饮料中苯甲酸含量的测定
马东平;盖轲;齐慧丽;魏晓霞
【摘要】Benzoic acid in beverages is titrated with standard sodium hydroxide solution .The determina-tion result is compared with the provisions of national standard .It shows that the content of benzoic acid
in beverages is conformed to the national regulations .The results indicate that the content of benzoic acid is 0.01300 g in 250g beverages, that is, the content is 0.05200 g/kg.This method is simple, the opera-tion is convenient , and reagents are available .%用标准氢氧化钠溶液来滴定饮料中
的苯甲酸，并对测定结果与国标规定的量进行比较，得出饮料中苯甲酸的含量符合国标规定的量，测定结果为250 g 饮料中苯甲酸的含量为0.01300 g，也就是
0.05200 g/kg。此法简单，操作方便，试剂易得。
【期刊名称】《陇东学院学报》
【年(卷),期】2014(000)001
【总页数】2页(P27-28)
【关键词】滴定法;饮料;苯甲酸
【作者】马东平;盖轲;齐慧丽;魏晓霞
【作者单位】陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000;陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000;陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000;陇东学院化学化
工学院，甘肃庆阳 745000
【正文语种】中文
【中图分类】O657.3
食品防腐剂是用于防止食品因微生物引起的变质，提高食品保存性能，延长食品保质期而使用的食品添加剂［1］。由于防腐剂能延长食品保质期，我国《食品卫生法》规定，允许食品加入适量的防腐剂。常用食品防腐剂种类繁多，可以分为化学防腐剂和天然防腐剂两大类。化学防腐剂又分为无机防腐剂和有机防腐剂。有机化学防腐剂主要有苯甲酸(苯甲酸钠)、山梨酸(山梨酸钾)、对羟基苯甲酸脂类、脱氢醋酸、双乙酸钠、柠檬酸和乳酸等［2-4］。饮料中常见的防腐剂苯甲酸又名安息香酸，稍溶于水，溶于乙醇，酸性条件下对多种微生物(酵母、霉菌、细菌)有明显抑菌作用，对产酸菌作用较弱。在直接饮用的果汁型饮料内的最大使用量为
1.0g/kg。由于苯甲酸溶解度低，实际生产中大多是使用其钠盐，其钠盐的抗菌作用是转化为苯甲酸后起作用的［5-6］。目前饮料中苯甲酸钠的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法等［7-10］。饮料中苯甲酸钠添加含量不仅影响着企业的品牌效益，还会影响到消费者安全问题，因此运用简便快捷的方法测定饮料内的苯甲酸钠含量具有重要的意义。本文用标准氢氧化钠溶液来滴定饮料中的苯甲酸，提供了一种比较实用便捷和低成本的分析方法，这种方法不需要贵重的液相或气相色谱仪，样品处理简单易于操作，测定结果与国家标准中高效液相色谱法测定结果一致。此一方法可作为饮料产品中苯甲酸含量测定的有效方法。这种方法宜于向大众推广普及，尤其适宜于偏远地区群众(非专业人员)检测饮料中的苯甲酸含量。
1 实验部分
1.1 主要仪器与药品
仪器:铁架台，天平，量筒，烧杯，容量瓶，分液漏斗，普通漏斗，酒精灯，蒸馏
烧瓶，直形冷凝管，温度计，石棉网，碱式滴定管，锥形瓶。
药品:0.1mol/L NaOH溶液，10%NaOH 溶液，30g NaCl，饱和 NaCl溶液，
1∶1HCl，150mL 乙醚，10mL 乙醇，酚酞指示剂，邻苯二甲酸氢钾，醒目汽饮。
1.2 原理
在弱酸条件中，用乙醚将样品中的苯甲酸提取出来，将乙醚挥发后，用乙醇或醇醚混合物溶解，用酚酞做指示剂，采用0.1mol/L标准NaOH滴定至终点，然后根
据氢氧化钠消耗的体积计算苯甲酸的含量。
1.3 方法
1.3.1 NaOH溶液的配制及标定
粗称4.4g NaOH于烧杯中，加新煮沸并冷却的蒸馏水搅拌、溶解并稀释至
1000mL，即为0.1mol/L NaOH标准溶液。
0.1mol/L NaOH标准溶液的标定取105～110℃干燥至恒重基准邻苯二甲酸氢钾
约0.50g，精密称量，置250mL锥形瓶中。加入50mL新煮沸并冷却的蒸馏水，振摇使之完全溶解，加1%酚酞指示剂2滴，用0.1mol/L NaOH标准溶液滴定使溶液由无色至微红色(30s不褪色)，即为终点。平行测定三次。计算NaOH溶液
的浓度，三次测定的相对平均偏差应小于0.2%。
数据记录和计算如表1
所用公式:
绝对误差:E=x－xT(x:测量值xT:真实值)相对误差:
偏差:标准偏差:相对标准偏差:
表1 NaOH的浓度的标定?
1.3.2 饱和NaCl溶液的配制
准确称取58.50g NaCl。在500mL烧杯中加入约300mL蒸馏水，将NaCl加入，
并用玻璃棒搅拌使其完全溶解。将烧杯中溶液用玻璃棒引流转移到1000mL容量
瓶中。用适量蒸馏水洗涤烧杯内壁到2～3次，将洗涤液一并转移到容量瓶中，振荡，加水定容。先直接加水到离刻度线1～2cm时改用胶头滴管加水到刻度线。
盖好瓶塞，摇匀即可。
1.3.3 10%的NaOH溶液的配制
首先将蒸馏水煮沸除去其中的CO2，冷却，然后称取10g的NaOH倒入烧杯中，量取90mL冷却好的蒸馏水搅拌，溶解，装入试剂瓶中，最后贴上标签。
1.3.4 1∶1的 HCl溶液的配制
用量筒量取10mL浓盐酸倒入烧杯中，再量取10mL蒸馏水边搅拌边倒入，然后
装入试剂瓶中，贴上标签。
1.3.5 酚酞指示剂的配制
称取0.5g酚酞，用乙醇溶解，并稀释至100mL，装入试剂瓶中，贴上标签。
1.4 样品的处理
取250mL样品于烧杯中，加10%NaOH呈碱性，置水浴蒸发至100mL(除去
C2H5OH)后移入250mL容量瓶，再用饱和NaCl定容。放置2小时后，过滤，
收集滤液备用。
1.5 滴定过程
用10mL中性乙醇和10mL水溶解残渣，加2滴酚酞作指示剂，用0.1mol/L NaOH进行滴定，直到锥形瓶中出现稳定的微红色，30s内不褪色时，即为滴定
终点。记录所消耗NaOH溶液的体积。
2 结果与分析
2.1 实验测定结果
根据实验记录数据计算所测饮料中苯甲酸的含量见下表2。
表2 饮料中苯甲酸含量的测定?
2.2 分析
我国《食品添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)规定:碳酸饮料，最大使用量为0.2g/kg;低盐酱菜、酱类、蜜饯，0.5g/kg;葡萄酒、果酒、软糖，0.8g/kg;酱油、食醋、果酱果汁(味)型饮料，1.0g/kg;食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁，2g/kg;果汁(果味)冰，1.0g/kg(混用或单独使用)［11］。苯甲酸和苯甲酸钠同时使用时，
以苯甲酸计不得超过最大使用量。
本实验所用饮料属于碳酸饮料，最大使用量为0.2g/kg，而实验测得250g饮料中苯甲酸的含量为0.01300g，也就是0.05200g/kg，符合国家《食品添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)规定。
3 结论
采用中和滴定法测定苯甲酸含量，测定结果:每1kg碳酸饮料中含有0.05200g，
标准偏差为0.071%，符合国家《食品添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)规定。与国标法相比，这种方法不需要贵重的仪器，简便快捷、准确度高，可作为饮料产品中苯甲酸含量测定的有效方法。
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实验四高效液相色谱-质谱联用检测饮料中的苯甲酸和山梨酸含量 （一）目的与要求 1.了解液相色谱-质谱联用的基本原理及分析流程； 2.了解液相色谱-质谱联用操作技术； 3.掌握常见防腐剂的测定方法。 （二）原理 苯甲酸和山梨酸是饮料中较为常用的有机酸类防腐剂，对霉菌等微生物有抑制作用。苯甲酸作为苯系的化合物，会在身体内有所蓄积对身体造成损害，而山梨酸是一种不饱和脂肪酸，毒性虽然较之苯甲酸小，但是过量、长期食用将危害人体肝脏、肾脏功能。我国食品标准中规定苯甲酸、山梨酸在碳酸类饮料中的加入量不得超过0.2 g/kg。 液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS已经成为最重要研究方法之一。质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。 （一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。 （二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。 （三）实验部分 3.1 试剂与仪器
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱法是一种常用的分析方法，由于其操作简便、分离效果好以及分析结果准确可靠而得到广泛应用。下面将详细介绍该方法的原理、仪器设备、操作步骤以及常见问题及解决方法。 一、方法原理： 该方法采用液相色谱法进行分析，根据待测样品中的目标化合物与色谱柱之间的相互作用来实现物质的分离和定量。主要包括样品的预处理、色谱分离、定量检测和数据分析等步骤。 二、仪器设备： 液相色谱仪是该方法的主要仪器设备，其中包括色谱柱、检测器和数据处理系统等，常用的色谱柱有C18反相色谱柱、正相色谱柱等。常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器等。 三、操作步骤： 1. 样品的预处理：将待测食品样品取适量加入提取溶剂中，超声或搅拌混合，静置一段时间使目标化合物溶解。然后通过滤膜过滤，以获取纯净的样品溶液。 2. 色谱分离：将样品溶液注入色谱柱中，通过不同组分在色谱固定相和流动相之间的相互作用来实现分离。可以调整流动相的组成和流速等条件来优化分离效果。 3. 定量检测：分离后的组分进入检测器，根据目标化合物的特性进行定量检测。
常用的方法是通过比较待测样品和已知浓度的标准溶液的峰面积或峰高来确定目标化合物的含量。 4. 数据处理：将检测到的信号转化为对应的色谱图，并通过计算机数据处理系统进行数据分析和结果计算。 四、常见问题及解决方法： 1. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性选择合适的色谱柱，如苯甲酸和山梨酸可以选择C18反相色谱柱，糖精钠可以选择离子交换色谱柱。 2. 流动相的选择：合理选择流动相的组成和流速，以实现目标化合物的高效分离。这需要根据不同化合物的极性和溶解度等参数进行优化。 3. 检测器的选择：根据不同化合物的特性选择合适的检测器，如苯甲酸和山梨酸可以选择紫外检测器进行检测，糖精钠可以选择荧光检测器进行检测。 4. 样品的提取：提取过程要注意样品的充分溶解和提取溶剂的选择，以获得准确的分析结果。 5. 数据处理方法的选择：根据实际情况选择合适的方法进行数据处理，如使用峰面积法或峰高法进行浓度计算。 总结： 液相色谱法是一种常用的测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的分析方法，具有操作简便、分离效果好、准确可靠等优点。通过合理选择色谱柱、流动相和检测器等条件，并进行样品预处理和数据处理，可以得到准确的分析结果。在实际操
虚拟实验《HPLC测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸》实验指导☆目录： 一、实验目的 二、实验原理 三、观看实验操作视频 四、虚拟实验操作 五、思考题 一、实验目的 1．掌握高效液相色谱仪的基本结构及使用方法。 2．掌握测定饮料中苯甲酸和山梨酸的基本原理及实验方法。 3．掌握样品处理的一般方法。 二实验原理 1．样品混匀超声除去二氧化碳和乙醇后，调节pH 至近中性，经0.45μm滤膜过滤后进高效液相色谱仪，经反相C18 色谱柱分离后，紫外检测器230 nm 波长处检测。以色谱峰的保留时间定性，利用色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。 三、观看实验操作视频 通过观看实验操作视频，对整个实验流程有一定的了解 四、虚拟实验操作 仪器：岛津高效液相相色谱仪主机和电脑（控制装置）；电子天平；紫外可见分光光度计； 超声震荡清洗器，pH计；电热板或电炉；纯水机；抽滤装置。 器材：50ml容量瓶；50ml烧杯；移液管；微孔滤膜（0.45μm）；微量进样器。 试剂：稀氨水（1:1）；苯甲酸标准（）；山梨酸标准（）；碳酸氢钠溶液；甲醇。 一、高效液相色谱实验室检测 1.实验准备 1.1标准品及所需试剂的配置： （1）稀氨水（1:1） （2）碳酸氢钠溶液：配置的浓度为20g/L，准确称取碳酸氢钠（分析纯）2.00g ，加水溶解至100.00mL。 （3）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g 乙酸铵，用超纯水溶解至1000mL， （4）甲醇（色谱纯） （5）苯甲酸标准储备液（5.0mg/mL）：准确称取0.2500g 苯甲酸，加碳酸氢钠溶液25.mL，加热溶解，定容至50.00mL。 （6）山梨酸标准储备液（5.0mg/mL）：准确称取0.2500g 山梨酸，加碳酸氢钠溶液25.mL，加热溶解，定容至50.00mL。 （7）标准混合使用液（含苯甲酸0.5mg/mL，山梨酸0.5mg/mL）：准确吸取各标准储备液5.00mL，加水定容至50.00mL。
卫生化学实验七 高效液相色谱法（HPLC）测定饮料中山梨酸和苯甲酸 一、实验目的与要求 1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法 2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法 3、熟悉饮料样品的处理方法 二、实验方法与原理 苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。因此国家严格限制其使用量。在本实验中，样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇，然后过滤注入高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230 nm波长处检测。以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。 三、实验仪器与试剂 1、仪器：高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯（1个）； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.2 2 μm）。 2、试剂： （1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02 mol/L，色谱纯）；流动相分别超声脱气（10 min） （2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g山梨酸，加超纯水定容至250 ml。 （3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g苯甲酸，加超纯水定容
至250 ml。 四、实验步骤 1、样品处理 碳酸饮料（雪碧）：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min，然后用微孔滤膜（0.22 μm）过滤，滤液备用。吸取100 μl滤液于离心管中，并加入900 μl超纯水，混合均匀标记为样品。 2、配制标准溶液 （1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。吸取滤液50 μl于另一离心管并加入950 μl超纯水，得到50 μg/ml的苯甲酸标准品，做好标记。（2）同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品，做好标记。 （3）混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀，得到500 μg/ml的混合标准品。吸取50 μl混合标准品（500 μg/ml）于离心管中并加入950 μl超纯水，得到25 μg/ml的混合样，标记为混标。 3、色谱条件： 色谱柱：C18反相键合色谱柱 流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液（5 : 95） 流速：1 ml/min 检测波长：230 nm 进样量10 μl 4、标准品和样品测定 （1）分别进苯甲酸（50 μg/ml）、山梨酸（50 μg/ml）标准品，确定保留时间。 （2）记录混合标准品（25 μg/ml）的峰面积并按下式计算样品中苯甲酸和山梨酸含量：
实验三紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂—苯甲酸 1 实验试剂与仪器 1.1 试剂 苯甲酸（AR,雪碧汽水 1.2 仪器 日立UV-3010紫外-可见光谱仪，1cm石英比色皿 2 实验原理与方法 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。我国规定了苯甲酸（盐）在碳酸饮料中最大使用量为0.2g/kg。苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有强吸收 由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验测定雪碧中苯甲酸，含有人工合成色素、甜味剂等，但一般在紫外区无吸收，故不干扰测定，样品不用处理，苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，可在225nm波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。 3 实验步骤 3.1 苯甲酸标准储备液配制 称取O.IOOOg苯甲酸于100mL容量瓶中，加适量蒸馏水定容，配制成1mg/mL溶液，吸取此液5mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，每毫升溶液相当于苯甲酸100ug。 3.2 标准曲线绘制 取苯甲酸标准储备液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00mL,分别置于50mL容量瓶中，用蒸馏水溶液稀释至刻度。以水为对照液，测定其中5号标准溶液的紫外可见吸收光谱（测定波长范围为200~350nm,找出入一,然后在入max处测定五个标准溶液的吸光度A。 3.3 样品处理和测定 雪碧饮料除二氧化碳后，准确移取2.5mL于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，在入max处测定吸光度。 4 实验结果
实验七饮料中苯甲酸含量的测定 （HPLC 法） 一、实验目的 1、掌握高效液相色谱法（HPLC）测定苯甲酸和糖精钠含量的基本原理与操作技术； 2、了解高效液相色谱分析仪的结构及使用方法 3、了解饮料中苯甲酸的含量。 二、实验原理 样品加热去除CO2后，调pH值至中性，经微孔滤膜过滤后进样高效液相色谱仪, 经反相色谱分离后，用紫外检测器在特定波长（入max23Onm ）下测定被测组分的吸光度，根据保留时间和峰面积与标准比较定性和定量。 三、主要试剂和仪器 1、试剂 ①甲醴一一色谱纯，0.45滤膜过滤 ②稀竟水（1:1）—— 1份竟水+1份去离子水 ③0.02mol/mL乙酸铉溶液—— 1.26g乙酸铉+1000mL水溶解后,0.45叩滤膜过滤。 ④苯甲酸标准贮备液（1mg/mL ）——称取苯甲酸0.1000g+1mL2%NaHC6，搅拌溶 解，加水定容至100ml 2、仪器 ①高效液相色谱仪（附可变波长紫外检测器）,Agile nt 1100LC ②常规玻璃器皿 四、色谱条件 ①色谱柱——YWG — C18 10 P m 4.61ID x 250mm ②柱温室温 ③流动相——甲醴：0.02mol/L乙酸铉=5: 95 ④流速---1ml/min ⑤检测器——UV 230nm ⑥进样量——20 Z 五、测定方法 1、样品处理 准确吸取饮料样品15.00mL入烧杯中，水浴加热（微温）去CO2,冷却后用1: 1 竟水调pH7 （pH试纸或1%酚猷乙醴溶液指示）,加水定容至25ml,混合均匀后用0.45 滤膜过滤备用O 2、标准曲线制备 吸取苯甲酸标样（0.1mg/ml ）0ml、2ml、3ml、4ml、5ml,移入10ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度。进行HPLC仪分离检测，采用色谱数据处理系统自动绘制峰面积A~苯
紫外分光光度法测定饮 料中的苯甲酸 TYYGROUP system office room 【TYYUA16H-TYY-TYYYUA8Q8-
实验三紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂—苯甲酸 1 实验试剂与仪器 试剂 苯甲酸（AR），雪碧汽水 仪器 日立UV-3010紫外-可见光谱仪，1cm石英比色皿 2 实验原理与方法 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。我国规定了苯甲酸（盐）在碳酸饮料中最大使用量为0.2g/kg。苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有强吸收 由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验测定雪碧中苯甲酸，含有人工合成色素、甜味剂等，但一般在紫外区无吸收，故不干扰测定，样品不用处理，苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，可在225nm波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。 3 实验步骤 苯甲酸标准储备液配制 称取0.1000g苯甲酸于100mL容量瓶中，加适量蒸馏水定容，配制成1mg/mL溶液，吸取此液5mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，每毫升溶液相当于苯甲酸100ug。 标准曲线绘制 取苯甲酸标准储备液、、、、，分别置于50mL容量瓶中，用蒸馏水溶液稀释至刻度。以水为对照液，测定其中5号标准溶液的紫外可见吸收光谱（测定波长范围为 200~350nm），找出λ max ，然后在λ max 处测定五个标准溶液的吸光度A。 样品处理和测定
山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法 一、目的与要求： 1、掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。 二、原理： 样品酸化后，用乙醚提取山梨酸，苯甲酸。将样品提取液浓缩，点于浆酰胺薄层板上，展开,显色后，根据薄层板上山梨酸，苯甲酸的比移值与标准比较定性，并可进行概略定量。 三、试剂与仪器： 1、异丙醇 2、正丁醇 3、石油醚沸程：30-60℃。 4、乙醚：不含过氧化物 5、氨水 6、6N盐酸：取100毫升盐酸 7、无水乙醇。 8、聚酰胺粉：200目。 9、山梨酸标准溶液：精密称取0.2000克山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于200毫克山梨酸。 10、苯甲酸标准溶液：精密称取0.2000克苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2毫克苯甲酸。 11、展开剂 (1)正丁醇-氨K--无水乙醇(7：1：2) (2)异丙醇-氨水-无水乙醇(7：1：2) 12、显色剂：O.04％溴甲酚紫的50％乙醇溶液，用0.1N氢氧化钠溶液 调至PH=8。 13、4％氯化钠酸性溶液：于4％的氯化钠溶液中加少量6N盐酸酸化。 14、吹风机。 15、层析缸。 16、玻璃板：10 X 18cm 17、微量注射器：10微升，100微升。 18、喷雾器。 四、操作方法 1、样品提取 称取2.5克事先混合均匀的样品，置于25毫升带塞量筒中，加0.5毫升6N盐酸酸化，用15、10毫升乙醚提取两次，每次振摇1分钟，将上层醚提取液吸人另一个25毫升带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3毫升4％氯化钠酸性溶液洗涤两次，静止15分钟，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤人25毫升容量瓶中。加乙醚至刻度混匀，吸取l0.0毫升乙醚提取液分两次置于10毫升带塞离心管中，在约40 (2的水浴上挥发干，加入0.10毫升乙醇溶解残渣，备用。 2、测定
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
高效液相色谱法 2.1原理 不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。 2.2试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682要求。 2.2.1 甲醇：色谱纯。 2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经微孔滤膜过滤。 2.2.3 亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾[K 4Fe(CN) 6 ·3H 2 O]加水至1000mL。 2.2.4 乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH 3COO) 2 ·2H 2 O]溶于少量水中，加入 30mL冰醋酸，加水稀释至1000mL。 2.2.5 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合。 2.2.6 正己烷。 2.2.7 pH4.4乙酸盐缓冲溶液： a）乙酸钠溶液：称取6.80g乙酸钠（CH 3COONa·3H 2 O）,用水溶解后定容至1000mL。 b）乙酸溶液：称取4.3mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。 将上述两种溶液按体积比37:63混合，即得pH4.4乙酸盐缓冲溶液。 2.2.8 pH7.2磷酸盐缓冲溶液： a）称取23.88g磷酸氢二钠（Na 2HPO 4 ·12H 2 O）,用水溶解后定容至1000mL。 b）称取9.07g磷酸二氢钾（KH 2PO 4 ），用水溶解后定容至1000mL。 将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合，即得pH7.2磷酸盐缓冲液。 2.2.9 标准溶液的配制： a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.2360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1.00mg。
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量 一、实验目的 1.了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV-2501的操作。 2.掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。 3.掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。 二、实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，根据GB2760- 1996规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。 苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。根据苯甲酸（钠）在225nm 处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含量。 三、仪器和试剂 1.紫外可见分光光度计UV-2501（日本岛津），1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。 2.NaOH溶液（0.1mol/L） 3.苯甲酸钠标准溶液的配制 (1)苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL 容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。 (2)苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水 稀释定容。 (3)系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL 于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/L NaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。 4.雪碧（500mL） 5.蒸馏水 四、实验步骤 1.吸收曲线的绘制 （1）系列标准溶液的配制 50mL瓶编号 1 2 3 4 5 6 100.0mg/L苯甲酸钠标准溶液体积（mL）0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 0.1mol/L NaOH溶液体积（mL） 1.00 用蒸馏水容量50.0 系列标准溶液浓度（mg/L）0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 记录吸光度A值 （2）吸收曲线的测定 用某一浓度较高的标准液如4号或5号溶液，于210nm~300nm波长范围内扫描，即的苯甲酸钠的吸收曲线。 （3）由吸收曲线上找出最大吸收波长λmax。 2. 工作（标准或校正）曲线的绘制 按溶液由稀到浓的顺序分别测定他们的吸光度A，然后以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，求出线性方程和相关系数。 浓度（mg/L）0 4 6 8 10 X 吸光度A -0.0110.2250.3330.4410.5520.1044
用高效液相色谱法测定饮料屮的苯甲酸 一.实验目的 通过对高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸,空握采用高效液相色谱法进行定性及定量 分析的基本方法 二.实验原理 本实验中苯甲酸是食品行业通用的防腐剂，据科学报道，冃前影响我们仅胡安全的最人 问题是茂品腐败和微生物的繁殖，正是由于仅品中使用了防腐剂，而使我们避免了更多仅品 中的不安全因素。而粉中添加了增白剂最终转化成的苯甲酸不超过60ppm,我国GB2760- 1996《食品添加剂卫生使用标准》中规定,苯甲酸在酱油、醋中的最大使用量为lOOOppm, 葡萄酒中为800ppm,碳酸饮料中为ZOOppmo 苯甲酸是我国冃前最常用的仗品防腐剂，其主要作用是防止由微生物的活动而引起的仗 品变质。 本实验以汽水为样品，超声除去二氧化碳，调PH 至中性，过滤后进入高效液相色谱，经反相 色谱分离后,根据保留时间和峰面枳进行定性和定號。 三•仪器和试剂 1高效液相色谱仪（紫外检测器或者DAD 检测器） 2甲醇：经0.45pm 滤膜过滤。 3桶氨水（1 + 1）：氨水加水等体积混介。 4乙酸彼溶液（0 02mol/L ）：称取1 54g 乙酸规加水至1000ml,溶解，经045um 滤膜过滤。 5碳酸氢钠溶液（20g/L ）：称取碳酸氢钠（优级纯），加水至lOOinl,振荡溶解。 6苯甲酸标准标准溶液：准确称取0 lOOOg 苯甲酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L ） 5ml ・加热溶 液，移入100ml 容量瓶中，加水定容至100mh 苯甲酸含量为lmg/ml,作为储备溶液。 7苯甲酸使用溶液：取苯甲酸标准储备液10ml,放入100ml 容量瓶中，加水至刻度。此溶 液含有苯甲酸0 lmg/ml,经0 45um 滤膜过滤。 其分子式为: 0H,俗名安息香酸
碳酸饮料中苯甲酸钠含量的测定与分析 [实验日期]：年月日——月日[实验操作人]： [实验地点]： [实验目的]： 1.学习使用双相滴定法进行饮料中苯甲酸钠的测定操作 2.学习使用紫外—可见分光光度计，并将测定结果与双相滴定法进行比较。 3.体会化学分析方法和仪器分析方法在低含量测定中的优缺点 [实验原理]： 本实验采用双相滴定法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量。本实验选做紫外-可见分光光度法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量，并将结果与双相滴定法进行对照苯甲酸钠的测定可以使用HCl滴定，但因为生成的苯甲酸常温下溶解度很小，几乎不溶于水，由此造成滴定终点的pH突越不够明显，另外游离的苯甲酸附着在容器和液面表面会影响观察滴定结果，并在一定程度上吸附少量的指示剂，不利于终点判断。而苯甲酸在常温下难溶于水（0.34g/100ml），在空气中微挥发，有吸湿性，溶于热水，也溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。苯甲酸钠常温易溶于水（53.0g/100ml，PH≈8）。综合考虑，在本实验中采用乙醚来吸收水相中的游离苯甲酸，将苯甲酸提取入乙醇溶液中，之后在乙醇溶液中使用0.01mol/L的标准NaOH溶液以PP为指示剂滴定碳酸饮料样品至显粉红色，根据滴定消耗的NaOH标准溶液的体积计算碳酸饮料中苯甲酸钠的含量。1注：选作部分相关内容见后。 [实验仪器]： 50ml酸式滴定管，50ml碱式滴定管，250ml锥形瓶×3，500ml分液漏斗，1000ml 1 根据最新GB2760- 2003国家卫生标准规定,碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。
烧杯，250ml容量瓶×n，25ml移液管，10ml量筒，100ml量筒，玻璃棒，表面皿，带橡胶塞的细口瓶×2，50ml具塞量筒×2，2ml吸量管，10ml移液管。 电子分析天平（0.0001g），紫外-可见分光光度计，电热恒温水浴锅（室温+5℃~99℃）。[实验试剂]： HCl溶液（1+1），40%NaOH溶液，草酸/邻苯二甲酸氢钾基准试剂，苯甲酸基准试剂，PP，无水硫酸钠(分析纯)，乙醚(分析纯)，NaCl(分析纯)，乙醇(分析纯)。 雪碧碳酸饮料一瓶(备用样品：美年达碳酸饮料一瓶)。 [实验内容]： (一)实验预准备： （1）准备除去CO2的去离子水：在1000ml烧杯中加入800ml去离子水并加热至沸腾，沸腾3~5min，冷却至室温备用。注意在加热过程中，在去离子 水沸腾前加盖表面皿，以减少热量损失并缩短加热时间，加热刚开始时 烧杯外侧凝结的水滴要及时用滤纸片擦掉，以免受热不均烧杯炸裂。加 热至近沸时注意防止暴沸，可以从烧杯尖嘴处深入玻璃棒轻轻搅动。 （2）准备4%的NaCl溶液：100ml去离子水中加入4.0gNaCl固体，溶解摇匀。 （3）准备HCl溶液（1+1）：按照体积比1:1的比例将25ml浓盐酸和25ml去离子水混合，摇匀。 (二)氢氧化钠标准溶液的配制和标定 （1）配置NaOH标准溶液：在10ml量筒中量取2.5ml饱和氢氧化钠溶液（20mol/L），用500ml水稀释，置于橡胶塞细口瓶中振荡摇匀，使用25ml 移液管量取上述溶液于250ml容量瓶中，加水稀释至刻度线，摇匀，转 移至带橡胶塞的磨口细口瓶中备用。
碳酸饮料中笨甲酸钠含量的测定与分析 摘要 碳酸饮料中苯甲酸钠添加含量不仅影响着企业的品牌效益还会影响到消费者安全问题，然而目前国家标准中苯甲酸钠含量的测定方法不太适合测定实验研究，本实验提供了两种比较实用便捷和低成本的分析测定技术。 碱滴定法测定笨甲酸钠用标准氢氧化钠溶液滴定处理液至初显粉红色为终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积，再运用公式计算出样品中苯甲酸钠含量。紫外分光光度法测碳酸饮料中的苯甲酸钠在酸性条件下经乙醚提取分离后,测定样品中苯甲酸钠的吸光度, 通过标准曲线的回归方程查得样品中苯甲酸钠的含量。 这两种方法不需要贵重的气相或液相色谱仪, 样品处理简单易于操作, 检验结果与国家标准中高效液相色谱法测定结果基本一致。可作为饮料产品中苯甲酸钠含量监控的有效方法。 关键词：碳酸饮料关键词苯甲酸钠碱滴定法紫外分光光度计 1、前言 苯甲酸钠又称安息香酸钠，分子式为 C7H5NaO2，性状白色颗粒或结晶性粉末。无臭或微带安息香气味,味微甜,有收敛性;易溶于水（常温）53.0g/100ml 左右,PH 在 8 左右；是酸性防腐剂,在碱性介质中无杀菌,抑菌作用;其防腐最佳 PH 是 2.5-4.0， PH5.0 时 5%的溶液杀菌效果也不是很好.苯甲酸钠亲油性较大, 在易穿透细胞膜进,细胞体内,干扰细胞膜的通透性,抑制细胞膜对氨基酸的吸收; 进入细胞体内电离酸化细胞内的碱储,并抑制细胞的呼吸酶系的活性,阻止乙酰辅酶A 缩合反应,从而起到食品防腐的目的。苯甲酸钠是用于内服液体药剂的防腐剂，有防止变质发酸、延长保质期的效果。我国食品防腐剂主要采用苯甲酸钠及山梨
酸钾，由于苯甲酸钠价格便宜，在碳酸饮料等饮品中作为防腐剂被广泛使用。但苯甲酸钠用量过多会对人体肝脏产生危害, 甚至致癌。为确保食品添加剂的绝对安全使用, 根据 GB2760- 1996 国家卫生标准规定,碳酸饮料中苯甲酸钠的 1 允许最大使用量为 0.2g/kg。 在中国大多数地区,碳酸饮料生产企业众多,规模较大,对防腐剂苯甲酸钠的 添加控制水平较高,然而也有可能会发生防腐剂苯甲酸钠超标的情况。如果每批都送检,成本太高,企业自行按国家标准测定也不可合行。目前国家标准中苯甲酸钠含量的测定方法有气相色谱法、高效液相色谱法及薄层层析法,但缺少适合中小企业的快速简便方法。因此运用简便快捷的方法测定碳酸饮料内的苯甲酸钠含量具有重要的意义。 2、实验目的 1、了解并掌握苯甲酸钠的防腐机制和苯甲酸钠作为食品添加剂的添加范围。 2、根据碱滴定法则为原理，在实验中掌握碳酸饮料中笨甲酸钠含量测定方法。 3、能根据碱滴定法则的标准做出准确的分析且得到正确的结论。 4、掌握紫外可见分光光度计的检测方法并得出准确的结果做对照。 5、能分析出几种碳酸饮料中笨甲酸钠含量的精确数值。 3、实验原理 本实验测定的是碳酸饮料，其中含有大量的 CO2 ，很可能与碱反应，对滴定有一定的影响，在这种情况下，应实验前先搅拌溶液，充分除去水中溶解的 CO2 后再进行实验。本实验采用碱滴定法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量和紫外可见分光光度法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量做对照实验。
食品中苯甲酸和山梨酸的检测 摘要：近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。食品安全已越来越引 起广大消费者的密切关注和担忧。目前我国每年食物中毒报告例数约2万人，但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康，还 涉及相关企业的经济效益和市场空间，关系到整个食品行业的发展。 苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠，将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用，其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言，苯甲酸和苯甲 酸钠的摄食是不适合的嘲。另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。在体 外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的 报道，在使用上有争议，虽仍为各国允许使用，但应用范围愈来愈窄。日本的进口食品 中就限制使用，甚至部分禁止使用，日本已停止生产。但因价值低廉，在中国仍作为主 要防腐剂使用。 山梨酸具有较低的毒性，是迄今为止国际公认的最好的防腐剂，已经成为了西方发 达国家的主流防腐剂。但事实上，现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。 由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。 1防腐剂的检测 在食品工业中，作为防腐剂，不能影响人体正常的生理功能，一般说来，在正常规 定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。因此，食品防腐剂的定性 与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。 目前，测定防腐剂的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相气谱法等