Western blot
试剂配制
1．30％丙稀酰胺储存液
丙稀酰胺29g
N，N’-亚甲双丙稀酰胺1g
双蒸水定容到100ml，
经高压蒸汽灭菌的滤纸过滤避光，4℃保存于棕色瓶中2．1.5 M Tris-HCl (MW=121.1)pH 8.8
Tris碱90.75g
双蒸水400ml
用浓HCl调pH至8.8，加双蒸水定容至500ml。4℃冰箱保存
3．1.0 M Tris pH6.8
Tris碱12g
双蒸水60ml
用浓HCl调pH至6.8，
加双蒸水定容至100ml。4℃冰箱保存
4．10％SDS(w/v）
SDS 10g
溶于加水至100ml，室温放置
5．10％过硫酸胺（10%APS）
过硫酸胺1g
溶于10ml双蒸水中。可在密闭的管子里4℃保存一周6．10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
Tris 30.3g
甘氨酸144g
SDS 10g
定容至1000ml室温放置。
临用时稀释成1×电泳缓冲液
7．1%溴酚蓝（w/v）
溴酚蓝Tris-base MilliQ 水100 mg
60 mg
定容至10 ml
8．TEMED原液，4℃冰箱保存
9．2×sample buffer(2×样品缓冲液)
1.0 M Tris pH6.8
2.5ml
SDS 0.8g
DTT 0.3085g
甘油3ml
溴酚蓝0.004g
加双蒸水至10ml，分装—20℃保存
10. 4×SDS加样缓冲液10ml
1M Tris-HCl(ph:6.8) 2.5ml
SDS 0.8g
溴酚蓝0.004g
甘油4ml
Takara
5x buffer 总5ml
1M Tris-HCl(ph:6.8) 1.25ml
SDS 0.5g
溴酚蓝BPB 25mg
甘油 2.5ml
500ul每管分装，使用前将25ul的2-ME加到没管中
11．转膜缓冲液
Tris 碱 5.8g
甘氨酸 2.9g
SDS 0.37g
甲醇200ml
加双蒸水至1000ml，临用前配制，4℃冷却
12．1×TBST
Tris 碱 3.0285 g
氯化钠8.766g
Tween-20 500ul
加双蒸水至1000ml，现配现用。（4℃最多保存一周）
13．n%封闭液(一般5%)
脱脂奶粉n克溶于100ml 1×TBST，4℃冰箱保存
附表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）溶液成分510152025304050 6%
水 2.6 5.37.910.613.215.921.226.5 30%丙烯酰胺溶液123456810
1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3
2.5
3.85 6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0040.0080.0120.0160.020.0240.0320.04 8%
水 2.3 4.6 6.99.311.513.918.523.2 30%丙烯酰胺溶液 1.3 2.74 5.3 6.7810.713.3
1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3
2.5
3.85 6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.0240.03 10%
水 1.94 5.97.99.911.915.919.8 30%丙烯酰胺溶液 1.7 3.35 6.78.31013.316.7
1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3
2.5
3.85 6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02 12%
水 1.6 3.3 4.9 6.68.29.913.216.5 30%丙烯酰胺溶液246810121620
1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3
2.5
3.85 6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02 15%
水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.99.211.5 30%丙烯酰胺溶液 2.557.51012.5152025
1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3
2.5
3.85 6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02
附表2 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶（浓缩胶）所用溶
液
不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）溶液成分123456810 5% 水0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831 1.3 1.7
1.5 mol/L Tris (pH8.8)0.130.250.380.50.630.750 1.25
10% SDS0.010.020.030.040.050.060.080.1 10%过硫酸氨0.010.020.030.040.050.060.080.1 TEMED0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01
实验步骤：
一、电泳
1．制胶：按附表1和附表2配制电泳凝胶，下层为分离胶，上层为浓缩胶；
配置分离胶：
1）一旦加入TEMED，马上开始聚合，故应快速旋动混合物并进入下一步操作。
2）迅速在两玻璃板的间隙中灌注正丁醇或者双蒸水溶液，留出灌浓缩胶所需的空间。
（梳齿长+1cm）
3）在凝胶上加满0.1%SDS(也可以用dd水)，将凝胶垂直放于室温下。覆盖水层可防止因氧气扩散进入凝胶而抑制聚合反应。
4）分离胶聚合后（约30min），倾出覆盖层液体，用去离子水洗涤凝胶顶部数次以除去未聚合的丙稀酰胺。尽可能地排去凝胶上的液体，再用纸巾的边缘吸净残留液体。配置浓缩胶
1）一旦加入TEMED，为防止马上开始聚合，故应快速旋动混合物。
2）在已经聚合的分离胶上快速直接灌注浓缩胶，直到加满后
3）立即在浓缩胶中插入干净的梳子，小心避免混入气泡（如果梳子间有气泡，需要从新插梳子）。
4）约30min后凝胶凝聚，小心拔出梳子。
把凝胶固定于电泳装置上,准备电泳缓冲液约500ml,将电泳缓冲液加满电泳槽的中间,保持内外不通且使外面的电泳缓冲液没过电泳槽下面的金属导线。
2．样品处理及加样
(1)等质量样品加入等体积2×或4×样品缓冲液，99℃煮5min；（注意：煮样品时不要盖锅盖，以免样品溢出或者盖子鼓开）
(2)2000转离心样品10-30秒；样品冷却后，按照预定顺序，根据梳子厚度加样。（1.5mm 的梳子上样40ul左右, 1mm的梳子加样15ul左右）
(3)将样品加入浓缩胶的梳孔中，留一合适的梳孔中加入蛋白Marker；
3．电泳装置正负极正确连接后开始电泳，起始电压100V，待样品在浓缩胶部分浓缩成一条线后，加大电压至120V，待溴酚兰达到底部边缘，即可停止电泳。
二、转膜
1．膜的准备。
甲醇浸泡PVDF膜10~15min，转膜缓冲液平衡15~30min。
戴手套，剪一块合适大小的PVDF膜在甲醇中浸泡1分钟。（注意：当进行接触滤纸、凝
胶和膜的操作时，一定要带手套，否则，手上的油脂会阻断转移）。将500ml转膜缓冲液
倒入较大的托盘中，把两块海绵、两块与膜等大的滤纸、已经浸泡好的PVDF膜放入托盘中，充分的浸泡。
2．胶的准备。
将玻璃板撬开，撬的时候动作要轻，要在两个边上轻轻的反复撬。（禁止一个位置用力，防止玻璃破碎）撬一会儿玻璃板便开始松动，直到撬去玻板，去除浓缩胶，根据目的蛋白
的位置，切胶。胶和PVDF膜、滤纸一样大（注意：撬玻璃板和切胶时一定要小心，胶很
易裂，要用巧劲，最好将撬板蘸水浸湿后再敲胶，可以避免由于胶黏在撬板上而破损）3．装入转膜仪器。
将转膜夹子打开，使黑的一面保持水平。在上面垫一张纤维垫，用玻棒来回擀几遍以擀走
里面的气泡。（一手擀另一手要压住垫子使其不能随便移动）。然后，在垫子上垫一层滤纸。小心剥下切好的分离胶盖于滤纸上，调整位置，使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。
接着，将膜盖于胶上，要盖满整个胶（膜盖下后尽量不再移动）并除气泡。在膜上盖一层
滤纸并除去气泡。最后盖上另一个海绵垫，擀几下就可合起夹子。（按照：夹子黑面—纤维垫—1张滤纸－凝胶－膜－1张滤纸－纤维垫—夹子白面的顺序排列。整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡）。
4．转膜仪器入电泳槽进行转膜
将夹子放入转移槽中，使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。电转移时会产热，
在槽的一边放一块冰来降温，并且使转移槽在冰浴中进行转膜。加入转膜缓冲液至刚能没
过夹子，100V，100min，（蛋白质在转移缓冲液中从负极向正极转移，也就是从夹子的黑
面向白面。对于大分子量的蛋白，转膜时电压要高一点，时间也要延长一点。特别是务必
注意加强降温措施。）
三、封闭：转膜结束后用封闭液室温摇床封闭1-2小时；
四、免疫
1．一抗孵育：用n%封闭液适当比例稀释一抗（根据说明书，一般先从1：1000开始
摸索浓度，然后根据实验结果调节到合适的浓度），室温孵育半小时后，4℃冰箱孵育过夜；次日从4℃冰箱拿出室温再孵育半小时；
2．1×TBST洗膜：10min×3次；
3．二抗孵育：用n%封闭液适当比例稀释二抗（根据具体抗体摸索），室温孵育1小时；4．1×TBST洗膜：15min×4次；
五、显影
1．按膜的大小取适量ECL（等量A液和B液混合），将膜从TBST中取出，用滤纸吸干TBST，将膜蛋白面朝下置于ECL上1 min，然后将膜正面朝上用保鲜膜包裹起来；
2．在暗房中，将感光胶片放在膜上，置于X射线摄影暗盒中1～30min，曝光时间取决于
样品；
3．将感光胶片放在显影液中10sec~1min ,在清水中漂洗后浸入定影液中，至胶片透明。
在暗室中，将1×显影液和定影液分别到入塑料盘中；在红灯下取出X－光片，用切纸刀
剪裁适当大小；打开X-光片夹，把X－光片放在膜上，一旦放上，便不能移动，关上X-
光片夹，开始计时；根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般为1min或5min，条带信号
弱时，延长曝光时间，以达最佳效果；曝光完成后，打开X-光片夹，取出X-光片，迅速
浸入显影液中，待出现明显条带后，即刻终止显影。显影时间一般为1～2min（20～25℃），温度过低时（低于16℃）需适当延长显影时间；显影结束后，马上把X-光片浸入定影液中，定影时间一般为5～10min，以胶片透明为止；用自来水冲去残留的定影液后，室温下晾干。
注意：1. 如果使用柯达的显影定影液，时间很快的，显影结束后最好先用事先准备好的自来水洗一下片子，然后再放到定影液中进行定影，这样可以延长定影液使用时间，从而节约定影液。
2. 如果目标蛋白条带很淡，除了延长曝光时间，还可以用两张X－光片，前后压片。
3.如果背景很强，可以洗膜后，加ECL，再显影。但是效果不是很好，所以，第一次
压片是最重要的。
3．拍照或扫描照片、分析。用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值
Western blot注意事项及秘笈心得
1．玻璃应该要洗得非常干净，否则胶面会不平；
2．配胶时，加入配胶的各成分后应充分混匀以免影响较的凝固，若胶制的不均匀，将会影响电泳；
3．配胶的浓度根据目的蛋白的大小而定，蛋白分子量越大，所用的胶凝度应越小；
4．转膜时，纤维垫－1张滤纸－凝胶－PVDF膜－1张滤纸－纤维垫各层之间不应有气泡，组装好后可用试管赶气泡
5．电转膜过程中，尽量创造低温环境，用内置的冰盒的同时放在冰浴或冰水浴里转膜；6．背景过高可能的原因及解决办法
(1)封闭不全——延长封闭时间；
(2)试用0.5%~1%BSA封闭；
(3)抗体浓度太高，或孵育时间太长——降低抗体浓度，缩短孵育时间；
(4)控制曝光时间
(5) 抗体特异性差，使用多抗容易出现这个问题，若有可换用单抗；
7．没有信号
(1)抗体浓度太低，或孵育时间太短——增加抗体浓度，延长孵育时间；
(2)一抗二抗的效价低；
(3)蛋白的表达量低——适当加大上样量。
SDS-PAGE相关试剂、缓冲液的配置方法 1.5M Tris-HCl 组分浓度：1.5M 配制量：200ml 配制方法：1.称量下列制剂，置于250ml蓝口瓶中。 Tris-base 36.33g 2.向烧杯中加入约150ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.调pH=8.8(在磁力搅拌器上进行)，定容至200ml， 4℃保存 1.0M Tris-HCl 组分浓度：1.0M 配制量：200ml 配制方法：1.称量下列制剂，置于250ml蓝口瓶中。 Tris-base 24.22g 2.向烧杯中加入约150ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.调pH=6.8(在磁力搅拌器上进行)，定容至200ml， 4℃保存 1.0M Tris-HCl 组分浓度：1.0M 配制量：200ml 配制方法：1.称量下列制剂，置于250ml蓝口瓶中。 Tris-base 24.22g 2.向烧杯中加入约150ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.调pH=7.5(在磁力搅拌器上进行)，定容至200ml， 4℃保存 10%SDS （W/V）组份浓度：10%（W/V）SDS 配置量：200ml 配制方法： 1.称取2g SDS。 2.加入200ml的去离子水后搅拌溶解。 注意：溶解定容SDS时不宜剧烈摇晃，避免产生过多的泡沫；10%SDS溶液在低温是易析出晶体，可以置于70℃溶解。 30%（W/V）丙烯酰胺组份浓度：30%（W/V）Acrylamide 配制量：200ml 配制方法：1.称量下列制剂，置于1L烧杯中。 丙烯酰胺58g N-N亚甲基双丙烯酰胺2g 2.向烧杯中加入约150ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至200ml，用定性滤纸滤去 杂质。 4.于棕色瓶中4℃保存。
Guide operators to deal with the process of things, and require them to be familiar with the details of safety technology and be able to complete things after special training.硅表试剂配制安全操作规 程正式版
硅表试剂配制安全操作规程正式版 下载提示：此操作规程资料适用于指导操作人员处理某件事情的流程和主要的行动方向，并要求参加 施工的人员，熟知本工种的安全技术细节和经过专门训练，合格的情况下完成列表中的每个操作事 项。文档可以直接使用，也可根据实际需要修订后使用。 1、硅表A、B、C试剂的配制必须遵守严格的步骤和程序 2、试剂瓶要有标签，有毒药品要在标签上注明，无标签的不得使用。 3、严禁试剂入口。如需以鼻辨别试剂，须将试剂瓶远离，用手轻轻扇动，严禁鼻子接近瓶口。 4、 A试剂的配制须在烧杯、锥形瓶等耐热、耐酸容器中进行，边搅拌边将浓硫酸缓慢地倒入蒸馏水中。将浓硫酸较快地倒入水中，或是反过来将水倒入浓硫酸中进行混合是危险的，请严格按照说明进行
5、若皮肤或眼内溅入硫酸或乙二醇试剂，将会发生烧伤，请立即用大量冷水冲洗并就医 6、混合试剂时请戴橡胶手套以防与试剂直接接触 7、 C试剂的配制过程尽量避光操作，C试剂长期暴露于日光下可能引起成分改变，配制完毕后立即将试剂C倒入遮光的容器中 8、一切废液如含有害物质超过安全标准，应先行处理，不准直接排入下水系统 ——此位置可填写公司或团队名字——
实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱
文件名称 实验室用试剂配制管理规程 编制者审核者批准者 编制日期审核日期 批准日 期 颁发部门制作备份 分发部门 实施日 期 实验室用试剂配制管理规程 目的：本办法规定了实验室用试剂使用的操作要点及管理要求。 范围：适用于QC实验室试剂的管理。 责任：QC检验员对本标准实施负责。 内容： 1.0 术语： 试剂：指杂质检查的标准贮备液（以下简称标准贮备液）、杂质检查的标准溶液（以下简称标准溶液）、标准缓冲液、指示剂、一般试液及缓冲液。 2.0 试剂 2.1 配制标准贮备液必须使用优级纯或分析纯的化学试剂。 2.2 配制标准缓冲液必须使用正规厂家生产的标准缓冲液试剂。 2.3 配制一般试液及缓冲液必须使用分析纯或化学纯的化学试剂。 2.4 所用的化学试剂必须达到优级纯或分析纯的标准。 3.0 溶剂 3.1 配制试剂及培养基所使用的水均指纯化水、纯化水的质量必须符合《中华人民共和国药典》2010年版规定。 3.2 配制标准缓冲液的水必须是新沸冷却pH为5.5—7.0的纯化水。
3.3 配制硫代硫酸钠、氢氧化钠的水及规定试剂使用的水必须是新沸冷却的。 3.4 所有的有机溶剂一般的应为化学纯或分析纯，检验对溶剂有特殊规定的，必须符合该标准操作规程项下的要求。 4.0 配制方法 4.1各类试剂必须严格按照《药品检验操作通则》或《中华人民共和国药典》现行版规定的方法配制。 4.2 配制标准缓冲液、标准贮备液、指示剂的称量必须用万分之一的分析天平称取，配制一般试液及缓冲液的称量≥1g的用架盘天平称取，﹤1g的用分析天平称取。 4.3 标准缓冲液、标准贮备液、指示剂由QC检验员配制、复核。 4.4 各类试剂的配制必须有两人同时进行，复核人对配制的全过程进行复核，包括所用的化学试剂、溶剂、称量、溶解、稀释、定容，全部准确无误后，该试剂方可使用。 4.5 生物测定使用的缓冲液必须灭菌。 5.0 试剂的标识 5.1 标准缓冲液、标准贮备液，必须用统一的标签标识，内容包括溶液名称、配制日期、浓度、有效期、配制人、复核人，一般试剂及缓冲液、标准溶液、指示剂按以上要求标识。 6.0 配制记录：各类试剂配制必须建立记录，内容包括名称、配制浓度、配制数量、配制日期、编号、配制人、复核人等。 7.0 试剂的效期：标准缓冲液、标准贮备液、标准溶液的有效期一般为三个月，指示剂、一般试剂除另有规定外有效期一般为六个月。 8.0 试剂的贮存 8.1 各类试剂均应按《药品检验操作标准》等要求的条件贮存。
Western bolt 一、实验目的 通过实验了解western blot技术的原理和操作。 二、实验原理 SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。 PAGE能有效的分离蛋白质,主要依据其分子量和电荷的差异,而SDS-PAGE的分离原理则仅根据蛋白质的分子量的差异。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC膜)，在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。NC膜是生物学试验中最重要的耗材之一。 第一抗体就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。 化学发光HRP底物（辣根过氧化物酶底物，也常被称为ECL试剂）是目前Western blot检测中最为灵敏的试剂。显影液的A液主要成分为鲁米诺（Luminol）及发光增强剂，B液主要成分为过氧化物溶液。二抗上含有HRP（辣根过氧化物酶），可以催化A液和B液反应发光。 三、实验器材 1.电泳槽，胶板架子 2.转膜仪 3.NC膜 4.电泳电源 5.滤纸 6.摇床 7.X射线摄影暗匣 8.X射线胶片 9.塑料薄膜 四、实验试剂 1.runningbuffer 5xrunningbuffer(1L) Tris 15.1g
1DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC 根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。 3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压) 将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。 30.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0）柠檬酸钠88.2g DEPC水1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用 5 HEPES 溶液HEPES 23.8g (ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml 6 50X Denhaldt′s 液 聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA）0.2g DEPC 水20ml 7 预杂交buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml 龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 8Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween 9Maleic acid buffer (ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g 定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 10Detection buffer
The Daily Operation Mode, It Includes All The Implementation Items, And Acts To Regulate Individual Actions, Regulate Or Limit All Their Behaviors, And Finally Simplify Management Process. 编订：XXXXXXXX 20XX年XX月XX日 化学试剂操作工安全技术操作规程简易版
化学试剂操作工安全技术操作规程 简易版 温馨提示：本操作规程文件应用在日常的规则或运作模式中，包含所有的执行事项，并作用于规范个体行动，规范或限制其所有行为，最终实现简化管理过程，提高管理效率。文档下载完成后可以直接编辑，请根据自己的需求进行套用。 一、在试验室中，任何药品都或多或少具 有毒性，因此人员不可直接去尝其味，不要直 接俯向容器去嗅其味，应慢慢地摇动手掌将气 体引向自己鼻孔。 二、任何化学药品一经放置容器后，应立 即贴上标签，标明名称、规格、浓度和日期， 对标签有怀疑，应查问或检验清楚后再使用。 三、不能在易燃烧品的附近加热，应移去 易燃易炸物品后再使用。 四、切不可对试剂瓶或量筒直接加热，也 不可在试剂瓶、量筒中配置溶液，以免容器发
热使容器破裂。 五、用移液管吸取溶液时必须小心谨慎，吸取挥发分、强碱酸、腐蚀性、刺激性或有毒的液体时，必须用吸尔球或水泵抽气吸取，不能用嘴吸取，以确保安全。 该位置可填写公司名或者个人品牌名 Company name or personal brand name can be filled in this position
Western blot 常用试剂配制 1.5 mol/L Tris (PH8.8) 1．称量181.7g Tris置于1L烧杯中。 2．加入约800 ml去离子水，充分搅拌溶解。 3．用浓盐酸调节pH值至8.8。 4．定容至1L. 5．高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的p H值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。（参照kara公司Catalog-N1） 1 mol/L Tris (PH6.8) 1．称量121.1g Tris置于1L烧杯中。 2．加入约800 ml去离子水，充分搅拌溶解。 3．按下表量加入浓盐酸调节所需的pH值。 pH值浓HCl 6.8 7.4 约70 ml 7.6 约60 ml 8.0 约42 ml 4．定容至1L. 5．高压灭菌后，室温保存。 注意：1.溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH
值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 如1 mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃，并置备质量更好的Tris。 （参照kara公司Catalog-N1） 30％丙稀酰胺（100ml） 1．称量下列试剂置于烧杯中。 丙烯酰胺（Acrylamide） 29 g 双丙烯酰胺(BIS) 1 g 2．加入约60 ml去离子水，充分搅拌溶解。 3．定容至100 ml, 用0.45 μm滤膜滤去杂质。 5．于棕色瓶中4 oC保存。 注意：1. 丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成分。 （参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924） 30％SDS 1．称量10 g 高纯度（电泳级）的SDS置于100~200 ml烧杯中。 2．加入约800 ml去离子水，68oC加热溶解。
常用液体配制标准操作规程（SOP） 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 二〇〇八年九月修订
目录 一、细菌培养系统（责任人：郑子峥） 二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜） 三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕） 四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛） 五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、） 六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）
一、细菌培养系统 1、LB培养基: 每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。 2、固体培养基: LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）： 注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。 注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。 4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan） 注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。 注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。 5、细菌培养： 配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性
Western Blot蛋白测定步骤 三蒸水制备后需要高压消毒 一、组织的采集 （一）器材和试剂准备： 镊子、眼科剪、70%乙醇（三蒸水配制）、1.5mL离心管、液氮 （二）步骤（以心脏为例）: 1、脱颈椎处死小鼠，读取小鼠编号 2、乙醇消毒胸部，剪开胸腔，剪下心脏（一颗心脏约100mg），排除血液，放入离心管，投入液氮中 3、组织于-80摄氏度冻存 二、组织蛋白的提取： （一）器材和试剂准备： 4mL离心管、15mL管、研磨机、镊子、冰盒、离心机、RIPA蛋白裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay，详见下载的网页）（碧云天公司）、PMSF（Phenylmethanesulfonyl fluoride，苯甲基磺酰氟，详见下载的网页prod号36978，Thermo Scientific）、70%乙醇、三蒸水 （二）步骤 1、准备好三管10mL70%乙醇、一管三蒸水；取出RIPA和PMSF解冻 2、按照1mLPIRA ：10uLPMSF ：100mg组织的比例，加试剂和组织于4mL离心管 3、按照三管10mL70%乙醇、一管三蒸水的顺序依次洗涤研磨钻头（每管5秒），再研磨组织，上下且圆周运动离心管。每管研磨的转速和时间保持一致。当出现大量泡沫时即可停止 4、静置于冰盒30分钟 5、12000rpm，4摄氏度，30分钟 6、先取100uL上清于离心管，再取300uL上清于离心管。前者用于测试，后者备用。-80摄氏度冻存。 注意：购置的RIPA不宜反复冻融，需分装-80摄氏度保存；PMSF为晶体状，购置后按照说明书溶于异丙醇，分装-80摄氏度保存
ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作规程 【试验目的和原理】 ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。 常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。 Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。 ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM抗D抗体的凝胶。A 细胞、B细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D 凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应
【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】 1、用于输血前检测 （1）鉴定ABO，以备选择ABO血型相配合的血液用于交叉配血。 （2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。2、用于围产期检查 （1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。（2）用于产后母子的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产后诊断。 3、用于常规ABO、RhD血型化验检查，如健康体检等。 【样本要求】 1、建议使用抗凝的血样，尤其是EDTA抗凝管采集的血样，需要量2ml 。 （EDTA抗凝采血管为紫帽管）。 2、血液样本在采集后48小时以内检测。
Western-Blot操作流程 试剂配制 1.RIPA裂解液： 10mM Tris（MW121.14，PH7.5） 1%NP40 0.5%TritonX-100 0.2%脱氧胆酸钠 2 mM EDTA 1 mM PMSF 20%甘油 调pH值至7.5。 混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。 制胶用（1-6）： 1. 1.0mol/L Tris〃HCl （pH6.8） Tris (MW121.14) 12.114g 蒸馏水 100ml 溶解后，（用浓盐酸调pH至6.8），室温下保存。 2. 1.5mol/L Tris〃HCl（pH8.8） Tris (MW121.14) 18.671g 蒸馏水 100ml 溶解后，（用浓盐酸调pH至8.8），室温下保存。 3.10％SDS SDS 10g 蒸馏水至 100ml 如溶解困难，可在50℃水浴下溶解，室温保存。 如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 4.10％过硫酸胺（AP） 过硫酸胺 0.1g
（现用现配，可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在1.5mlEP管中，一次性多装几管，使用时加入蒸馏水水即可，溶解后，4℃保存，保存时间为1周） 5．四甲基乙二胺原液（TEMED）： 4?C保存。 6．30%丙稀酰胺： 4?C保存。 10%下层胶，即分离胶（两块胶，15ml）：胶的浓度根据自己所做蛋白的大小确定依次加入去离子水 5.9ml 30%丙烯酰胺 5ml 1.5M Tris-HCl（pH8.8） 3.8ml 10%SDS 150μl 10%AP 150μl TEMED 6μl 每加一种成分随即摇匀，为了加快凝胶，可以将过硫酸胺和TEMED量加大，根据实验当时的温度适当调整，加入TEMED混匀后应即刻灌胶。灌胶后加异丙醇（1ml）消泡 5%上层胶（两块胶，6ml）： 依次加入去离子水 4.1ml 30%丙烯酰胺 1ml 1M Tris-HCl（pH6.8） 0.75ml 10%SDS 60μl 10%AP 60μl TEMED 6μl 每加一种成分随即摇匀，为了加快凝胶，可以将过硫酸胺和TEMED量加大，根据实验当时的温度适当调整，加入TEMED混匀后应即刻灌胶。 7．5X电泳液缓冲液 Tris（MW121.14） 15.1g 甘氨酸（MW75.07） 94g SDS 5.00g 蒸馏水至 1000ml 溶解后室温保存,用时稀释5倍，通常取160ml配制成800ml即可。 8．10X转膜缓冲液 甘氨酸（MW75.07） 151.1g Tris（MW121.14） 30.3g
实验室常用生化试剂配方 1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版） 抗生素 英文名称及缩写 抗性基因 贮藏液浓度(mg/ml) 100 25(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 35 25(0.15M NaOH配) 50(DMSO配) 50 50 MM 使用终浓度（μg/ml）链霉菌 2CM YEME 大肠杆菌 LA或LB 氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMP Ampicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprim cat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph －* 10 10 2 5 10 5 100 10 －－ 25 25 20 25 10 － 50 －－－－－－ 2.5 － 5 50-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30
注意事项： (1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请 确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装； （2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并 设置阴性对照； （3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio （4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并 分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确 保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水 乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易 挥发，有剧毒； （5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存； （6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整； (7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次 性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂 对自身的损伤及对工作环境的污染。 注意事项： (1)表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓冲液配制，缓冲液配制方法 参考《分子克隆实验指南（第3版）》： 蛋白酶 K缓冲液：50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM 乙酸钙； RNase A缓冲液：TE （pH 7.6）：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA；溶菌酶缓冲液：10 mM Tris-HCl（pH 8.0）； (2) RNase A配制好后沸水浴处理5 min，取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水 浴处理5 min后再使用； （3）制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌； （4）所有酶均应在-20℃保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界 污染。 （1）IPTG用无菌水配制，0.22μm一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20℃；
1.目的： 建立本规程旨在为盐酸滴定液的配制、标定提供操作标准。 2.范围： 本规程对本公司的中心化验室盐酸滴定液的配制，标定有效。 3.责任： 中心化验室滴定液配制人、标定人。 4.检验依据： 《中国药典》2015年版四部 5.内容: 分子式：HCl 分子量：36.46 5.1 配制 ◆盐酸滴定液（1mol/L）：取盐酸90ml，加水适量使成1000ml摇匀。 ◆盐酸滴定液（0.5、0.2或0.1mol/L）照上法配制，但盐酸的取用量分别为45 ml、18 ml、或9.0ml。 5.2 标定 ◆盐酸滴定液（1mol/L）：取在270-300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约 1.5 g，精密称定，加水50ml使溶解，加甲基红—溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液由
绿色变为暗紫色。每1ml的盐酸滴定液（1mol/L）相当于53.00mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。 ◆盐酸滴定液（0.5mol/L）照上法标定，但基准无水碳酸钠的取用量改为约 0.8g。每1ml的盐酸滴定液（0.5mol/L）相当于26.50 mg的无水碳酸钠。 ◆盐酸滴定液（0.2mol/L）照上法标定，但基准无水碳酸钠的取用量改为 0.3g。每1ml的盐酸滴定液（0.2mol/L）相当于10.60 mg的无水碳酸钠。 ◆盐酸滴定液（0.1mol/L）照上法标定，但基准无水碳酸钠的取用量改为约 0.15g。每1ml的盐酸滴定液（0.1mol/L）相当于5.30 mg的无水碳酸钠。 ◆如需用盐酸滴定液（0.05mol/L、0.02mol/L、或0.01mol/L）时，可取盐酸滴定液（1mol/L或0.1mol/L）加水稀释制成。必要时标定浓度。 5.3 原理 Na 2CO 3 +2HCl 2NaCl+CO 2 +H 2 O 5.4 计算公式 m×1000 盐酸滴定液的浓度（mol/L）：= V×T 式中：m为基准无水碳酸钠的称取量（mg）； v 为本滴定液的消耗量（ml）； T为与每1ml的盐酸滴定液相当的无水碳酸钠的毫克数。 5.5 试剂与仪器。 ◆试剂：盐酸、基准无水碳酸钠、甲基红—溴甲酚绿混合指示液。 ◆仪器：锥形瓶250ml、量筒（1000ml、100ml）100ml烧杯、碱式滴定管、电热恒温干燥箱、电子天平、干燥器、扁形称量瓶、胶头滴管、研钵、坩埚。 5.6 注意事项 ◆配制中，盐酸的取用量如按药典的规定量取，则配制成的滴定液的F值常为1.05-1.10;因此，在加水稀释并摇匀后，首先与已知浓度的氢氧化钠滴定液作比较试验，求得其粗略浓度，再加水适量稀释，以调节其浓度使其F值为0.95-1.05，而后再进行标定； ◆基准无水碳酸钠应在270-300℃干燥至恒重，以除去水分和碳酸氢钠。具
Western blot常用试剂配方 1. 丙烯酰胺-双丙烯酰胺储存液：30% AB（100ml） 丙烯酰胺29 g 双丙烯酰胺1g 加蒸馏水至100ml，过滤，棕色瓶保存。 2. 10% SDS：（10ml） 电泳级SDS 1 g 蒸馏水9 ml 初始PH约为，用针尖蘸少许浓盐酸调PH 至，定容至10ml。（四甲基乙二胺）（成品） 4. Lower-buffer （1.5M Tris-Cl PH ）：50ml Tris-base 9.085 g 蒸馏水45 ml 加浓盐酸（约）调PH至后定容至50ml，4℃保存。 5. upper buffer（1.0M Tris-Cl，PH ）：50ml Tris-base 6.055 g 蒸馏水44 ml 加浓盐酸调PH至后定容至50ml，4℃保存。 6. 10%过硫酸铵（10% AP）：新鲜配制 称取0.05g AP于EP管中，储存于-20℃，用时溶于蒸馏水7. 5 × loading buffer：（1ml）50ml upper buffer ml 甘油（丙三醇）ml 25ml
SDS g 5g DTT 0.0385 g 溴酚蓝 加蒸馏水溶解后定容至1ml。取加蒸馏水配成工作液。8. 5 × running buffer：（1000ml） Tris-base 15.1 g 甘氨酸（Glycine）94 g SDS 5 g 加蒸馏水溶解后定容至1000ml。用时加4000 ml蒸馏水。 9. 考马斯亮蓝染液：100ml（可重复利用） 甲醇30 ml 冰乙酸10 ml 蒸馏水60 ml 考马斯亮-250 0.05 g 10. 考马斯亮蓝脱色液500ml：现用现配 乙酸（10%）50ml 甲醇（30%）150ml 加蒸馏水定容至500ml。 11. Transbuffer（PH ）：100ml 现用现配 Tris-base 0.3028 g 甘氨酸 1.4872 g 甲醇20 ml 加蒸馏水定容至100ml。 12. 10 x 丽春红染液（储存液）：（可重复利用） （用时用蒸馏水稀释为1 X 的）染色后用纯水脱色
实验室试剂管理规章制度 1、目的 确保化验结果的准确与化验室安全。 2、适用范围 适用于***化验室对各种试剂药品的管理。 3、试剂管理与溶液配制管理规定 3.1化学药品贮存 3.1.1 较大量的化学药品放置于药品贮存室中，分类放置。 3.1.2 贮存室避免阳光直接照射，以免因温度过高使试剂变质。 3.1.3 贮存室应干燥通风，避免烟火。 3.2 试剂溶液贮存 3.2.1 所有试剂、溶液以及样品的包装瓶上都必须有标签，标签要完整、清晰、绝对不允许容器内装入与标签不相符的物品。标签大小与瓶子相称，标签应书写工整，写明名称、浓度、配制日期。标准溶液还应写明标定日期、有效期、标定者，并作《溶液配制原始记录》、《标准溶液标定原始记录》，专用试剂溶液按分析项目分组存放。 3.2.2 试剂应分类存放，以便使用。 3.2.2.1 无机试剂分作酸类、碱类、盐类及氧化物等。 3.2.2.2 盐类按阳离子分类：如钠盐、钾盐、铵盐、镁盐、钙盐等。 3.2.2.3 一般有机试剂按官能团分类：烃类、醇类、醛类、酚类等。 3.2.2.4 指示剂按用途分类：如酸碱指示剂、氧化还原指示剂、络合物指示剂。 3.2.3 配制的溶液装在有塞的细口瓶中，需要滴加使用的装在滴瓶中，见光易分解变质的应装在棕色瓶中，如AgNO3溶液、Na2S2O3溶液等。 3.3 危险药品管理 3.3.1 危险品的贮存应干燥、通风良好。 3.3.2 易燃液体贮存的温度不应超过28℃，易爆炸品贮存温度不超过30℃。3.3.3 危险品应分类隔开贮存，量较大应隔开房间贮存，量小时亦应设立铁板柜或分开贮存。 3.3.4 腐蚀物品应选用耐腐蚀材料作架子。 3.3.5 爆炸性物品可将瓶子储存于有干燥黄沙的柜中。 3.3.6 相互接触能引起爆炸的不同危险品，应分开存放，绝对不能混存。
培养基、试剂与试液管理规程 1. 目的： 规范培养基、试剂、试液的管理，确保其应用于检测不会造成结果准确性的偏离。 2. 适用范围： 适用于培养基、试剂、试液的购入、接收、使用、保管的管理。 3. 职责： 3.1 中心化验室管理人员、QA人员:负责监督本规定的执行； 3.2 中心化验室QC员:按本规定严格执行。 4. 内容： 4.1 培养基 4.1.1 培养基由中心化验室指定专人保管与发放，建立《培养基接收、发放台帐》； 4.1.2 制备 4.1.2.1 制备培养基所用的玻璃器皿清洁干燥,培养基经适用性考察合格后方可用于样品检测使用; 4.1.2.2 按《培养基配制操作规程》（JMSC02-301080061）进行称量、配制、过滤、分装、灭菌。 4.1.2.3 及时填写《培养基配制记录》，内容：培养基名称、培养基生产厂家、培养基批号、配制日期、配制总量、配制批号、配制方法、配制人、复核人及日期。 4.1.2.3.1 培养基的配制批号编写方式为：以年月日六位数加当日流水号两位数表示，如：2011年11月02日配制第一个培养基的批号为：11110201 4.1.3 使用 4.1.3.1 干燥培养基使用时只需按标签上的说明称量、加水、分装、高压灭菌。不需调节PH。若为自配培养基应矫正PH，原料也应挑选，琼脂凝固力应测定，以确定配制时琼脂用量,试剂规格应为化学纯以上。 4.1.3.2 配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。 4.1.3.3 培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。 4.1.3.4 培养基配制后应在2 h内灭菌，避免细菌繁殖。 4.1.3.5灭菌后的培养基作好《培养基配制标签》，注明名称、配制批号，配制日期、配制人，并在冷暗处保存备用，放置时间不能超过7天，以免水分散失染菌。已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用。 4.1.3.6 琼脂培养基应用水浴或微波炉加热，勿用电炉直接熔化琼脂培养基，以免营养成份过度受热而破坏。 4.1.3.7使用培养基，必须填写《培养基使用记录》，标明：培养基名称、配制批号、配制总量、使用日期、使用量、剩余量、使用去向（使用于产品应标明产品名称、批号）。 4.1.4 保存: 4.1.4.1 未开封脱水培养基应避光保存于25℃以下阴凉干燥处，已开封的培养基应盖紧，避光储存于
实验室药品的取用和溶液的配制 1 固体试剂的取用规则 （1）要用干净的药勺取用。用过的药勺必须洗净和擦干后才能再使用，以免沾污试剂。 （2）取用试剂后立即盖紧瓶盖。 （3）称量固体试剂时，必须注意不要取多，取多的药品，不能倒回原瓶。 2 液体试剂的取用规则 （1）从滴瓶中取液体试剂时，要用滴瓶中的滴管，滴管绝不能伸入所用的容器中，以免接触器壁而沾污药品。从试剂瓶中取少量液体试剂时，则需要专用滴管。装有药品的滴管不得横置或滴管口向上斜放，以免液体滴入滴管的胶皮帽中。 （2）使用胶头滴管“四不能”：不能伸入和接触容器内壁，不能平放和倒拿，不能随意放置，未清洗的滴管不能吸取别的试剂。 （3）配制一定物质的量溶液时，溶解或稀释后溶液应冷却再移入容量瓶。 （4）配制一定物质的量浓度溶液，要引流时，玻璃棒的上面不能靠在容量瓶口，而下端则应靠在容量瓶刻度线下的内壁上（即下靠上不靠，下端靠线下）。 （5）容量瓶不能长期存放溶液，更不能作为反应容器，也不能互用。（一般用于配制标准溶液的容量瓶最好专用） 3 溶液的配制 （1）配制溶质质量分数一定的溶液 计算：算出所需溶质和水的质量。把水的质量换算成体积。如溶质是液体时，要算出液体的体积。 称量：用天平称取固体溶质的质量；用量筒量取所需液体、水的体积。 溶解：将固体或液体溶质倒入烧杯里,加入所需的水,用玻璃棒搅拌使溶质完全溶解。（2）配制一定物质的量浓度的溶液 计算：算出固体溶质的质量或液体溶质的体积。 称量：用托盘天平称取固体溶质质量，用量筒量取所需液体溶质的体积。 溶解：将固体或液体溶质倒入烧杯中，加入适量的蒸馏水用玻璃棒搅拌使之溶解，冷却到室温后，将溶液引流注入容量瓶里。 转移：用适量蒸馏水将烧杯及玻璃棒洗涤2－3 次，将洗涤液注入容量瓶，振荡，使溶液混合均匀。
1范围 本规程适用于标准溶液的配制与标定 2规范性引用文件 下列标准中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9725化学试剂电位滴定法通则 3一般规定 3.1除另有规定外,本规程所用试剂的级别应在分析纯(含分析纯)以上,所用制剂及制品,应按GB/T603的规定制备,实验用水应符合GB/T6682中三级水的规格。 3.2本规程制备标准滴定溶液的浓度，除高氯酸标准滴定溶液、盐酸-乙醇标准滴定溶液、 )=0.5mol/L]外,均指20℃时的浓度；在标准滴定溶液标亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO 2 定、直接制备和使用时若温度不为20℃时,应对标准滴定溶液体积进行补正。规定“临用前标定”的标准滴定溶液,若标定和使用时的温度差异不大时,可以不进行补正。标准滴定溶液标定、直接制备和使用时所用分析天平、滴定管、单标线容量瓶、单标线吸管等按相关检定规程定期进行检定或校准。 3.3在标定和使用标准滴定溶液时,滴定速度一般应保持在6-8mL/min。 3.4称量工作基准试剂的质量小于或等于0.5g时,按精确至0.01mg称量；大于0.5g时,按精确至0.1mg称量。 3.5制备标准滴定溶液的浓度应在规定浓度的±5%范围以内。 3.6除另有规定外，标定标准滴定溶液的浓度时，需两人进行实验,分别做四平行，每人四平行标定结果相对极差不得大于相对重复性临界极差[CR (4)r=0.15%]，两人共八平行标 0.95 (8)r=0.18%]。在运算过程中保留5位定结果相对极差不得大于相对重复性临界极差[CR 0.95 有效数字，取两人八平行标定结果的平均值为标定结果，报出结果取4位有效数字。 3.7本规程中标准滴定溶液浓度的相对扩展不确定度不大于0.2%(k=2)。 3.8本规程使用工作基准试剂标定标准滴定溶液的浓度；当对标准滴定溶液浓度的准确度有更高要求时，可使用标准物质(扩展不确定度应小于0.05%)代替工作基准试剂进行标定或直接制备，并在计算标准滴定溶液浓度时，将其质量分数代入计算式中。 3.9标准滴定溶液的浓度小于或等于0.02mol/L时(除0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠、氯化
氨苄青霉素 ﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 5g Ampicillin置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。卡那霉素 (可配 25mL ﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 2.5g 卡那霉素置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。RNase A ﹡组分浓度 10mg/ml RNase A ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.取 0.5g RNase A置于 50ml 塑料离心管中。
2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 100℃煮沸 15min, 缓慢冷却至室温,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。IPTG ﹡组分浓度 24mg/ml IPTG ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1.2g IPTG置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 X-Gal ﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1g X-Gal置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40mlDMF (二甲基甲酰胺 ,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3.小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 DTT ﹡组分浓度 1M DTT ﹡配制量 10ml