本篇主要是利用vue-cli来搭建vue项目，其中前提是node和npm已经安装好，文章结尾将会简单提到一个简单的例子。使用vue-cli搭建项目最开始我也是看网上的教程一步步搭下来，所以其中的一些步骤说法为了表达正确会进行一定参考。
一、 项目使用技术、框架简单介绍
我们使用vue-cli来搭建整个项目，vue-cli就是一个脚手架，步骤很简单，输入几个命令之后就会生成整个项目，里面包括了webpack、ESLint、babel很多配置等等，省了很多事。根据小高之前给的要求以及结合DSS项目中的经验，我们今天搭建的项目结构组成为：
Vue+ ESLint + webpack + iview+ES6
Vue: 主要框架
ESLint: 帮助我们检查Javascript编程时的语法错误，这样在一个项目中多人开发，能达到一致的语法Webpack: 设置代理、插件和loader处理各种文件和相关功能、打包等功能。整个项目中核心配置iview: 是基于vue的一套样式框架，里面有很多封装好的组件样式
ES6: 紧跟时代潮流，使用ES6语法，利用babel处理。
二、 安装vue-cli
1. 打开cmd ,敲入命令：
npm install --global vue-cli （–global：全局安装）
2. 安装好之后打开C:\Users\Administrator\AppData\Roaming\npm 可以看到这个文件夹下
已经有相关的脚本文件，如图：
此时vue-cli已经安装好啦，往下走
三、 创建项目
1. cmd打开自己的项目工作空间，然后敲入命令：
vue init webpack test（其中test为我的项目名称）
2. 然后终端会出现下图“一问一答”模式，如图：
这里有几个需要说明一下，没说明的直接回车选择默认就好，对项目没多大影响，很傻瓜式：
“Project name”：这个是项目名称，默认是输入时的那个名称，想改的话直接输入修改，也可以直接回车
“Install vue-router”:是否需要vue-router，这里默认选择使用，这样生成好的项目就会有相关的路由配置文件
“Use ESLint to lint your code”:是否使用ESLint，刚才说了我们这个项目需要使用所以也是直接回车，默认使用，这样会生成相关的ESLint配置
“Setup unit tests with Karma + Moch?”: 是否安装单元测试。由于我们现在还没有单元测试，所以这里选择的是”N”，而不是直接回车哦
“Setup e2e tests with Nightwatch”：是否安装e2e测试，这里我也同样选择的是“N”
这几个配置选择yes 或者 no 对于我们项目最大的影响就是，如果选择了yes 则生成的项目会自动有相关的配置，有一些loader我们就要配套下载。所以如果我们确定不用的话最好不要yes，要么下一步要下很多没有用的loader
3.全部选择好回车就进行了生成项目，最后生成的目录结构如下图：
此时项目已经基本搭建完成。接下来和大家说明一下目录结构~
四、 目录结构说明
1. build 文件夹：
如上图，这个文件夹主要是进行webpack的一些配置，就我个人觉得啊~对我们最有用并且可能会使用的就是webpack.base.config.js、webpack.dev.config.js、webpack.prod.config.js三个webpack的配置文件，分别是基本webpack配置、开发环境配置、生产环境配置。实际上这些文件里面的内容，一些简单的配置都已经有了，包括入口文件、插件、loader、热更新等都已经配置好了。我们要做的只是根据自己的项目有什么loader需要增加的，比如生成环境需要加上UglifyJsPlugin插件等可以自行配置，或者一些插件增加或者不需要的删除，其实都是和业务相关了，其他的都可以不需要动。
2. config 文件夹：
如上图，这几个配置文件我觉得最主要的就是index.js 这个文件进行配置代理服务器，这个地方和我们息息相关，和后台联调就是在这里设置一个地址就可以了。打开index.js 找到“proxyTable“这个属
性，然后在里面加上对应的后台地址即可，例如：
3. src文件夹：
这个文件夹是整个项目最主要以及使用频率最高的文件夹。
“assets”: 共用的样式、图片
“components”: 业务代码存放的地方，里面分成一个个组件存放，一个页面是一个组件，一个页面里面还会包着很多组件
“router”: 设置路由
“App.vue”: vue文件入口界面
“main.js：对应App.vue 创建vue实例，也是入口文件，对应webpack.base.config.js里的入口配置4.static 文件夹：
存放的文件不会经过webpack处理，可以直接引用，例如swf文件如果要引用可以在webpack配置对swf 后缀名的文件处理的loader，也可以直接将swf文件放在这个文件夹引用
5.package.json:
这个文件有两部分是有用的：scripts 里面设置命令，例如设置了dev用于调试则我们开发时输入的是npm run dev ；例如设置了build 则是输入 npm run build 用于打包?另一部分是这里可以看到我们需要的依赖包,在dependencies和devDependencies中，分别对应全局下载和局部下载的依赖包
五、 下载依赖包
上一步我们已经生成好项目，现在打开之前说过的package.json 文件，找到devDependencies 和 dependencies ，在这里面可以删掉我们不需要的，其他就则都需要使用 npm install 下载安装，例如vue： npm install vue –save-dev
这个过程会生成一个node_modules 文件夹，这一个过程可能会有一点耗时间，但是也是傻瓜式，一个个下载，下载好之后输入npm run dev 。如果有哪些缺漏的都会提示再补下载就好了
六、 npm run dev
当所有依赖包都下载好之后，输入命令：npm run dev 运行就可以看到一个自带的默认页面打开。此时项目就已经全部搭建好并且运行了~炒鸡简单吧，总结下来其实只有四步
npm install --global vue-cli 下载vue-cli脚手架
vue init webpack test 生成项目，形成基本结构
npm install 依赖包
npm run dev 运行
我们接下来要做的就是业务相关的了，vue 就是一个个组件往里面加就可以了。
一个简单的vue项目
在上面的基础我写了一个简单的vue项目，主要改动的文件如下：
1. build/webpack.base.config.js
进行loader的配置，以及有一个iview的css文件不进行babel的处理，如下
1. src/router/index.js: import引入组件文件，根据vue-router写上相应的路由配置3.src/components:
业务代码集中地，我做了一个简单的，只有三个组件。然后在每个组件中又分成几个组件构成，具体的语法需要自行学习vue
另外这个开发过程需要注意的是我们这个项目是遵循ESLint规则，所以可能运行的时候会报一些错误，但是大多数都是和缩进、空格之类有关的，按照提示修改即可。
EXCEL之手把手教你如何做合同明细表摘要：EXCEL 合同明细表目录链接 目录 1. EXCEL合同台账的管理作用 2. 合同台账框架 2.1 目录表 2.2 单个合同明细表 2.3 空模板 2.4 下拉箭头清单 3. 合同台账中使用的EXCEL的功能及作用 4. 操作流程 4.1空模板页面和下拉菜单制作 4.2新建合同文档 4.3 合同执行阶段数据录入 4.4 合同执行完毕
以下为正文： 1. EXCEL合同台账的管理作用 1.1 统一企业的EXCEL合同台账格式，方便录入各项合同数据；1.2 建立合同目录清单，分类罗列，执行状态一目了然； 1.3 动态登记合同执行过程中的每一个数据，促进合同执行和合同数据高度统一； 1.4 合同执行完毕后，打印作为合同封面留底，便于查看或审核书面合同执行情况； 1.5 本文只针对企业的采购合同做管理台账，如有需要，可根据此模板制作企业的销售合同台账。 2. 合同台账框架 2.1 目录表 2.1.1 作用：合同的清单，并可实现分类呈现和汇总； 2.1.2 格式如下：
2.2 单个合同明细表： 2.2.1 作用：合同的清单，记录合同的各项静态信息，在执行过程中，记录每一条合同的动态信息，； 2.2.2 格式如下：
2.3 空模板： 2.3.1 作用：新增合同时，以此合同为空白模板复制建档； 2.3.2 格式如下：
2.4 下拉箭头清单 2.4.1 作用：作为部门、费用类别、合同类别下拉清单设置用途； 2.4.2 格式如下：
3. 合同台账中使用的EXCEL的功能及作用 3.1 超链接：用于文档页面间转换，便于目录和单个合同股明细来回的切换； 3.2 移动或复制：用于文档复制，新建合同清单，复制空模板，建立一个新的模板格式的页面： 3.3 定义名称：设置下拉菜单的清单时，可以跨页面使用； 3.4 if函数：用于判断合同执行的状态； 3.5 查找替换：用于设置跨页面取数公式时，替换公式中的一部分数据。 4. 操作流程
Primer 5.0搜索引物： 1.Primer Length我常设置在18－30bp,短了特异性不好，长了没有必要。当然有特殊要求的除外，如加个酶切位点什么的。 2.PCR Product size最好是100－500bp之间，小于100bp的PCR产物琼脂糖凝胶电泳出来，条带很模糊，不好看。至于上限倒也不必要求苛刻。 3.Search parameters还是选Manual吧，Search stringency应选High，GC含量一般是40－60％。其它参数默认就可以了。 4.搜索出来的引物，按Rating排序，逐个送Oligo软件里评估。当然，搜索出的引物，其扩增产物很短，你可以不选择它，或是引物3端≥2个A或T,或引物内部连续的G或C太多,或引物3端≥2个G或C，这样的引物应作为次选，没得选了就选它。对于这样的引物，如果其它各项指标还可以，我喜欢在引物末端去掉一个不满意的或加上一个碱基，看看引物的评估参数有没有变好点。 Oligo 6.0评估引物： 1.在analyze里,Duplex Formation不管是上游引物、下游引物还是上下游引物之间，The most stable 3’-Dimer绝对值应小于4.5kcal/mol, The most stable Dimer overall绝对值一般应小于多少kcal/mol跟PCR退火温度有关，我几次实验感觉在PCR退火温度在65°的时候，The most stable Dimer ove rall 6.7kcal/mol没有问题。 2.Hairpin Formation根据黄金法则 3.False priming sites: Primer的priming efficiency应该是错配地方的4倍左右，更多当然更好。 4.在PCR栏，个人感觉其所显示的optimal annealing temperature数值值得参考。在PCR摸索条件的时候，退火温度为其数值加减2的范围就可以了。 5.Internal stability很重要：我们希望引物的内部稳定性是中间高、两边低的弧形，最起码保证3端不要过于稳定。下图1引物3端过于稳定，很容易导致不适当扩增。△G参照黄金法则，这其实很好理解：把一滴水放到大海里，这滴水就会不停的扩散分布，扩散的越厉害越稳定，所以△G绝对值越大结构越稳定。 最后说一句，敢于尝试就会成功。 第二贴 －－科室工作很多，小医生了，没有办法，所以肯怕不能满足很多战友的要求（qq聊或帮助设计），在此表示抱歉。就楼上的问题我试着回答一下，不一定正确，供参考吧。 －－1、两个评价系统不一样，个人感觉oligo评价引物好点，primer出来的引物，我一般按效率排序，再结合退火温度和引物长度，选择引物到oligo测试。这是初步的选择，其实引物到了oligo里，退火温度也不一样。 －－2、3端的二聚体应该避免，这个要看你的退火温度决定，一个50°的退火温度肯定和65°对二聚体的影响不一样了，一般来讲尽量控制在－4.5kcal/mol以下（个人观点，很多东西真得还是需要自己摸索）。 －－3、个人感觉3端有A无A影响不大，3端有T的没有经验。有T是不是一定不行，个人感觉不见得。软件是评估，法则也不是没有例外，不是1＋1＝2那么确定。 －－4、错配和二聚体谁轻谁重，个人觉得“到致命的程度”谁都重要，我也说不好。我设计的时候，尽量两个都不得罪。 －－5、GC含量并非不重要，它直接影响引物各端稳定性，3端来两个G或C,稳定性就上去了，粘在模板上很牢。所以我设计的时候，尽量避免这样的情况出现。 谈一下我学这个引物设计的过程吧：
手把手教你做电影制片的预算 一般而言，电影预算是指电影拍摄的全部投资，包含影片剧本稿费，影片道具成本，影片拍摄成本，影片参与人员薪酬，影片后期制作成本，影片市场宣传成本，额外其他成本等。电影预算是影片投资的基础和重要参考依据，是电影管理和市场化运作的前提，高质量的电影预算是电影拍摄、制作、发行顺利进行的保障，是对投资方利益的保证。本文精选电影预算的相关概念及进行预算的相关办法为大家做相关知识普及。 电影预算是影片投资的基础和重要参考依据，也是电影管理和市场化运作的前提，高质量的电影预算是电影拍摄、制作、发行顺利进行的保障，也是对投资方利益的保证。 由于电影预算还设计很多财会知识的运用，在此，我们仅用两周时间，为大家简单介绍一下电影预算常规知识，并辅以好莱坞影片的预算细目作为范例。 一、什么是电影制片预算 电影制片预算，亦可称为电影成本预算(简称：电影预算)，指的是电影拍摄的全部投资，包含影片剧本稿费、影片道具成本、影片拍摄成本、影片参与人员薪酬、影片后期制作成本、影片市场宣传成本、和额外其他成本等。 二、电影制片预算的分类 总体来说，电影预算可以分为两大类：线上费用(above-the-line)和线下费用(below-the-line)。之所以要将线上费用和线下费用划分出来，是因为，线上费用的高低主要取决于主创团队的薪资，这也致使线上费用可产生的金额区间跨度很大;而相反，同一制作水准下的线下费用，则相对稳定，可预测性也较高。 1、线上费用| Above the Line 定义线上费用视具体影片而定，指的是在创造过程中自然衍生出来的费用。线上费用主要包括获取剧本或编写剧本的支出(编剧的雇佣费)、制片部门和导演的薪水、以及演员的薪资和额外报酬等;这些支出项目，也统称为“创造性元素(Creative Eleme nts)”支出。 范畴说明 从某种程度来说，“创造性”这个词用在这里，显得略微不够恰当;因为很多归属于线下费用的工种，也同样做着“创造性”的工作。而之所以做这样的划分，是因为从职业角度来讲，这两类费用支出还是存在着细微的区别的。 对于归属在线上费用的工种来说，这些人通常是根据他们在电影产业的现有地位而收取薪酬的，同时，他们也可能会参与影片最终利润的分成。因此，线上费用的估算，更多的要基于市场环境和主创团队受关注的热度。 主要支出项目
引物设计的11条黄金法则
PCR引物设计的11条黄金法则 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primerlength）常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应。 3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。 GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（meltingtemperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值
5~10℃。若按公式Tm=4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。 4.引物3′端要避开密码子的第3位。 如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。 5.引物3′端不能选择A，最好选择T。 引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T 时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。 6.碱基要随机分布。 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（Falsepriming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端
08 年第一期螺旋课堂--“荧光定量 PCR 技术”
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2007 年已悄然逝去，2008 年已向我们扑面而来。08 年是共和国发展的关键 一年，也是螺旋网抓住机遇，加快发展的关键一年。今年螺旋网将为各位螺友提 供大量的关于生命科学的讨论主题，让各位螺友对生命科学的灵感相互碰撞，达 到共鸣。还有螺旋网将联合一批一线生命科学人员为您的研究保驾护航。同时还 将为大家提供各种资源包括各类电子书、生命科学研究进展、生物软件等。 为此，螺旋课堂 08 年的课程将围绕着最新的研究方法、研究进展进行课程 设置。具体安排如下： 第一期：荧光定量 PCR 技术 第二期：原位杂交技术 第三期：引物的设计原理及方法 第四期：BAC 库的构建技术 第五期：手把手教你进行序列分析
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手把手教你用EXCEL制作可以计划与实际对比的动态甘特图 要制作动态的，可以进行计划与实际对比的甘特图，关键要解决两个问题： 1、计划时间与实际时间分成两行显示，这样才能够让甘特图的进度条也分成两行显示出来，实现计划与实际的对比； 2、使用数据透视表来查询，但是要解决透视表作为图表数据源时，如果发生变化，则图表也会错乱的问题。 下面是制作这种图表的步骤： 第一步、制作一个录入界面，同时用VBA将其保存到另一个作为数据库的表格中： 1、录入界面如下图所示：（注：录入界面中，计划时间与实际时间可以在同一行中。） 2、作为数据库的表格如下图所示：（注：本表需要做成可以方便地生成数据透视表的二维表格，并且，这一步是关键步骤，要在这一步通过VBA把录入界面的数据在此时把计划时间、实际时间分成两行显示。）
第二步、根据数据库生成几个数据透视表，其结构略有不同，自己根据需要进行调整（注：此处要使用OFFSET函数定义好上面数据库表中有效数据的范围。）： 数据范围=OFFSET(项目进度数据库!$A$1,,,COUNTA(项目进度数据库!$A:$A),COUNTA(项目进度数据库!$1:$1)) 1、单项目查询：
2、多项目查询： 3、各项目汇总查询：（只显示每个工程项目的总时间，不显示明细时间）
第三步、制作一个辅助表，用简单的公式把上述几个数据透视表对应起来，所谓简单，即本sh eet 中某一格=透视表中某一格，但要注意如果透视表中的空白格，可能会显示为0，所以用IF函数作些调整，如 IF(C1<>"空白",单项目查询!$A$1,"")：
到了这一步，制作甘特图所需的数据表格已经基本完成了。接下来要准备好制作甘特图所需的数据源。 第四步、用OFFSET函数把甘特图所需的进度条1、2、3、4，Y座标轴名称（就是在图上显示的工作内容），甘特图的总数据范围定义好： 图表_进度条1 =OFFSET(制图辅助!$C$1,1,1,COUNTA(制图辅助!$C:$C)-COUNTIF(制图辅助!$C:$C,"空白")-1) 图表_进度条2 =OFFSET(制图辅助!$C$1,1,2,COUNTA(制图辅助!$C:$C)-COUNTIF(制图辅助!$C:$C,"空白")-1) 图表_进度条3 =OFFSET(制图辅助!$C$1,1,3,COUNTA(制图辅助!$C:$C)-COUNTIF(制图辅助!$C:$C,"空白")-1) 图表_进度条4 =OFFSET(制图辅助!$C$1,1,4,COUNTA(制图辅助!$C:$C)-COUNTIF(制图辅助!$C:$C,"空白")-1) 图表_进度图Y轴名称 =OFFSET(制图辅助!$C$1,1,-1,COUNTA(制图辅 助!$C:$C)-COUNTIF(制图辅助!$C:$C,"空白")-1) 图表_制图辅助范围 =OFFSET(制图辅助!$B$1,,,COUNTA(制图辅助!$C:$C)-COUNTIF(制图辅助!$C:$C,"空白"),6) 第五步、用普通制作甘特图的方法制作出甘特图： 首先，创建图表大概样式。 在图表向导中，选条形图当中的堆积条形图，并按步骤逐步操作，相关需要选定数据范围的地方，输入上面定义好的名称：
怎么制作个人简历表格 篇一：手把手教您如何用word做个人简历 手把手教您用word修改、制作一个完整的个人简历 如果您自己不会设计模板，您可以自己到网上下载一个模板，但是一般情况下这个模板都不会太令人满意，也许因为内容太少，也许因为封面页不够清新。无论怎样，您只需要选择一个您喜欢的样式就好，然后本文章会教您如何根据这个样式将个人简历变成世界上独一无二的简历。如果您自己心中已经设想了一个漂亮的模板，但是对于某些word的技巧尚不能熟练掌握，那么这篇文章也可以帮助您。 现在，我以车辆工程专业为例，模拟一个学生制作个人简历的过程。 一、下载模板 注意问题：根据自己的专业性质选择适合的模板，一般都不能太花哨，此时您无需在意简历里面的内容是否与你想要填写的一致，也无需在意添加照片的位置是否刚好是一寸，也无需在意模板的封面页是不是太丑。 假如您心中的模板（以下称其为黑简历）应该包括以下内容： 但是您下载的中意的模板（以下称其为蓝简历）却是这样的： 所以您需要修改的内容包括：1、将蓝简历中基本信息对应的表格进行调整，并且加入放照片的框框 2、将蓝简历中后面每一个表格的标题更改成您希望的名称
注意：更改表格行列数、添加文字不难，但是添加之后表格会跳行，会出现表格之间间距不同导致不美观的问题，所以您必须合理安排每个表格的大小以及表格内文字的多少，使同一个表格尽量在一页里面，必要时交换两个表格的位置。二、删添模板内容 1、先不管放照片的地方。因为黑简历中个人信息有10项，所以我们先将蓝简历的基本信息表格制作成5行4列的样式，也就是删除后四行。 蓝简历变为： ()按住玫红框框里的标志，改变表格长宽，使其保持原来的长度，否则后面的表格会往上移，不美观。 现在再解决照片的问题，首先要添加列，但是如果您现在右击表格→插入→列（在右侧），您会发现表格变得很乱，并且添加的不是一列而是两列，原因是该表格最顶端还有一行（上图黑框区域所圈），这一行在您看来是为了美观，但它却有四列，且与下面没有对齐，导致添加列会出现异常，所以，建议删除该行，以后再添加。删除该行后再添加列，基本信息表格变为： 点击表格工具→合并单元格 现在存放照片的框框已经有了，但问题是照片不是刚好能放进去，如果您先添加图片再来调整框框的大小，您会发现这样行不通，因为图片无法任意移动。解决办法是：添加一个一寸大小的矩形形状，再将照片填充进去，最后根据装有照片的矩形的大小，来调整框框的大小，具体步骤：
play手把手教你创建一个博客项目10完整的应用程 序测试 现在，我们差不多终止了博客引擎的编码工作，但对项目来讲还没有完成，为了让我们的代码能够完全正确的工作，我们还需要对项目进行测试。 因此，我们之前差不多为yabe的模型层功能书写的单元测试，同时确信博客引擎的核心功能差不多进行了完好的测试，然而关于一个web应用程序来讲模型层只是其中的一部分，我们还需要确定web接口能否按预期的目标一样正常工作。也确实是讲还需要测试yabe博客引擎的操纵器层，甚至需要对UI自身进行测试，比如我们的JavaScript代码。 测试操纵器部分 Play提供了一种功能，确实是使用JUnit来直截了当测试应用程序的操纵器。我们把这些测试叫做‘功能性测试’，这是因为我们打算测试web应用程序的完整功能。 差不多上，一个功能性测试将直截了当调用Play的ActionInvoker，和一个HTTP 要求相似。因此我们需要给出一个HTTP方法、一个URI和多个HTTP参数。 Play 之后会路由这些要求，调用相应的action，同时回发到填写的响应（filled response）。之后，你就能够对之进行分析，以检查响应内容是否你所预期的。 import org.junit.*; import play.test.*; import play.mvc.*; import play.mvc.Http.*; import models.*; public class ApplicationTest extends FunctionalTest { @Test public void testThatIndexPageWorks() { Response response = GET("/"); assertIsOk(response); assertContentType("text/html", response); assertCharset("utf-8", response); } }
QPCR原理及应用 由于Real-time qPCR的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验，也基本上被real-time qPCR 所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测，很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测，不知从何入手；甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑，不知所措。 本文就从real-time qPCR的发展史说起，包括real-time qPCR的原理，实验设计，实际操作，数据分析，常见问题解答五个方面，手把手教你从各个方面了解real-time qPCR，彻底的从菜鸟到高手！ 一、Real-time qPCR发展史 Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于常规的PCR的缺点，real-time qPCR 由于其操作简便，灵敏度高，重复性好等优点发展非常迅速。现在已经涉及到生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析，SNP检测，等位基因的检测，药物开发，临床诊断，转基因研究等。 在Real-time qPCR技术的发展过程中，定量PCR仪的发展起了至关重要的作用。1995年，美国PE公司（已经并入Invitrogen公司）成功研制了Taqman 技术，1996年推出了首台荧光定量PCR检测系统，通过检测每个循环的荧光强度，通过Ct值进行数据分析。从而荧光定量PCR获得广泛应用。现在的定量PCR 仪有ABI7000、7300、7500，7700、7900HT、StepOnePlusTM、StepOneTM、PRISM@StepOneTM系列；BIO-RAD的CFX96、iCycler iQ5@、MyiQ@、MJ Research Chromo4TM Opticon 系列；Stratagene MxTM系列；Roche LightCycler@系列；Eppendorf Masercycler@；Corbett Rotor-GeneTM；Cepheid SmartCycler@和BIOER的LineGene系列。 随国内生命科学的快速发展，科研水平不断提高，发高水平文章已不再是新鲜事。与其同时，国内公司经过长期不懈的努力，也有自主研发的real-time PCR
01.创建项目 简介 在这个教程中你会学到用Play框架从头到尾的开发一个真实的Web程序。在这个程序中，我们将使用在一个真实项目中需要的所有技术，来介绍Play框架开发Web程序的实战技巧。 这个教程分为几个独立的部分。每个部分将介绍更多复杂的特性，并且提供真实项目的需求，包括数据验证、错误处理、权限框架、自动测试框架、Web界面接口、国际化等内容。 项目 我们决定创建一个blog项目。这不是一个有想象力的决定，但是这个项目能让我们学习到目前Web程序大多数的功能性需求。为了更有趣点，我们要处理不同角色的用户（editor，admin）。这个项目的名字称为yabe。 这个教程的源代码在Play安装目录下的samples-and-tests/yabe/目录。 先决条件 首先，确保计算机安装了Java，Play框架需要Java 5或以上版本。还有我们要使用命令行，最好使用类Unix操作系统。当然如果你使用Windows操作系统，Play框架也会工作得很好。要有Java和Web开发技术（比如：HTML, CSS and JavaScript）的知识，然而不必深入了解JEE的知识。Play框架是一个“全栈式”Java框架，提供和封装了你所需要的所有Java API，你不必知道怎样配置JPA实体或者部署JEE组件。当然还需要文本编辑器。如果你习惯用诸如Eclipse和NetBeans等Java IDE开发Play框架的Web程序是非常好的。然而使用一些诸如Textmate、Emacs或VI简便的文本编辑器来开发Play框架的Web程序也是非常愉快的。 安装Play框架 安装非常简单，下载最近的版本然后解压到任何路径。如果使用Windows，应避免在安装路径中有空格。比如c:\play ，而不能是c:\Documents And Settings\user\play。最好是把Play主目录加入到工作路径path，这样只需要在命令行输入play就可以使用Play框架
在专门的引物设计软件中，“Oligo”是最著名的。它的使用并不十分复杂，但初学者容易被其复杂的图表吓倒。Oligo 5.0的初始界面是两个图：Tm图和ΔG图；Oligo 6.0的界面更复杂，出现三个图，加了个Frq图。“Oligo”的功能比“Premier”还要单一，就是引物设计。但它的引物分析功能如此强大以至于能风靡全世界。oligo的下载和安装我就不多说了，打开oligo相信也无需多讲。打开oligo的页面如下： 单击file菜单再点open或点击“打开”快捷图标或者用快捷键“CTrl＋O”可打开下面的窗口：在打开的OPEN窗口内选择FreqSeq再点“打开”： 选择drosfr或者其它一个文件点击“打开”：
出现以下窗口，点击“window”再点击“Tile”： 出现以下窗口，图中显示的三个指标分别为Tm、ΔG和Frq，其中Frq是6.0版本的新功能，为邻近6至7个碱基组成的亚单位在一个指定数据库文件中的出现频率。该频率高则可增加错误 引发的可能性。因为分析要涉及多个指标，起动窗口的cascade排列方式不太方便，可从 windows菜单改为tile方式。如果觉得太拥挤，可去掉一个指标，如Frq，这样界面的结构同于Oligo 5.0，只是显示更清楚了： ?G值反映了序列与模板的结合强度，最好引物的?G值在5'端和中间值比较高，而在3'端相 对低（如图）。Tm值曲线以选取72℃附近为佳，5'到3'的下降形状也有利于引物引发聚合反应。Frq曲线为“Oligo 6”新引进的一个指标，揭示了序列片段存在的重复机率大小。选取引物时，宜选 用3'端Frq值相对较低的片段： 再点击Search再点“Fo'r Primers and probes”或使用快捷键F3：
手把手教你写项目方案 写在前面的话： 如果是已经系统学习过项目管理的童鞋请绕行，本文写给需要尽快上手写方案的童鞋，算是快速上手工具。 方案分很多种，有项目方案、策划方案、活动方案、商业企划书、公关方案、施工方案、解决方案、产品方案、运营方案、市场方案、配置方案等等，总的来说，将解决问题的办法和计划呈于案前都是方案。 从应用频率来说，项目方案需求最多，今天我们就来聊聊项目方案怎么写。写方案之前需要明白几件事情： 1、方案解决什么问题？ 通过沟通切实了解项目背景、项目目标是写好方案的前提，我们写的方案全部内容其目的就是要解决问题，如果问题都没弄清楚，是不可能提出相符的解决方案的。 比如：某大学开展一个课题，需要收集全国范围内23-28岁之间年轻人的收入数据。 看到这个问题我们先不忙提出解决方案，而是要就问题提出问题。 ●为什么要收集数据？ ●收入数据具体包括哪些字段，最近一年收入？上一年度收入？最近一月 收入？工资收入还是全部收入？ ●提供的数据需要怎么证明其真实性，需要收入证明？口头采集？银行查 询结果？ ●年轻人包括男的和女的？就业中和待业中的？ ●23-28岁包括不包括23岁和28岁？收集数据中是否要收集对方年龄 证明？
●全国范围内是具体到各省？各市？各县？还是下沉到各乡镇？ ●是按照就业所在地收集还是按照户籍所在地收集？是否需要提供他们 的户籍证明？ ●准备在多长时间内完成收集？ ●准备花多少预算来解决这个问题？ 上述问题都解决了，问题也就弄清楚了。 2、需求方有哪些要求？ 在明确了问题之后，我们还不能就此打住，因为能解决问题是一回事，能按要求解决问题是另一回事，所以我们要延伸出新的问题和需求方进一步确认，了解需求方在问题本身之外的要求。 还是1中的例子，我们要接着提问： ●最终数据的交付是什么形式？纸质版？U盘？邮件？ ●内容以什么形式提交？word？excel？还是数据库？ ●合作中是否需要阶段性提交项目成果？ ●搜集形式是否有要求？在线可不可以？线下可不可以？电话访问可不 可以？第三方提供可以不可以？ ●质量控制对方是否参与？实施过程对方是否参与？ ●合作过程中我们需要和哪些人进行对接？ ●这里就有了交付成果。 再做一点点思考 了解完上面这些问题之后，我们要回过头来研究一下，我们自己怎么解决上述问题。首先要考虑的是就解决问题本身我们要设计一个明确的流程，通常可以按照执行主体进行划分： 确定数据来源——取得数据、同时取得来源证明——数据整理——交付验收，这就是项目思路 这个时候我们需要考虑上述每个阶段分别需要什么人、多少人、什么设备、
年报操作指引 2017年度市场主体年报工作开始啦！ 具体时间：江苏省2017年度市场主体年报工作于2018年1月1日开始，6月30日结束。2017年12月31日前设立登记的市场主体，应当报送2017年度年报。 具体影响：企业未按时年报和公示信息隐瞒真实情况、弄虚作假，将被工商（市场监管）部门列入经营异常名录（满三年将被列入严重违法企业名单），并向社会公示影响其信用，在政府采购、工程招投标、国有土地出让、授予荣誉称号、银行贷款、企业招工、催收货款、办理房产抵押登记等工作中予以限制或禁入，并在各部门业务中联动受限，会因“一处违规”，而“处处受限”。 企业年报具体步骤（个体户步骤类似） 第一步：建议使用火狐浏览器，否则即使能进入年报填写，最终不一定能提交。
首先进入“常州市工商行政管理局官网主页”（https://www.doczj.com/doc/5d8713452.html,/），点击“国家企业信用公示系统（江苏）”（如下图所示红圈处）,再点击“年报入口”进入国家企业信用信息公示系统(江苏)主页(https://www.doczj.com/doc/5d8713452.html,/index.html)（如下图所示红圈处），点击“企业信息填报”，如下图所示红圈处，进入登录界面。
第二步：市场主体有两种方式登录公示系统进行年报。一种方式为“工商联络员”登录，另一种方式为电子营业执照登录。采取“工商联络员”登录方式的，如已注册过“工商联络员”，输入“统一社会信用代码/注册号”和“工商联络员身份证号”，凭手机验证码登录填报。未注册过“工商联络员”的企业，需指定一名负责本单位年报公示工作的工商联络员，先在公示系统按照页面提示进行“联络员注册”，注册成功后，回到登录页面进行登录。需输入统一社会信用代码、联络员身份证号码、验证码登录。验证码通过点击“获取验证码”按钮，发往注册的联络员手机号码获得，目前一个手机号24小时之内只能获取5个验证码；已通过登记机关领取电子营业执照的可以通过“电子营业执照”方式登录，输入PIN码和验证码即可。 已注册过“工商联络员”的市场主体若要更换原先注册的“工商联络员”的，必须在登录公示系统之前完成“联络员变更”，新任“工商联络员”需取得原“工商联络员”的注册信息（姓名、证件号码、手机号码等），经系统完成准确性和匹配性判断，校验后方能变更。
PCR引物设计的黄金法则 1. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。 GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm= 4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。 4.引物3′端要避开密码子的第3位。 如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。
5.引物3′端不能选择A，最好选择T。 引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。 6. 碱基要随机分布。 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（False priming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。 7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。 引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。 两引物之间也不应具有互补性，尤其应避免3′ 端的互补重叠以防止引物二聚体（Dimer与Cross dimer）的形成。引物之间不能有连续4个碱基的互补。 引物二聚体及发夹结构如果不可避免的话，应尽量使其△G值不要过
手把手教你做小型逆变器 [导读]我在这里教大家做的逆变器，和一般的逆变器不一样，这个逆变器是高频逆变器，一般用于驱动几百瓦的灯泡，能够轻易满足户外照明的用途。逆变器想要大功率就要用IGBT，我这里主要 关键词：ZVS逆变器场效应管 逆变器（inverter）是把直流电能（电池、蓄电瓶）转变成交流电（一般为220v50HZ 正弦或方波）。应急电源，一般是把直流电瓶逆变成220V交流的。通俗的讲，逆变器是一种将直流电（DC）转化为交流电（AC）的装置。 至于我在这里教大家做的逆变器，和一般的逆变器不一样，这个逆变器是高频逆变器，一般用于驱动几百瓦的灯泡，能够轻易满足户外照明的用途。逆变器想要大功率就要用IGBT，我这里主要讲的是用场效应管做逆变器。 嗯，为什么不用三极管，而用场效应管呢？原因就是： （1）场效应管是电压控制器件，它通过VGS来控制ID； （2）场效应管的输入端电流极小，因此它的输入电阻很大。 （3）它是利用多数载流子导电，因此它的温度稳定性较好； （4）它组成的放大电路的电压放大系数要小于三极管组成放大电路的电压放大系数； （5）场效应管的抗辐射能力强； （6）由于不存在杂乱运动的少子扩散引起的散粒噪声，所以噪声低。 而且今天教大家做的逆变器，不能用三极管做，只能用场效应管或IGBT。 这个逆变电路就是大家熟悉的ZVS（软开关电路）如下图。
这个电路特别在高效率，深受电子爱好者的称赞，原因是场效应管发热很少，几乎不发热。 原因就是软开关，至于ZVS就不多说了。 准备以下零件： 10K 1/4W 电阻 X2 470欧 3W电阻 X2 1N4007二极管 X2 12V稳压管 X2 1200V 0.3μ电磁炉电容 X2 磁环（电脑电源上有得拆） X1 1MM漆包线 1米 1.2M漆包线数米 接线端子2P（脚距5mm） 3个 接线端子3P（脚距5mm） 2个
手把手教你设计引物（图文并茂） 关键词：引物设计2014-05-14 10:33来源：丁香园点击次数：9911 不知不觉几年下来自己也快毕业了，感谢丁香园这些年来的帮助。没有什么可回报的东西，就发个帖教教新人如何设计引物吧，尽量做到手把手的教，图文并茂。 引物设计的帖子不少，以前很多战友会推荐Oligo、PrimerPremier、DNA man等等软件。这些软件设计完最后还是要去BLAST比对下，所以我教大家一种易懂实用的在线设计方法，觉得好的话请投个票。 就以人的PTEN基因为例，首先你要找到他的基因序列，如果你要用的是cDNA，就找它的mRNA序列。如果你要做的是DNA，就找DNA的序列。 以cDNA为例，普遍的一种方法是上PUBMED中GENE栏搜索找到cDNA那栏，但PUBMED 导出序列不太方便，我介绍个网站 https://www.doczj.com/doc/5d8713452.html,/index.html 1. 输入目的基因，进入 2.在左侧栏选择TRANSCRIPT，选择后进入
3. 选择PTEN-001中的TRANSCRIPT进入，点击左侧cDNA 4. 然后点击CONFIGURE THIS PAGE进入设置你要显示的内容
5. 除了第一栏SHOWEXONS选择YES外，其他的都选择NO，然后取个名字保存SAVE CONFIGURATION AS 6. 然后在左侧栏点击DOWNLOADVIEW AS RTF可下载你要的cDNA序列，这个文件可以用WORD打开，不同的颜色代表一个外显子间断
下载后打开的WORD
7. 然后根据可以根据你感兴趣的序列设计引物了，比如我在分别在第6和第7外显子分别设计上下游引物。选取并复制第6和第7外显子序列
呵呵，经验畅谈居的同志真给力啊！刚刚申精不到十分钟，就加精了！ 我们作为淘宝卖家，特别是一些鞋帽服装类的卖家，由于经营产品的特殊性，经常要在自家宝贝描述当中为宝贝的实际尺寸列举出具体的数据，以方便各位买家朋友对更好的挑选到自己适合自己的尺码。 根据我的观察，在淘宝店铺当中进行数据列举，主要有两种形式。我们先来看看几张在淘宝店铺当中找到的几个具有代表性的数据列举形式。 第一种形式，是纯文字列举。如图1所示。 图1 这种形式应该是最原始的一种尺码数据列举方式，在这里，我们只需要在编辑宝贝描述时，直接用文字键入，方便易行。这种方式也是很多小卖家正在使用的方式。 第二种形式，图片列举。如图2所示。 图2 这种形式就是先用一些辅助软件，制作表格，并在表格当中填充数据，其次将这个表格处理成图片，然后把这个图片上传到自己的图片空间当中，最后在编辑宝贝描述时，直接将这个图片从空间当中插入就行了。这种形式虽然麻烦一点，但从表现形式上看，这种方式显得很专业，至少在版面上很美观。并且
利用这种方式，还可以根据自己的需要，创造性的设计出很精美的表格，从而能更好的美化自己的店铺。如图3所示。 图3 当然，这里的创意是无限的，所制作的表格图片的样式也是无限的。这正是所谓只有想不到，没有做不到！ 但回过头来，我们再来审视一下这两种形式。 第一种形式简单方便，如果数据发生变化，我们可以随时进行修改，而不会增加任何操作，但这种形式对于我们店铺形象的推广没有多大的益处，毕竟不太美观。 第二种形式专业美观，不仅列举出了数据，还可以用丰富的表现形式来为自己店铺的形象增色不少，但这种形式可操作性不强，因为一旦我们的宝贝尺码数据发生变化，我们只能重新制作表格，生成图片，上传图片，最后编辑修改。如果店铺当中的宝贝数量多的话，那这种表格的制作任务就会令人望而生畏。这也是为什么有那么多的小卖家宁愿选择文字列举形式的一个非常重要的原因，毕竟店小，没有那么多的人手来处理这种事情，只有大卖家才会富余的人手来进行这种表格的处理。 那能不能把这两种数据列举方式的优点统一起来，让数据可以随时修改，并最大程度上以专业的形式呈现在我们面前，使鱼和熊掌两者兼得呢？ 我个人总是坚信，只要我们敢想，就一定可以做到。经过我的试验，我发现这种两者兼得的方式其实是存在的！ 在我家店铺当中目前正在使用经过我改良之后的数据列举方式，效果如图4和图5所示：
手把手教如何操作闲鱼赚钱项目，多一份副业多一份收入 目前比较主流的一个项目，我想大家应该都有了解。今天主要就想跟大家分享一些大咖的玩法，作为一个闲鱼新手玩家该如何去操作这些细节以及如何去运营这些账号，下面手把手的教你如何做好闲鱼项目。当然如果想操作的话可以找我（//3011654//）首先是账号的要求： 1.账号 必须是老号，注册在1年以上的老号，通过实名认证，芝麻粉授权。 原因就是闲鱼是淘宝旗下的一款二手产品交易市场，权重和支付系统都是共用的，所以你的淘宝账号权重，以及实人认证，都影响着闲鱼账号的权重。 解决了这个问题之后，就是账号的介绍与头像，写的一定要诚恳，头像一定要真实。这样的话，很多人打开主页之后，很直观的知道你是做什么的。 像这样的介绍，就非常接地气，而且头像的使用，也容易让人产生不错的好感。搞定了这一步之后，接下来就是产品。 2.产品定位 产品定位非常重要，一旦定位，不要随意更改了，因为产品杂乱无章的话，会影响到后续粉丝购买的精准度。 这一块有的定位于家常日用百货，海鲜类、水果类、农产品类。 不过按照目前的状况来看，水果类的茶农，更容易受到亲睐，因为已经是夏季了，很多家庭都对水果有着需求。 有需求就有市场，但是作为一个新账号，一点流量也没有，起步是最困难的，所以引流款就显得非常重要。 何为引流款？ 引流款指的就是，用低价，实惠，超值的产品，使顾客在关注产品的同时，能够进店铺去逛一下。 因为闲鱼系统默认，你发布的产品，浏览量越高，想要的越多，那么默认你为优质的卖家。 所以这点很重要。但是，起步是最困难的，一方面产品渠道难以解决，一方面，对于新手来说，不知道如何引流最有效，立竿见影。 接下来，我就给大家详细讲讲，那些卖出几万单的人，都在用的产品渠道。 3.产品渠道 对，就是我经常所说的货源集中地，1688这里面有着非常强大的功能，而且现在针对不同的流量渠道，为商家开辟了很多专场，有微供专场、源头直供、采源宝。 我们用到其中最重要的一个功能就是采源宝。点击打开微供专场，在轮播图片里面就可以找到采源宝。 然后，我们可以看到许多水果，里面品种繁多，但是我们在这里面选择产品，是有标准的。是需要有利润的，选择产品从3个方面考虑： 1、产品价格； 第一个原因不难理解，因为我们要加价，如果价格太高的话，超出了顾客的购物消费范围，那么这样的产品，是很难卖的。 2、库存； 第二个原因是为了账号安全，如果没货了，没能及时下架产品，那么对账号的影响是非常严重的。 3、重量。 第三个原因就是重量，闲鱼的人群属性，就是捡便宜，所以只有价格低，分量足，才能
由于Real-time qPCR的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验，也基本上被real-time qPCR所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测，很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测，不知从何入手；甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑，不知所措。 本文就从real-time qPCR的发展史说起，包括real-time qPCR的原理，实验设计，实际操作，数据分析，常见问题解答五个方面，手把手教你从各个方面了解real-time qPCR，彻底的从菜鸟到高手！ 一、Real-time qPCR发展史 Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于常规的PCR的缺点，real-time qPCR由于其操作简便，灵敏度高，重复性好等优点发展非常迅速。现在已经涉及到生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析，SNP检测，等位基因的检测，药物开发，临床诊断，转基因研究等。 在Real-time qPCR技术的发展过程中，定量PCR仪的发展起了至关重要的作用。1995年，美国PE公司（已经并入Invitrogen公司）成功研制了Taqman技术，1996年推出了首台荧光定量PCR检测系统，通过检测每个循环的荧光强度，通过Ct值进行数据分析。从而荧光定量PCR获得广泛应用。现在的定量PCR仪有ABI7000、7300、7500，7700、7900HT、StepOnePlusTM、StepOneTM、PRISM@StepOneTM系列；BIO-RAD的CFX96、iCycler iQ5@、MyiQ@、MJ Research Chromo4TM Opticon 系列；Stratagene MxTM系列；Roche LightCycler@系列；Eppendorf Masercycler@；Corbett Rotor-GeneTM；Cepheid SmartCycler@和BIOER的LineGene系列。 随国内生命科学的快速发展，科研水平不断提高，发高水平文章已不再是新鲜事。与其同时，国内公司经过长期不懈的努力，也有自主研发的real-time PCR仪器生产比如西安天隆科技公司的TL系列仪器。 二、Real-time qPCR概述 1. Real-time qPCR原理 实时PCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。一般来讲，定量PCR仪包括：实时荧光定量PCR仪主要由样品载台、基因扩增热循环组件、微