Western-Blot操作流程
试剂配制
蛋白提取试剂
1. RIPA裂解液：
50mM Tris（MW121.14，PH7.5） 3.02g
150mM NaCl 4.38g
1%TritonX-100 5ml
1%脱氧胆酸钠 5g
0.1%SDS 0.5g
蒸馏水至 500ml。
调pH值至7.5。
混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。
2. 蛋白酶抑制剂cooktail
所需母液成分：
（1）100mmol/L PMSF
PMSF 17.4mg
异丙醇 1ml
溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。
（2）10mM 亮肽素leupeptin: -20℃保存
（3）2.1mg/ml 抑肽素Aprotinin: 4℃保存
配制：成分终浓度每ml裂解液所加母液量 PMSF 1mmol/L（储存浓度稀释100倍） 10ul Leupeptin 0.1mmol/L（储存浓度稀释100倍） 10ul Aprotinin 1ug/ml （储存浓度稀释2000倍） 0.5ul 各成分直接加入所用的RIPA裂解液中，之后按照60ul/孔（12孔板）提取蛋白。
蛋白定量试剂
1. G250考马斯亮蓝溶液（蛋白定量专用）
考马斯亮蓝G250 100mg
95％乙醇 50ml
85％磷酸 100ml
蒸馏水至 1000ml
配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存于棕色瓶中。
2．牛血清白蛋白BSA储存液（1mg/ml）：
100mg BSA粉末溶于20 ml双蒸水，定容至100 ml，加少量防腐剂，4℃保存。
上样用试剂
1．4X上样缓冲液
1.0 mol/L Tris·HCl（pH6.8） 2ml
SDS 0.8g
溴酚蓝 0.04g
甘油 4ml
去离子水定容至10ml。混匀后，分装于1.5ml离心管中，4℃保存。使用时稀释成1X。
2．1.0 mol/L二硫苏糖醇（DTT）（10X）
用20 ml 0.01 mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT,分装成1ml小份储存于-20?C。使用时稀释成1X。
例如：上样量20μl--4X上样缓冲液 5μl+ DTT 2μl + 样本蛋白13μl
工作液
制胶用（1-6）：
1. 1.0mol/L Tris·HCl （pH6.8）
Tris (MW121.14) 12.114g
蒸馏水 100ml
溶解后，（用浓盐酸调pH至6.8），室温下保存。
2. 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8）
Tris (MW121.14) 18.171g
蒸馏水 100ml
溶解后，（用浓盐酸调pH至8.8），室温下保存。
3. 10％SDS
SDS 10g
蒸馏水至 100ml
如溶解困难，可在50℃水浴下溶解，室温保存。
如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。
4. 10％过硫酸胺（AP）
过硫酸胺 0.1g
蒸馏水 1ml
（现用现配，可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在1.5mlEP管中，一次性多装几管，使用时加入蒸馏水水即可，溶解后，4℃保存，保存时间为1周）
5．四甲基乙二胺原液（TEMED）： 4?C保存。
6． 30%丙稀酰胺： 4?C保存。
10%下层胶（两块胶，15ml）：
依次加入去离子水 5.9ml
30%丙烯酰胺 5ml
1.5M Tris-HCl（pH8.8） 3.8ml
10%SDS 150μl
10%AP 150μl
TEMED 6μl
每加一种成分随即摇匀，为了加快凝胶，可以将过硫酸胺和TEMED量加大，根据实验当时的温度适当调整，加入TEMED混匀后应即刻灌胶。灌胶后加正丁醇（1ml）消泡
5%上层胶（两块胶，6ml）：
依次加入去离子水 4.1ml
30%丙烯酰胺 1ml
1M Tris-HCl（pH6.8） 0.75ml
10%SDS 60μl
10%AP 60μl
TEMED 6μl
每加一种成分随即摇匀，为了加快凝胶，可以将过硫酸胺和TEMED量加大，根据实验当时的温度适当调整，加入TEMED混匀后应即刻灌胶。
7． 5X电泳液缓冲液
Tris（MW121.14） 15.1g
甘氨酸（MW75.07） 94g
SDS 5.00g
蒸馏水至 1000ml
溶解后室温保存,用时稀释5倍，通常取160ml配制成800ml即可。
8． 10X转膜缓冲液
甘氨酸（MW75.07） 151.1g
Tris（MW121.14） 30.3g
蒸馏水至 1000ml
溶解后室温保存,用时稀释10倍，并加入甲醇至20%。
通常取80ml母液，加560ml蒸馏水，最加160ml甲醇，配制成800ml即可。（先加甲醇易产生沉淀）
9． 10XTBS缓冲液
Tris（MW121.14） 24.2g
NaCl 80.0g
蒸馏水至 1000ml
（浓盐酸调pH至7.6），溶解后室温保存。
10．1XTBST缓冲液
10XTBS缓冲液 100ml
蒸馏水 900ml
Tween-20 1 ml
因Tween-20比较粘稠，应缓慢吸取并可把枪头剪掉一块，即可防止产生气泡。
溶解后室温保存。
11．封闭液/抗体稀释液（5%脱脂牛奶)：
1XTBST缓冲液 95-100 ml
脱脂奶粉 5g
溶解后4℃保存，可于一周内使用。
其他商品性试剂
一抗、二抗、显影液、定影液、ECL化学发光试剂
操作步骤
（一）蛋白样品制备
（1）单层贴壁细胞总蛋白的提取：
1、倒掉培养液，将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液，（暂不作可将培养皿存于-80度）。
2、向培养皿中加入裂解液，通常6孔板150-200ul/孔，12孔板50-60ul/孔，冰上放置，摇床20min
3、用勺子刮下细胞，并吸出液体至1.5ml离心管中，勺子在处理不同样本前清水洗净、擦干（注意冰上操作）
4、超声处理（可选）注意蛋白悬液放于冰上，15sec处理，duty cycle 50-60 每次处理后清水洗探头、擦干，再作下一个
5、于4℃下12000rpm离心5min。
6、将离心后的上清分装转移倒1.5min的离心管中放于-80℃保存。
（2）组织中总蛋白的提取：
1.将200mg组织块剪碎，置于1ml裂解液中（5ml离心管）。
2.匀浆器进行匀浆，注意冰上操作，匀浆后置于冰上。
3.10，000g ,4℃,10min,（5ml管）
4.取上清至1.5ml管，12，000g ,4℃,60min,
5.取上清至新1.5ml管,-80℃储存
（二）蛋白含量的测定
1、从-20℃取出1mg/mlBSA，室温融化后，备用。
2、取7个5ml离心管，分别加入1mg/mlBSA:0、10、20、40、60、80、100ul，用蒸馏水补足各管至100ul。
3、样本取5ul，加蒸馏水95ul，使总量亦为100ul，混匀。
4、各管加G-250溶液2ml混匀，室温静止2分钟。
5、混匀后，在生物分光光度计上比色分析，测定595nm的光吸收，测定时浓度由低到高。
6、于Excel根据标准品绘制标准曲线，根据得出的公式计算样本浓度。
（三） SDS－PAGE电泳
（1）清洗玻璃板：一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。
（2）灌胶与上样
1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。
（可以用1%琼脂糖在垂直电泳槽的左、右和下部封边）
2、按前面方法配10％下层胶（15ml，两块胶，每块胶在6.5 ml左右），加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶后胶上加一层正丁醇（1ml左右），液封后的胶凝的更快。
3、当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。弃去正丁醇，用水冲洗，并用吸水纸将水吸干。
4、等待胶凝期间可计算含50-100ug蛋白的溶液体积即为上样量（根据自己的实验需要进行选择，没有固定的量），目的蛋白GluT3一般在20-30μl左右。
取出上样样品至200μl的EP管中，加入4×上样缓冲液及DTT至终浓度均为1×（上样总体积一般不超过30μl）。上样前要将样品于沸水中煮5-10min使蛋白变性（亦可以使用PCR仪进行变性，加快速度，这样就不用将水煮沸了）。
5、按前面方法配5％的上层胶（6ml，两块胶）,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中（从梳子的一头开始插）。
灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小（也提示胶已经凝固），从而使加样孔的上样体积减小，所以在上层胶凝固的过程中要在两边补胶（不补胶问题也不大）。
等待上层胶凝固期间配制1×电泳缓冲液。
6、加入1×电泳缓冲液，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
*电泳缓冲液一定要加至超过玻璃板的上缘（量要足够多），否则电泳期间会出现电流过低的现象，进而影响电泳的效果。
7、上样 (注意：最外两泳道易跑歪，尽量不用。)
Marker 6μl （Marker加在最边上的加样孔中）
样本 20-30μl
实验所用Marker电泳后出现10条带：10，15，25，35，40，55，70，100，130，170KDa （3）电泳：电压100V，电流300mA,功率50W，时间1.5hour。(电泳15分钟后可调节电压到130V)
电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳，进行转膜（一般要让目的条带跑过分离胶的1/3比较好）。电泳结束前20分钟配制1X转膜缓冲液。
（四）转膜
（1）转一张膜需准备4张滤纸和1张硝酸纤维素膜。
切滤纸和膜时一定要戴手套（因为手上的蛋白会污染膜）。将切好的硝酸纤维素膜和滤纸置于1X转模缓冲液浸湿。
（2）夹子黑的一面：海绵-2张滤纸-胶-NC膜-2张滤纸-海绵
将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫，用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。在垫子上垫二层滤纸，一手固定滤纸一手用玻棒擀去其中的气泡。（一手擀另一手要压住垫子使其不能随便移动。）
先将玻璃板撬开，随后将浓缩胶轻轻刮去，小心剥下下层胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。将硝酸纤维素膜盖于胶上，要盖满整个胶并除气泡。在膜上盖2张滤纸并除去气泡（膜盖下后不可再移动）。最后盖上另一个海绵垫，擀几下就可合起夹子。
整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触，接触后会发生短路。
如果同时做两块胶，转膜的时候应记住样本的位置。
（3）将夹子放入转移槽槽中，要使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。电转移时会产热，在槽的一边放一块冰来降温。一般用100V转移1.5h。
* 实际上应该根据蛋白分子量的大小确定转膜时间，对于小分子量的蛋白，转膜时最好垫两块硝纤膜，以免转膜过头，因为如果第一张膜上蛋白质已经转过了，第二张膜上还有蛋白质可以进行检测；对于大分子量的蛋白，转膜时电压要高一点，一般80-100V，时间也要延长一点，开始最好也用两块膜，特别是务必注意加强降温措施。当然转膜是要摸条件的，最好刚开始做的时候摸个转膜的时间梯度。如果由于时间原因来不及做下面实验，可以在4度下12V转膜过夜；
* 硝纤膜建议使用0.22μ的小孔径膜，不容易转膜过头；
* 不同的转膜装置，转移效率是不一样的，所以换用转膜装置，最好再摸个条件；
* 转膜时电极方向注意是膜正胶负。
如果同时做两块胶，转膜结束应在膜上做标记，以便查询相应样本。
转膜结束前配制封闭液（5%脱脂牛奶)及1X TBST缓冲液。
（五）免疫反应
（1）封闭：将膜用移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭2h。
（2）一抗
a. 用parafilm膜制作与膜大小相同的槽；
b. 从封闭液中取出膜，1X TBST 5minX3次;
c. 将一抗用封闭液稀释至适当浓度（目的蛋白GluT3 1:300, actin 1:2000）；
d.将膜蛋白面朝上放于槽中，加入抗体，室温下孵育1-2h后（目的蛋白GluT3 1.5h,actin 1h），4度过夜，次日用1X TBST在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。
（3）二抗
同上方法准备二抗稀释液（目的蛋白GluT3 1:1000,actin 1:1000）并与膜接触，室温下孵育1h后，用1X TBST在室温下脱色摇床上洗三次，每次10min。
（六）化学发光，显影，定影
（1）将A和B两种试剂等量（常用各500μl）在5ml离心管中等体积混合；
打开X-光片夹，铺上保鲜膜，将NC膜面朝上放于保鲜膜上，滴加此混合液1-3min
后（见到荧光），用保鲜膜包好。
（2）将1×显影液，自来水和定影液分别到入盘中；
在红灯下
* 取出X－光片，用切纸刀剪裁适当大小（比膜的长和宽均需大1cm）；把X－光片放在膜上，一旦放上，便不能移动，关上X-光片夹，开始计时；根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般为1min到5min，也可选择不同时间多次压片，以达最佳效果；
* 曝光完成后，打开X-光片夹，取出X-光片，迅速浸入显影液中显影，待出现明显条带后，即刻终止显影。显影时间一般为1～2min（20～25℃），温度过低时（低于16℃）需适当延长显影时间；
* 显影结束后，先用自来水洗一下X-光片，然后再放到定影液中进行定影（这样可以延长定影液使用时间，从而节约定影液）。定影时间一般为5～10min，以胶片透明为止；（七）凝胶图象分析：将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值。
【管理制度】检验用试剂管理 规程 xxxx年xx月xx日 xxxxxxxx集团企业有限公司 Please enter your company's name and contentv
安徽丰汇生物制药有限公司文件 目的：本文件规定了检验用试剂的管理要求，以保证检验工作质量。 范围：适用于化验室检验用试剂的管理。 责任：本文件由化验室负责起草，化验室主任审核，生产负责人批准。化验室负责实施。 正文： 1.试剂定义：试剂是指检测中所使用的各项检验用试剂，除生化试剂和指示剂外，一般常用的化学 试剂分为基准试剂、优级纯、分析纯与化学纯四个等级。 2.化学试剂的分类 根据试剂的纯度、杂质含量、提纯的难易，以及各项物理性质，生化试剂和指示剂外，化学试剂一般分为基准试剂、优级纯、分析纯、化学纯四个等级。 —基准试剂（JZ，绿标签）：作为基准物质，标定标准溶液。 —优级纯（GR，绿标签）（一级品）：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。 —分析纯（AR，红标签）（二级品）：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。 —化学纯（CP，蓝标签）（三级品）：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。 3. 试剂的采购 试剂应从可靠的供应商处采购，必要时应对供应商进行评估 4.试剂的接收 4.1分类存放
实验室在接收试剂、试药时，应根据每种试剂的类别、性状进行分柜存放 4.2.建立记录 建立接收试剂、试药的记录。记录包括名称、级别、接收人、生产厂家、批号、数量、入库日期5. 试剂贮存 5.1.购买回来的大量整箱的试剂应存放于公司试剂库内，由库房保管员负责保管。化验室领用的试剂， 一般应存放于化验室内。基准试剂、有毒试剂使用后应放回试剂库，试剂库应通风避光，窗帘用双层遮光布料做成。 5.2化学试剂库应远离实验室和办公室。室内严禁明火，消防灭火设施器材完备，每日定期通风 30-60min。 5.3盛放化学试剂的贮存柜需用防尘，耐腐蚀、避光的材质制成，取用方便。 5.4化学性质或防护与灭火方法相互抵触的化学危险物品，不得在同一柜存放。 5.5 有毒试剂、易制毒品应贮藏于专柜中、加锁。 5.6定期查看试剂标签是否完整，如标签腐蚀，应及时更换。 6.试剂贮存有效期 如果试剂生产厂家给出有效期的可以采用厂家的效期。对于生产厂家没有规定有效期的试剂，使用前可以检查固体试剂的性状如果性状发生改变不可以使用、液体挥发性试剂如果体积减少1/3就不可以使用，一旦试剂开瓶后一般来说试药自开瓶之日起最长推荐有效期不应超过5年。由首次开瓶人在每瓶试剂瓶上加贴试剂标签，填写内容包括开瓶日期、开瓶人、有效期至。固体试剂有效期为5年，液体试剂有效期为3年。挥发性液体试剂为1年，易吸潮，易氧化的固体试剂为2年，固体剧毒试剂开瓶后。如在贮存期间没有发现试剂受潮、风化、变质或性状变化者可以继续使用。 7 .普通试剂的管理 7.1.选用原则
常用试剂的配制 1．无Ca2+、Mg2+Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO 3 0.175g Na 2HPO 4 ·12H 2 O 0.076g KH 2PO 4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO 3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。 2．甲基红试剂 （1）成份 甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。 3．Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO 4·7H 2 O 2g MgCl 2·6H 2 O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl 2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na 2NPO 4 ·12H 2 O 3.04g KH 2PO 4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 使用时甲,乙原液按下列比例配成Hanks 液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO 3 调整PH值。 4．0.4%酚红溶液 称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒
几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5．pH7.2 Tris-NH 4 CI溶液(红细胞崩解液） Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH 4 Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液(PB) A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH 2PO 4 ·H 2 O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最 后补加蒸馏水至 1000ml 。 B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na 2HPO 4 .7H 2 O 3.6g（或 Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g, 或Na 2HPO 4 · 2H 2 O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加 蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。 8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS） 硼酸钠（Na 2B 4 O 7 .10H 2 O） 0.46g 硼酸（H 2BO 3 ） 0.51g 加蒸馏水至100ml 溶解。9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一： 0.2mol/L Na 2HPO 4 （ Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH 2PO 4 （NaH 2 PO 4 ·2H 2 O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na 2HPO 4 81.0ml 加0.2mol/L NaH 2 PO 4 19ml,再加1900mlH 2 O和 17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。 PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二： 甲液（0.1mol/LKH 2PO 4 溶液）：KH 2 PO 4 13.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na 2HPO 4 溶液）：Na 2 HPO 4 35.814g，加蒸馏水至1000ml。 取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。
文件名称 实验室用试剂配制管理规程 编制者审核者批准者 编制日期审核日期 批准日 期 颁发部门制作备份 分发部门 实施日 期 实验室用试剂配制管理规程 目的：本办法规定了实验室用试剂使用的操作要点及管理要求。 范围：适用于QC实验室试剂的管理。 责任：QC检验员对本标准实施负责。 内容： 1.0 术语： 试剂：指杂质检查的标准贮备液（以下简称标准贮备液）、杂质检查的标准溶液（以下简称标准溶液）、标准缓冲液、指示剂、一般试液及缓冲液。 2.0 试剂 2.1 配制标准贮备液必须使用优级纯或分析纯的化学试剂。 2.2 配制标准缓冲液必须使用正规厂家生产的标准缓冲液试剂。 2.3 配制一般试液及缓冲液必须使用分析纯或化学纯的化学试剂。 2.4 所用的化学试剂必须达到优级纯或分析纯的标准。 3.0 溶剂 3.1 配制试剂及培养基所使用的水均指纯化水、纯化水的质量必须符合《中华人民共和国药典》2010年版规定。 3.2 配制标准缓冲液的水必须是新沸冷却pH为5.5—7.0的纯化水。
3.3 配制硫代硫酸钠、氢氧化钠的水及规定试剂使用的水必须是新沸冷却的。 3.4 所有的有机溶剂一般的应为化学纯或分析纯，检验对溶剂有特殊规定的，必须符合该标准操作规程项下的要求。 4.0 配制方法 4.1各类试剂必须严格按照《药品检验操作通则》或《中华人民共和国药典》现行版规定的方法配制。 4.2 配制标准缓冲液、标准贮备液、指示剂的称量必须用万分之一的分析天平称取，配制一般试液及缓冲液的称量≥1g的用架盘天平称取，﹤1g的用分析天平称取。 4.3 标准缓冲液、标准贮备液、指示剂由QC检验员配制、复核。 4.4 各类试剂的配制必须有两人同时进行，复核人对配制的全过程进行复核，包括所用的化学试剂、溶剂、称量、溶解、稀释、定容，全部准确无误后，该试剂方可使用。 4.5 生物测定使用的缓冲液必须灭菌。 5.0 试剂的标识 5.1 标准缓冲液、标准贮备液，必须用统一的标签标识，内容包括溶液名称、配制日期、浓度、有效期、配制人、复核人，一般试剂及缓冲液、标准溶液、指示剂按以上要求标识。 6.0 配制记录：各类试剂配制必须建立记录，内容包括名称、配制浓度、配制数量、配制日期、编号、配制人、复核人等。 7.0 试剂的效期：标准缓冲液、标准贮备液、标准溶液的有效期一般为三个月，指示剂、一般试剂除另有规定外有效期一般为六个月。 8.0 试剂的贮存 8.1 各类试剂均应按《药品检验操作标准》等要求的条件贮存。
透析液配置操作常规及流程 一、配制室 1．浓缩液配制室应位于透析室清洁区内相对独立区域，周围无污染原，保持环境清洁， 每班用紫外线消毒1 次。 2．浓缩液配制桶须标明容量刻度，应保持配制桶和容器清洁，定期消毒。 3．浓缩液配制桶及容器的清洁与消毒。 （1）浓缩液配制桶：每日用透析用水清洗 1 次；每周至少用消毒剂进行消毒1 次， 并用测试纸确认无残留消毒液。配制桶消毒时，须在桶外悬挂“消毒中”警示牌。 （2）浓缩液配制桶滤芯：每周至少更换 1 次。 （3）容器：应符合中华人民共和国药典、国家/ 行业标准中对药用塑料容器的规定。 用透析用水将容器内外冲洗干净，并在容器上标明更换日期，每周至少更换1 次或消毒1 次。 二、成分及浓度 透析液成分与人体内环境成分相似，主要有钠、钾、钙和镁四种阳离子，氯和碳酸 氢根两种阴离子，部分透析液含有葡萄糖，具体成分及浓度见表
碳酸氢盐透析液成分及浓度 成分浓度(mmol/L) 钠135 ～145 钾0 ～4 钙 1.25 ～1.75 镁0.5 ～0.75 氯100 ～115 醋酸根 2 ～ 4 碳酸氢根30 ～40 葡萄糖0 ～11 二氧化碳分压(mmHg) 40 ～110 pH 7.1 ～7.3 1．钠常用透析液钠离子浓度为135 ～145 mmol/L，少数特殊病情（如低钠血 症、高钠血症等）患者用低钠（钠离子浓度低于130 mmol/L）或高钠（钠离子浓度高于 145 mmol/L）透析液。 2．钾透析液钾离子浓度为0 ～ 4 mmol/L，常用钾浓度为 2 mmol/L，临床应依 据患者血钾浓度适当调整
3．钙终末期肾衰竭患者有低钙血症倾向。常用透析液钙离子浓度一般为1.5 mmol/ L；当患者患高钙血症时，透析液钙离子浓度调至1.25 mmol/L；当患者患低钙血症时， 透析液钙离子浓度调至1.75 mmol/L。 4．镁透析液镁浓度一般为0.5 ～0.75 mmol/L。 5．氯透析液浓度与细胞外液氯离子浓度相似，一般为100 ～115 mmol/L。 6．葡萄糖分含糖透析液（5.5 ～11 mmol/L）和无糖透析液两种。7．透析液碳酸氢盐透析液碳酸氢盐浓度为30 ～40 mmol/L。8．醋酸根浓缩液中常加入2 ～4 mmol/L 醋酸，调整透析液pH 值和防止CO2 跑掉。 三、配制 （一）制剂要求 1．透析液应由浓缩液（或干粉）加符合质控要求的透析用水配制。2．购买的浓缩液或干粉，应具有国家相关部门颁发的注册证、生产许可证或经营许 可证、卫生许可证。 3．医疗机构制剂室生产血液透析浓缩液应取得“医疗器械生产企业许可证”后按国 家相关部门制定的标准生产。 （二）人员要求
1.目的：建立实验室化学试剂配制标准管理规程，保证检验工作质量。 2.范围：适用于化学试剂、试药的配制。 3.责任：QC检验员、中心化验室主任对本标准的实施负责。 4.内容： 4.1试剂配制应按规定的书面规程进行。 4.2建立配制记录，由操作人员在配制过程中逐项填写，内容包括： （1）配制试剂名称、浓度、配制总量、配制日期、使用截止日期。 （2）配制试剂配比。 （3）所用试剂级别、浓度、PH值。 （4）配制方法、加入顺序。 （5）配制溶剂及必要的处理。 （6）配制者签名、复核者签名。 4.3配制人员在配制前首先检查所领试剂、试药与该试剂配制规程的一致性，瓶签完好，试剂外观符合要求，在规定的使用期限内，方可进行配制。
4.4试剂的恒重：固体化学试剂在贮存中易吸潮而增加重量，故配制时需恒重。按恒重要求进行操作。 4.5称重：称重是决定所配试剂准确性的关键步骤，必须准确无误。 4.6所用操作器具必须洁净、无痕迹，最好选用一等容量瓶、一等吸管配制和稀释。 4.7严格按配制方法进行操作，实验操作符合规定要求。 4.8按一定使用周期配制试剂，不要多配，特别是危险品、毒品应随用随领随配，多余试药退库，以防时间长变质或造成事故。原则上配用量以3—6个月为宜。 4.9配好后的试剂放在具塞、洁净的适宜容器中。见光易分解的试剂要装于棕色瓶中，挥发性试剂其瓶塞要严密，见光易变质的试剂应用蜡封口。贴好瓶签，注明名称、浓度、配制日期、使用期限、配制者。 4.10用过的容器、工具按各自的清洁规程清洗，必要时消毒、干燥、贮存备用。 4.11化学试剂配制记录保留至试剂用完后一年。
附件: 陕西神果药业有限责任公司 化学试剂配制记录 文件编号: 页数1/1 编号:
化学试剂间的管理规程 文件名称化学试剂间的管理规程新订□修订□ 文件编码编制部门质量管理部 制订人审核人批准人 制订日期年月日审核日期年月日批准日期年月日 颁发部门生效日期年月日 分发部门 变更记录 一、目的： 建立化验室化学试剂的购买、接受、储存、发放、使用、销毁使用管理规程，使化验员能正确地使用试剂,，保证化验工作质量。 二、适用范围： 化学试剂、试药、储备液 三、责任者： 化验员、化验室主任、化学试剂管理员 四、内容： 4.1化学试剂的购买： 4.1.1由化验室主任根据库存量及化学试剂检验需要量提出购买计划，经质管科长审核，公司总经理批准，交供应科采购员购买。 4.1.2供应科采购员到经公司审核批准的供应商或生产商处，依据采购计划要求的试剂品名、规格、等级、数量、生产商名称等，尤其是包装的完好性，标签是否为原厂粘贴牢固无破损，符合要求后进行采购。 4.2化学试剂的入库 4.2.1购买后由采购员直接交化学试剂管理员接收并入库。 4.2.2化学试剂管理员先检查包装的完好性，封口是否严密,试剂无泄漏，标签是否粘贴牢固无破损，内容清晰,贮存条件明确，瓶签已部分脱胶的，应及时用胶水粘贴。无标签的试剂不得入库。严格按采购计划单内容，逐一核对，入库后填写“试剂、试药入库记录”。 4.2.3化学试剂保管员必须每周检查一次温湿度表并记录。超出规定范围的应及时调整。
4.2.4 无标签的试剂应予销毁。 4.3化学试剂贮存 4.3.1原装化学试剂贮存环境 4.3.1.1化学试剂应单独贮藏于一楼专用试剂库内，专人保管。该贮存室应阴凉、避光，防止由于阳光照射及室温偏高造成试剂变质、失效。 4.3.1.2化学试剂贮库在一楼的专用房间。室内严禁明火，消防灭火设施器材完备，以防一旦事故发生造成伤害和损失。。 4.3.1.3盛放化学试剂的贮存柜需用防尘、耐腐蚀、避光的材料制成。 4.3.1.4危险品应贮藏于专用仓库保险柜内,保险柜钥匙由指定人员保管。 4.3.1.4化学试剂贮库室温应保持以5-30℃,相对湿度以45-75%为宜。 4.3.1.5化学试剂贮库应明天开启排风扇通风。 4.3.1.6化学性质或防护、灭火方法相互抵触的化学危险品，不得在同一柜或同一储存室内存放。 4.3.1.7化学试剂贮库存放的试剂数量要适量，不要过多。 4.3.2操作区化学试剂的贮存 4.3.2.1化验室操作区内的橱柜中及操作台上，每个品种试剂只允许存放1-2瓶数量的化学试剂，不允许超量存放。 4.3.2.2配制试剂在实验室操作区内保存，存放于试剂架上。性质不稳定及储备液存放于操作台下部柜中。除执行化学试剂贮存要求外，应特别注意其外观的变化。 4.3.2.3由使用人员负责保管,一般贮存3-6个月为宜,过期不得使用,须重新配制。在使用过程中发现有沉淀的，亦不得使用。 4.3.2.4注意避免阳光直射和室内通风。 4.3.2.5注意室内温湿度变化，夏季高温季节应放在冷藏箱内保存。 4.3.3化学试剂种类繁多，须严格按其性质（如剧毒、麻醉、易燃、易挥发、强腐蚀品等）和贮存要求分类存放。 4.3.3.1分类：按液体、固体分类，每一类又按有机、无机、危险品，低温贮存品等再次归类，按序排列，分别码放整齐造册登记，按分类、购进顺序登记。每一类均应贴有标记，内容包括：类别、贮存条件、异常情况下紧急处理方法。
1.目的：建立检验室化学试剂的配制、使用管理规程。 2.适用范围：适用于公司检验用化学试剂。 3.职责：QC检验室对本规程实施负责。 4.内容： 4.1化学试剂的配制： 4.1.1试剂配制应按批准的书面规程及标准进行。 4.1.2填写配制记录，由配制人员在操作过程中逐项填写。内容包括：配制试剂名称、浓度、批号、配制总量、配制日期、使用期限、配制试剂配比、配制方法、加入顺序、配制人签名等。 4.1.3配制试剂的批号编制 按称量、配制的日期进行编号，溶液配制批号为配制日期（年月日各取两位数）与在此日期配制的溶液的序号（两位数），如稀盐酸批号为12020301，表示此稀盐酸溶液为2012年02月03日配制的第一批稀盐酸溶液。 4.1.4配制人员在配制前首先检查所领试剂、试药与该试剂配制规程的一致性，瓶签完好，试剂外观符合要求，在规定的使用期内，方可进行配制。 4.1.5称重：称重是决定所配试剂准确性的关键步骤，必须准确无误。 4.1.6所用操作器具必须洁净、无痕迹，并且选用合格的容量瓶、吸管或移液管进行配制和稀释。 4.1.7严格按配制方法进行操作，实验操作符合规定要求，并填写试剂配制记录。 4.1.8按一定使用周期配制试剂，不要多配。特别是危险品、毒品应随用随领随配，以防时间长变质或造成事故。 4.1.9配好后的试剂放在具塞、洁净的适宜容器中。贴好瓶签，注明名称、浓度、配制日期、使用期限、配制者。 4.1.10用过的容器、工具应清洗干净，晾干，放置备用。 4.1.11化学试剂配制记录保留至试剂用完后1年。 4.2化学试剂的使用： 4.2.1不了解试剂性质者不得使用。 4.2.2使用前首先辩明试剂名称、浓度、纯度、是否过使用期。无瓶签或瓶签字迹不清、超
实验室常用生化试剂配方 1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版） 抗生素 英文名称及缩写 抗性基因 贮藏液浓度(mg/ml) 100 25(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 35 25(0.15M NaOH配) 50(DMSO配) 50 50 MM 使用终浓度（μg/ml）链霉菌 2CM YEME 大肠杆菌 LA或LB 氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMP Ampicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprim cat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph －* 10 10 2 5 10 5 100 10 －－ 25 25 20 25 10 － 50 －－－－－－ 2.5 － 5 50-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30
注意事项： (1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请 确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装； （2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并 设置阴性对照； （3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio （4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并 分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确 保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水 乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易 挥发，有剧毒； （5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存； （6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整； (7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次 性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂 对自身的损伤及对工作环境的污染。 注意事项： (1)表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓冲液配制，缓冲液配制方法 参考《分子克隆实验指南（第3版）》： 蛋白酶 K缓冲液：50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM 乙酸钙； RNase A缓冲液：TE （pH 7.6）：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA；溶菌酶缓冲液：10 mM Tris-HCl（pH 8.0）； (2) RNase A配制好后沸水浴处理5 min，取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水 浴处理5 min后再使用； （3）制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌； （4）所有酶均应在-20℃保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界 污染。 （1）IPTG用无菌水配制，0.22μm一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20℃；
目的：化学试剂、试液具有一定的毒性及危险性。对化学试剂、试液加强管理，不仅是保证分析结果的准确，也是确保人民生命财产安全的需要。 适用范围：适用分析室中所用检验用试剂、试液的管理。 责任人：中心化验室主任负责监督执行制，化学试剂管理员负责接收，分析人员按照本规定进行操作。 内容： 1.试剂、试液的采购 1．1化学试剂的购买：每月由中心化验室主任根据库存量及化学试剂检验需要量提出购买计划，计划中应包括：试剂名称、规格、级别、数量、必要时指定生产厂家，经质量部部长批准，由供应部采购员购买。 2．试剂、试液接收贮存 2.1购入试剂、试液由化学试剂管理员负责验收检查，检查生产日期、标签是否清楚完整、是否有渗漏现象、外观是否符合要求等，填写“试剂、试液登记台帐”，登记台帐包括试剂名称、规格、试剂级别、生产厂家、数量、购入日期、接收人等，统一保存于试剂室并做好管理。 2.2化学试剂管理员应由具备一定的专业知识，具有高度责任心的专业技术人员担任，保证化学试剂按规定的要求贮存。 2.3试剂室应避光、通风，防止由于阳光照射及室温偏高造成试剂变质、失效。试剂室室内严禁明火，消防灭火设施器材完备，以防一旦事故发生造成伤害和损失，做好“温湿度记录”。 2.4试剂、试液贮存时，应按序排列，码放整齐。试剂应包装应完好，封口密封、标签完整，瓶签脱落、变质的试剂、试液不得使用。 2.5普通试剂、试液：按其性质和贮存要求分类存放，按固体、液体分开。按其性质和贮存要求分类存放。化学性质或防护、灭火方法相互抵触的化学危险品，不得在同一柜中存放。酸与碱，强氧化剂与强还原剂要分开存放。 2.6特殊试剂、试液:易潮解吸湿、易失水风化、易挥发、易吸收二氧化碳、易氧化、易吸水变质的试剂需密闭或封蜡保存,见光易变色、分解、氧化的试剂、试液需避光保存。腐蚀品、易燃品等应单独存放,某些高活性试剂应低温干燥贮放。 2.7化学试剂管理员必须每天检查试剂室温、湿度表，并记录。记录内容包括：检查时间、检查人、温度、湿度、结果、备注。超出规定范围应及时调整。 2.8购入基准试剂按照要求单独存放。 3．试剂、试液领用 3.1领用试剂以“先入先出”原则。避免试剂积压时间过长，而超过有效期。 3.2分析人员领取试剂时,首先在“试剂、试液发放记录表”，填写相关内容：品名、规格、批号、生产厂家、数量、单位、货位号、进货日期、检品名称、检品批号、发放量、结存量、领用人。然后在试剂瓶上贴上明显牢固的“开瓶标签”，写明试剂的品名，批号，开瓶日期、失效日期，开瓶人。 3.3化学试剂管理员每个月的月初对试剂状况进行巡查，如果试剂邻近有效期应及时封存，集中处理。
透析液配置室制度 1.购买的浓缩液或者干粉，需由国家相关部门颁发的注册证， 生产许可证或经营许可证，卫生许可证。 2.透析液必须用浓缩液或者干粉加符合标准的透析用水配制。 3.医疗机构制剂室应取得“医疗器械生产企业许可证”后按国 家相关部门制定的标准生产血液透析浓缩液，且只能限本医院内部使用。 4.透析室用干粉配置浓缩液（A,B液），应由经过培训的护士和 技术员操作，并做好配置记录和专人核实登记。 5.透析液配置应在清洁区内相对独立区域设置，周围无污染源， 干燥通风，室内整洁，每班对环境清洁消毒一次。 6.浓缩液配置桶须标明容量刻度，应保持配置桶和容器清洁， 每日用透析用水清洗一次，每周消毒一次，并有记录。 7.每周至少更换或消毒一次容器，消毒后备用容器应干燥保存。 8.透析液成分及浓度测定每月一次，检查记录。 9.浓缩B液配制应在配制后24小时内使用，B桶外标明配制时 间，当天未用完的B液应废弃。A液应在配制后一周内使用。 10.浓缩液配制桶滤芯，每周至少更换一次。 11.每月一次透析液细菌培养一次，要求细菌数＜200CFU/ml,透 析液内毒素至少3个月检测一次，内毒素＜2EU/ml.透析液的细菌内毒素每台透析机至少每年检测一次，登记并保留检验结果。
透析液配置流程 多人份的配制： 1.按照需要配液量，先注入所需的配液量的透析用水，水37°C 2.开启电源开关，开始搅拌，同时加入核对好数量的A或B透 析粉（A干粉15袋，B干粉15袋）并计时。 3.当液体搅拌清澈时，关闭电源开关。 4打开阀门开关，分装透析液至每个容器内。 5分装后立即用透析用水冲洗桶内。 单人份的配制： 取量杯一只，用透析用水将容器内外以及量杯冲洗干净，按成品干粉说明要求，将所需的干粉倒入容器内，加入所需透析用水的量，加盖后左右上下摇动容器，至干粉完全融化即可。
化学试剂管理规定 Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】
化学试剂管理规定 一、目的：为加强公司化学试剂的使用管理，特制定本规定； 二、范围：本文件规定了化学试剂管理的内容及要求，适用于本公司； 三、职责： 资产管理部负责化学试剂购置； 各检测室负责人对领用的化学试剂进行管理、处置，对本单位化学试剂的使用管理进行监督检查； 四、管理内容及要求 化学试剂的采购 化学试剂的贮存 化学试剂的领用 化学试剂的使用 对于盐酸设立专门区域存放，实行双人双锁，钥匙由专人保管。出入库时应两人一起到场，使用过的空瓶等容器，应及时回收，统一处理。配制时，只许缓缓将试剂倒入水中，严禁将水倾入药品中。保管人员要定时维护和检查药品是否有损坏或泄露，采取合理办法处理事故隐患。 对于易制毒化学品采取专柜放置，并实行固定的双人双锁，“易制毒化学品专柜”不得长时间敞开；原则上，领用时不可以带走整瓶，当天使用多少领用多少。易制毒化学品原包装（外包装、试剂瓶等）放置于“易制毒化学品专柜”上，并统一回收，不得改作他
用，所有易制毒化学品应符合标签管理、普通试剂管理、记录管理 之规定 化学危险品管理制度 为了加强对化学危险品的安全管理,保证安全的使用,保障员工生命财产的安全,保护环境,特制定如下制定: 一、本公司对化学危险品的购置、使用、存储、统一规划，严格管理； 二、在使用某种化学危险品时需办理领用手续，同时填写《化学试剂领用记录》； 三、所用化学危险品必须有明确的标识； 四、使用化学危险品时，必须遵守各项安全生产制度和操作规程； 五、根据化学品的性质、种类设置相应的通风、操作等安全设施； 六、盛装化学危险品的容器在使用前后，必须进行检查，消除隐患，防止事故发生； 七、开封的化学危险品应尽快使用完毕，暂时不用的化学危险品应重新密封保存； 八、加强对使用场所、储存场所的日常检查和定期检查，并做好记录。 标准溶液的配制管理制度 1、目的 保证标准滴定溶液在保质期内浓度的可靠性以及被测样品 分析结果的准确性与真实性。 2、基本要求 从事标准溶液配制的人员需持试验检测证书上岗。 所用化学药品试剂无异常现象。 标准溶液制备水，除另有规定外，均系指蒸馏水。 制备标准溶液所用的玻璃计量器具、天平必须经过严格检定、校准合格，方可使用。
实验室试剂管理办法 1 目的 1.1 使操作员能够妥善保存化学药品、化学试剂，防止其变质、防止意外事故的发生。 1.2 使操作员能够妥善处理废料，防止其污染环境、防止意外事故的发生。 2 范围 2.1 适用于化验室化验员日常药品的管理。 3 职责 3.1 化验室 4 内容 4.1 化学药品、试剂的储存 4.1.1 化学药品储存室应符合有关安全规定，有防雷、防火、防爆、调温等安全措施。室内应干燥、通 风良好、温度一般不超过3 0C。 4.1.2 化学药品建立严格的帐目并记录于《化学试剂点检表》、《化学药品使用记录表》。 4.1.3 室内备有消防器材。 4.1.4 所有的化学试剂分类存放，无机试剂按酸、碱、盐、氧化物、单质等分类；盐类按阳离子分类，钾 盐、钠盐、铵盐、钙盐、镁盐等；有机试剂按官能团排列，烃、醇、酸、酯等；指示剂按用途分 类，酸碱指示剂、氧化还原指示剂、配位滴定的金属指示剂；专用有机指示剂按测定对象分类。 4.1.5 易燃易暴品应存放于阴凉偏低、不易碰撞的地方，有良好的通风效果，移动时轻拿轻放；配备相应 的灭火设备。 4.1.6 低沸点、易挥发有机溶剂存放于阴凉、通风处，远离热源，不得有明火。并不要与固体试剂同置一 个柜中。 4.1.7 见光易分解的应保存在棕色瓶中，或用黑色袋子裹严包装物，避光保存。 4.1.8 易燃易爆品、有毒害药品，应锁入药品柜内，防止人员带出制成自己或他人身体伤害和财产损 失，药品柜钥匙由部门主管保管一把，带班主管保管一把，其余钥匙全部交还公司，如要使用以上药品，需带班主管或部门主管批准后，由带班主管或代理人亲自开锁按其需要数量发料，并记录于< 化学药品使用记录表》。易燃易爆品储存于①药品柜，有毒害药品储存于②药品柜。 4.2 化学试剂溶液的管理 4.2.1 化学试剂溶液要装在细口瓶中，见光易分解的应装在棕色瓶中。所有化学试剂溶液在存放过程中 都应避免受热和强光照射。 4.2.2 所有试剂、溶液的盛装容器上都必须贴上标签，标签书写工整、完整和清晰；试剂最好是原标签， 配制的溶液包装上的标签应写明名称、单位浓度、配制日期；长期使用的试剂、溶液上的标签，贴层透明胶保护，以防腐蚀、磨损。并填写《标液配制记录表》。 4.2.3 影响试液质量的因素。试液的质量除主要受试剂质量的影响以外还会受其他多种因素的影响。 4.2.3.1 试液的稳定性。稳定性较好的试剂配制成溶液后，其稳定性可能变差。因而试液都应标明配 制日期，并根据需要定期检查记录于《实验室试剂点检表》，如发现试液变色、沉淀等变质迹 象，即应弃去重配。不稳定试液应分多次少量配制，并分特别情况来采取特殊贮存方法，如避光 等。 4.2.3.2 试液的贮存期。一般浓溶液在贮存期内变化不大，而稀溶液则随贮存时间的延长，其浓度多 会发生变化。溶液的浓度愈低，有效使用期限愈短。化学试剂溶液只能在其有效期内使用，GB 601 规定一般滴定分析用标准溶液在常温下，使用期限不宜超过两个月。 4.2.3.3 容器的耐蚀性。玻璃容器的耐碱性都较差，玻璃被腐蚀后可释放出某些杂质污染试液，所以，应采用聚乙烯瓶盛放碱性试液。软质玻璃的耐酸性和耐水性也较差，不应采用此种玻璃制成的容器长期贮存试液。
透析液测定操作流程 1、打开仪器电源，预热30分钟，使仪器处于稳定状态（37℃）； 2、填写表头： “测定日期”默认为同电脑的系统时间相同 “数据文件名”与“测定日期”相同，可以改动； “检验员”填写操作者姓名； “试剂批号”与试剂盒上的批号一致；（必填） “试剂灵敏度”的填写为0.01EU/ml；（必填） 3、填写标本名称、稀释倍数（如果标本名称一样，一定要区分开（如透析液1、透析液2），否则软件会自动计算2个标本结果的平均值）。 4、确认试验方法为动态浊度法，然后点击“采集”（如图）
5、进行标本操作： （1）、样品预处理：原水，RO水，透析液不用预处理，可直接进行检测； A原液，B原液须用内毒素检测用水或处理液稀释40倍后进行检测 （2）、样品的检测：取样品0.2ml加入反应主试剂A中，待干粉完全溶解后完全转移至平底试管进行检测 6、试验结束，返回主界面，进入数据分析：
7、调入实验数据： 8、查看试验结果：
结果判断： （1）、《中华人民共和国医药行业标准》YY 0572-2005《血液透析和相关治疗用水》（ISO 13959：2002,MOD）用水标准 在水处理装置的输出端的细菌内毒素的含量≤1EU/ml；血液透析装置入口的输送点上细菌内毒素的含量≤5EU/ml； （2）、《中华人民共和国医药行业标准》YY 0598-2006《血液透析和相关治疗用浓缩物》（ISO 13958：2002,MOD）标准 浓缩物以细菌内毒素检查用水配成透析液后细菌内毒素的含量<0.5EU/ml； （3）、我国《血液透析器复用操作规范》透析复用用水标准 血液透析器透析复用用水内毒素含量≤2EU/ml； （4）、血液净化标准操作规程（2010 版） 透析用水的内毒素＜2 EU/ml；置换液内毒素＜0.03EU/ml； 9、打印试验结果： 点击功能键“打印”选择分组格式，即可打印。
实验室用试剂配制管理规程 目的：本办法规定了实验室用试剂使用的操作要点及管理要求。 范围：适用于QC实验室试剂的管理。 责任：QC检验员对本标准实施负责。 内容： 1.0术语： 试剂：指杂质检查的标准贮备液（以下简称标准贮备液）、杂质检查的标准溶液（以下简称标准溶液）、标准缓冲液、指示剂、一般试液及缓冲液。 2.0试剂 2.1配制标准贮备液必须使用优级纯或分析纯的化学试剂。 2.2配制标准缓冲液必须使用正规厂家生产的标准缓冲液试剂。2.3配制一般试液及缓冲液必须使用分析纯或化学纯的化学试剂。 2.4所用的化学试剂必须达到优级纯或分析纯的标准。 3.0溶剂 3.1 配制试剂及培养基所使用的水均指纯化水、纯化水的质量必须符合《中华人民共和国药典》2010年版规定。
3.2配制标准缓冲液的水必须是新沸冷却pH为5.5—7.0的纯化水。 3.3配制硫代硫酸钠、氢氧化钠的水及规定试剂使用的水必须是新沸冷却的。 3.4所有的有机溶剂一般的应为化学纯或分析纯，检验对溶剂有特殊规定的，必须符合该标准操作规程项下的要求。 4.0配制方法 4.1各类试剂必须严格按照《药品检验操作通则》或《中华人民共和国药典》现行版规定的方法配制。 4.2配制标准缓冲液、标准贮备液、指示剂的称量必须用万分之一的分析天平称取，配制一般试液及缓冲液的称量≥1g的用架盘天平称取，﹤1g的用分析天平称取。 4.3标准缓冲液、标准贮备液、指示剂由QC检验员配制、复核。 4.4各类试剂的配制必须有两人同时进行，复核人对配制的全过程进行复核，包括所用的化学试剂、溶剂、称量、溶解、稀释、定容，全部准确无误后，该试剂方可使用。 4.5生物测定使用的缓冲液必须灭菌。 5.0试剂的标识 5.1标准缓冲液、标准贮备液，必须用统一的标签标识，内容包括溶液名称、配制日期、浓度、有效期、配制人、复核人，一般试剂及缓冲液、标准溶液、指示剂按以上要求标识。 6.0配制记录：各类试剂配制必须建立记录，内容包括名称、配制浓度、配制数量、配制日期、编号、配制人、复核人等。 7.0试剂的效期：标准缓冲液、标准贮备液、标准溶液的有效期一
https://www.doczj.com/doc/ae18035387.html, 常用试剂配制及显色方法 （一）通用显色剂 1．重铬酸钾——硫酸 一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。 喷洒剂：5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。喷洒后加热至150o C斑点出现。2．碘：检查一般有机物 （1）碘蒸汽：在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高 显色的灵敏度。 （2）0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。3．碘——碘化钾溶液：很我有机物虽黄色（配法见后）。 4．5%——磷钼酸乙醇溶液：喷后120o C烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景变为无色。 5．20%磷酸乙醇溶液：喷后120o C，还原性物质显兰色。 6．碱性高锰酸钾试剂：还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。 溶液II：5%碳酸钠溶液。 溶液I和溶液II等量混合使用。 7．中性0.05%高锰酸钾溶液：易还原性物质在淡红背景上显黄色。 8．硝酸银——氢氧化铵（Tollen’s--zoffaronl）试剂，喷后105o C烤5~10分钟，还原性物质显黑色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液。溶液II：氢氧化铵溶液。 临用前溶液I和溶液II以1：5混合。注意：放久则形成爆炸性的叠氦化银。 9．硝酸银——高锰酸钾试剂：还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液：2N氢氧化铵溶液：2N氢氧化钠（1：1：2）。临用前配制。 溶液II：高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。 10．四唑试剂：还原性物质，在室温或微加热时显紫色。 溶液I：0.5%四唑兰甲醇溶液。溶液II：6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。 11．铁氰化钾：三氯化铁试剂：还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。 溶液I：1%铁氰化钾溶液。溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II
氨苄青霉素 ﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 5g Ampicillin置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。卡那霉素 (可配 25mL ﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 2.5g 卡那霉素置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。RNase A ﹡组分浓度 10mg/ml RNase A ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.取 0.5g RNase A置于 50ml 塑料离心管中。
2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 100℃煮沸 15min, 缓慢冷却至室温,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。IPTG ﹡组分浓度 24mg/ml IPTG ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1.2g IPTG置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 X-Gal ﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1g X-Gal置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40mlDMF (二甲基甲酰胺 ,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3.小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 DTT ﹡组分浓度 1M DTT ﹡配制量 10ml
修订说明 《血液净化标准操作规程（2020版）》主要在以下方面进行了修订： 一是对独立血液透析中心提出要求。2020版操作规程中新增了对独立血液透析中心定义、资格认定、结构布局、管理规程和人员资质等要求。 二是对血液透析质量管理和持续改进提出要求。2020版操作规程中新增了血液透析医疗质量管理和持续改进内容，血液透析医疗质量管理从医源性感染管理质控指标、血液透析质量质控指标、血液透析并发症管理质控指标和透析患者医疗质量管理指标四个方面提出要求，保证患者透析质量和安全。持续改进从组织结构、工作制度、实施规范和流程等方面提出要求。 三是对集中供液系统操作提出要求。2020版操作规程中新增了集中供液系统操作规范内容，将集中供液系统划分为集中供浓缩透析液系统和集中供透析液系统两大类，分别对其配制室、设备安装、培训、验收、透析液配制、清洗消毒和质量管理等提出要求。 四是对血管通路的类别进行细化。2010版操作规程中将中心静脉导管置管术分为临时和长期两种置管术。2020版操作规程中将中心静脉导管置管术分为无隧道无涤纶套中心静脉导管置管术和带隧道带涤纶套中心静脉导管置管术两
种。新增对血管通路的监察和监测、介入治疗等内容。 五是对血液透析患者并发症进行细化。2020版操作规程中增加对血液透析患者常见并发症的诊治，包括高血压、中低血压、心律失常、心率衰竭、心源猝死、脑卒中、贫血、骨异常、高尿酸血症等并发症的预防和治疗。 六是对附录进行细化。2020版操作规程中增加透析器（滤器）重复使用知情同意书、门诊血液透析治疗病历首页血液透析（滤过）记录表单、血液净化治疗患者传染病报告表单、无隧道无涤纶套中心静脉导管置管的标准操作流程图、带隧道带涤纶套中心静脉导管置管的标准操作流程图和血液透析技术医疗质量控制指标的计算公式等附录。
化验室化学试剂管理规定 1.范围和目的 本规程适用于品检科所有化学试剂以及配制试剂。 制定本规程的目的是为了建立化验室化学试剂的购买、接受、储存、发放、使用、销毁使用管理规程，使化验员能正确地使用试剂，保证化验工作质量。 2.化学试剂的购买： 技术员根据库存量及化学试剂检验需要量提出购买计划，经化验室负责人审核，公司厂长批准，交供应科采购员购买。 3.化学试剂的入库 购买后由采购员直接交给仓库管理员并办理入库手续。 技术人员根据购买计划办理出库手续并通知化学试剂管理员到出库接受。 化学试剂管理员先检查包装的完好性，封口是否严密,试剂无泄漏，标签是否粘贴牢固无破损，内容清晰,贮存条件明确，瓶签已部分脱胶的，应及时用胶水粘贴。无标签的试剂不得入库。严格按采购计划单内容，逐一核对。 化学试剂保管员必须每天检查一次温湿度表并记录。超出规定范围的应及时调整。 无标签的试剂应予销毁。 4.化学试剂的领用 化验员根据检验需要量提出领用要求。 化学试剂管理员根据化验员的要求发放化学试剂，并填写化学试剂领用记录。 5.化学试剂贮存 原装化学试剂贮存环境 55 5 55℃,相对湿度以45-75%为宜。 5应有良好的通风设备。 化验室内化学试剂的贮存 5 配制好的化学试剂应存放于试剂架上。性质不稳定的配制试剂应根据不同的性质存放，如放在阴暗处、冰箱等地方。使用化学试剂的过程中应特别注意其外观的变化。 配制化学试剂一般贮存1~2个月为宜,过期不得使用,须重新配制。在使用过程中发现有沉淀的，亦不得使用。 55需要冷藏保存的化学试剂应放在冷藏箱内保存。 易潮解、易失水风化、易挥发易吸收、二氧化碳、易氧化、易吸水变质化学试剂，需密闭保存或蜡封保存,应存放试剂柜下部柜中,平时应关门上锁；。 易爆炸品、易燃品、腐蚀品应单独存放,平时应关门上锁,剧毒品用后归还专用库（柜）。某些高活性试剂应低温干燥贮放。 保持室内清洁,通风和温湿度应符合规定。 每日检查一次消防灭火器材的完好状况,保证随时可以使用。