单核细胞增生李斯特菌
形态特征：
①革兰氏阳性的类球形杆菌
②大小约为0.4~0.5µm x 0.5～2.0µm
③两端钝圆
④在有些培养基中稍弯，单个、成V形或成对平行排列
⑤在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性
⑥兼性厌氧，无芽孢，一般不产生荚膜
⑦在20~25℃时以4根周毛运动，在37℃时只有较少的鞭毛或1根鞭毛
培养特性：
①需氧和兼性厌氧
②生长范围为2-42℃
③最适温度为35-37℃
④pH中性至弱碱性（pH9.6）
⑤在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。
⑥在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。
⑦在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
⑧在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。
⑨在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
生化特性：（甘露醇、木糖为阴性，其他为阳）
1.该菌触酶阳性，氧化酶阴性。
2.发酵多种糖类，产酸不产气。
发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。
不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。
3.不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。
4.吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。
5.MR-VP试验和精氨酸水解阳性。
生化试验：
①动力试验+
原理：有动力的细菌扩散生长，培养基浑浊，无动力的细菌培养基澄清。（结果：有动力，呈伞状生长，底为弯月牙形）
②过氧化氢酶试验（触酶试验）+
原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。（结果：汽包产生为+）
应用：葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
③MR-VP试验+
原理：葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸→pH4以下→（+甲基红指示剂）→培养基变红
V-P试验：葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇(强碱+V-P试剂)→二乙酰(胍基)→培养基变红
糖发酵试验
葡萄糖和麦芽糖发酵试验+
原理：有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸产气，培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（－），培养基仍为紫（蓝）色。（结果：黄+）
七叶苷水解试验+
原理：某些细菌（如类肠球菌）可水解七叶苷，生成葡萄糖和七叶素。七叶素可与培养基中的柠檬酸铁试剂的二价铁离子反应生成黑色化
合物沉淀，是培养基变黑。（结果：黑+，黄-）
甘露醇发酵试验-
原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，有的能分解多种糖类，有的仅能分解1~2种糖类，还有的不能分解。细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点鉴别细菌。（结果：黄+，绿-)
木糖发酵试验-
原理：某些细菌能利用D-木糖作为碳源。木糖本身有抗细菌和霉菌的功能，尤其是革兰氏阴性菌及白色念珠菌。(结果：黄+）
鼠李糖发酵试验+
原理：鼠李糖在细菌中以多糖或脂多糖存在与细胞表面。（结果：黄+）
24h
1℃，
国际标准ISO11290-1 第一版1996-12-15 食品和动物饲料微生物学---单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法第一部分 检测方法 目录 内容页次 1 范围 1 2 参考标准 1 3 定义 1 4 原理 2 5 培养基和试剂 2 6 设备和玻璃仪器 3 7 取样 3 8 取样前处理 3 9 步骤 3 10 结果表述7 11 检验报告7 附录 A 检验步骤图8 B 培养基和试剂的组成和配制9 C 亨氏证明试验16
食品和动物饲料微生物—单核增生李斯特氏菌检测和计数的水平方法 第一部分 检测方法 警告：为了保障实验室人员的安全，强烈推荐执行单核增生李斯特氏菌检验应在具备相应设备条件的实验室进行，在有经验的微生物专家控制下，保温后的一切丢弃物应小心处理。特别是，强烈推荐孕妇不能操作单核增生李斯特氏菌的培养。 1 范围 本ISO11290详细说明了单核增生李斯特氏菌检测和计数的水平方法。 限于简介中讨论的条件，本ISO11290适用于给人消费和作为动物饲料的产品。 2 参考标准 以下标准包含的条件；通过参照这些内容，组成了这部分ISO11290的条件。出版时，引用的这些版本是有效的。所有标准都需要修订，而各机构对本部分基于ISO11290的批准应鼓励调查和应用以下引用标准的最近版本。IEC和ISO成员保留目前有效的国际标准的注册。 ISO6887：1983，微生物学---微生物检验中稀释液制备的一般导则 ISO7281：1996，食品及动物饲料微生物学---微生物检验通则 3 有关定义 本部分ISO11290适用以下定义： 3.1 单核增生李斯特氏菌依据本部分ISO11290实施检验，在固体选择性培养基上形成典型菌落并呈现固有形态、生理生化特征的微生物。 3.2单核增生李斯特氏菌的检验依据本部分ISO11290实施检验，在给定产品的质量和体积的条件下，检验这些微生物的存在或不存在。 4.原理 在本部分ISO11290范围内，单核增生李斯特氏菌检验需要四个连续的阶段（见附录A检验流程图） 注意1：李斯特氏菌可能存在量少并与大量的其它种类细菌混杂，因此需要选择性富集。同时也必须检测受破坏的李斯特氏菌，初级选择性富集培养基，含有降
单核细胞增生李斯特菌培养方法 前言 本文档旨在介绍一种关于单核细胞增生李斯特菌 （L is te ri am on oc yt o ge ne s）的培养方法。这种培养方法可以帮助研究 人员在实验室中有效地培养和研究单核细胞增生李斯特菌，提供便利的实 验操作流程和相关规范。 材料和试剂 -培养基：大肠杆菌肉汤培养基（LB Br ot h）。 -平板培养基：L BA ga r平板。 -培养器具：试管、枪口鳌头瓶、平板培养基瓶。 -紧缩酶（R es tr ic ti o nE nz ym es）：用于D NA修饰。 步骤 1.准备试管：将适量的LB Br ot h培养基加入试管中，每株文化需要一 个试管。试管要标记清楚，以便记录。 2.孵育菌种：将单核细胞增生李斯特菌取出，置于L BA ga r平板上， 静置于37°C培养箱中孵育12-16小时。 3.菌种接种：从平板上挑取一小块单核细胞增生李斯特菌菌落，用枪 口鳌头瓶内的紧缩酶捉摄菌落悬液，均匀地滴入LB Br oth培养基试管中。 4.培养：将接种的试管放入37°C恒温培养箱中，培养12-16小时。 在培养过程中，营养条件适宜的单核细胞增生李斯特菌会迅速繁殖生长。 5.存储：选择健康生长、菌量适宜的菌株，用含有20%甘露醇的 L B Br ot h培养基制备菌液，并将其分装保存于枪口鳌头瓶中，并在- 80°C低温冰箱中保存，确保菌株的长期保存。 结论
本文档提供了一种针对单核细胞增生李斯特菌的培养方法。通过遵循上述步骤，我们可以在实验室中成功培养和研究单核细胞增生李斯特菌。这一方法的重要性在于为相关研究提供了可靠的实验操作流程，并且可以在不同实验室间进行标准化操作。希望本文档能够对相关研究工作者提供帮助，并促进单核细胞增生李斯特菌领域的研究进展。
李斯特氏菌 李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。李斯特氏菌 - 概况 李斯特菌 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。李斯特氏菌 - 特点 李斯特菌快速检测试剂盒 1、分布广：存在于土壤、水域(地表水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、鱼、鸟、野生动物、家禽。 2、生存环境可塑性大：能在2-42℃下生存(也有报道0℃能缓慢生长)能在冰箱冷藏室内较
单增李斯特菌的调查报告 一、单增李斯特菌的概述 生活中李斯特菌到处存在，但其中只有一种为致病菌。李斯特菌可从各种食品样本中分离出来包括乳制品、肉类、蔬菜和海鲜，也可从食品加工过程中的环境中分离而来。 李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。目前国际上公认的李斯特菌共有七个菌株：（1）单核细胞增生李斯特菌 (Listeria monocytogenes/L.mono) （2）绵羊李斯特菌 (Listeria iuanuii) （3）英诺克李斯特菌(Listeria innocua) （4）威尔斯李斯特菌(Listeria welshimeri) （5）西尔李斯特菌 (Listeria seeligeri) （6）格氏李斯特菌 (Listeria grayi) （7）默氏李斯特菌 (Listeria murrayi) 其中单增李斯特菌(Listeria monocytogenes/L.mono)是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。 在美国LM被列为7种主要的食源性致死病菌之一,已经被WHO食品安全工作计划列为重点检测的食源性病原菌之一。LM为需氧或兼性厌氧菌,生长温度为1~45℃,对不利环境具有较强的耐受能力,在4℃冰箱中也可生长繁殖,在pH 5.0~9.0的环境中, 1年后仍可检出,这使其危害性进一步增大。另外,LM病原体定居在细胞内,因此应用抗生素治疗效果不理想。由于LM引起的疾病及其食源性感染日益引起世界各国的重视,对该病建立快速、灵敏、准确的检测是有效防治本病、诊断病原菌和保证食品卫生安全的重要手段。 二、单增李斯特菌的检测方法 （1）平板培养法（国标）：用不同浓度的沙门菌菌悬液人工染菌二类食品各4o份，用增菌液两步增菌，两种分离培养基分离，对比检出率及分离效果。检出率62．5％，最低检出限为0.5cfu/25g一13cfu/25g。 （2）显色培养基：上海欢奥科贸有限公司 （3）PCR试剂盒：生物梅里埃的检测系统、杜邦：BAX?系统检测法，BAX?系统的单增李斯特菌检测法的灵敏度和特异性比率达到了98%，，并通过USDA-FSIS和AOAC国际的认证，成为官方检测法。 美国伯乐iQ-Check单增李斯特菌的检测：iQ-Check系统采用了所有的实时荧光PCR方法的优点为食品中病原微生物提供快速和可靠地检测解决方案。iQ-Check试剂盒为食品和环境样品中的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)定性检测试剂盒。 陆桥： 单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）荧光定量PCR检测试剂盒1680 48T 索奥： 单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
李斯特氏菌的检验 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南 非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发觉的，为纪念近代消毒手 术之父、英国生理学家约瑟夫李斯特（1827～1912），1940年被第 三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。单核细胞增生李斯特氏 菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染 后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然 界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的平安具有危急，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威逼人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必需加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证明是李 斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严峻的可引起血液和脑组织感染， 许多国家都已经实行措施来掌握食品中的李斯特菌，并制定了相应 的标准。 其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯 特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。 试验步骤 1. 增菌培育 将未开封的测试片贮藏在8℃的环境下，并在包装上标示的有效
期内使用。在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。取回的样品应在4℃下处理、存放和运输，假如是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。 取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培育4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，连续培育20h和44h.。 2. 分别 共培育24h和48h后，取EB培育物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培育24-48h，LPM平板在30℃培育24-48h。然后，把LPM平板放于解剖镜载物台上，以450角入射光从平板下面照耀平板，通过目镜垂直向下观看查找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对比。 已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。 加入七叶苷和Fe3 的LPM平板不用斜射光系统，选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落四周有一个黑色环，其它菌也可形成黑色环，但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相像。在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落，分别
乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果与分析 单核细胞（monocytes）是一类存在于人体血液和组织中的白细胞（leukocytes）。它们作为免疫系统中的重要成分，具有很强的吞噬能力 和免疫调节功能。李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏 阳性杆菌，它能够引起严重的人类食物中毒，尤其是婴儿和免疫缺陷患者。乳粉作为婴幼儿的主要食物，其安全性尤为重要。 为了对乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌的能力进行验证，可以进行以 下步骤： 1.材料准备: -乳粉样品 - 特定培养基（如Listeria Enrichment Broth） -李斯特氏菌（已知培养物） -离心管 -培养皿 2.试验步骤: a.预处理乳粉样品: -取适量的乳粉样品，加入适量的特定培养基 -将混合物在摇床上以适当速度摇匀 -使用离心机将样品离心，以除去悬浮的杂质 b.培养李斯特氏菌:
-取一定量的已知培养物，加入特定培养基中 -在适当的温度和湿度下，培养李斯特氏菌至适宜的生长期 c.接种乳粉样品: -取适量的乳粉样品，加入特定培养基中 -添加已培养的李斯特氏菌（适量）到乳粉样品中 -使混合物充分混合 d.孵化和观察: -将接种混合物接种到适当的培养皿中 -将培养皿置于适当的环境中（温度、湿度等） -在一定时间内观察培养皿中是否有李斯特氏菌的生长 3.结果与分析: 通过观察培养皿中的生长情况，可以得出以下结论和分析： -如果培养皿中出现了李斯特氏菌的生长，说明乳粉样品中存在单核细胞增生的李斯特氏菌能力。 -如果培养皿中未观察到李斯特氏菌的生长，说明乳粉样品中不存在单核细胞增生的李斯特氏菌能力。 -结果应与对照组进行比较，以确定是否存在显著差异。 需要注意的是，这是仅仅通过培养方法进行初步验证，不能判断乳粉样品的感染风险和食用安全性。为了更准确地评估乳粉中李斯特氏菌的存在和潜在传播风险，还需要进一步的实验和分析方法，如PCR检测、测定
食品单增李斯特菌检测研究国内外文献综述 目录 1.食品安全问题现状 (1) 2.单增李斯特菌存在现状 (2) 3.食源性致病菌的检测技术 (3) 参考文献 (4) 1.食品安全问题现状 由于恶劣的自然环境和时间的变化，人类的饮食生活习惯也发生了很大的变化。食品加工和销售方式也发生了很大的转折和变革，随着我国开展全球性的食品贸易迅猛增长，食品的流通速度加快，然而安全性下降，食物中毒的现象屡屡发生，食源性疾病的患者和发病率也呈现出明显的上升倾向[10]。无论是发达国家还是在发展中国家，食源性疾病已经极大地损害了人类的身体健康与生命安全，也对经济产生了重要的冲击。所以，食源性疾病已逐渐成为我们当前必须面对的严峻挑战[11]。 由于受到社会经济效益的驱使，食品企业在生产、销售中屡屡使用各种违规或其他非法的手段。比如，使用大量的剧毒性农药或者喷洒各种蔬菜、水果等方式进行除虫:或者使用瘦肉精等一些非违禁的激素进行饲养，从而增加瘦肉的产量;随意地使用一个吊白块的方式来添加新鲜的白面粉;把稻草水兑颜料+黄色的带绿勾盐作为酱油卖给企业获利的现象，不胜枚举。随着企业时代的不断进步和企业改革史的变迁，食品安全企业在批量生产和规模经营这个过程中产品规模的逐步扩大和不断普及以至我国食品安全贸易逐渐逐步呈现走向国际化，世界上所有国家和地区都在不断发生重大食品安全污染事件。例如，2006年比利时"二嗯英英事件"、英国"疯牛病"、日本的大肠杆菌0157:h7食物细菌中毒[12]，以及被人在我国广泛媒体曝光的安徽阜阳劣质生鲜乳制品("大头娃娃事件")、霉变菌中毒米、苏丹红鸭蛋污染事件、孔雀石虾等绿色海藻鱼虾的排放养殖和其他各类污染事件，都已经逐渐使得我国食品安全突出问题逐渐成为了社会众人广泛密切关注的一个热门话题，再次向人敲响了对我国食品安全领域存在突出问题的重要警钟。"民以食为天，食以安为先"已成为当今人类对食品质量最基本的诉求[13]。 对我国历年食源性疾病监测数据的分析表明，微生物引起的食源性疾病占疾病和事故总数的近40%，导致患者人数最多，占所有患者的一半以上[14]。而且
李斯特氏菌检测 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。 科标检测在微生物检测领域拥有丰富的经验，可以针对食品、医药、化妆品、农产品、一次性产品以及工业产品等进行微生物检测以及产品微生物污染分析，为客户提供快速、高效、权威的第三方微生物检测服务，保证产品质量安全，专业得到了国内、国际知名企业的广泛认可。 实验步骤 1. 增菌培养 将未开封的测试片贮藏在≤8℃的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。 取回的样品应在4℃下处理、存放和运送，如果是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培养4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，继续培养20h和44h.。 2. 分离 共培养24h和48h后，取EB培养物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培养24-48h，LPM平板在30℃培养24-48h。然后，把LPM平板放于解剖镜载物台上，以450角入射光从平板下面照射平板，通过目镜垂直向下观察寻找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对照。 已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。 加入七叶苷和Fe3 的LPM平板不用斜射光系统，选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落周围有一个黑色环，其它菌也可形成黑色环，但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相似。 在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落，分别划线于TSAYE平板上以得到更纯、更典型的单个菌落。食品检验中在TSAYE平板上纯化是必须的，因为在PALCAM和
单增李斯特氏菌及其检测方式 —、单增李斯特氏菌 单増李斯特氏菌，学名Usteria monocytogenes ,—种革兰氏阳性菌，是李斯特菌属。李斯特菌属(Listeria)共分为2个群，7个种：第一群包括单核细胞増生性李斯特菌(L monocytogenes , LM)(亦称产单核细胞李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L ivanovii)(亦称绵羊李斯特菌)、英诺克李斯特菌(Linnocua)(亦称无害李斯特菌)、丰氏李斯特菌(L welshimei)、塞氏李斯特菌(L seeligeri),第二群包括格氏李斯特菌(L grayi)和莫氏李斯特菌(L mulTayi)0其中，单増李斯特菌是唯一能引发疾病的人畜共患病的。它能引发人、畜的李氏特菌病，感染后要紧表现为、和单核细胞増多。 二、单增李斯特氏菌检测方式 1.细菌培育法 该菌营养要求不高，兼性厌氧，最适在含有C02的微需氧环境中生长，生长温度范围°＜：45。＜：, 最适温度为30°C-37°C ,能在一般冰箱冷藏室生长，是一种典型的耐冷性细菌，同时还具有耐盐性。LM 在一般琼脂平板上呈细小直径约、半透明露珠样菌落。在血琼脂平板上有P溶血环。在显色培育基上呈蓝绿色。 2.生化鉴定法 该菌要紧生化特性如下： ®触酶阳性； ②氧化酶阴性； ③发酵多种糖类； ④产酸不产宅；
⑤不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二塘； ⑥不利用枸檢酸盐，40%胆汁不溶解； ⑦D引嗥、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、乌氨酸均阴性； ® VP、甲基红实验和精氨酸水解实验阳性； ®对碱和盐抗击力强，60・70°C经5-20分钟可杀死，70%酒精5min. %石碳酸、％氢氧化钠、% 福尔马林20min可杀死此菌。 ⑩该菌对青霉素、氨苯青霉素、四环素、磺胺均灵敏。 3.血清凝集法 依照菌体抗原和鞭毛抗原，L M分为16个血清型：1/2比l/2b. l/2c. 3a. 3b、3c、4a、4ab. 4b. 4c、4d、4e、五、6a. 6b、7e抗原结构与毒力无关,对人致病的要紧为血清型l/2a. l/2b. 4b,占全世界本病病例约90%。 关于血清凝隼法用的诊断血清方面推荐天津生物芯片公司生产的单増李斯特氏菌全套诊断血清产品，该菌最多见的0:3,0:5,0:8和0:9型的诊断血清被纳入这套产品，详情如下: 二十三、单增李瞬菌诊断 血清
1、阪崎肠杆菌：阪崎肠杆菌是奶粉（乳）制品中新发现的一种致病菌。 研究表明婴幼儿配方奶粉是当前发现致婴幼儿、早产儿脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎的主要感染渠道,在某些情况下，由阪崎肠杆菌引发疾病而导致的死亡率可达40％～80%。 2、沙门氏菌：我国食源性疾病中细菌性食物中毒病例最为常见，其中 由沙门氏菌引起的中毒病例占70％-80％，而以肉、蛋、奶等畜产品被沙门氏菌污染所引起的中毒可占90％以上。该菌对人致病，引起肠伤寒，肠胃炎和败血症，也可能传染人类以外的其他多种动物。因此，目前对食品质量安全监控进行CMA（中国计量认证/认可）认证检测时，沙门氏菌的检测已成为了必检的卫生指标测定项目之一。 3、志贺氏菌：志贺氏菌属即通称的痢疾杆菌，细菌性痢疾是最常见的 肠道传染病,夏秋两季患者最多。传染源主要为病人和带菌者,通过污染了痢疾杆菌的食物、饮水等经口感染。志贺氏菌所致菌痢的病情较重，志贺氏菌侵入肠粘膜组织并释放内毒素引起症状。症状为剧烈腹痛、腹泻（水样便，可带血和粘液）、发热、里急后重显著。严重者出现痉挛和休克。 4、金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病 原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。 金黄色葡萄球菌引起的中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制
品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。 5、副溶血弧菌：副溶血弧菌对人和动物均有较强的毒力，其致病物 质溶血素、溶血毒，具有溶血活性、肠毒素和致死作用。副溶血性弧菌食物中毒也称嗜盐菌食物中毒，是进食含有该菌的食物所致，主要来自海产品或盐腌渍品，常见者为蟹类、乌贼、海蜇、鱼、黄泥螺等，其次为蛋品、肉类或蔬菜。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。主要病理变化为空肠及回肠有轻度糜烂，胃粘膜炎、内脏(肝、脾、肺)淤血等。 6、创伤弧菌：或称为海洋弧菌，是一种栖息于海洋中的细菌。如果伤 口暴露在含有这种细菌的海水中，创伤弧菌会在伤口上繁殖，可能引发溃烂，甚至导致组织坏死。若食用了遭误染的海鲜，也有罹患肠胃炎的可能。 7、大肠杆菌O：157：大肠杆菌0：157血清型属肠出血性大肠杆菌， 其引起的出血性腹泻，约2％～7％的病人会发展成溶血性尿毒综合征，儿童与老人最容易出现后一种情况。致病性大肠杆菌通过污染饮水、食品、娱乐水体引起疾病暴发流行，病情严重者，可危急生命。 8、霍乱弧菌：人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者，主要通过 污染的水源或饮食物经口传染。霍乱弧菌是人类霍乱的病原体,霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。属
食品中致病菌及其限量标准 1 食品致病菌的概念 食物污染后可在食品中生长繁殖并可引起人或动物疾病的细菌称为食品致病菌。食品致病菌可通过直接或间接途径污染食品及水源，人经口摄入可导致肠道传染病、食物中毒等食源性疾病的发生。食品中主要的致病菌有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧和致病性大肠杆等。 2 常见致病菌及其主要污染食品 1．沙门氏菌 沙门氏菌（salmonella）亦称沙门菌，是肠杆菌科的一个重要菌属，为革兰阴性杆菌，需氧或兼性厌氧，大多具有周身鞭毛，能运动，在7℃～45℃条件下均可生长，最适温度为35℃~37℃。沙门菌对干燥、腐败、日光等因素具有一定的抵抗力，在自然环境中可以生存数周或数月。多数沙门菌的宿主特异性极弱，既可感染动物也可以感染人，故易引起人类的食物中毒。沙门菌血清型很多，引起食物中毒最常见
是鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、都柏林沙门菌、德尔卑沙门菌、肠炎沙门菌等。 沙门菌可污染各种食品，尤其是动物性食品。其污染食品后一般无感官性状的变化故对贮存较久的食品，即使没有明显的腐败变质，也应注意彻底加热灭菌，以防引起食物中毒。 2．副溶血性弧菌 副溶血性弧菌（Vibrio Para hemolyticus）系弧菌科弧菌属，为革兰染色阴性的多形态杆菌或微弯曲弧菌，无芽孢。该菌嗜盐畏酸，在温度30℃～37℃，含盐3％～4％，pH值为7.4～8.2的培养基中生长良好，低于0.5％或高于8％盐水中停止生长。副溶血性弧菌存活能力强，在抹布和砧板上能生存1个月以上。 副溶血弧菌广泛存在于近岸海水、海底沉积物和鱼、贝类等海产品中，故海产品是引起副溶血性弧菌食物中毒的主要食品。另外，在盐分较高的腌制食品，如咸菜、腌肉等也可检出副溶血弧菌。 3．致病性大肠杆菌 大肠杆菌亦称大肠埃希氏菌（Escherichia），是人类和大多数温血动物肠道中的正常菌群，通常不致病。但也有某些血清型的大肠杆菌有不同程度的致病
牛李斯特菌脑炎的流行、诊断与防治 李斯特菌脑炎是大脑实质感染单核细胞性李斯特菌引起的一种疾病，偶见于饲喂青贮饲料的奶牛。最初引起发热，随后感觉过敏、有攻击倾向、转圈、撞头，伴有一侧或双侧上眼睑下垂的面部麻痹、干性角膜炎。一侧或双侧耳朵也可能受影响，偶尔第五和第七脑神经受影响，导致咀嚼和吞咽受损，食物阻塞于咽和口部。 1 病原学 单核细胞性李斯特菌是一种微需氧、革兰氏阳性、有鞭毛的球杆菌，存在于湿度范围较大的环境中，可感染人和多种家畜。李斯特菌病在牛群中零呈散发，其中多数病例与在冬季饲喂质量较差的、发酵的青贮饲料有关。牛、羊的发病年龄基本一致，一般为2~3岁，但是牛的易感性比羊低。牛群很少暴发李斯特菌病。 2 病理学 该病的发病机制与机体自口腔黏膜低级神经支沿着三叉神经支的向心路径有关。颅内的初始病变是脑桥后部出现小点状的坏死，这与小星形胶质细胞和星形胶质细胞活化后，单核细胞和少量嗜中性粒细胞进入神经无有关。最初的坏死点可能是单侧的，但后来发生扩散，导致中脑和其下的延髓出现双侧性的小脓肿。 3 诊断依据 病牛的直肠温度在38.5~39.2℃，食欲差，机体消瘦。泌乳牛奶产量明显下降，体重减轻。唾液少引发瘤胃损伤，出现腹痛、弓背及频繁的磨牙。当脑干出现多数脑神经核时，说明单核细胞性李斯特菌感染已经上升至三叉神经，以大量单侧脑神经缺陷为特征。此时，病牛表现为精神沉郁，某些病例向患侧转圈。也有同侧轻度偏瘫的症状，这时要注意与牛海绵状脑病时表现的共济失调相鉴别。 三叉神经核受感染后，颊肌麻痹，面部皮肤感受能力下降。面瘫时耳低垂，上眼睑下垂，唇松弛，偶然可见舌麻痹和下垂；当眼轮匝肌麻痹时，可导致暴露性角膜炎；颊肌和唇的功能失常会导致口部患侧流涎；损伤波及网状激活系统时，病牛精神沉郁。头倾斜向患侧的症状不典型。前庭蜗神经核受损后，病牛出现转圈运动。病牛经常有前冲倾向，可见头部向门里或饲槽下挤，甚至穿过隔间。奶牛会冲进挤奶室，前冲后突，造成混乱，经常闯入挤奶区域。当发现牛将头挤进饲槽下面等症状时，诊断要谨慎。因为有时会将面瘫归因于外伤，但后者不能解释单侧下颌功能异常和面部皮肤知觉丧失的原因。 第℃、X、℃对脑神经功能丧失后，病牛会出现鼾样呼吸和吞咽困难，如果在出现症状10~14d 后仍没有进行治疗，病牛会发生昏迷。单核细胞性李斯特菌引发脑膜脑炎时，脑脊液中蛋白质浓度有轻微升高，在0.8~2.0g/L范围内。 李斯特菌病常与饲喂青贮饲料有关，在临床症状的基础上，发现脑脊液蛋白质浓度升高，脑脊液中单核细胞增多，可怀疑发生李斯特菌病。同时要与耳前庭损伤、铅中毒、脑脓肿、牛海绵状脑病和神经性丙酮血症进行鉴别诊断。 从脑组织分离细菌需要冷聚集一段时间，但是应用神经组织病理学方法通常足以对疾病进行分类确诊。 4 治疗与预防 青霉素和磺胺三甲氧苄氨嘧啶是治疗的首选抗生素。应用青霉素进行治疗，最小剂量为4.4×104IU/kg，静脉注射，每天2次，连续应用至少10天。另外，第一天采用静脉注射青霉素4.4×104IU/kg，每天2次。建议第一天注射青霉素的剂量应高于3×105IU/kg，因为超过最小抑菌浓度的10~30倍，才会达到理想的治疗效果。 唾液缺乏，会导致脱水和代谢性酸中毒。在投胃管输送液体时必须特别谨慎，因为数天食欲
微生物检测技术培训总结 由于近年来李斯特菌越来越多的被要求出现在出口食品的检验报告中，为了提高广东个地方CIQ的李特斯菌检验水平，由广东商检局科技处举办了本次培训。 本次培训共分为三个部分： 第一部分：由华粤行邹黎明博士介绍当前国际上微生物检测最先进的设备、仪器及其功能。 1、常规菌落计数检测： 样品 样品稀释（自动稀释仪：样品不用准确称量，可自动稀释至所需倍数） 样品均质（均质机：一次性处理，混合均匀） 培养基/稀释液灭菌（全自动高压灭菌锅）制平板（全自动平板制作机：750皿/小时） 接种（螺旋接种仪：将样品浓度从0到10-3连续增大划螺旋线至一块平皿上） 培养（精密培养箱） 计数（自动菌落计数器：带电脑软件，拍照储存菌落形态，方便追溯） 鉴定（自动快速微生物鉴定仪：可鉴定2千种，细菌、霉菌、酵母） 2、在线检测： 空气：浮游菌采样器（采样量准确，标准空气采样器） 设备表面：生物荧光检测仪（25秒出计数结果，ATP卫生监测） 第二部分：由省CIQ科技处介绍李斯特菌的检测。 1、为什么强调李斯特氏菌检测的重要呢？ A、李斯特氏菌在自然界中分布很广，水、土壤、人和动物粪便中均可存在；在人群中 0.6~16%的人长期携带李斯特氏菌，70%的人可短期携带；在食品中李斯特氏菌主要存 在于生肉、水产、奶制品、生食中。 B、李斯特氏菌生长力很强，生长范围为2~42℃，20%盐水、pH3.8~9.6均可生长， -20℃条件可存活，可耐受反复冷冻，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。 C、李斯特氏菌致病性强：
李斯特氏菌属共包括七个种： 单核增生李斯特氏菌 绵羊李斯特氏菌 英诺克李斯特氏菌 威尔斯李斯特氏菌 西尔李斯特氏菌 格氏李斯特氏菌 默氏李斯特氏菌 其中单核细胞增生李斯特氏菌对人类致病性强，绵羊李斯特氏菌对人类也有一定的致病性，其余李斯特氏菌无致病性。在自然界李斯特氏菌主要以单核增生李斯特氏菌、绵羊李斯特氏菌、英诺克李斯特氏菌、威尔斯李斯特氏菌为主，以广州商检局为例，2001~2004年共检出： 李斯特氏菌检出单核增生李斯特氏菌检出 禽肉 22 12 冰激淋 1 1 奶制品 1 0 生肉 14 6 水产品 7 2 45 21 46.7% 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌，能引起人和牛、绵羊等动物的脑膜炎，可使家兔豚鼠等实验动物感染扣引起血中单核细胞增高，可引起婴儿及新生儿的化脓性脑膜炎或脑膜脑炎，死亡率可达70%。子宫内感染的新生儿可导致新生儿李斯特氏菌病、流产、死胎或习惯性流产。 因此为了保障实验室人员的安全，国际卫生组织强烈推荐执行单核增生李斯特氏菌检验应在具备相应设备条件的实验室进行，在有经验的微生物专家控制下，保温后的一切丢弃物应小心处理。特别是，强烈推荐孕妇不能操作单核增生李斯特氏菌的培养。 2、单核细胞增生李斯特氏菌的检验 现行的单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法主要有ISO11290、FDA BAM、 GB/T4789.30-2003、SN 0184-1993等，广州商检局的检验方法主要依据ISO11290结合最新的微生物快速检验方法给出。 检验步骤如下： 检样（25g/ml）
《吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》 一、任务来源 本标准对《食品卫生微生物学检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》地方标准进行制定。受吉林省卫生厅委托。项目编号：D BS22/019-2012。 1.承担及参加单位 本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心。 本标准主要参加单位：长春市预防控制中心。 主要起草人：刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇 2.标准制定的主要过程： ⑴确立标准制定的基本原则，比较与研究国内相关检验方法的文献报道，并结合大量的实验室方法的研究工作，制定出标准的讨论稿。 ⑵组织有关参加单位进行实验室比队验证工作，结合比队结果，找出实验过程存在的问题，汇总、分析数据，修改标准文本。 ⑶撰写《食品卫生微生物学检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》标准文本的《征求意见稿》和标准《编制说明》等材料。 ⑷把标准文本送给十位专家征求意见，汇总专家意见。根据专家意见对标准文本进行完善。 ⑸提交《食品卫生微生物学检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》（送审稿）《编制说明》供卫生厅审议。 二、本标准立项背景 单增李斯特氏菌已成了新兴的重要的食源性疾病的病原菌，近几年来，包括我国在内的许多国家相继出现因李斯特氏菌而引起的食物中毒暴发事件，并且正逐年上升。因此受到各国政府高度重视，纷纷制定策略,开展监督监测工作，
以便预防和控制该菌的污染、传播。 在我国已加入WTO的背景下，我国的食品安全质量将面临新的更大的挑战。为减少贸易壁垒，减少国家的名誉和经济损失，与国际接轨，提高检测能力，建立和研制发达国家公认的方法，势在必行。国外许多国家均建立了食品中的定量方法或原则，规定了各种食品的限量标准（如美国规定了食品中允许的水平下不能生长）。近些年中国对食品中的量化方法仍停留在科学研究上。根据中华人民共和国食品安全法的明确规定，国家要建立食品安全风险监测制度，对食源性疾病、食品污染以及食品中的有害因素进行监测。这就要求尽快建立科学可行的单增李斯特氏菌（）的定量检测方法。同时用定量方法对食品中的量化，制定各类食品中该菌的限量标准，与国际标准尽早接轨。建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法，为制定食品的限量标准，开展食源性李斯特氏菌病在食品中的危害的风险评估提供依据，从而更科学的评价食物链中的危害与人体健康风险的相关性，完善与强化国家的食品安全体系。 三、本标准的主要依据： 经查FDA、USDA和我国均无相应国家标准报告。 食品微生物学检验単增李斯特氏菌检验。 2.国内杂志公开报道的単增李斯特氏菌检验定量检验方法的文献。 四、增加的内容 本标准分为两种检测方法： 第一法：单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法 第二法：MPN计数法 其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品。 商品化鉴定系统的应用。该标准应用了Vitek GNI＋全自动微生物免疫分析仪）或API 1003试剂条1（法国生物梅里埃公司）或其他微量生化鉴定试条。这些方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用，鉴定效果很好。
DBS22 DBS22/019—2012 吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测 2013年发布 2013年实施 吉林省卫生厅发布
前言 本标准根据GB/T1。1—2000《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》的要求编写. 本标准分为两种检测方法： 第一法:单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法； 第二法：MPN计数法。 其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品。 本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心、长春市疾病预防控制中心. 本标准负责起草人:刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇
吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测 1 范围 本操作程序规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的定量检验方法. 本操作程序适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2。1 冰箱：2℃～5℃和—18℃. 2.2 恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃. 2.3 均质器。 2.4 显微镜:10×～100×. 2。5 电子天平:感量0。1 g。 2.6 锥形瓶:100 mL、500 mL。 2。7 无菌吸管:1 mL（具0。01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）。 2.8 无菌平皿:直径90 mm。 2。9 无菌试管：16 mm×160 mm.。 2。10 离心管:30 mm×100 mm. 2。11 无菌注射器:1 mL。 2。12 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）。 2.13 马红球菌（Rhodococcus equi）。 2。14 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3。1 含0。6％酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE)：见附录A中A。1. 3。2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）：见附录A中A.2。 3。3 李氏增菌肉汤LB(LB1，LB2)：见附录A中A.3。 3。4 1%盐酸吖啶黄（acriflavine HCl）溶液：见附录A中A。3.2。1。 3.5 1％萘啶酮酸钠盐(naladixic acid）溶液：见附录A中A.3。2.1. 3。6 PALCAM琼脂：见附录A中A.4。 3.7 革兰氏染液：见附录A中A。5。 3。8 SIM动力培养基：见附录A中A。6. 3。9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR）和V-P试验用]：见附录A中A。7。3.10 5%—8％羊血琼脂：见附录A中A.8。 3。11 糖发酵管：见附录A中A.9。 3。12 过氧化氢酶试验:见附录A中A.10。 3。13 李斯特氏菌显色培养基。 3。14 API listeria 10300生化鉴定试剂盒。