第一章
酶学与酶工程
1、酶学（Enzymology）研究酶的理论（basic principle, biosynthesis, property, modification-up stream process）。研究酶的结构与功能、酶的催化机制、酶反应动力学、酶的生物合成以及调节机制等的理论学科。
酶工程（Enzyme engineering）研究酶的生产与应用（production and application）。
2、酶工程研究的热点
a．基因工程和蛋白质工程
基因工程与蛋白质工程构建酶是十分诱人的领域：在30亿年生物进化中，只发现了1055种功能蛋白和酶，经计算300个氨基酸可组成不同序列的蛋白质有约10390种，因而在自然界，绝大多数新蛋白或酶仍未产生，有待人类去进行人工定向进化，创造开发新酶类，其中对大量天然蛋白质的DNA测序，建立大量蛋白质功能基因库，为杂交提供重要信息，通过计算机模拟，从头设计及合成全新的非天然有用酶已成为可能。此外，利用天然酶的多样性，通过靶子基因的定点突变噬菌体展示技术，结合化学修饰技术，赋予酶的新结构，新特性，改进酶的催化功能，可使酶制剂工业进入一个崭新的时代。
b．人工合成酶
人工合成酶（Synzyme）是合成具有催化功能的高聚物分子，目前使用分子印迹和生物印迹技术制备人工酶，原理与抗体酶过渡态理论大致相同，已经初步制备了具有蛋白酶功能，氧化还原酶催化功能的人工酶，人工酶亦可用于手性药物及化合物的分离纯化及生物传感器的分子识别，目前人工酶的催化转换数仍很低，需要多学科配合，对酶催化分子机理的深入了解，才会有可能在特殊反应中优于天然酶。
c．酶的定向固定化技术
优点：进一步研究蛋白质结构；且不影响酶的活性和催化功能
d．非水酶学（nonaqueous enzymology）
特点：绝大多数有机物在非水体系溶解度较高；与水中相比，非水系统内酶的稳定性较高；从非水体系内回收产物比水中容易。
e．糖生物学（glucobiology）和糖基转移酶（glucosyltransferase）
f．极端环境微生物的新酶种
已发现的极端生命形式包括嗜热菌(thermophiles)、嗜冷茵(psychrophiles)、嗜碱菌(alkaliphiles)、嗜酸菌(acidophiles)、嗜盐苗(halophiles)、嗜压菌(barophiles)等，来自极端微生物的极端酶(extremozymes)，可在苛刻条件下行使功能，将极大地拓展酶的应用空间，并是建立高效率、低成本生物技术加工过程的新基础，PCR技术中的高温Taq DNA聚合酶、洗涤剂中的碱性酌等都具代表意义。
g．不可培养微生物的新酶种
3、国内外酶制剂生产应用差异
a．规模：国外多公司重组；国内重复建设、效益低
b．投入：国外开发经费高达15%；国内研究开发投入仅占销售额的1%
c．开发重点：国外大力研制、开发新酶种和新用途；国内品种少，剂型少
对我国酶制剂生产的建议：走集约化、规模化经营；加大科研能力；发展具有自己知识产权的新技术；调整产品结构、大力开发新品种。
第二章
1、名词解释
阻遏作用：生物自我调节的一种方式。当某一最终代谢产物已大量存在时，有关生物就与调节基因发生相互作用使有关的酶停止进行合成此一产物的过程。
抑制作用：一些物质与酶结合以后，影响了酶与底物的结合及酶的转换数，从而改变了酶的活力，这种降低酶催化反应速度的过程称为抑制作用。
抑制率：
可逆抑制：抑制剂与酶以非共价键结合导致酶活力降低或丧失，用透析、超滤等方法能将抑制剂除去，从而恢复酶活力。分为：竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制。
不可逆抑制：酶制剂与酶活性中心的必需基团以共价键结合，从而是必需基团改变或构象改变，不能用透析、超滤等方法能将抑制剂除去而恢复酶活力。
2、习惯命名法和系统命名法的异同点
相同点：二者均用到按酶的作用性质分类这一原则，将酶分为六大类，分别命名为水解酶、氧化还原酶、转移酶、异构化酶、裂解酶、连接酶。
不同点：
习惯命名法
1.一般采用底物加反应类型而命名，如蛋白水解酶、乳酸脱氢酶、磷酸己糖异构酶等。
2.对水解酶类，只要底物名称即可，如蔗糖酶、胆硷酯酶、蛋白酶等。
3.有时在底物名称前冠以酶的来源，如血清谷氨酸－丙酮酸转氨酶、唾液淀粉酶等。
习惯命名法简单，应用历史长，但缺乏系统性，有时出现一酶数名或一名数酶的现象。系统命名法
鉴于新酶的不断发展和过去文献中对酶命名的混乱，国际酶学委员会规定了一套系统的命名法，使一种酶只有一种名称。它包括酶的系统命名和4个数字分类的酶编号。
原则：是以酶所催化的整体反应为基础，规定每种酶的名称应同时明确酶的底物及催化反应的性质。
例如：谷丙转氨酶（习惯名称）写成系统名时，应将它的两个底物“L-丙氨酸”“α-酮戊二酸”同时列出，它所催化的反应性质为转氨基，也需指明，故其名称为“L-丙氨酸：α-酮戊二酸转氨酶”。
酶的系统分类方法主要是根据酶催化反应的类型将其分成6大类，即氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂解酶类、异构酶类和连接酶类，分别用1,2,3,4,5,6来表示。再根据底物中被作用的基团或键的特点将每一类分为若干个亚类，每一个亚类又按顺序编成1,2,3,4等数字。每一个亚类可再分为亚亚类，仍用1,2,3,4等编号。
3、酶的组成和结构特点
虽然目前研究表明有些核酸分子只有催化活性，但绝大部分酶的化学本质是蛋白质，因此两具有一般蛋内质所具有的结构层次，其中一级结构是指蛋白质肽链的氨基酸残基的排列顺序。二级结构是指肽链中局部肽链的构象，包括螺旋(α—helix)、β折叠(β—sheet)、β转角(β—turn)和无规卷曲(random coils)，这些结构是完整肽链结构的结构单元，也是蛋白质复杂空间构象的基础。在肽链结构中，两个或几个二级结构单元被连接多肽连接起来，进一步组成有特殊的几何排列的局域空间结构，这些局域空间结构称为超二级结构，或简称Motif，几个或多个超二级结构组成复杂超二级结构后，常常与一些二级结构单元进一步组合，形成紧密的球形结构，称为结构域(structural domain)。三级结构是指蛋白质肽链中所有肽键和残基(包括侧链)间的相对位置。四级结构是指一些具有特定三级结构的肽链通过非共价键形成的大分子体系的组合方式。组成四级结构组分的肽链称为亚基。酶与其他蛋白质的不同之处就在于酶分子的空间结构上具有特定的具有催化功能的区域。
具有酶活性的蛋白质都是球蛋白，通常由几百个氨基酸组成，其作用的底物大多却为小分子，因此酶分子与底物直接发生作用的仅仅只有一小部分氨基酸侧链，这些与酶催化活性有
关的氢基酸侧链称为酶的活性中心。即酶活性中心是指酶与底物结合并使之反应的区域，一般位于酶分子的表面的裂缝或凹槽，往往是疏水区，可容纳一个或多个小分子底物或大分子底物的一部分，这就是酶的活性中心。
酶的活性中心由结合基团、催化基团组成：结合基团具有与底物特异结合的作用，催化基团则直接参与催化，可使底物敏感键断裂。结合基团和催化基团属于酶的必需基团。这些功能基团是一些在一级结构可能较远、但在空间位量上比较接近的一些氨基酸残基或基团，辅酶分子或其某一部分也可参与其中。
还有一些属于酶活性中心以外的基团，在维持空间结构、对酶活性的发挥方面不可缺少的氨基酸残基，也属于酶的必需基团。非必需基团虽然对酶活性没有贡献，但它们具合其他的生物学作用，如决定酶的专一性，或参与活性调节、免疫、分子识别等过程。
4、酶催化能力的表示方法
5、酶专一性的类别
a．键专一性：只要求作用于底物一定的化学键，而对化学键两端的基团无严格要求。b．基团专一性：不仅对作用的底物的化学键有要求，还对与该化学键两端的基团有要求。c．绝对专一性：仅仅催化一种底物的反应，而不作用与任何其他物质。
d．立体异构专一性：当底物具有立体异构体时，酶只能作用其中的一种，又分为旋光异构专一性和几何异构专一性。
6、酶调节作用的形式
酶活性的调节与酶浓度的调节
7、酶抑制剂的类别
a．按化学性质分：无机化合物类、有机化合物类
b．按照酶所催化反应的类型分：氧化还原酶抑制剂、转移酶抑制剂、水解酶抑制剂、裂解酶抑制剂、异构酶抑制剂和合成酶抑制剂
c．按对疾病治疗作用分：降血脂作用的酶抑制剂、降血压作用的酶抑制剂、抗血栓作用的酶抑制剂、抗肿瘤作用的酶抑制剂、HIV复制的酶抑制剂、抗炎症作用的酶抑制剂和其他种类酶抑制剂等等。
d．按与酶作用机制分类：不可逆抑制作用抑制剂、可逆抑制作用（竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制）
第三章
名词解释：
末端产物（尾产物）阻遏（end product repression）：在生物的生长发育过程中，原以一定速率合成某些酶，当这些酶催化生成的产物过量积累时，这些酶的合成就会受到阻遏，这就叫末端代谢产物阻遏，也称为反馈阻遏。
分解代谢产物阻遏（catabolite repression ）：是指有些酶，特别是参与分解代谢的酶，当细胞在容易被利用的碳源(如葡萄糖)上生长时，其合成受到的阻遏，这种现象也称为葡萄糖效应(glucose effect)。
1.简述酶的生物合成过程
生物体内酶的合成成为酶的生物合成。
2. 简述酶（蛋白质）工程的研究方法
酶在研究过程中既可作为研究的主体对象，又可以作为研究其他物质的工具，因此根据研究对象的不同可以将酶研究分为两种类型。第一种类型的酶研究，主要研究酶的最适温度、最适pH值、温度稳定性、PH值稳定性等酶自身的一些性质，是研究的主体对象；第二种研究类型是将酶作为工具来研究其他物质，例如研究发现一些酶属于糖蛋白，待往需要将蛋
白质结构中的糖基结构切下来，在切糖的时候可以选择采用化学法切，同时也可以采用糖肽酶切，如果采用糖肽酶来切，则糖肽酶在研究的过程中是作为一种工具酶来使用的。
3. 简述合成酶的优良菌种的特点
非致病菌，在系统发生上与病原体无关，也不产生毒素。这一点对食品用酶和医药用酶尤为重要；
菌种的遗传性能稳定，不易变异退化，不易感染噬茵体；
除蛋白酶生产茵种外，其他产酶菌种的产蛋白酶活力应该很低，防止目标酶的水解；
目标酶的产量要高，酶的性能符合应用需要，而且酶的提取简便，最好是产胞外酶的菌株；
能利用廉价原料．发酵周期短，容易培养。
4. 简述酶发酵过程中产生泡沫的原因
1、通气搅拌的强烈程度通气大、搅拌强烈可使泡沫增多，因此在发酵前期由于培养基营养成分消耗少，培养基成分丰富，易起泡。应先开小通气量，再逐步加大。搅拌转速也如此。也可在基础料中加入消泡剂。
2、培养基配比与原料组成培养基营养丰富，黏度大，产生泡沫多而持久，前期难开搅拌。
3、菌种、种子质量和接种量
菌种质量好，生长速度快，可溶性氮源较快被利用，泡沫产生几率也就少。菌种生长慢的可以加大接种量
4、灭菌质量
培养基灭菌质量不好，糖氮被破坏，抑制微生物生长，使种子菌丝自溶，产生大量泡沫，加消泡剂也无效。
5. 简述打破酶调节机制的方法
6. 简述动植物和微生物细胞的差异
动植物细胞比微生物细胞大得多；动植物细胞对剪切力敏感；动植物细胞生长速率与代谢速率低；动植物细胞对营养要求复杂
第四章
1、名词解释
Enzyme activity unit（U）:酶活力单位，一个酶活力单位指一定条件下单位时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量。
Specific activity：比活，每分钟每毫克酶蛋白在25℃下转化的底物的微摩尔数。
连续凝胶电泳：是以各种具有网状结构的多孔凝胶作为载体，缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应达到分离效果的电泳技术。
2、简述酶提取过程应该注意哪些问题
3、简述酶制剂保存中应该注意哪些问题
4、酶纯化的方法主要有哪些，简述层析分离的原理
离心分离、沉淀分离、过滤与膜分离、萃取分离、层析分离、电泳分离
层析分离是另混合液中各组分的物理化学性质（分子的大小和形状、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度分布在固定相与流动相中。当流动相流经固定相时，各组分以不同的速度移动，从而使不同的组分分离纯化。
酶可以采用不同的层析方法进行分离纯化，常用的有吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶层析和亲和层析等。
5、膜分离技术及在酶分离过程中的应用
膜分离是利用具有一定选择透过特性的薄层物质(即分离膜)，使溶液中一种或几种物质透过，而其他物质不能透过，从而达到物质分离纯化目的的技术。
6、简述聚丙烯酰胺凝胶的特点
(1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；
(2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶；
(3)对pH和温度变化较稳定；
(4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr（丙烯酰胺）纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；
(5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g
(6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；
(7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。
第五章
名词解释
酶化学修饰：在分子水平上对酶进行修饰，以达到改变酶的结构和性质的目的。
1、简述对酶化学修饰前应该注意哪些问题
(1)对酶性质的了解。主要包括对酶的活性部位、酶的稳定条件、酶反应最佳条件及酶
侧链基团性的了解。
(2)对修饰剂的要求。在选择修饰剂时考虑：①修饰剂的相对分子质量、修饰剂链的长
度对蛋白质的吸附性；②修饰剂上反应基团的数目及位置；③修饰剂上反应基团的话化方法与条件。一般情况下，要求修饰剂具有较大的相对分子质量、良好的生物相容性和水溶性、修饰剂分子表面合较多的反应基团及修饰后酶活的半衰期延长。
(3)对酶反应条件的选择。修饰反应—般总是尽可能在酶稳定条件下进行，尽可能少破
坏酶活性功能的必需基团。反应的最终结果是要得到酶和修饰剂的高结合率及高酶活回收率。因此选择反应条件时要注意：①反应体系中酶与修饰剂的分子比例；②反应体系的溶剂性质，盐浓度和pH条件；③反应温度及时间。以上的反应条件随修饰反应的类型不同而不同，需要经过大量义验才能确定。
2、酶分子的修饰方法
金属离子置换修饰、大分子结合修饰、肽链的有限水解修饰、酶蛋白侧链基团修饰、氨基酸置换修饰、物理修饰
3、修饰酶稳定性的变化
共三套 《酶工程》试题一： 一、是非题（每题1分，共10分） 1、酶是具有生物催化特性的特殊蛋白质。（） 2、酶的分类与命名的基础是酶的专一性。（） 3、酶活力是指在一定条件下酶所催化的反应速度，反应速度越大，意味着酶活力越高。（） 4、液体深层发酵是目前酶发酵生产的主要方式。（） 5、培养基中的碳源，其唯一作用是能够向细胞提供碳素化合物的营养物质。（） 6、膜分离过程中，膜的作用是选择性地让小于其孔径的物质颗粒成分或分子通过，而把大于其孔径的颗粒截留。（） 7、在酶与底物、酶与竞争性抑制剂、酶与辅酶之间都是互配的分子对，在酶的亲和层析分离中，可把分子对中的任何一方作为固定相。（） 8、角叉菜胶也是一种凝胶，在酶工程中常用于凝胶层析分离纯化酶。（） 9、α－淀粉酶在一定条件下可使淀粉液化，但不称为糊精化酶。（） 10、酶法产生饴糖使用α－淀粉酶和葡萄糖异构酶协同作用。（） 二、填空题（每空1分，共28分） 1、日本称为“酵素”的东西，中文称为__________,英文则为__________,是库尼（Kuhne）于1878年首先使用的。其实它存在于生物体的__________与__________。 2、1926年，萨姆纳（Sumner）首先制得__________酶结晶，并指出__________是蛋白质。他因这一杰出贡献，获1947年度诺贝尔化学奖。
3、目前我国广泛使用的高产糖比酶优良菌株菌号为__________,高产液化酶优良菌株菌号为___________。在微生物分类上，前者属于__________菌，后者属于__________菌。 4、1960年，查柯柏（Jacob）和莫洛德（Monod）提出了操纵子学说，认为DNA分子中，与酶生物合成有关的基因有四种，即操纵基因、调节基因、__________基因和__________基因。 5、1961年，国际酶委会规定的酶活力单位为：在特定的条件下（25oC，PH及底物浓度为最适宜）__________,催化__________的底物转化为产物的__________为一个国际单位，即1IU。 6、酶分子修饰的主要目的是改进酶的性能，即提高酶的__________、减少__________，增加__________。 7、酶的生产方法有___________，___________和____________。 8、借助__________使__________发生交联作用，制成网状结构的固定化酶的方法称为交联法。 9、酶的分离纯化方法中，根据目的酶与杂质分子大小差别有__________法，__________法和__________法三种。 10、由于各种分子形成结晶条件的不同，也由于变性的蛋白质和酶不能形成结晶，因此酶结晶既是__________，也是__________。 三、名词术语的解释与区别（每组6分，共30分） 1、酶生物合成中的转录与翻译 2、诱导与阻遏 3、酶回收率与酶纯化比（纯度提高比） 4、酶的变性与酶的失活
一、填充题 1、酶分子修饰生物法是通过基因工程的手段改变蛋白质，即基于核酸水平对 蛋白质进行改造，利用基因操作技术对DNA或mRNA进行改造和修饰以期获得化学结构更为合理的蛋白质。 2酶的固定化方法主要可分为四类分别为：吸附法、包埋法、 共价键结合法、和交联法。 3、吸附法是通过载体表面和酶分子表面间的次级键相互作用而达到固定目的的方法，是固定化 中最简单的方法。吸附法又可分为物理吸附法 和离子吸附法。 4、重氮法是将酶蛋白与水不溶性载体的重氮基团通过共价键相连接而固定化的 方法，是共价键法中使用最多的一种。 5、酶反应器有两种类型：一类是直接用游离酶进行反应，即均相酶反应器；另一类是应用固定化 酶进行的非均相酶反应器。 6、酶联免疫测定（即ELISA）的基本原理包括以下两点：（1）利用抗原与抗体的特异反应将待测 物与酶连接；（2）通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 二、名词解释 1、同工酶：同工酶的命名： 同工酶是指在生物体内或组织中催化相同反应而具有不同分子形式（包括不同的氨基酸序列、空间结构等）的酶，这种分子形式差异是由于酶蛋白的编码基因不同，或者虽然基因相同，但基因转录产物mRNA 或者其翻译产物是经过不同的加工过程产生的。 2、产酶促进剂：产酶促进剂是指在培养基中添加某种少量物质，能显著提高酶的产率，这类物质称为产酶促进剂。 3、酶活力：酶活力是指酶催化反应的能力，它表示样品中酶的含量。1961 年国际酶学会规定，l min 催化lμmol 分子底物转化的酶量为该酶的一个活力单位 ( 国际单位 ) ，温度为25 ℃，其它条件(pH 、离子强度) 采用最适条件。 4、溶菌酶:溶菌酶又称为胞壁质酶，是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶。溶菌酶是由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白，化学性质非常稳定。 三、简答题 1、酶学对食品科学有哪些重要性? 答：（1）酶对食品加工和保藏的重要性（2）酶对食品安全的重要性（3）酶对食品营养的重要性（4）酶对食品分析的重要性（5）酶与食品生物技术 2、在酶的纯化方法中，酶和杂蛋白根据它们的性质差异有哪些分离方法？ 答：酶和杂蛋白的性质差异大体有以下几个方面，它们的分离方法根据这个基础分为： (1) 根据分子大小而设计的方法。如离心分离法、筛膜分离法、凝胶过滤法等。 (2) 根据溶解度大小分离的方法、如盐析法、有机溶剂沉淀法、共沉淀法、选择性沉淀法、等电点沉淀法等。 (3) 按分子所带正负电荷多少分离的方法，如离子交换分离法、电泳分离法、聚焦层析法等。 (4) 按稳定性差异建立的分离方法，如选择性热变性法、选择性酸碱变性法、选择性表面变性法等。 (5) 按亲和作用的差异建立的分离方法，如亲和层析法、亲和电泳法等。 3、固定化酶有哪些优点？ 答：固定化酶的优点： （1 ）同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次地使用； （2 ）固定化后，和反应物分开，有利于控制生产过程，同时也省去了热处理使酶失活的步骤；
生物化学测试题及答案——诊断酶学 一、 A 型题 1. 转氨酶的作用需下列哪一种维生素（） A.烟酸 B.泛酸 C.硫胺素 D.磷酸吡哆醛 E.四氢叶酸 2. 酶促反应进程曲线通常可用于确定（） A. 酶反应线性范围 B. 适宜的 pH C. 适宜的酶量范围 D. 反应线性的时间范围 E. 底物的浓度 3. SI制中酶活性单位为（ ） A.U/L B.Katal C.g/L D.ml/L E.pmol 4. 下列哪一种辅因子的生成可通过测定340nm处吸光度的降低数来表示（） A.FADH2 B.NAD+ C.NADH+ D.FMN E.NADPH 5. 人体含 ALT 最丰富的组织是（） A.肝细胞 B.心肌 C.骨骼肌 D.红细胞 E.肾脏 6. 用 ACP诊断前列腺疾病时，为防止红细胞干扰，应加入何种抑制剂（） A.苯丙氨酸 B.L- 酒石酸
C.尿酸 D.EDTA E.L- 半胱氨酸 7. 为保证酶动力学分析，要求底物浓度必须是（） A.>Km值 10 倍以上 B. 与 Km值相同 C. 等于 1/2Km 值 D.<1/2Km 值 E.<1/10Km 值 8.LD 测定的全部方法中，所必需的物质是（） A.丙酮酸 B.2 ， 4- 二硝基苯肼 C.乳酸 D.NAD+或 NADH E.氢氧化钠 9. 急性心肌梗死时，最先恢复正常的酶是（） A.ALT B.LD C.CK D.AST E.ALP 10.血清肌酸激酶比色法，即利用磷酸肌酸 +ADP→肌酸 +ATP反应测定肌酸生成量，在试剂中加入半胱氨酸，其目的是（） A.激活剂 B.调整缓冲液的 pH C.维持缓冲液的 pH 稳定 D.提供 -SH E.提供高能磷酸基团 二、 B 型题 A.AST B.LD C.α - HBD D.CK E.ACP 1.急性心肌梗死时，最先恢复正常的血清酶是（） 2.对前列腺癌诊断价值最大的血清酶是（） A.LD2>LD1>LD3>LD4>LD5 B.LD5>LD1>LD2>LD3>LD4
年级2001 专业生物技术 一名词解释（每题3分，共计30分） 1.酶工程 2.自杀性底物 3.别构酶 4.诱导酶 5.Mol催化活性 6.离子交换层析 7.固定化酶 8.修饰酶 9.非水酶学 10.模拟酶 二填空题(每空1分,共计30分) 1.决定酶催化活性的因素有两个方面，一是，二是 。 2.求Km最常用的方法是。 3.多底物酶促反应的动力学机制可分为两大类，一类是，另一类是 。 4.可逆抑制作用可分为，，， 。 5.对生产酶的菌种来说，我们必须要考虑的条件有，一是看它是不是，二是能够利用廉价原料，发酵周期，产酶量，三是菌种不易，四是最好选用能产生酶的菌种，有利于酶的分离纯化，回收率高。 6.酶活力的测定方法可用反应法和反应法。 7.酶制剂有四种类型即酶制剂，酶制剂，酶制剂和 酶制剂。 8.通常酶的固定化方法有法，法，法， 法。 9.酶分子的体外改造包括酶的修饰和修饰。 10.模拟酶的两种类型是酶和酶。 11.抗体酶的制备方法有法和法。 三问答题(每题10分,共计40分) 1.固定化酶和游离酶相比，有何优缺点 2.写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理。 3.为什么酶制剂的生产主要以微生物为材料 4.下面是某人对酶测定的一些数据，据此求出该酶的最大反应速度和米氏常数。
10-6 10-6 10-5 10-5 10-5 10-4 10-4 10-2 酶工程试题（B） 一名词解释 1.抗体酶 2.酶反应器 3.模拟酶 4.产物抑制 5.稳定pH 6.产酶动力学 7.凝胶过滤 8.固定化酶 9.非水酶学 10.液体发酵法 二填空题(每空1分,共计30分) 值增加，其抑制剂属于抑制剂，Km不变，其抑制剂属于抑制剂，Km 减小，其抑制剂属于抑制剂。 2.菌种培养一般采用的方法有培养法和培养法。 3.菌种的优劣是影响产酶发酵的主要因素，除此之外发酵条件对菌种产酶也有很大的影响，发酵条件一般包括，，，， 和等。 4.打破酶合成调节机制限制的方有，，。 5.酶生物合成的模式分是，，， 。 6.根据酶和蛋白质在稳定性上的差异而建立的纯化方法有法，法和 法 7. 通常酶的固定化方法有法，法，法， 法。 8. 酶分子的体外改造包括酶的修饰和修饰。 9.酶与抗体的重要区别在于酶能够结合并稳定化学反应的，从而降低了底物分子的，而抗体结合的抗原只是一个态分子，所以没有催化能力 三问答题(每题10分,共计40分) 1.在生产实践中，对产酶菌有何要求 2.对酶进行化学修饰时，应考虑哪些因素 3.列出用共价结合法对酶进行固定化时酶蛋白上可和载体结合的功能团 4.某酶的初提取液经过一次纯化后，经测定得到下列数据，试计算比活力，回收率及纯化 倍数。
福建农林大学考试试卷（A）卷 课程名称：食品酶学考试时间：120分钟 食品科学与工程专业年级班学号姓名 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1.下列哪种剂型的酶最方便于在食品生产中使用： A．液体 B．粉剂 C．颗粒 D．纯酶结晶 2.酶制剂的生产主要来源于： A.动物组织提取法； B.植物组织提取法； C.化学或生物合成法； D.微生物发酵法； 3.蛋白酶按其活性部位分为： A．胰蛋白酶、胃蛋白酶、凝乳酶 B．肽链端解酶、肽链内切酶C．丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶、酸性蛋白酶 D．水解酶、裂合酶4.酶委员会根据酶所催化的反应的性质将酶分为六大类，包括氧化还原酶、转移酶、 裂合酶等，不包括以下哪种类型： A.水解酶 B.裂解酶 C.异构酶 D.连接酶 5.以吸附法固定化酶，酶与载体之间的结合力不包括： A．范德华力 B．疏水相互作用 C．双键 D．离子键
6.根据酶的电荷性质进行酶的分离纯化方法不包括： A．离子交换 B．电泳 C．等电聚焦D．离心沉淀 7.有关米氏常数Km叙述不正确的是： A．Km是酶的一个特征性常数：也就是说Km的大小只与酶本身的性质有关，而与酶浓度无关。 B．Km值还可以用于判断酶的专一性和天然底物，Km值最小的底物往往被称为该酶的最适底物或天然底物。 C．Km可以作为酶和底物结合紧密程度的—个度量指标，用来表示酶与底物结合的亲和力大小。 D．某个酶的Km值已知时，无法计算出在某一底物浓度条件下，其反应速度相当于Vmax的百分比。 8.下图表示的是可逆抑制剂与不可逆抑制剂的区别，叙述正确的是： A．曲线1为无抑制剂；曲线2为不可逆抑 制剂；曲线3为可逆抑制剂 B．曲线1为无抑制剂；曲线2为可逆抑制剂； 曲线3为不可逆抑制剂 C．曲线1为不可逆抑制剂；曲线2为无抑制 剂；曲线3为可逆抑制剂 D．曲线1为不可逆抑制剂；曲线2为可逆抑 制剂；曲线3为无抑制剂 9.在一些用发酵方法加工的鱼制品中，由于鱼和细菌中什么酶的作用，会使这些食品 缺少维生素B。 A．硫胺素酶 B．蛋白酶 C．胃蛋白酶 D．胰蛋白酶 10.在科技文献中，当一种酶作为主要研究对象时，在文中第一次出现时可以不标明酶 的： A．系统名 B．数字编号 C．酶的来源 D．生产商 11.下列有关SOD叙述不正确的是： A．SOD是一类含金属的酶； B．SOD存在于几乎所有靠有氧呼吸的生物体内，从细菌、真菌、高等植物、高等动物直至人体均有存在； C．SOD分子中不含赖氨酸，芳香氨酸也很少，能抗胃蛋白酶水解； D．SOD是氧自由基专一清除剂，在照射前供给外源性SOD，可有抗辐射效果。
诊断酶学 目的要求：熟悉酶在体内的病生变化机制； 掌握酶促反应动力学的基本原理及酶活性测定方法; 掌握肝胆疾病的酶学指标应用与评价； 第一节概述 临床酶学：指临床实验室应用酶作为多种疾病的诊断、预防、治疗及预后评估的学科。包括基础酶学、诊断酶学、治疗酶学 基础酶学：注重酶的动力学研究； 诊断酶学：应用酶、酶试剂对疾病进行诊断； 治疗酶学：利用酶制剂进行疾病治疗； 一、复习酶的概念、结构与功能 1.基本概念酶是活细胞的产物，是生物催化剂； 生物催化剂的特性：（1）高度不稳定性；（2）催化效率极高； （3）高度特异性；（4）催化作用的可调节性； 2.结构与功能 （1）酶的化学组成 单纯酶 结合酶酶蛋白 + 辅助因子＝全酶 辅基结合紧密 辅酶结合疏松 （2）酶的活性中心 指酶分子表面的能与底物结合并起催化反应的特定区域，该区域由酶的必需基团所组成。 酶的活性中心被占据或构象发生改变均可导致酶的催化效率下降或消失。 二、血浆（清）酶分类 1.血浆特异酶在血浆中发挥作用，其降低表示合成该酶的组织受损。 2.非血浆特异酶在血浆中含量较低且无任何功能 （1）外分泌酶来源于外分泌腺，其浓度与分泌的腺体功能有关 （2）代谢酶存在于各种组织细胞，参与物质代谢； 血清中大量出现时提示细胞受损； 代谢酶分为：一般代谢酶器官特异性酶 四、血清酶变化的病生机制 过多 细胞内酶生成过少 变异 K2 K1 K3 组织间隙血管内 K4 K8 抑制抑制 酶激活酶激活 变化变化 K7 K5 K6 图示说明：不同组织或器官中的酶进入血中的途径不同；
不同的酶其清除方式不同； 控制血清酶水平的因素： 1.酶在细胞内的合成速度 2.酶从细胞释入血清的速度 取决于三个方面：细胞内外酶浓度差； 酶蛋白分子量的大小； 酶在细胞内的定位及存在形式； 3.酶在细胞外间隙的分布和运送 酶从胞内进入血液的途径： （1）直接进入血液 （2）部分直接入血，部分进入组织间隙 （3）经淋巴系统入血 4.酶从血中清除的速度 可用酶的半衰期表示 *血清酶从血清中消失的速率因人不同，因酶而异，随疾病过程的不同时间而变化。 5.其它 注意激活剂或抑制剂对酶活性的影响 五、其它影响血清酶的因素 1. 生理因素的影响性别、年龄、进食、运动、妊娠等 2.测定方法的影响方法的不同（速率法、终点法） 测定条件的不同 单位的差异 3.标本的影响 （1）最好用血清（2）溶血的影响 （3）尽快、及时分离（4）样品的存放 4.其它因素对酶活性测定的影响 （1）温度的影响（2）抑制剂的影响 （3）样品中酶浓度的影响（4）反应体系中其它物质的影响 其它酶和物质；工具酶的污染；非酶反应；容器的污染等。 第二节酶活性测定的基本知识 一、酶活性的概念酶活性即酶促反应速度（v）： 指在规定的条件下，单位时间（t）内底物（s）的减少量或产物（p）的增加量。 v ＝ - d[s] / dt v ＝ d[p] / dt 注意：强调单位时间的变化量 二、酶促反应进程
酶工程试题(A) 年级2001 专业生物技术 一名词解释（每题3分，共计30分） 1.酶工程 2.自杀性底物 3.别构酶 4.诱导酶 5.Mol催化活性 6.离子交换层析 7.固定化酶 8.修饰酶 9.非水酶学 10.模拟酶 二填空题(每空1分,共计30分) 1.决定酶催化活性的因素有两个方面，一是，二是 。 2.求Km最常用的方法是。 3.多底物酶促反应的动力学机制可分为两大类，一类是，另一类是 。 4.可逆抑制作用可分为，，， 。 5.对生产酶的菌种来说，我们必须要考虑的条件有，一是看它是不是，二是能够利用廉价原料，发酵周期，产酶量，三是菌种不易，四是最好选用能产生酶的菌种，有利于酶的分离纯化，回收率高。 6.酶活力的测定方法可用反应法和反应法。 7.酶制剂有四种类型即酶制剂，酶制剂，酶制剂和 酶制剂。 8.通常酶的固定化方法有法，法，法， 法。 9.酶分子的体外改造包括酶的修饰和修饰。 10.模拟酶的两种类型是酶和酶。 11.抗体酶的制备方法有法和法。 三问答题(每题10分,共计40分) 1.固定化酶和游离酶相比，有何优缺点？ 2.写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理。 3.为什么酶制剂的生产主要以微生物为材料？ 4.
酶工程试题（B） 一名词解释 1.抗体酶 2.酶反应器 3.模拟酶 4.产物抑制 5.稳定pH 6.产酶动力学 7.凝胶过滤 8.固定化酶 9.非水酶学 10.液体发酵法 二填空题(每空1分,共计30分) 1.Km值增加，其抑制剂属于抑制剂，Km不变，其抑制剂属于抑制剂，Km减小，其抑制剂属于抑制剂。 2.菌种培养一般采用的方法有培养法和培养法。 3.菌种的优劣是影响产酶发酵的主要因素，除此之外发酵条件对菌种产酶也有很大的影响，发酵条件一般包括，，，， 和等。 4.打破酶合成调节机制限制的方有，，。 5.酶生物合成的模式分是，，， 。 6.根据酶和蛋白质在稳定性上的差异而建立的纯化方法有法，法和 法 7. 通常酶的固定化方法有法，法，法， 法。 8. 酶分子的体外改造包括酶的修饰和修饰。 9.酶与抗体的重要区别在于酶能够结合并稳定化学反应的，从而降低了底物分子的，而抗体结合的抗原只是一个态分子，所以没有催化能力 三问答题(每题10分,共计40分) 1.在生产实践中，对产酶菌有何要求？ 2.对酶进行化学修饰时，应考虑哪些因素？ 3.列出用共价结合法对酶进行固定化时酶蛋白上可和载体结合的功能团 4.某酶的初提取液经过一次纯化后，经测定得到下列数据，试计算比活力，回收率及纯化 倍数。 （A）答案及评分细则 一 1. 酶工程：又叫酶技术，是酶制剂的大规模生产和应用的技术。
第1章考试题 1 某水泥厂生产普通硅酸盐水泥,现改产火山灰硅酸盐水泥,原包装袋未变,客户投诉水泥重量不够,请分析原因。 答: 火山灰硅酸盐水泥的堆积密度较普通硅酸盐水泥小，由于包装袋的容积一定，因而质量变小。 2质量为3.4kg，容积为10L的容量筒装满绝干石子后的总质量为18.4kg。若向筒内注入水，待石子吸水饱和后，为注满此筒注入水4.27kg。将上述吸水饱和的石子擦干表面后称得总质量为18.6kg（含筒重）。求该石子的吸水率，表观密度，堆积密度。 石子的质量为m＝18.4-3.4＝15.0(kg) 石子的堆积体积为V oˊ＝10L， 石子所吸水的量为m w＝18.6-18.4＝0.2(kg)，水的体积为0.2L 开口孔隙体积为石子吸收水的量，即V k＝0.2L 注入筒内的水的体积为Vˊw=4.27L, 该体积等于石子间空隙的体积与石子开口孔隙之和。V s+V k＝4.27L 故，石子的质量吸水率为 W m＝m w/m＝0.2/15×100%=1.3%石子的体积吸水率为
V v =V k/V o = 0.2/(10-4.27+0.2)×100% = 3.4% 石子的堆积密度为 ρodˊ=m/ V oˊ=15/10=1500(kg/m3) 石子的表观密度为 ρod＝m/V o=15/(10-4.27+0.2)=2530(kg/m3) 第3章考试题 一、名词解释 1 胶凝材料 2 气硬性胶凝材料 1 凡能在物理、化学作用下，从浆体变为坚固的石状体，并能胶结其他物料而具有一定机械强度的物质错。 2 只能在空气中硬化，并保持和继续发展强度的胶凝材料 二、问答题 1 建筑石膏制品为何一般不适于室外? 答：因建筑石膏制品化学成分主要为CaSO4·2H2O，微溶于水；且建筑石膏制品内部含大量毛细孔隙、水或水蒸汽易进入建筑石膏制品内部，加快二水石膏晶体溶解于水的速度，特别是晶体间搭接处易受溶液破坏，强度大为下降。正因为其耐水性差、吸水率高、抗渗性及抗冻性差，故不宜用于室外。
诊断酶学 一、血清酶 （一）血清酶的分类 1.血浆特异酶：在血浆中发挥特定催化作用的酶。如胆碱酯酶、脂蛋白脂肪酶、铜氧化酶等。 大多数在肝内合成。 血浆特异酶活性的改变，除了反映血液功能外，还反映来源器官的功能。 2.非血浆特异酶：在血浆中浓度很低，且无功能。 （1）分泌酶：来源于外分泌腺的酶。如胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和前列腺酸性磷酸酶等。 血液中分泌酶以失活状态存在，不发生催化作用。 在血液中的浓度和其分泌腺体的功能活动和疾病有关，例如，急性胰腺炎时，血淀粉酶就会升高。 （2）代谢酶（细胞酶）：在细胞内发挥催化功能的酶。正常时这些酶存在于组织细胞中，血浆中酶活性很低。细胞内、外浓度差异悬殊。 当酶来源的组织细胞发生病变，细胞膜通透性增加或细胞坏死时，细胞内酶大量进入血浆，导致血浆酶活性显著增高。其下降的临床意义很少。 这一类酶较多，如转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶等，它们在肝病、心脏病时都可能出现变化。 （二）血清酶生理变异及其病理生理机制 1.血清酶生理变异 （1）性别：CK和GGT都是男性高于女性。 （2）年龄：碱性磷酸酶（与骨生长发育相关）。 （3）进食：酗酒可引起γ-GGT明显升高。 （4）运动：剧烈运动可引起血清中多种酶升高，如CK、LD、AST等。 （5）妊娠与分娩：妊娠时ALP升高，分娩时可能有CK、CK-BB、LD升高。 2.血清酶病理改变机制： （1）酶合成异常： 血浆特异酶大多数是在肝合成，当肝功能障碍时酶浓度常下降。如血清胆碱酯酶活性在有肝功能障碍时可能下降。 由于酶基因变异也可引起特定酶减少或消失，如肝-豆状核综合征患者血中铜氧化酶活性可明显下降。如有骨细胞增生时，血中ALP可上升。 （2）细胞酶的释放： 是疾病时大多数血清酶增高的主要机制，影响细胞酶释放的主要原因有： 1）细胞内、外酶浓度的差异； 2）酶在细胞内的定位和存在的形式； 3）酶蛋白分子量的大小：酶释放的速度和分子量成反比。例如LD分子量大于CK，而当有心肌梗死时，LD在血液中升高的时间就晚于CK。
一、名词解释（本题共8个小题，每小题2分，共16分）。 1、固定化酶： 2、原生质体： 3、超滤： 4、酶的催化特性： 5、生物酶工程： 6、酶的必需基团和活性中心： 7、诱导与阻遏： 8、酶反应器： 二、填空题（本题共5个小题，每空2分，共24分）. 1、酶的分类（）（）（）。（三种即可） 2、酶活力是（）的量度指标，酶的比活力是（）的量度指标，酶转换数是（）的量度指标。 3、微生物产酶模式可以分为同步合成型，（）中期合成型，（）四种。 4、酶的生产方法有（），生物合成法和化学合成法。 5、优良的产酶微生物所具备的条件：（1）（）（2）（）（3）（）（写出三种即可）。 三、判断题（本题共10个小题，每空1.5分，共15分）。 1、酶是具有生物催化特性的特殊蛋白质。 2、酶活力是指在一定条件下酶所催化的反应速度，反应速度越大，意味着酶活力越高。 3、液体深层发酵是目前酶发酵生产的主要方式。 4、培养基中的碳源，其唯一作用是能够向细胞提供碳素化合物的营养物质。 5、在酶与底物、酶与竞争性抑制剂、酶与辅酶之间都是互配的分子对，在酶的亲和层析分离中，可把分子对中的任何一方作为固定相。 6、补料是指在发酵过程中补充添加一定量的营养物质，补料的时间一般以发酵前期为好。 7、酶固定化过程中，固定化的载体应是疏水的。 8、在酶的抽提过程，抽提液的 pH 应接近酶蛋白的等电点。 9、青霉素酰化酶不但能催化青霉素侧链的水解作用，而且也能催化逆反应。 10、亲和试剂又称活性部位指示试剂,这类修饰剂的结构类似于底物结构。 四、问答题（本题共5个小题，共45分）。 1、试述提高酶发酵产量的措施。（8 分，答出四点即可） 2、酶失活的因素？（8分） 3、酶的提取方法有哪些？（8分） 4、酶分子修饰的意义有哪些？（6分） 5、试简述酶分子的定向进化。（5分） 6、固定化酶和游离酶相比，有何优缺点？（10分，优缺点答五点即可） 答案 一、1、固定化酶：通过物理的或化学的方法，将酶固定在载体上，能使酶发挥催化作用的酶；2、原生质体：脱去细胞壁的植物、真菌或细菌细胞；3、超滤：超滤是采用中空纤维过滤新技术，配合三级预处理过滤清除自来水中杂质；4、酶的催化特性：①极高的催化效率②高度的专一性③酶活性的可调节性④酶的不稳定性5、生物酶工程：是指在基因水平上，对酶蛋白分子进行修饰、改造，改进酶蛋白的催化特性或酶蛋白的蛋白质特性等；6、酶的必需基团：指酶分子中与酶的活性密切相关的基团；活性中心：是与底物结合并催化反应的场所；7、酶合成的诱导是指加入某种物质使酶的合成开始或加速进行的过程；酶合成
1.酶的特性有哪些？（1）催化效率高：比一般的酶高106-1013倍；（2）酶作用的专一性：一种酶作用于一种或一类分子结构相似的物质（3）易变性：大多数酶的化学本质是蛋白质，因而会被高温、酸、强碱等破坏(4)酶的催化条件温和；(5)酶在生物体内参与每一次反应后，它本身的性质和数量都不会发生改变。 8. 国际酶学委员会推荐的分类和命名规则的主要依据是什么？ 酶学委员会提出以酶所催化的化学反应性质作为酶的分类和命名规则的主 要依据，每一种酶都给以三个名称：系统名，惯用名和一个数字编号。 2、脂肪酶和脂肪氧化酶的不同？脂肪酶水解脂肪，产生甘油、甘油一酯和脂肪酸脂肪氧化酶催化顺，顺-1,4-戊二烯的不饱和脂肪酸及酯的氢化氧化作用。4、酶活力：指酶催化反应的能力，它表示样品中酶的含量。 3、Km值代表反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 固定化酶：是指在一定的空间范围内起催化作用，并能反复和连续使用的酶。优点：同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次的使用；固定化后，和反应物分开，有利于控制生产过程，同时也省去了热处理使酶失活的步骤；稳定性显著提高；可长期使用，并可预测衰败的速度；提供了研究酶动力学的良好模型。26.固定化酶的稳定性增强主要表现在哪些方面？操作稳定性（2）贮藏稳定性（3）热稳定性（4）对蛋白酶的稳定性（5）酸碱稳定性。 27.什么是糖酶？常见的糖酶有哪几种？（四种以上） 糖酶：裂解多糖中将单糖连接在一起的化学键，使多糖降解为小分子，催化糖单位结构上的重排形成新的糖类化合物的酶。 常见的糖酶：α-淀粉酶、糖化酶、β-淀粉酶，乳糖酶，果胶酶，纤维素酶等最常见的微生物产酶发酵类型是液体深层发酵 2. 琼脂糖凝胶过滤和离子交换法等纯化酶的机理各是什么？ 琼脂糖凝胶过滤：不同式样通过凝胶时，能进入颗粒状凝胶的微孔的小分子被阻滞，不能进入微孔的大分子未被阻滞，改变颗粒状凝胶的微孔大小可能改变凝胶量分级分离范围。（琼脂糖凝胶过滤根据分子大小而设计的方法） 离子交换法：改变PH或提高溶液离子强度，根据酶结合到离子交换剂上的能力将混合物中的蛋白质分离开。（离子交换法按分子所带正负电荷多少分离的方法）5. 一些乳制品中为什么添加乳糖酶？ 乳糖的溶解度比较低，在冷冻乳制品中容易析出，使得产品带有颗粒状结构，乳糖部分水解可以防止出现这种情况。 .酶的动力学研究包括哪些内容？图示竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制的区别。酶促反应动力学以化学动力学为基础，通过对酶促反应速度的测定来讨论诸如底物浓度、抑制剂、温度、pH和激活剂等因素对酶促反应速度的影响。 4. 酶制剂的保存需要考虑哪些因素？(1) 温度：在低温条件下（0-4℃）使用、处理和保存，有的需要更低的温度，加入甘油或多元醇有保护作用。(2) pH与缓冲液：pH应在酶的pH稳定范围内，采用缓冲液保存。(3) 酶蛋白浓度：一般酶浓度高较稳定，低浓度时易于解离、吸附或发生表面变性失效。(4) 氧：有些酶易于氧化而失活。(5) 为提高酶稳定性，常加入下列稳定剂：如钙离子保护淀粉酶，锰离子保护溶菌酶，二巯基乙醇保护巯基酶。（常加入下列稳定剂：①底物、抑制剂和辅酶，它们的作用可能是通过降低局部的能级水平，使酶蛋白处于不稳定状态的扭曲部分转入稳定状态。②对巯基酶，可加入－SH保护剂。如二巯基乙醇、GSH(谷胱甘肽)、DTT(二硫苏糖醇)等。③其他如Ca2+能保护α－淀粉酶，Mn2+能稳定溶菌酶，Cl－能稳定透明质酸酶。）
临床化学--诊断酶学练习题 一、A1 1、血清ALP活性升高最常见于 A、急性肾炎 B、骨肿瘤 C、恶性贫血 D、甲状腺功能低下 E、梗阻性黄疸 2、肌酸激酶组织含量最高的是 A、肺脏 B、骨骼肌 C、肾脏 D、红细胞 E、肝脏 3、有助于诊断骨骼和肝脏疾病的血清酶是 A、AST B、CK C、ALP D、ACP E、LPS 4、急性肝炎时AST/ALT比值 A、小于1 B、大于1 C、等于1 D、大于3 E、大于2 5、在人体组织中ACP含量最多的是 A、肝脏 B、心肌 C、红细胞 D、血小板 E、前列腺 6、酒精中毒时血清酶活力升高最明显的时 A、GGT B、ALP C、CK D、LD
E、ALT 7、急性心肌梗死时，下列血清酶最早升高的是 A、ALT B、LD C、CK D、AST E、ALP 8、肝病时血清LD同工酶升高最明显的是 A、LD1 B、LD2 C、LD3 D、LD4 E、LD5 9、ALT在人体各组织中含量最多的是 A、肺脏 B、心肌 C、脑组织 D、红细胞 E、肝脏 10、孕妇血清中酶活性增高最明显的是 A、LD B、ALP C、CK D、AMY E、LPS 11、LD5主要组织来源是 A、心脏 B、肺 C、肝脏 D、脾脏 E、肾脏 12、心肌酶谱不包括 A、ALT B、AST C、CK D、α-HBD E、LD
13、肌钙蛋白由几个亚单位组成 A、2 B、3 C、4 D、5 E、6 14、LD由H和M亚基组成几种同工酶 A、2 B、3 C、4 D、5 E、6 15、胞质中CK的同工酶有几种 A、2 B、3 C、4 D、5 E、6 16、CK同工酶由几个亚基组成 A、2 B、3 C、4 D、5 E、6 17、心肌中主要含有的CK同工酶是 A、CK-BB B、CK-MB C、CK-MM D、CK-BB和CK-MB E、CK-MM和CK-MB 18、关于乳酸脱氢酶性质的叙述错误的是 A、由两种亚单位组成 B、有5种同工酶 C、在肝脏中含量最高 D、具有“冷变性”的特点 E、血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异性的 19、转氨酶的辅酶是 A、烟酸
DNA Replication and Repair_Lei Shi 1、DNA损伤修复的类型、来源。 ⑴细胞内源性的损伤—复制错误,碱基脱氨氧化； ⑵外源型-环境因素造成的损伤—辐射（TT）致癌物质（烷化剂、EB亚硝酸等）如碱基的损伤、 错配,碱基的缺失,碱基的交联等. 2、男性谱系和女性谱系鉴定的机理。 ⑴男性谱系：Y染色体，Y-STR（short tandem repeat）是Y染色体上的短串联重复序列。Y-STR经常用于法医学，亲子鉴定和家谱DNA测试。Y-STR特异性地从雄性Y染色体获得。Y染色体上的基因只能由亲代中的雄性传递给子代中的雄性（即由父亲传递给儿子），因此在Y染色体上留下了基因的族谱，Y-DNA 分析现在已应用于家族历史的研究。 ⑵女性谱系：线粒体DNA。线粒体DNA（mtDNA）是DNA的一部分，是母系遗传的，通过卵子传递，且一般很难发生改变。mtDNA存在于双膜细胞器内。每个细胞中有许多线粒体DNA拷贝。?如果样本有限，mtDNA可以获得更多的DNA, ?可以从高度降解的来源获得DNA 3、基因操作的载体必须具备的特征是什么？常用的载体有哪些？ ⑴克隆载体应具备的主要特点： 至少有一个复制起点（origin of replication, ori） 至少有一个选择性标志（selection marker） 有适宜的限制性内切酶的单一切点：称为多克隆位点（multiple cloning sites，MCS）应有较高的拷贝数。 ⑵表达载体：原核表达载体：除了具备克隆载体的一般特点外，还需有调控外源基因有效转录和翻译的序列，如启动子、核糖体结合位点、转录终止序列等。 ⑶真核表达载体包括在大肠杆菌中起作用的复制起始位点、抗生素抗性基因、多克隆位点等。真核表达载体中还具有： ①真核表达调控元件：包括启动子、增强子、转录终止序列、poly A 加尾信号等 ②真核细胞复制起始序列 ③真核细胞药物抗性基因 目前应用最广泛的原核表达载体是大肠杆菌表达载体。 常用载体：质粒载体：pBR322质粒 噬菌体载体：λ噬菌体、M13噬菌体 病毒载体：反转录病毒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒等 4、如何分离蛋白质（分离方法及步骤） 蛋白质分离主要根据五种原理：分子大小、溶解度、电荷、吸附性质、对配体分子的生物学亲和力等。分离方法有透析与超滤、凝胶过滤法、离子交换层析法、低温有机溶剂沉淀法等。
酶工程期末考试试题(A) 一名词解释：( 每小题3分共30分) 1 酶催化的专一性：绝对专一性和相对专一性； 2 酶催化的邻近效应、定向效应：底物彼此靠近、活性中心浓度增大、底物与结合部位按有利于催化反应的方向定位； 3 Kcat：催化常数，即在最适条件下，没摩尔酶每分钟所转化的底物摩尔数； 4 酶活力：酶催化活力，用酶催化反应速度表示； 5 酶催化周期：每mole酶蛋白催化每mole底物所需要的时间； 6 Ks盐析和β盐析 Ks盐析：即蛋白质溶液的pH值和温度固定不变，改变溶液的盐浓度（离子强度），以达到沉淀蛋白的作用；此法常用的盐是硫酸铵。 β盐析法：是在一定的离子强度下，改变溶液的pH值和温度，以达到蛋白沉淀的目的。 7 离子交换剂：离子交换剂是借酯化、氧化或醚化等化学反应，在琼脂糖、纤维素或凝胶分子上某些极性基团，通过极性基团的静电吸附作用，对极性大分子进行分离。按离子交换剂上的活性基团的性质不同，可分为阳离子交换剂和阴离子交换剂两种。 8 生物酶工程：是指在基因水平上，对酶蛋白分子进行修饰、改造，改进酶蛋白的催化特性或酶蛋白的蛋白质特性等。 本章主要介绍核酶、进化酶、杂合酶和抗体酶的有关基本概念和基本知识。 9 酶分子的定向进化： 是指在分子水平上，人为地创造特殊的进化条件，模拟自然进化机制（随机突变、基因重组和自然选择），对酶基因进行改造，并进行定向选择，筛选出所需性质的酶蛋白。10 核酶：化学本质是核酸的酶，包括核酶和脱氧核酶 二填空题：（每空1分共 20分） ⑴按催化反应类型分，将酶分成6个大类，它们的名称及其代码分别是氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、连接酶； ⑵根据葡聚糖凝胶的交联度不同，软胶包括 G75 、 G100 、 G150 、 G200 ； ⑶酶固定化方法有吸附法、交联法、吸附交联法、共价结合法、微胶囊法； ⑷酶蛋白化学修饰的方法包括金属离子置换、大分子结合、肽链有限水解、 氨基酸置换、侧链基团修饰；
一、填空题 1、蛋白质的二级结构有、和。 2、竞争性抑制剂不改变酶的；非竞争性抑制剂不改变酶的。 3、有竞争性抑制剂参与的米氏方程为。 4、α-淀粉酶耐酸，不耐；β-淀粉酶，不耐。 5、根据作用模式蛋白酶可分为和。 6、根据其程度不同，酶的专一性、和。 7、用双倒数作图法测定酶促反应的Km和Vmax，其纵轴截矩为，斜率 为、横轴为 。 8、酶的比活力是指，比活力越高，表明。 9、酶的活性中心由和两部分构成。 二、名词解释（ 1、同工酶； 2、电泳； 3、包埋法； 4、酶电极； 三、判断是非 1、除甘氨酸外，所以的氨基酸都是具有光学性，在蛋白质中的氨基酸都是D型。（） 2、酶反应器和生化反应器的区别主要表现在酶反应器的生产条件为低温、低压、和能耗低。（） 3、羧肽酶B可以除去苦味肽。（） 4、脲酶的专一性很强，除作用于尿素外，不作用于其他物质。（） 5、当底物浓度处于饱和水平时，酶促反应的速度与酶浓度成正比，当底物处于限速浓 度时，酶促反应将随时间而降低。（） 6、某一酶反应的最适pH和最适温度都是恒定的，是酶的特征常数。（） 7、一个酶作用于多种底物时，其最适底物的Km值应是最小的。（） 8、K＋能维持淀粉酶的最适构象，从而使酶具有最高的活力。（） 9、β-淀粉酶是一种外切酶。（） 10、辅基和辅酶的区别只在于它们与蛋白质结合的牢固程度不同，并无严格区别。（） 四、选择题
1、目前公认的酶与底物结合的学说是。 A、活性中心学说 B、诱导锲合学说 C、钥匙学说 D、中间产物学说 2、变构酶是一种。 A、单位酶 B、寡聚酶 C、多酶复合体 D、米氏酶 3、下列关于酶特性的叙述，错误的是。 A、催化效率高 B、专一性强 C、作用条件温和 D、都有辅助因子参与 4、下列关于同工酶的叙述中，错误的是。 A、同工酶的结构、组成不尽相同 B、不同的同工酶Km值不同 C、同工酶在电泳中迁移率不同 D、同工酶的功能不同 5、一个简单的酶促反应，当［S］《Km时。 A、反应速度最大 B、反应速度与底物浓度成正比 C、增加底物浓度，反应速度不受影响 D、增加底物浓度，反应速度降低 6、丙二酸对于琥珀酸脱氢酶的影响属于。 A、反馈抑制 B、非竞争性抑制 C、竞争性抑制 D、底物抑制 7、胰凝乳蛋白酶仅能水解R1是。 A、酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸残基的侧链的肽键 B、酪氨酸、组氨酸或色氨酸残基的侧链的肽键 C、蛋氨酸、苯丙氨酸或色氨酸残基的侧链的肽键 D、精氨酸、苯丙氨酸或色氨酸残基的侧链的肽键 8、巯基蛋白酶存在于活性部位的氨基酸是。 A、Cys、His、Met B、Cys、His、Asp C、Cys、Asp、Met D、Tye、His、Met 9、下列关于多酚氧化酶，叙述错误的是。 A、一元酚羟基化生成相应的邻-二羟基化合物 B、邻-二酚氧化生成邻醌 C、两类反应都需要有分子氧参加 D、邻-二酚氧化生成邻羧酸 10、下列关于酶与水分活度，叙述正确的是。 A、降低酶制剂的水分活度有利于提高它们的稳定性 B、不同的酶对水分活度的要求都是一样的
笔记3（分子克隆2——主要步骤） 分子克隆可以分为以下几个步骤： 分离制备待克隆的DNA片段————将靶DNA片段与载体在体外进行连接————重组DNA分子转入宿主细胞————筛选、鉴定阳性重组子————重组子的扩增。 1.带有目的基因的DNA片段的获得： 可以用限制内切酶降解基因组DNA，再配合使用其他实验手段得到待定的DNA片段，可以用超速离心的方法分离出具有特定核苷酸组成的DNA片段，可以用mRNA做模板，用反转录酶合成互补DNA，即cDNA，也可以用化学合成的方法直接合成一段DNA。 2.重组DNA分子的构建： 重组DNA分子中包括两部分，一部分是外源DNA，即目的DNA片段，另一部分是载体DNA。用作载体的，有质粒、噬菌体或病毒DNA。它们的基本特征是能够独立复制。如果用同一种限制性内切酶切割这两种DNA，则它们的末端完全相同，由于有互补的单链末端序列存在，在连接酶的作用下，就可以形成重组DNA 分子。在没有互补单链末端的情况下，也可以用酶学方法造成一个互补单链末端之后再进行连接。
3.重组DNA分子的转化和重组克隆的筛选： 重组DNA分子必须进入宿主细胞中，才能得到扩增和表达．这个过程叫做转化。大肠杆菌是目前使用最广泛的宿主细胞。除此以外．其他细菌、酵母、哺乳动物细胞等也可作为宿主细胞，可以根据实验的需要加以选择。在被转化的宿主细胞中，不同的单个细胞(在平板上表现为单个菌落，亦称克隆)中可能含有不同的重组质粒或非重组质粒，因此必须进行筛选，以便确定哪些是重组克隆。筛选可以使用抗菌素抗性或其他方法，依载体的性质而定。 4.特定重组克隆的鉴别： 由于重组克隆往往是较多的，而在某一克隆实验中，我们感兴趣的目的克隆只有一个或几个，所以需要进一步鉴别。使用的方法主要有核酸杂交法和免疫化学法。 此外，找出了目的克隆之后，还需要根据实验的目的，进一步弄清目的克隆中外源DNA片段上的基因的结构和功能。主要有酶切图谱的制定，基因在DNA 片段上的精确定位，确定是否有内含子，DNA序列分析，离体翻译实验，外源基因在某些宿主细胞中的表达及产物的提纯等。
酶工程试题(A) 一名词解释（每题3分，共计30分） 1. 酶工程：又叫酶技术，是酶制剂的大规模生产和应用的技术。 2.自杀性底物：底物经过酶的催化后其潜在的反应基团暴露，再作用于酶而成为酶的不可逆抑制剂，这种底物叫自杀性底物。 3.别构酶；调节物与酶分子的调节中心结合后，引起酶分子的构象发生变化，从而改变催化中心对底物的亲和力，这种影响被称为别构效应，具有别构效应的酶叫别构酶 4.诱导酶：有些酶在通常的情况下不合成或很少合成，当加入诱导物后就会大量合成，这样的酶叫诱导酶 5.Mol催化活性：表示在单位时间内，酶分子中每个活性中心转换的分子数目 6.离子交换层析：利用离子交换剂作为载体这些载体在一定条件下带有一定的电荷，当带相反电荷的分子通过时，由于静电引力就会被载体吸附，这种分离方法叫离子交换层析。 7.固定化酶：通过物理的或化学的方法，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚于一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶发挥催化作用的酶 8.修饰酶：在体外用一定的化学方法将酶和一些试剂进行共价连接后而形成的酶 9.非水酶学：通常酶发挥催化作用都是在水相中进行的，研究酶在有机相中的催化机理的学科即为非水酶学 10模拟酶：利用有机化学合成的方法合成的比酶结构简单的具有催化作用的非蛋白质分子叫模拟酶。 二填空题(每空1分,共计30分) 1.决定酶催化活性的因素有两个方面，一是酶分子结构，二是反应条件。 2.求Km最常用的方法是双倒数作图法。 3.多底物酶促反应的动力学机制可分为两大类，一类是序列机制，另一类是乒乓机制。 4.可逆抑制作用可分为竞争性，反竞争性，非竞争性，混合性； 5.对生产酶的菌种来说，我们必须要考虑的条件有，一是看它是不是致病菌，二是能够利用廉价原料，发酵周期短，产酶量高，三是菌种不易退化，四是最好选用能产生胞外酶的菌种，有利于酶的分离纯化，回收率高。 6.酶活力的测定方法可用终止反应法和连续反应法。 7.酶制剂有四种类型即液体酶制剂，固体酶制剂，纯酶制剂和固定化酶制剂。 8.通常酶的固定化方法有吸附法，包埋法，交联法， 共价键结合法。 9.酶分子的体外改造包括酶的表面修饰和内部修饰。 10.模拟酶的两种类型是半合成酶和全合成酶。 11.抗体酶的制备方法有拷贝法和引入法。 三问答题(每题10分,共计40分) 1.固定化酶和游离酶相比，有何优缺点？ 解：优点（1）易将固定化酶和底物，产物分开产物溶液中没有酶的残留简化了提纯工艺 （2）可以在较长的时间内连续使用（3）反应过程可以严格控制，有利于工艺自动化（4）提高了酶的稳定性 （5）较能适于多酶反应 （6）酶的使用效率高产率高成本低 缺点 （1）固定化时酶的活力有损失 （2）比较适应于水溶性底物 （3）与完整的细胞相比，不适于多酶反应。 2.写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理。 解：.方法:透析与超虑离心分离凝胶过滤盐析等电点沉淀共沉淀吸附层析电泳亲和层析热变性酸碱变性表面变性等（原理略） 3.为什么酶制剂的生产主要以微生物为材料？ 解：（1）微生物种类多，酶种丰富，且菌株易诱变，菌种多样 （2）微生物生长繁殖快，酶易提取，特别是胞外酶 （3）来源广泛，价格便宜 （4）微生物易得，生长周期短 （5）可以利用微电脑技术控制酶的发酵生产，可进行连续化，自动化，经济效益高 （6）可以利用以基因工程为主的分子生物学技术，选育和改造菌种，增加产酶率和开发新酶种 4 解：最大反应速度140 ，Km: 1.0?10-5 酶工程试题（B） 一名词解释 1抗体酶：是一种具有催化作用的免疫球蛋白，属于化学人工酶 2酶反应器：是利用生物化学原理使酶完成催化作用的装置，他为酶促反应提供合适的场所和最佳的反应条件，使底物最大限度的转化为物。 3模拟酶：利用有机化学合成的方法合成的比酶结构简单的具有催化作用的非蛋白质分子叫模拟酶。 4底物抑制：在酶促反应中，高底物浓度使反应速度降低的现象。 5稳定pH：酶在一定的pH范围之内是稳定的，超过这个限度易变性失活，这样的pH范围为此酶的稳定pH 6产酶动力学：主要研究细胞产酶速率及各种因素对产酶速率的影响，包括宏观产酶动力学和微观产酶动力学。 7凝胶过滤：又叫分子排阻层析，分子筛层析，在层析柱中填充分子筛，加入待纯化样品再用适当缓冲液淋洗，样品中的分子经过一定距离的层析柱后，按分子大小先后顺序流出的，彼此分开的层析方法。 8固定化酶：通过物理的或化学的方法，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚于一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶发挥催化作用的酶 9非水酶学：通常酶发挥催化作用都是在水相中进行的，研究酶在有机相中的催化机理的学科即为非水酶学 10液体发酵法：以液体培养基为原料进行微生物的繁殖和产酶的方法，根据通风方法不同又分为液体表层发酵法和液体深层发酵法。 二填空题(每空1分,共计30分) 1.Km值增加，其抑制剂属于竞争性抑制剂，Km不变，其抑制剂属于非竞争性抑制剂，Km减小，其抑制剂属于反竞争性抑制剂。 2.菌种培养一般采用的方法有固体培养法和液体培养法。 3.菌种的优劣是影响产酶发酵的主要因素，除此之外发酵条件对菌种产酶也有很大的影响，发酵条件一般包括温度，PH ，氧气，搅拌，湿度和泡沫等。 4.打破酶合成调节机制限制的方有控制条件，遗传控制，其它方法。 5.酶生物合成的模式分是同步合成型，延续合成型，中期合成型，滞后合成型。 6.根据酶和蛋白质在稳定性上的差异而建立的纯化方法有热变性法，酸碱变性法和表面变性法 7. 通常酶的固定化方法有交联法、包埋法，吸附法、共价结合法 8. 酶分子的体外改造包括酶的表面修饰和内部修饰。 9.酶与抗体的重要区别在于酶能够结合并稳定化学反应的过滤态，从而降低了底物分子的能障，而抗体结合的抗原只是一个基态分子，所以没有催化能力 三问答题(每题10分,共计40分) 1.在生产实践中，对产酶菌有何要求？ 一般必须符合下列条件： a)不应当是致病菌，在系统发育上最好是与病原菌无关 b)能够利用廉价原料，发酵周期短，产酶量高 c)菌种不易变异退化，不易感染噬菌体 d)最好选用产胞外酶的菌种，有利于酶的分离纯化，回收率高 在食品和医药工业上应用，安全问题更显得重要 2.对酶进行化学修饰时，应考虑哪些因素？ 解：（1）被修饰酶的性质，包括酶的稳定性，酶活性中心的状况，侧链基团的性质及反应性 （2）修饰反应的条件，包括PH与离子强度，修饰反应时间和温度，反应体系中酶与修饰剂的比例等 3.列出用共价结合法对酶进行固定化时酶蛋白上可和载体结合的功能团 解：（1）酶蛋白N端的α氨基或赖氨酸的∑氨基 （2）酶蛋白C端的羧基及天冬氨酸的β羧基或谷氨酸的γ羧基 （3）半胱氨酸的巯基1分 （7）丝氨酸骆氨酸苏氨酸上的羟基 （8）苯丙氨酸和骆氨酸上的苯环 （9）组氨酸上的咪唑基 色氨酸上的吲哚基 解：（1）起始总活力：200?120＝24000（单位） （2）起始比活力：200÷2.5＝80（单位/毫克蛋白氮） （3）纯化后总活力810?5＝4050（单位）2 （4）纯化后比活力810÷1.5＝540（单位/毫克蛋白氮） （5）产率（百分产量）：4050÷24000＝17％ （6）纯化倍数：540÷80=6.75