反应大肠埃希菌呈阳性 正确答案 学生答案 脲酶试验 苯丙氨酸脱氨酶试验 H2S 产生试验 甲基红试验 VP 试验 试题2 单项选择题 (5.0分 得分:5.0 难度:水平题) 下列哪种细菌属肠杆菌科 正确答案 学生答案 绿脓杆菌 布氏杆菌 鼠疫杆菌 流感杆菌 白日咳杆菌 试题3 单项选择题 (5.0分 得分:0.0 难度:水平题) 甲型付伤寒沙门菌的“Ｏ”、“Ｈ”抗原是 正确答案 学生答案 Ｏ2Ｈa Ｏ4Ｈb Ｏ6ＨL Ｏ9Ｈd O3He 试题4 单项选择题 (5.0分 得分:0.0 难度:水平题) ＳＳ平板中加入的指示剂为 正确答案 学生答案 伊红 品红 美蓝 中性红 酚红 试题5 单项选择题 (5.0分 得分:5.0 难度:水平题)
啮齿类动物是鼠疫杆菌的储存宿主，它主要通过下列哪个媒介传播 正确答案 学生答案 蚊 蝇 螨 蜱 蚤 试题6 单项选择题 (5.0分 得分:0.0 难度:水平题) 在生化反应中，宋内志贺菌与其它志贺菌的区别是 正确答案 学生答案 甘露醇产酸不产气 靛基质试验阴性 迟缓分解乳糖 葡萄糖产酸不产气 尿素分解试验阴性 试题7 单项选择题 (5.0分 得分:0.0 难度:水平题) 具有Vi 抗原的细菌有 正确答案 学生答案 甲型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 丙型伤寒沙门菌、伤寒沙门菌 肠炎沙门菌、大肠杆菌 变形杆菌 试题8 单项选择题 (5.0分 得分:0.0 难度:水平题) 与立克次体有交叉抗原的肠道杆菌是 正确答案 学生答案 沙门菌的某些菌株 志贺菌的某些菌株 埃希菌的某些菌株 变形杆菌的某些菌株 克雷伯菌的某些菌株 试题9 单项选择题 (5.0分 得分:5.0 难度:水平题) 在我国最常见的细菌性痢疾的病原菌是 正确答案 学生答案
肠杆菌科及检验 ● 考点 概述 概念；命名与分类原则；共同特点；自然与人体内的分布；微生物学检查方法；临床意义。 埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。 生物学性状；微生物学检验；临床意义。 【内容讲解】 一、概述（共性） 肠杆菌科是由多个菌属组成，G-杆菌，生物学性状相似。 大多数肠道杆菌属于正常菌群。当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。 部分为致病性细菌。 （一）分类 肠杆菌科细菌的种类繁多。主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。根据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌属、耶尔森菌属等。 （二）生物学特性 1.形态与染色 G-，杆菌，大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。 多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。 2.培养 需氧或兼性厌氧；营养要求不高； 普皿和麦康凯培养基：中等大小、表面光滑的菌落； 液体培养基：混浊生长。 3.生化反应 发酵葡萄糖产酸、或产酸产气； 乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形杆菌）。触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。 4.抗原构造 表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包绕在O抗原外的不耐热的多糖抗原，可阻断O抗原与相应抗体之间的反应，加热处理能破坏其阻断作用。 5.变异 菌落S～R变异 鞭毛H～O变异 耐药性变异