江西农业大学生物科学与工程学院
第5章微生物营养和培养基练习题(A卷)试卷部分班级:___________学号:___________姓名:___________得分:___________
题目部分，(卷面共有66题,146.0分,各大题标有题量和总分)
一、选择(12小题,共13.0分)
(1分)[1]参与微生物基团移位运输方式的体系是：
A.Hpr；
B.酶1；
C.酶2；
D.Hpr+酶1+酶2 答：（）
(1分)[2]微生物细胞吸收糖、核苷酸、脂肪酸和腺嘌呤等物质，通常采用的运输方式是：A.主动运输；B.促进扩散；
C.基团移位；
D.单纯扩散。答：（）
(1分)[3]在鉴别性EMB培养基上，在反射光下大肠杆菌菌落呈现的颜色是：
A.棕色；
B.粉红色；
C.绿色并带有金属光泽；
D.无色。答：（）
(1分)[4]培养放线菌的高氏一号培养基和培养真菌的察氏培养基属于下列培养基中的：A.天然培养基；B.组合培养基；
C.半组合培养基；
D.鉴别培养基。答：（）
(1分)[5]微生物细胞吸收无机离子、有机离子、乳糖、蜜二糖或葡萄糖，通常采用的运输方式是：
A.基团移位；
B.单纯扩散；
C.主动运输；
D.促进扩散。答：（）
(1分)[6]根据培养基上呈现菌落颜色的不同而能鉴别大肠杆菌和肠杆菌属几种细菌的培养基是：
A.Ashby无氮培养基；
B.Martin培养基；
C.高氏一号培养基；
D.EMB培养基。答：（）
(1分)[7]为避免由于微生物生长繁殖过程中的产物而造成培养基pH值的变化，可采用的调节方法是：
A.在配制培养基时加入磷酸盐缓冲液或不溶性CaCO3。
B.在配制培养基时应高于或低于最适pH值；
C.在配制培养基时降低或提高碳、氮源用量；改变碳氮比。
D.在培养过程中控制温度和通气量。答：（）
(1分)[8]微生物细胞吸收O2、CO2、乙醇和少数氨基酸分子，通常采用的运输方式是：A.促进扩散；B.单纯扩散；
C.主动运输；
D.基团移位。答：（）
(2分)[9]微生物细胞吸收营养物质的促进扩散和主动运输方式最主要的差异在于：
A.营养物质在运输前后均发生分子结构变化，促进扩散变化小，主动运输变化大。
B.主动运输需要消耗能量溶质运输方向由稀至浓；促进扩散不需要消耗能量，溶质运输方向由浓至稀。
C.主动运输由膜内外营养物质的浓度差驱动；促进扩散可逆浓度梯度运送营养物质。
D.热稳定性可溶蛋白不参与促进扩散，而参与主动运输。答：（）
(2分)[10]在下列细菌中基团移位运输方式研究得较多的是：
A.伤寒杆菌和痢疾杆菌；
B.棒杆菌和芽孢杆菌；
C.大肠杆菌和金黄色葡萄球菌；
D.乳链球菌和黄单胞菌。答：（）
(1分)[11]生活在低营养环境下的微生物欲获得无机离子、有机离子和一些糖类等浓缩形式的营养物，通常采用的运输方式是：
A.主动运输；
B.基团移位；
C.单纯扩散；
D.促进扩散。答：（）
二、填空(12小题,共20.0分)
(1分)[1]Mg2+除了参与微生物体内的____________合成外，还可以作为____________剂。(2分)[2]____________细菌、___________细菌、___________细菌以及____________类等微生物均属于光能无机营养类型。
(2分)[3]微生物细胞采用主动运输方式吸收营养物的机制在于，通过消耗___________，使载体蛋白发生_______变化，从而能够__________梯度从外界摄取营养物。例如吸收_________离子。
(1分)[4]通过培养基中某些化学物质的___________变化来调节培养基的pH值称为pH的__________调节。
(1分)[5]在培养基中添加具有缓冲作用的一对无机盐如__________________或者加入不溶性的无机盐如_______________，可以中和因微生物生长而产生的酸性物质，从而稳定培养基中的pH值。
(1分)[6]产醇类的工业发酵培养基，其中的__________源物质含量应比__________源含量高得多。
(1分)[7]用于产氨基酸类的工业发酵培养基，其中的___________源物质含量应比_________源含量偏高为宜。
(2分)[8]利用动植物、微生物或其提取物制成的培养基称为__________培养基。它适合于____________用以及用于大生产中的___________培养基或__________培养基。
(2分)[9]微生物可利用的氮源谱是____________元素型、____________元素型、____________元素型和____________元素型。
(1分)[10]一些生长在动物血液、组织和肠道中的致病微生物，不仅需要足够的碳源，同时还必须有__________％（V/V）左右的__________的存在才能正常生长。
(5分)[11]_______、_______、_______、_______、_______、_______、_______、______、_______和___________10种元素是构成微生物菌体的主要元素。
(1分)[12]流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）是生长因子__________型细菌，需要____________作为其生长因子。
三、是非(19小题,共19.0分)
(1分)[1]微生物培养基中的C N比系指单位体积中碳源的重量与氮源的重量之比。答：（）(1分)[2]一些细菌和某些酵母菌尚可以石油、柴油、煤油、石蜡以及胶质沥青等作为生长的碳源。答：（）
(1分)[3]光能营养型微生物是指能够以日光作为能源的微生物。答：（）
(1分)[4]在工业发酵生产中用于大量产生代谢产物的发酵培养基，应以低碳高氮（即C N低）为宜。答：（）
(1分)[5]紫硫细菌、绿硫细菌、硝化细菌、硫化细菌和氢细菌生长所需要的碳源物是CO2或碳酸盐。答：（）
(1分)[6]一些肠道细菌除必须供给有机碳源外，尚需要少量CO2才能正常生长。答：（）(1分)[7]多数真菌、放线菌和许多细菌是生长因子异养型微生物。答：（）
(1分)[8]几乎自然界中所有含碳的物质均可被不同的微生物作为碳源加以利用。答：（）(1分)[9]对许多异养微生物来说，葡萄糖既是其生长所必需的碳源，又可作为能源，因此具有双重营养功能。答：（）
(1分)[10]单纯扩散是微生物细胞获取营养物质的主要方式之一，例如：糖类、醇类和氨基酸分子可通过单纯扩散进入微生物细胞。答：（）
(1分)[11]促进扩散是由膜内外营养物的浓度差驱动、有载体蛋白质参与的营养物运输方式。答：（）
(1分)[12]基团移位是微生物细胞需要有磷酸烯醇式丙酮酸-已糖磷酸转移酶系参与，需要消耗能量并使溶质分子在运送前后发生分子结构改变的一种运输方式。答：（）
(1分)[13]凡是能够为微生物的生命活动提供结构物质、能量、代谢调节物质和良好生理环境的物质，均称为微生物的营养物。答：（）
(1分)[14]还原态的NH是硝化细菌的能源和氮源物质，具有双功能营养作用。答：（）
(1分)[15]主动运输的机制在于通过消耗能量改变特异性载体蛋白的构象，从而逆浓度梯度吸收外界环境的营养物质。答：（）
(1分)[16]牛肉膏属于C、H、O、N类营养物，它可作为异养微生物的碳源、氮源和能源，具有三功能营养作用。答：（）
(1分)[17]产甲烷细菌只能以CO2或某些1C和2C化合物作为能源，而甲烷氧化菌仅能以甲烷和甲醇作为碳源物质。答：（）
(1分)[18]自然界中所有的动物和大量的异养微生物是氨基酸自养型生物，而所有的绿色植物和很多的微生物是氨基酸异养型生物。答：（）
(1分)[19]在工业发酵生产中所用的“种子”培养基，其氮源含量应偏低些（即C N比高）为宜。答：（）
四、名词解释(14小题,共40.0分)
(3分)[1]通透酶（透性酶permease）
(3分)[2]非可逆性凝固培养基：（non-reversible solidified medium）
(3分)[3]生长因子自养型微生物（auxoautotrophs）
(4分)[4]异养微生物（heterotrophs）
(3分)[5]基团移位（group translocation）
(3分)[6]热稳载体蛋白（Hpr,heat-stable carrier protein）
(3分)[7]碳源谱（spectrum of carbon source）
(3分)[8]自养微生物（autotrophs）
(3分)[9]碳氮比（C/N）
(2分)[10]单功能营养物（mono-functional nutrient）
(3分)[11]光能异养型（photoheterotroph）
(3分)[12]促进扩散（facilitated diffusion）
(3分)[13]主动运输（active transport）
(1分)[14]能源（energy source）
五、问答(7小题,共43.0分)
(10分)[1]简述微生物所需要的碳源物质的元素组成，并举例说明之？
(5分)[2]试举例说明以取得死或活有机物划分的微生物的营养类型。
(5分)[3]试写出异养微生物的能源谱。
(5分)[4]指出异养微生物对下列氮源物质利用的先后次序：
简单蛋白质，铵盐，N2，蛋白胨，硝酸盐。
(5分)[5]写出一般异养微生物对下列多糖类化合物利用的先后次序：
几丁质，纤维素，淀粉，琼脂，木质素。
(10分)[6]微生物培养基pH值的调节有哪两种方式？试述其内容要点。
(3分)[7]生长因子异养型微生物有何用途？
六、实验(2小题,共15.0分)
(10分)[1]欲从土样中富集好氧性自生固氮菌，应采用哪种培养基为宜？其富集原理如何？如何分离出好氧性自生固氮菌的菌落？
(5分)[2]欲对普通变形杆菌进行运动能力的观察，应使用何种类型的培养基？培养基中琼脂的用量是多少？如何进行接种？
第5章微生物营养和培养基练习题(A卷)答卷部分班级:___________序号:___________姓名:___________得分:___________
(卷面共有66题,146.0分,各大题标有题量和总分)
(10分)[1]欲从土样中富集好氧性自生固氮菌，应采用哪种培养基为宜？其富集原理如何？
[2]欲对普通变形杆菌进行运动能力的观察，应使用何种类型的培养基？培养基中琼脂的用量是多少？如何进行接种？(5分)
实验一微生物培养基的制备与灭菌（8课时） 一、目的要求 1、学习配制微生物培养基的一般方法和步骤。 2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。 二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。 三、实验材料 1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L的NaOH和1mol/L HCl溶液。 2、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。 3、其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净，然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。 （二）牛肉膏蛋白胨培养基的配制 1、培养基配制 （1）称量：按培养基配方计算出各成分的用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中。 注意：称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。称药品用的药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。 （2）溶解：用量筒称量所需体积的水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水），倒入烧杯中，用玻璃棒搅动溶解即可。 （3）调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH，可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用PH试纸测试，直至达到所需pH为止。 注意：pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 2、制备液体培养基 （1）用量筒准确量取20ml培养基，倒入100ml三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。 注意：倒溶液时不要把瓶口沾湿。包扎时不要把瓶子弄倒而把棉塞弄湿。
§1 微生物的营养要求P75 营养：微生物摄取和利用营养物质的过程。 营养物质：能满足微生物生长、繁殖和进行各种生理活动需要的物质。 微生物细胞培养收集湿菌体 烘干至恒重 干细胞灰分 无机物（盐） 有机物 蛋白质、糖、脂类、核酸、 维生素等及其降解物 分析方法：课本P79水分：70－90％离心、过滤、洗涤高温烘干105℃；低温真空干燥；红外线快速烘干。550℃焚烧 一、微生物细胞 的化学组分 2.细胞化合物的组成： 糖类、脂类、蛋白质、水、无机盐、生长因子、核酸 微生物、动物、植物之间存在“营养上的统一性” 3.化学元素组成： 主要元素：碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙、铁 微量元素：锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼 微生物、动物、植物之间存在“营养上的统一性” 4.微生物细胞的化学组分特点 (1)、不同的微生物细胞化学组分不同 （2）、同一种微生物在不同的生长阶段，其化学组分也有差异 二、营养物质及其生理功能 P76 1.根据营养物质在机体中的生理功能不同进行分类 五大类（武大）：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子 六大类（周德庆）:碳源、氮源、水、无机盐、生长因子、能源 1、碳源(carbon source) 为微生物提供碳素来源的物质。 1、功能 （1、构成微生物细胞物质，如糖、蛋白质、核酸等
（2、形成代谢产物，如酒精、乳酸等 （3、提供生命活动的能源 2、可作碳源的物质（P80表4－2） 糖类，蛋白质，有机酸，醇类，脂类，烃，CO2，碳酸盐等 碳源谱 必须利用有机碳源无机碳源为（唯一）主要碳源 自养微生物 异养微生物 最适碳源糖类优于其它化合物 单糖优于双糖、多糖 己糖优于戊糖 葡萄糖、果糖优于其他己糖 同一微生物对不同碳源的利用差别－速效碳源和迟效碳源 如葡萄糖和半乳糖同时存在于培养基中时，大肠杆菌先利用葡萄糖（速效碳源），再利用半乳糖（迟效碳源） 不同微生物的碳源谱相差很大 双功能营养物异养微生物的碳源兼作能源 2、氮源(nitrogin source) 为微生物提供氮素来源的物质。 1、功能 （1、构成微生物含氮物质，如蛋白质、核酸等 （2、形成代谢产物，如谷氨酸等 (3、一般不做能源 2、可作氮源的物质（P81表4－3） 蛋白质及其降解物（胨、肽、氨基酸）、硝酸盐、氨盐、N2、尿素、嘌呤、嘧啶、氰化物等 3、异养微生物氮的利用顺序 C.H.O.N> C.H.O.N.x >N.H > N.O 培养基中最常用的有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏 3、速效氮源和迟效氮源 实例：土霉素发酵生产中添加的玉米浆和花生饼粉 玉米浆：以较易吸收的蛋白质降解产物形式存在，易被利用（速效氮源） 花生饼粉：以大分子蛋白质形式存在，不易被利用（迟效氮源） 发酵生产中的作用不同：前者有利于菌体生长，后者有利于代谢产物形成保持适当的比例，协调菌体生长期和产物形成期，提高土霉素的产量 4、生理酸性盐与生理碱性盐： 以(NH4)2SO4等氨盐作为氮源培养微生物时，由于NH4+被吸收，会导致培养基的pH下降，因而将其称为生理酸性盐； 以NO3-为氮源培养微生物时，由于NO3-被吸收，会导致培养基pH升高，因而将其称为生理碱性盐。 3、无机盐（mineral salts 大量元素：Ca、K 、Mg、Fe等生长所需浓度在10－3-10－4mol/l 微量元素:Zn、Cu、Mn、Co、Mo等生长所需浓度在10－6-10－8mol/l
微生物的营养 微生物的特点：食谱广、胃口大 营养物质：那些能够满足微生物机体生长、繁殖和完成各种生理活动所需的物质 营养：微生物获得和利用营养物质的过程 营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是生物维持和延续其生命形式的一种生理过程。 第一节微生物的营养要求 一、微生物细胞的化学组成 （一）化学元素(chemical element): 大量元素(macro element) :碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙、铁（其中前六种占细菌细胞干重的97%）。 微量元素(trace element) : 锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼。 微生物、动物、植物之间存在“营养上的统一性”。 组成微生物细胞的各类化学元素的比例常因微生物种类的不同而异，也随菌龄及培养条件不同在一定范围内发生变化。 （二）微生物细胞的化学成分及分析 微生物细胞中的各种元素的存在形式：主要以水、有机物、无机物的形式存在于细胞中。 微生物细胞的化学组成的影响因素：微生物种类、菌龄、培养条件。 （三）元素在细胞内存在形式 上述元素主要以水、有机物、无机盐的形式存在于细胞中：
1、有机物：蛋白质、糖、脂类、核酸、维生素及其降解产物. 2、无机物：①参与有机物组成 ②单独存在于细胞质内以无机盐的形式存在. 3、水：约占细胞总重70%～90%，以游离水和结合水两种形式存在 游离水：干重法可测得； 结合水：不易蒸发、不冻结、也不能渗透，占水总量的17%—28% 。与其他生物细胞相比 ?共同成份：?特殊成份： 水肽聚糖 无机盐胞壁酸 蛋白质磷壁酸 糖类D-型氨基酸 脂类二氨基庚二酸 核酸等吡啶二羧酸等 化学成分及其分析 有机成分：化学方法直接抽提然后定性定量 细胞破碎、获得不同的亚显微结构，然后分析 无机成分：灰分测定 湿重、干重、细胞含水量 二、营养物质及其生理功能
第四章微生物营养试题 一．选择题： 40680 大多数微生物的营养类型属于： A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40681 蓝细菌的营养类型属于: A．光能自养 B. 光能异养 C．化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40682 的营养类型属于： A．光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40683 碳素营养物质的主要功能是: A. A.构成细胞物质 B. B.提供能量 C. C.A,B 两者 答 :( ) 40684 占微生物细胞总重量 70%-90% 以上的细胞组分是: A. A.碳素物质 B. B.氮素物质 C. C.水 答 :( ) 40685 能用分子氮作氮源的微生物有： A.酵母菌 B.蓝细菌 C.苏云金杆菌 答 :( ) 40686 腐生型微生物的特征是： A.以死的有机物作营养物质 B.以有生命活性的有机物作营养物质 ,B 两者 答 :( ) 40687 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是： A. A.所需能源物质不同 B. B.所需碳源不同 C. C.所需氮源不同 答 :( ) 40688 基团转位和主动运输的主要差别是： A. A.运输中需要各种载体参与 B. B.需要消耗能量 C. C.改变了被运输物质的化学结构 答 :( ) 40689 单纯扩散和促进扩散的主要区别是： A. A.物质运输的浓度梯度不同 B. B.前者不需能量 , 后者需要能量
C. 前者不需要载体 , 后者需要载体 答 :( ) 40690 微生物生长所需要的生长因子 ( 生长因素 ) 是： A. A.微量元素 B. B.氨基酸和碱基 C. C.维生素 D. D.B,C 二者 答 :( ) 40691 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：A．生长因素 B．C 源 C. N 源 答 :( ) 40692 细菌中存在的一种主要运输方式为： A. A.单纯扩散 B. B.促进扩散 C. C.主动运输 D. D.基团转位 答 :( ) 40693 制备培养基中常用的碳源物质是： A. A.糖类物质 B. B.碳酸盐 C. C.农副产品 答 :( ) 40694 微生物细胞中的 C 素含量大约占细胞干重的： A. A.10% B. B.30% C. C.50% D. D.70% 答 :( ) 40695 用牛肉膏作培养基能为微生物提供： A. A. C 源 B. B.N 源 C. C.生长因素 D. D.A,B,C 都提供 答 :( ) 40696 协助扩散的运输方式主要存在于： A. A.细菌 B. B.放线菌 C. C.真菌 答 :( ) 40697 主动运输的运输方式主要存在于： A. A.厌氧菌 B. B.兼性厌氧菌 C. C.好氧菌 答 :( ) 40698 基团转位的运输方式主要存在于： A. A.厌氧菌 B. B.兼性厌氧菌 C. C.好氧菌 D. D. A 和 B 答 :( ) 40699 缺少合成 AA 能力的微生物称为：
1．培养基应具备微生物生长所需要的六大营养要素是_碳源___、__氮源__、__能源__、___无机盐___、__生长因子__和???????????____水___。 2．碳源物对微生物的功能是__提供碳素来源__和__能量来源__，微生物可用的碳源物质主要有___糖类_、___有机酸_、__脂类_、__烃__、__ CO2及碳酸盐__等。 ３．微生物利用的氮源物质主要有_蛋白质_、_铵盐_、_硝酸盐__、_分子氮__、__酰胺_等，而常用的速效Ｎ源如__玉米粉__，它有利于___菌体生长___；迟效Ｎ源如__黄豆饼粉__、__花生饼粉_，它有利于___代谢产物的形成______。 ４．无机盐对微生物的生理功能是__作为酶活性中心的组成部分_、__维持生物大分子和细胞结构的稳定性_____ 、_调节并维持细胞的渗透压平衡__ 和 _控制细胞的氧化还原电位和作为某些微生物生长的能源物质等_。 ５．微生物的营养类型可分为__光能无机自养型__、__光能有机异养型__、_化能无机自养型和_化能有机异养型_。微生物类型的可变性有利于_提高微生物对环境条件变化的适应能力_。 ６．生长因子主要包括_维生素_、__氨基酸_和__嘌呤及嘧啶_，它们对微生物所起的作用是__作为酶的辅基或辅酶参与新陈代谢_、_维持微生物正常生长_、_为合成核柑、核苷酸和核酸提供原料__。 ７．在微生物研究和生长实践中，选用和设计培养基的最基本要求是__选择适宜的营养物质_、_营养物的浓度及配比合适_、_物理、化学条件适宜_、_经济节约_和__精心设计、试验比较_。 ８．液体培养基中加入CaCO３的目的通常是为了__调节培养基的pH值___。 ９．营养物质进入细胞的方式有__单纯扩散__、__促进扩散__、_主动运输__和___基团移位_，而金黄色葡萄球菌是通过___主动运输__方式运输乳糖，大肠杆菌又是通过_基团移位__方式运输嘌呤和嘧啶的。 10．影响营养物质进入细胞的主要因素是_营养物质本身__、__微生物所处的环境__和___微生物细胞的透过屏障___。 11．实验室常用的有机氮源有__蛋白胨__和__牛肉膏__等，无机氮源有__硫酸铵__和_硝酸钠等。为节约成本，工厂中常用___豆饼粉__等作为有机氮源。 12．培养基按用途分可分为基础培养基、增殖培养基、鉴别培养基和选择培养基四种类型。 二．是非题 1、在固体培养基中，琼脂的浓度一般为—%．（×）
第四章微生物的营养和培养基 一、名词解释 C/N比：微生物培养基中所含碳源中的C原子的摩尔数与氮源中的N原子的摩尔数之比。 EMB培养基：伊红美蓝乳糖培养基。 氨基酸自养型微生物：不需要利用氨基酸作氮源的微生物，它们能把尿素、 铵盐、硝酸盐甚至氮气等简单氮源自行合成所需要的 一切氨基酸。 单纯扩散：指疏水性双分子层细胞膜（包括孔蛋白在内）在无载体蛋白参与下，单纯依靠物理扩散方式让许多小分子、非电离分子尤其是亲 水性分子被动通过的一种物质运送方式。 单细胞蛋白：单细胞蛋白，也叫微生物蛋白，它是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微生物菌体。 氮源：凡能提供微生物生长繁殖所需氮元素的营养源。 的微生物。 光能自养型：光为能源，无机物为氢供体，基本碳源是CO 2 化能异养型：有机物为能源，有机物为氢供体，基本碳源是有机物的微生物。 的微生物。 化能自养型：无机物为能源，无机物为氢供体，基本碳源是CO 2基本培养基：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基。 基团移位：指一类既需要特异性载体蛋白的参与，又需耗能的一种物质要运送方式。 鉴别培养基：一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中 找出目的菌菌落的培养基。 培养基：指由人工配制的、含有六大营养素、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。 生长因子：是一类对调节微生物正常代谢所必需，但不能用简单的碳、氮源自行合成的微量有机物。 水活度：在天然或人为环境中，微生物可实际利用的自由水或游离水的含量。 速效氮：可以直接被植物根系吸收的氮。 碳源：一切能满足微生物生长繁殖所需碳元素的营养源。
第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于：（） A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于：（） A．光能自养 B. 光能异养C．化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是：（） A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A，B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是：（） A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有：（） A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于（）型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：（） A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是：（） A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是：（） A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量，后者需要能量 C. 前者不需要载体，后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是：（） A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B，C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：（） A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为：（） A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的：（） A. 10% B. 30% C. 50% D.70%
食品卫生微生物检验实验室操作要求 食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条 件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员 安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 一、无菌操作要求 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精 棉球将手擦干净。 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃 烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min， 再经火焰烧灼。 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求
1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备 进入无菌间后传递物品。 2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球 轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养 物等，必须经灭菌后方能使用。 (一)干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1．灭菌前准备 (1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包 装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 (2)装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2．装放 (1)干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。
第四章微生物的培养与生长 所有生物为了生存都必须不断地从外界环境中吸收所需的各种物质从中获得原料和能量以便合成新的细胞物质，生物所需的这些物质称之为营养物质。生物吸收利用营养物质的过程一般称为营养。营养物质是生物进行一切生命活动的物质基础，失去这个基础，一切生物都无法生存，微生物也不例外。可见，营养对微生物的重要性。 第一节微生物的营养 一、微生物细胞的化学组成 分析微生物细胞化学组成是了解微生物营养物质的基础。主要成分：C、H、N、O和无机成分。其中主要是水分、蛋白质、碳水化合物、脂肪、核酸和无机盐。水分占90-97，其余占3-10%。 二、营养物质及其生理功能 微生物所需的营养物质，主要包括碳素化合物、氮素化合物、水分、无机盐类和生长素。这些物质对微生物的生命活动主要有三方面的作用：（1）、供给微生物合成细胞物质的原料； （2）、合成代谢和生命活动所需的能量； （3）、调节新陈代谢。 （一）、碳源 碳源主要用来供给菌体生命活动所需的能量，构成军菌体细胞及代谢产物。常用的碳源有：糖类、脂肪和某些有机酸、部分醇类。 在某些特殊情况（如碳源贫乏），蛋白质水解产物或氨基酸等也可以被某些菌种作为碳源使用。由于菌种所含煤系统并不完全相同，所以，各种菌能利用的碳源亦不相同。 葡萄糖、麦芽糖、乳糖等单糖和双糖是绝大部分细菌、酵母菌、放线菌及霉菌可利用的碳源，大多数霉菌、放线菌和部分细菌可直接利用糊精和淀粉作为碳源。 （二）、氮源 氮源主要用来构成菌体细胞物质（如氨基酸、核酸、蛋白质）和含氮代谢产物。常用的氮源可分为两类：有机氮源和无机氮源。黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、蛋白胨、鱼粉等属于有机氮源；氨水、硫酸铵、尿素、硝酸钠、硝酸铵和磷酸氢二铵等为无机氮源。
第五章微生物营养习题及参考答案 一、名词解释 1．生长因子： 2．选择培养基(seclected media)： 3．基础培养基 4．合成培养基 5．化能异养微生物 6．化能自养微生物 7．光能自养微生物 8．光能异养微生物 9.单纯扩散 10.促进扩散 11.主动运输 12.基团移位 13.pH的内源调节 14.渗透压 15.水活度 二、填空题 1．微生物生长繁殖所需六大营养要素是、、、、 和等。 2．碳源物质为微生物提供和，碳源物质主要
有、、 、、等。 3．生长因子主要包括、和，其主要作用是、。 4．根据，微生物可分为自养型和异养型。 5．根据，微生物可分为光能营养型和化能营养型。 6．根据，微生物可分为无机营养型和有机营养型。 7．根据碳源、能源和电子供体性质的不同，微生物的营养类型可分为、、 和。 8．按用途划分，培养基可分为、、和等4种类型。 9．常用的培养基凝固剂有、和。 10．营养物质进入细胞的方式有、、和。 三、选择题（4个答案选1） 1．下列物质可用作生长因子的是（）。 A.葡萄糖 B.纤维素 C.NaGl D.叶酸 2．大肠杆菌属于（）型的微生物。 A.光能无机自养 B.光能有机异养 C.化能无机自养 D.化能有机异养 3．硝化细菌属于（）型的微生物。 A.光能无机自养 B.光能有机异养 C.化能无机自养 D.化能有机异养 4．某种细菌可利用无机物为电子供体而有贾稀为碳源，属于（）型的微生物。 A.兼养型 B.异养型 C.自养型 D.原养型 5、化能无机自养微生物可利用（）为电子供体。
A.CO 2 B.H 2 C.O 2 D.H 2 O 6．用来分离产胞外蛋白酶菌株的酪素培养基是一种（）。 A.基础培养基 B.加富培养基 C.选择培养基 D.鉴别培养基 7、固体培养基中琼脂含量一般为（）。 8．用来分离固氮菌的培养基中缺乏氮源，这种培养基是一种（）。 A.基础培养基 B.加富培养基 C.选择培养基 D.鉴别培养基 9．水分子可通过（）进入细胞。 A.主动运输 B.扩散 C.促进扩散 D.基团转位 10．被运输物质进入细胞前后物质结构发生变化的是（）。 A．主动运输 B.扩散 C.促进扩散 D.基团转位 四、是非题 1．某些假单胞菌可以利用多达90多种以上的碳源物质。 2．碳源对配制任何微生物的培养基都是必不可少的。 3．氨基酸在碳源缺乏时可被微生物用作碳源物质，但不能提供能源。 4．培养营养缺陷型微生物的培养基必须同时加入维生素、氨基酸、嘌呤及嘧啶。 5．为使微生物生长旺盛，培养基中营养物质的浓度越高越好。 6．对含葡萄糖的培养基进行高压蒸汽灭菌时可以121.3℃加热20min即可。 7．半固体培养基常用来观察微生物的运动特征。 8．基础培养基可用来培养所有类型的微生物。 9．伊红美蓝（EMB）培养基中，伊红美蓝的作用是促进大肠杆菌的生长。 10．在促进扩散过程中，载体蛋白对被运输物质具有较高的专一性，一种载体蛋白只能运输一种物质。 五、简答题 1．能否精确地确定微生物对微量元素的需求，为什么？ 2．为什么生长因子通常是维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶，而葡萄糖通常不
微生物培养基配制 培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。 配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。 注意事項–灭菌锅的使用 ①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀 灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門 進入灭菌锅之物品，蓋子不可關太緊或太鬆 拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套 培养基中的主要成分及其作用： 营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水 常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏 常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖 双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；
醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油） 水：用蒸馏水，不能用自来水凝固剂：琼脂、明胶、血清等 抑制剂： 1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率 2、种类： 盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等 染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红 胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐 抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素 指示剂 1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。
2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。 培养基的类型： ●根据培养基的物理状态来区分： 1、液体培养基：主要用于增菌培养、鉴别性培养 2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定 3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种 4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。 ●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装 瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。 ●根据培养基的用途来区分： 增殖培养基选择培养基鉴别培养基 1、增殖培养基：在普通培养基中加入 一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物
第四章 微生物的营养与培养基 目的要求： 通过本章的课堂教学，使学生了解微生物营养类型的特点及多样性，以及根据不同微生物各自的营养要求，配制相应的培养基对微生物培养的理论知识，为今后对微生物的研究与利用打下基础。 教学内容： 1、微生物的6类营养要素 2、微生物的营养类型 3、营养物质进入细胞的方式 单纯扩散(simple diffusion) 促进扩散(facilitated diffusion) 主动运输(active transport) 基团移位(group translocation) 4、培养基(media)配制的原则 5、培养基的种类 重点内容： 微生物 营养类型 营养物质进入细胞的方式 培养基(media)配制的原则及主要培养基类型 营养（nutrition）：微生物CUN 从外部环境中摄取对其生命活动必须的能量和物质，以满足其生长和繁殖等生理活动的过程。 营养物质（nutrient）：那些能够满足机体生长、繁殖和完成各种生理活动所需要的物质称为营养物质。营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是微生物维持和延续其生命形式的一种生理过程。 第一节 微生物的六种营养要素 一、微生物细胞的化学组成 细胞化学元素组成： 主要元素: 包括碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙、铁等，碳、氢、氧、氮、磷、硫等 微量元素: 包括锌、锰、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。 微生物细胞组成：有机物、无机物和水。 有机物：主要包括蛋白质、糖、脂、核酸、维生素以及它们的降解产物和一些代谢产物等物质。 无机物：是指与有机物相结构或单独存在于细胞中的无机盐(inorganic salt)等物质。 水：细胞维持正常生命活动所不可少的，一般可占细胞重量的70%-90%。
第四章微生物的营养和培养基习题参考答案 A部分习题参考答案 一、选择题 1-5. DACCB；6-10. ABCCD；11-15. ACCDC 二、是非题 1-5. TFTTT；6-10. TTTTF 三、填空题 1.CO2，糖类，醇类，有机酸类 2.氮气，硝态氮，铵态氮，有机氮化物 3.光，CO2，有机物，CO2 4.氧化无机物，CO2 5.光能自养型，光能异养型，化能自养型，化能异养型 6.基团转位. 7.NH3，CO2，化能自养型 8.碳素，氮素，矿质元素，生长因素，水. 9.有机物，无机物，水. 10.主动输送，基团转位 11.主动运输，基团移位. 12.光能，CO2，，有机物，H2O，，有机物 13.0.63-0.99，5:1 14.病毒，立克次氏体，人工配制的培养基，活体培养 15.糖，氨基酸，某些阳离子 四、解释题 1.微生物营养：指微生物获得与利用营养物质的过程。 2.光能自养型：以日光为能源，以CO2为碳源合成细胞有机物的营养类型。 3.化能自养型：通过以氧化无机物释放出的能量还原CO2成为细胞有机物的营养类型。 4.化能异养型：用有机物分解时释放出的能量将有机物分解的中间产物合成新的有机物的营养类型。 5.有机营养型微生物：只以适宜的有机化合物作为营养物质的微生物。 6.无机营养型微生物：以CO2作唯一碳源，不需要有机养料的微生物。 7.生长因子：微生物生长不可缺少的微量有机物，包括维生素，氨基酸及碱基等。 8.单纯扩散：营养物质进入微生物细胞时不需要载体参加，也不消耗代谢能量，而是顺营养物的浓度梯度由高浓度向低浓度运输营养物质进入微生物细胞的运输方式。
江西农业大学生物科学与工程学院 第5章微生物营养和培养基练习题(A卷)试卷部分班级:___________学号:___________姓名:___________得分:___________ 题目部分，(卷面共有66题,146.0分,各大题标有题量和总分) 一、选择(12小题,共13.0分) (1分)[1]参与微生物基团移位运输方式的体系是： A.Hpr； B.酶1； C.酶2； D.Hpr+酶1+酶2 答：（） (1分)[2]微生物细胞吸收糖、核苷酸、脂肪酸和腺嘌呤等物质，通常采用的运输方式是：A.主动运输；B.促进扩散； C.基团移位； D.单纯扩散。答：（） (1分)[3]在鉴别性EMB培养基上，在反射光下大肠杆菌菌落呈现的颜色是： A.棕色； B.粉红色； C.绿色并带有金属光泽； D.无色。答：（） (1分)[4]培养放线菌的高氏一号培养基和培养真菌的察氏培养基属于下列培养基中的：A.天然培养基；B.组合培养基； C.半组合培养基； D.鉴别培养基。答：（） (1分)[5]微生物细胞吸收无机离子、有机离子、乳糖、蜜二糖或葡萄糖，通常采用的运输方式是： A.基团移位； B.单纯扩散； C.主动运输； D.促进扩散。答：（） (1分)[6]根据培养基上呈现菌落颜色的不同而能鉴别大肠杆菌和肠杆菌属几种细菌的培养基是： A.Ashby无氮培养基； B.Martin培养基； C.高氏一号培养基； D.EMB培养基。答：（） (1分)[7]为避免由于微生物生长繁殖过程中的产物而造成培养基pH值的变化，可采用的调节方法是： A.在配制培养基时加入磷酸盐缓冲液或不溶性CaCO3。 B.在配制培养基时应高于或低于最适pH值； C.在配制培养基时降低或提高碳、氮源用量；改变碳氮比。 D.在培养过程中控制温度和通气量。答：（） (1分)[8]微生物细胞吸收O2、CO2、乙醇和少数氨基酸分子，通常采用的运输方式是：A.促进扩散；B.单纯扩散； C.主动运输； D.基团移位。答：（） (2分)[9]微生物细胞吸收营养物质的促进扩散和主动运输方式最主要的差异在于： A.营养物质在运输前后均发生分子结构变化，促进扩散变化小，主动运输变化大。
常用微生物培养基配方 大全 Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】
（1）分离细菌时，在培养基中加入浓度为50U/ml制霉菌素，可以抑制霉菌和菌的生长。 （2）（2）分离放线菌时，在样品中加入%十二烷基磺酸钠（SDS）不仅可以抑制细菌的生长，还能 激活放线菌孢子的萌发。加入氟哌酸（5mg/L）+制霉菌素（50mg/L）+青霉素（L）也可以有效地抑 制细菌和真菌，而不影响放线菌的生长。 （3）（3）分离霉菌和菌时，在培养基中加入青霉素、链霉素和四环素各30U/ml，可以抑制细菌和 放线菌生长。 （4）（4）分离根霉和毛霉时，由于这些微生物的菌丝易蔓延成片，难以得到纯化的菌落，通常在 培养基中添加%去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延，使菌落长得小而紧密。 （5）一般用于分离单一目的微生物的培养基中均含有抑制其他微生物的抑制剂，这些专用的抑制剂 在小型实验室配制较麻烦，现已有成品供应，只要直接加入基础培养基即可。如氨苄西林，主要用 于分离亲水气单孢菌。 （6） 1、细菌培养基 配方一牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏克，蛋白胨克，氯化钠克，琼脂克， 水 1000毫升 在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到～,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二马铃薯培养基 取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。
36种微生物常用培养基配制 1.牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.4～7.6。 2.高氏1号培养基(用于放线菌培养) 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4?3H2O 0.5g，MgSO4?7H2O0.5g，FeSO4?7H2O0.01g，水1000mL，pH7.4～7.6。配制时注意：可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3.马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌） K2HPO41g，MgSO4?7H2O0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，1/3000孟加拉红水溶液100mL，水900mL，自然pH，121℃湿热灭菌30min。待培养基融化后冷却55～60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。 4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养) 马铃薯(去皮)200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL，配制方法如下： 将马铃署去皮，切成约2cm2的小块，放入1500mL的烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖，再补足至1000mL，自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。 5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养) 蔗糖30g，NaNO3 2g，K2HPO4 1g，MgSO4?7H2O0.5g，KCl 0.5g，FeSO4?7H2O0.1g，水1000mL，pH7.0～7.2。 6.Hayflik培养基(用于支原体培养) 牛心消化液(或浸出液)1000mL，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15g，pH7.8～8.0，分装每瓶70mL，121℃湿热灭菌15min，待冷却至80℃左右，每70mL中加入马血清20mL，25%鲜酵母浸出液10mL，15醋酸铊水溶液2.5mL，青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上)0.5mL，以上混合后倾注平板。 *注意：醋酸铊是极毒的药品，需特别注意安全操作。 7.麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基) 葡萄糖0.1g, KCl 0.18g，酵母膏0.25g，醋酸钠0.82g，琼脂l.5g，蒸馏水l00mL。溶解后分装试管，1l5℃湿热灭菌15min。 8.葡萄糖蛋白胨水培养基(用于V.P.反应和甲基红试验) 蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO4 0.2g，水100mL，pH7.2，1l5℃湿热灭菌20min。 9.蛋白胨水培养基(用于吲哚试验) 蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.2～7.4，121℃湿热灭菌20min。 10.糖发酵培养基(用于细菌糖发酵试验) 蛋白胨0.2g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.02g，水100mL，溴麝香草酚蓝(1%水溶液)0.3mL，糖类lg。分别称取蛋白胨和NaCl溶于热水中，调pH至7.4，再加入溴麝香草酚蓝(先用少量95%乙醇
第四章微生物的营养和培养基 一、目的要求 掌握微生物细胞的组成、营养类型、物质进入细胞的方式及及培养基的配制。 二、教学内容 1．微生物的营养要素 2．微生物的营养类型 3．营养物质进入细胞的方式 4．培养基 三、重点内容 微生物的营养类型以及配制培养基的原则 四、教学方法 利用多媒体进行教学。 微生物同其他生物一样，为了生存必须从环境中吸收营养物质，通过新陈代谢将其转化成自身的细胞物质或代谢物，并从中获取生命活动所需要的能量，同时将代谢活动产生的废物排出体外。那些能够满足机体生长、繁殖和完成各种生理活动所需要的物质称为营养物质。微生物获得和利用营养物质的过程称为营养。营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是微生物维持和延续其生命形式的一种生理过程。 第一节微生物的六种营养要素 一、微生物细胞的化学组成 1．化学元素（chemical element） 构成微生物细胞的物质基础是各种化学元素。根据微生物对各类化学元素需要量的大小,可将它们分为主要元素和微量元素,主要元素包括碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙、铁等，碳、氢、氧、氮、磷、硫这六种主要元素可占细菌细胞干重的97%。微量元素包括锌、锰、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。 组成微生物细胞的各类化学元素的比例常因微生物种类的不同而各异。不仅如此，微生物细胞的化学元素组成也常随菌龄及培养条
件的不同而在一定范围内发生变化，幼龄的比老龄的含氮量高，在氮源丰富的培养基生长的细胞比在氮源相对贫乏的培养基上生长的细胞含量高。 2. 化学成分及其分析 各种化学元素主要以有机物、无机物和水的形式存在于细胞中。有机物主要包括蛋白质、糖、脂、核酸、维生素以及它们的降解产物和一些代谢产物等物质。对细胞有机物成分的分析通常采用两种方式：一是用化学方法直接抽提细胞内的各种有机成分，然后加以定性和定量分析；二是先将细胞破碎，然后获得不同的亚显微结构，再分析这些结构的化学成分。无机物是指与有机物相结构或单独存在于细胞中的无机盐(inorganic salt)等物质。分析细胞无机成分时一般将干细胞在高温炉（550℃）中焚烧成灰，所得的灰分物质是各种无机元素的氧化物，称为灰分(ash constituent)。采用无机化学常规分析法可定性定量分析出灰分中各种无机元素的含量。 水是细胞维持正常生命活动所不可少的，一般可占细胞重量的70%-90%。细胞湿重(wet weight)与干重(dry weight)之差为细胞含水量，常以百分率表示。将细胞表面所吸附的水分除去后称量所得重量即为湿重，一般以单位培养液中所含细胞重量表示（g/L或mg/ml），但具体测量过程中，常由于细胞表面吸附水分除去程度的不同而导致测量结果有误差，聚集在一起的单细胞微生物表面吸附的水分难以除去，这些吸附的水分可占湿重的10%。采用高温（105℃）烘干、低温真空干燥和红外线快速烘干等方法将细胞干燥至恒重即为干重。值得注意的是：高温烘干会导致细胞物质分解，而利用后两种方法所得结果较为可靠。 二、微生物的营养要素 微生物生长所需要的元素主要以相应的有机物与无机物的形式提供的，也有小部分可以由分子态的气体物质提供。营养物质按照它们在机体中的生理作用不同，可以将它们区分成碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水。 1.碳源在微生物生长过程中能为微生物提供碳素来源的物质称为碳源。碳源物质在细胞内经过一系列复杂的化学变化后成为微生物自身的细胞物质（如糖类、脂类、蛋白质等）和代谢产物，碳可占一般细菌细胞干重的一半。同时绝大部分碳源物质在细胞内生化反应过程中还能为机体提供维持生命活动所需的能源，因此碳源物质通常
实用文档 . 实验五培养基的配制（基础实验，4学时） 一、实验目的和要求 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素及水分等。琼脂是应用最广的凝固剂，培养基一经制成就应及时灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌器灭菌。 牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学中最常用的基础培养基，加琼脂制成的固体培养基常用于细菌的分离和培养。配方：牛肉膏0.3g, 蛋白胨1g，NaCl 0.5g，水100ml，琼脂1.5～ 2.0g，pH 7.2～7.6 三、实验用具 高压灭菌器、电热板、恒温培养箱、电子天平、500ml刻度搪瓷杯、称量纸、三角瓶、量筒、试管、培养皿、玻璃棒、pH试纸、记号笔、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH 、1mol/LHCl 四、实验步骤 1、称药品按配方依次称取，放入具刻度搪瓷杯中，牛肉膏可用表面皿或小烧杯称量，热水溶解后倒入搪瓷杯中，蛋白胨极易吸潮，称量要迅速。 2、溶解在具刻度搪瓷杯中加入少于所需要的水量，加热，用玻璃棒搅拌，溶解后加入琼脂，熔化后补充水至所需量。 3、调pH 用1mol/L NaOH 和1mol/LHCl调，用pH试纸检测。 4、分装液体培养基分装高度以试管高度的1/4左右为宜，三角瓶不超过容积的一半为好，固体培养基＜试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。 5、加塞用棉花制作塞 6、包扎三角瓶用牛皮纸或双层报纸包在棉塞外，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。试管先扎成捆后，在棉塞外用纸包。标明组别、培养基名称、日期。 7、灭菌 0.103MPa，121℃，湿热灭菌20min。 8、摆斜面趁热将试管口搁在一根长木条上，使斜面长度不超过试管总长的1/2。 9、平板制作灭菌后冷至50℃～60℃，取下棉塞，通过火焰，倒在已灭菌的平皿中，平皿制好后通常倒置 10、无菌检查将灭菌的培养基放在37℃恒温箱中培养24～48h，无菌生长可使用。 六、注意事项 1、分装时可用滤斗，避免培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 2、称药品用的牛角匙不要混用；称完药品及时盖紧瓶盖。 七、思考题 高压蒸汽灭菌器如何使用？
微生物的营养 1．微生物的营养要求 微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。 水：水是各种生物细胞必需的。水是良好的溶剂，微生物的新陈代谢过程中的一切生化反应都离不开水的作用。 碳源：碳源是合成菌体成分的原料，也是微生物获取能量的主要来源。整体上看来，微生物可以利用的碳源范围极广，从大类上说，可以分为有机碳源和无机碳源两大类，凡必须利用有机碳源的微生物就是异养微生物，凡能利用无机碳源的微生物就是自养微生物。糖类是最广泛利用的碳源。 氮源：氮源主要是供给合成菌体结构的原料，很少作为能源利用。与碳源相似，微生物作为一个整体来说，能利用的碳源种类十分广泛。某些微生物（如固氮菌）能利用空气中分子态的氮或利用无机氮化物如铵盐、硝酸盐合成有机氮化物。多数致病菌则必须供给蛋白胨、氨基酸等有机氮化物才能生长。 无机盐类：无机盐主要可为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素。微生物需要的无机盐类很多，主要有P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等，其主要功能为构成菌体成分；调节渗透压；作为某些酶的成分，并能激活酶的活性等。 生长因子：有些微生物虽然供给它适合的碳源氮源和无机盐类，仍不能生长，还要供给一定量的所谓“生长因子”。其种类很多，主要是B族维生素的化合物等。生长因子可以从酵母浸出液、血液或血清中获得。 2．微生物的营养类型 根据微生物对碳源的要求不同，可将其分为自养菌和异养菌两大营养类型。 凡能利用无机碳合成菌体内有机碳化物的，叫自养菌；不能利用无机碳而需要有机碳才能合成菌体内有机碳化物的，为异养菌。 根据其生命活动所需能量的来源不同，可分为光能营养菌和化能营养菌。前者是从光线中获得能量，后者则从化学物质氧化中取得能量。 因此，根据微生物所需的碳源和能源不同，可将微生物分为光能自养菌、光能异养菌、化能自养菌、化能异养菌等四类。如表所示： 微生物的营养类型