第四章微生物的营养和培养基
一、名词解释
C/N比：微生物培养基中所含碳源中的C原子的摩尔数与氮源中的N原子的摩尔数之比。
EMB培养基：伊红美蓝乳糖培养基。
氨基酸自养型微生物：不需要利用氨基酸作氮源的微生物，它们能把尿素、
铵盐、硝酸盐甚至氮气等简单氮源自行合成所需要的
一切氨基酸。
单纯扩散：指疏水性双分子层细胞膜（包括孔蛋白在内）在无载体蛋白参与下，单纯依靠物理扩散方式让许多小分子、非电离分子尤其是亲
水性分子被动通过的一种物质运送方式。
单细胞蛋白：单细胞蛋白，也叫微生物蛋白，它是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微生物菌体。
氮源：凡能提供微生物生长繁殖所需氮元素的营养源。
的微生物。
光能自养型：光为能源，无机物为氢供体，基本碳源是CO
2
化能异养型：有机物为能源，有机物为氢供体，基本碳源是有机物的微生物。
的微生物。
化能自养型：无机物为能源，无机物为氢供体，基本碳源是CO
2基本培养基：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基。
基团移位：指一类既需要特异性载体蛋白的参与，又需耗能的一种物质要运送方式。
鉴别培养基：一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中
找出目的菌菌落的培养基。
培养基：指由人工配制的、含有六大营养素、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。
生长因子：是一类对调节微生物正常代谢所必需，但不能用简单的碳、氮源自行合成的微量有机物。
水活度：在天然或人为环境中，微生物可实际利用的自由水或游离水的含量。
速效氮：可以直接被植物根系吸收的氮。
碳源：一切能满足微生物生长繁殖所需碳元素的营养源。
天然培养基：是指一类利用动、植物或微生物包括用其提取物制成的培养基。
微生物营养：生物体从环境吸取和利用营养物质，满足自身生理需要的过程。
无机营养型微生物：靠氧化无机物获得能量来生存的微生物。
选择性培养基：一类根据某微生物的特殊营养要求或对其化学、物理因素抗
性的原理而设计的培养基。
营养物：指具有营养功能的物质，在微生物学中，它还包括非常规物质形式的光辐射能在内。
有机营养型微生物：指对有机物氧化、分解而进行获得能量的反应来生活、
生殖的微生物。
主动运送：指一类须提供能量并通过细胞膜上特异性载体蛋白构象的变化，而使膜外环境中低浓度的溶质运入膜内的一种运送方式。
组合培养基：是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。
单功能营养物：光辐射能。
双功能营养物：还原态无机物。
多功能营养物：氨基酸类。
PTS系统：磷酸转移酶系统，即磷酸烯醇式丙酮酸－己糖磷酸转移酶系统。
营养缺陷型：因丧失合成某些生活必需物质的能力，不能在基本培养基上生长的，突变型菌株。
原养型：指营养缺陷型突变株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表现型上与野生型相同。
二、填空题
1.根据微生物利用碳源和能源的不同可将微生物分成为自养型、异养型、光能营养型和化能营养型四种类型，
2.按照营养物质在机体中生理作用不同可将其分为6种营养要素即碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水。
3.凡是必须利用有机碳源作为主要碳源的微生物为异养微生物，凡是以无机碳源作为主要碳源的微生物为自养微生物。
4.根据利用碳源不同，微生物可以分为异养微生物和自养微生物等类群。根
据利用能源不同，微生物可以分为化能营养型微生物和光能营养型微生物等类群。
5.微生物吸收营养物质的四种运输方式为单纯扩散、促进扩散、主动运送和基团移位；在营养物质的四种运输方式中，只有基团移位运输方式改变了被运输物质的化学组成。能逆浓度梯度方向进行营养物运输的运输方式是主动运送、基团移位，既消耗能量又需要载体的运输方式是主动运送、基团移位。
6.根据物理性状不同，微生物的培养基可以分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基等，根据物质成分不同，微生物的培养基可以分为天然培养基、组合培养基、半组合培养基等。
7.既能作为碳源又能作为能源的营养物称为双功能营养物。
8.微生物细胞的主要组成元素是蛋白质、核酸、类脂和碳水化合物，细菌细胞的碳、氮比为4：1 。
9.广义的生长因子除了维生素外，还包括碱基、卟啉及其衍生物、甾纯、胺类、C4~C6的分支或直链脂肪酸和氨基酸营养缺陷型突变株所需要的氨基酸。10.大肠杆菌细胞参与基团移位的特异蛋白载体称为__________________，运输某营养物至少需要_____、________、________和__________4种蛋白质，葡萄糖通过基团移位的方式进入细胞内，分子结构发生_________变化。
11.一般好氧微生物生长需要的的氧化还原电势为+0.3~+0.4V ，兼性厌氧菌在氧化还原电势高于+0.1V 进行呼吸产能，低于+0.1V 进行发酵产能，厌氧菌只能生活在氧化还原电势低于+0.1V 的环境中。
12.培养基配置的时候，C/N比通常为_________，测定培养基中的氧化还原电势用刃天青作为指示剂。
13.光能异养菌以光作能源，以CO2为碳源，以有机物作供氢体将CO2合成细胞有机物，化能自养菌以氧化有机物取得能量，以有机碳化物作碳源合成细胞有机物。
14.一般将化合物水解时释放自由能在5.0千卡（20.9千焦）以上的称为高能化合物。
15.光能自养型微生物含_________，主要以无机物如水，H2S、硫代硫酸钠等作为供氢体还原CO2 。
16.化能自养型微生物的能源十分独特，可以利用一些还原态无机物，如NH4+，
S，H2S，NO2-，H2，F2+等作为能源。
三、选择题
1.PDA培养基属于（ B ）。
A、合成培养基
B、半合成培养基
C、鉴别培养基
D、天然培养
基
2.半固体培养基中琼脂使用浓度为（ B ）。
A、10-20%
B、0.2-0.7%
C、1.5-2.0%
D、5-10%
3.从土壤中分离得到的微生物的营养类型属于（D）。
A、光能自养
B、光能异养
C、化能自养
D、化能异养
4.蛋白胨水培养基属于（ D ）。
A、合成培养基
B、半合成培养基
C、鉴别培养基
D、天然培养
基
5.高氏一号培养基属于（ A ）。
A、合成培养基
B、半合成培养基
C、鉴别培养基
D、天然培养
基
6.光能无机营养型微生物不以下列哪种物质作为电子供体，以CO2作为
生长的唯一碳源或主要碳源。（A）
A、NO3-
B、S
C、H2
D、H2S
7.红螺菌科细菌的营养类型属于（ B ）。
A、光能自养
B、光能异养
C、化能自养
D、化能异养
8.基团转位和主动运输的主要差别是（ D ）。
A、需要载体参与
B、物质从低浓度向高浓度运输
C、需要消耗能量
D、被运输物质的化学结构发生变化
9.酵母菌属于（ C ）微生物。
A、好氧型
B、厌氧型
C、兼性厌氧型
D、微厌氧型
10.金黄色葡萄球菌属于（D）型的微生物。
A、光能无机自养
B、光能有机异养
C、化能无机自养
D、化能有机
异养
11.可利用无机物为电子供体而以有机物为碳源属于（ B ）型的微生物。
A、兼养型
B、异养型
C、自养型
D、原养型
12.蓝细菌和藻类细菌的营养类型属于（ A ）。
A、光能自养
B、光能异养
C、化能自养
D、化能异养
13.马铃薯培养基属于（ B ）。
A、合成培养基
B、半合成培养基
C、鉴别培养基
D、天然培养
基
14.牛肉膏蛋白胨培养基属于（ D ）。
A、合成培养基
B、半合成培养基
C、鉴别培养基
D、天然培养
基
15.培养真菌时，不可采用下列哪种措施防止细菌污染（D）。
A、培养基中加抗生素
B、培养基中加入乳酸
C、培养基中加入合适的染料
D、降低培养温度
16.培养真菌时，为防止细菌污染，通常可以加入抗生素，下列哪种抗生素
可以进行高压蒸汽灭菌（C）。
A、青霉素
B、磷霉素
C、链霉素
D、氯霉素
17.配置培养基时通常加入（ A ）作为备用碱进行pH内源调节。
A、CaCO3
B、氨水
C、生物碱
D、K2PO4
18.实验室培养放线菌常用的培养基是（B）。
A、PDA培养基
B、高氏一号培养基
C、营养肉汤培养基
D、EMB培养基
19.实验室培养细菌常用的培养基是（A）。
A、牛肉膏蛋白胨培养基
B、马铃薯培养基
C、高氏一号培养基
D、查氏培养基
20.实验室培养细菌常用的培养基是（D）。
A、PDA培养基
B、高氏一号培养基
C、营养肉汤培养基
D、EMB培养基
21.实验室培养真菌常用的培养基是（ A ）。
A、PDA培养基
B、高氏一号培养基
C、营养肉汤培养基
D、EMB培养基
22.实验室制作固体培养基时，最常使用的凝固剂为（ B ）。
A、明胶
B、琼脂
C、纤维素
D、硅胶
23.试剂公司出售的糖发酵基础培养基和LB培养基属于（A）。
A、液体培养基
B、合成培养基
C、脱水培养基
D、天然培养基
24.碳源和能源来自同一有机物的是微生物属于（ D ）。
A、光能自养型
B、化能自养型
C、光能异养型
D、化能异
养型
25.微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是（ E ）。
A、卟啉和甾醇
B、氨基酸和碱基
C、维生素
D、C4~C6的分支或直链脂肪酸
E、以上都是
26.微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的（ C ）。
A、10%
B、30%
C、50%
D、70%
27.细菌中存在的一种主要运输方式为（ D ）。
A、单纯扩散
B、促进扩散
C、主动运输
D、基团转位
28.下列不属于主动运输特点的是（ B ）。
A、逆浓度
B、不需载体
C、需能量
D、运输速度有饱和性
29.下列哪项不是难养菌（ C ）。
A、类支原体
B、类立克次氏体
C、动物病毒
D、寄生性真菌
30.下列哪项说法是错误的（ D ）。
A、无机的氮源物质一般不为微生物提供能量，有机的氮源物质则提供
能源。
B、生长因子主要是构成酶的辅基或辅酶，是某些酶的活性所必须的成
份。
C、微生物可以通过水合作用与脱水作用控制由多亚基组成的结构如酶、
微管、鞭毛与病毒等的装配与解离。
D、酵母菌最适生长的a w值比细菌最适a w值高（低），霉菌一般比其
他微生物更耐干燥，生长的a w值通常在0.80左右。
31.下列哪种培养基不属于选择性培养基的是（ D ）。
A、Ashby无氮培养基
B、Martin培养基
C、酵母菌富集培养基
D、高氏一号培养基
32.下列哪种培养基属于鉴别培养基的是（ A ）。
A、EMB培养基
B、Martin培养基
C、Czapek培养基
D、McClary培养基
33.下列哪种微生物不属于化能无机营养型微生物的是（ E ）。
A、硝化细菌
B、硫化细菌
C、铁细菌
D、氢细菌
E、紫色非硫
细菌
34.下列培养基哪种是半合成培养基（ B ）。
A、豆芽汁培养基
B、PDA培养基
C、米曲汁培养基
D、察氏培养基
35.下列培养基哪种是合成培养基（ D ）。
A、LB培养基
B、PDA培养基
C、米曲汁培养基
D、高氏一号培养基
36.下列物质，哪一项是微生物通过基团移位进行运输的（ D ）。
A、氧、二氧化碳、甘油、乙醇、某些离子等小分子物质和亲脂性分子
B、氨基酸、单糖、维生素及无机盐等。
C、有机离子、无机离子和氨基酸、乳糖等糖类。
D、糖、糖的衍生物，嘌呤、嘧啶、碱基
37.下列物质，哪一项是微生物通过主动运输进行运输的（ C ）。
A、氧、二氧化碳、甘油、乙醇、某些离子等小分子物质和亲脂性分子
B、氨基酸、单糖、维生素及无机盐等。
C、有机离子、无机离子和氨基酸、乳糖等糖类。
D、糖、糖的衍生物，嘌呤、嘧啶、碱基
38.以高糖培养酵母菌，其培养基类型为（ C ）。
A、加富培养基
B、鉴别培养基
C、选择培养基
D、完全培养基
39.用来分离固氮菌的培养基中缺乏氮源，这种培养基是一种（ C ）。
A、基础培养基
B、加富培养基
C、选择培养基
D、鉴别培
养基
40.用玉米粉作培养基能为微生物提供（ C ）。
A、C源
B、N源
C、生长因素
D、以上都提供
41.在培养基中加入蛋白胨主要为微生物提供（C）。
A、生长因子
B、C 源
C、N 源
D、能源
42.紫硫细菌和绿硫细菌的营养类型属于（ A ）。
A、光能自养
B、光能异养
C、化能自养
D、化能异养
四、判断题
1.HPr对糖的吸有专一性。（×）
2.KNO3作为氮源培养微生物被称为生理碱性盐。（√）
3.pH通过影响营养物质的电离程度而影响进入细胞的能力。（√）
4.PTS系统的酶I和HPr是存在于细胞质中，是特异性的蛋白质。（×）
5.Vit作为微生物的生长因子其主要作用是作为辅基和辅酶参与新陈代谢，是某些酶活性所必须的成份。（√）
6.半固体培养基可以用来观察细菌的运动性以及产生硫化氢等生理特征。（×）
7.不同的糖进行基因转移（基因移位）时，都有自已独特的PTS系统，他们之间的差异主要是在酶II和酶III。一般HPr的酶I是相同的。（√）
8.不同的微生物对各种碳源的利用能力不同。（√）
9.不同微生物对生长因子的需求种类和数量不同。（√）
10.促进扩散必须借助于特异载体蛋白和能量。（×）
11.大多数微生物可以合成自身所需的生长因子，不必从外界摄取。（×）
12.氮源一般只提供合成细胞质和其他结构的原料，不作能源，但少数自养微生物能利用铵盐、硝酸盐作为氮源和能源。（×）
13.当培养基中有葡萄糖和乳糖时，大肠杆菌和伤寒沙门氏菌通常优先利用乳糖。（×）
14.对含葡萄糖的培养基进行高压蒸汽灭菌时可在121.3℃加热20min即可。（×）
15.红螺细菌即紫色非硫细菌能利用异丙醇作为供氢体还原二氧化碳，并积累丙酮。（√）
16.化能自养型微生物绝大多数是好氧菌，能量来自无机物氧化的化学能，以二氧化碳或碳酸盐为碳源。（√）
17.蓝细菌和弗兰克氏菌都能用氮气作氮源。（×）
18.每种微生物都有最适的和最低的a w值，一般细菌的a w值比霉菌的高。（√）
19.培养细菌的培养基中通常需要加入较多氮源，而培养真菌则加入较多氮源。
（？）
20.生长因子是微生物生长代谢所必需的，但微生物本身又不能合成的微量的特殊营养物。（√）
21.生理酸性盐、生理碱性盐被微生物吸收后会造成培养基的PH收生变化。对微生物生长造成不到影响。（×）
22.嗜盐古细菌可以利用紫膜进行光能转换。（√）
23.同一种微生物在不同的生长时期所需要的a w值不同，如细菌形成芽孢时比正常生长时需要更高的a w值。（√）
24.微生物的碳源物质既提供碳素营养，又提供微生物代谢能量。（√）
25.微生物对含氮化合物的吸收利用速率通常是NH4+比NO3-慢。（√）
26.微生物进行营养物质促进扩散时，通过专一性载体蛋白运输相应的物质，但有些微生物对同一种物质的运输有两种或两种以上的载体。（√）
27.微生物利用碳源物质具有选择性，不同微生物对不同糖类物质利用有差别，如果几种糖同时存在会形成分解代谢抑制。（√）
28.温度通过影响营养物质的溶解度、细胞膜的流动性以及运输系统的生理活性而影响微生物的吸收能力。（√）
29.物质进行单纯扩散的能力和速率与该物质的性质膜内外的该物质浓度差、胞外pH值、以及离子强度，温度有关。（√）
30.细菌细胞内N素含量大概是丝状真菌的3倍，而CN素含量大体相等。（×）
31.许多的碳源物质如葡萄糖等属于双功能营养物质。（×）
32.一般来说分子量小，极性小，脂溶性的物质容易吸收。（×）
33.有些微生物不能合成脂肪酸、甾醇、肌醇和胆碱等类脂物质，必须从外界摄取。（√）
34.在不同生长条件下，微生物的营养类型会发生改变，有利于提高微生物对环境的适应能力。（√）
35.在有些微生物中与物质运输有关的酶只有膜电势存在的情况下才有最大活性。（√）
36.主动运输的运输过程需消耗能量，运输速度对细胞质膜内外物质的浓度差有一定的依赖性。（×）
37.主动运输系统的能量来自于膜内外质子的浓度差和电位差，使膜处于充能状
态，形成能化膜。（×）
38.自养型微生物和异养型微生物的主要差别是所需碳源不同。（√）
39.自养型微生物以二氮化碳作为主要或唯一碳源。（√）
40.组成微生物细胞的各类化学元素的比例不是一成不变的，常因微生物种类、培养条件，菌龄的不同而在一定范围内发生变化。（√）
五、问答题
1.简述固体培养基的配制和灭菌方法。
配制：①加热，将琼脂融化；
②如果是要做试管，就加分装3ml培养基到试管，塞上试管塞；如果是做
平板，就将培养基倒入锥形瓶中；
③按照培养基规定的灭菌方式灭菌；
④如果是斜面，则将灭菌后的试管放成一个梯度，是培养基形成一个斜面；
如果是平板，就趁培养基凝固前将其倒入平板中，每个大约25ml，平
板放置5min左右凝固后即可。
灭菌方法：①加热灭菌：干热灭菌与湿热灭菌；
②过滤灭菌；
③辐射灭菌：放射线辐照灭菌与紫外线灭菌；
④化学药品灭菌。
2.叙述微生物的六大营养要素及其生理作用。
①碳源：碳素化合物是构成机体C骨架；构成代谢产物的C骨架；提供能量。
②氮源：组成蛋白质和核酸的主要元素；在细胞内合成氨基酸和碱基，进而合
成蛋白质、核酸等细胞成分，以及含氮的代谢产物；无机的氮源物质一
般不提供能量，有机的氮源物质提供能源。
③能源：为微生物生命活动提供最初能量来源的营养物质或辐射能。
④生长因子：辅酶或酶活化所需。
⑤无机盐：构成微生物细胞的成分；参与并维持生物体的代谢活动：调节和维持
酶活性；维持生物体内的平衡：调节渗透压、pH 、Eh；为化能自养
微生物提供能源。
⑥水：好的溶剂；维持生物分子结构的稳定性；保证和参与生物化学反应。
3.举例说明微生物在生长过程中培养基pH值可能发生的变化，并提出解决方法。微生物在生长繁殖和积累代谢产物的过程中，培养基的pH会发生如下变化：
①如微生物在含糖基质上生长，会产酸而使pH下降；
②微生物在分解蛋白质和氨基酸时，会产NH3而使pH上升；
③以（NH4）2SO4作氮源，会过剩SO42-，而使pH下降；
④分解利用阳离子化合物如：NaNO3,会过剩Na+而使pH上升。
为了维持培养基pH值的相对恒定，常常在培养基中加入缓冲物质如磷酸盐、碳酸盐等，以缓和pH的剧烈变化。
4.培养基中各营养要素的含量间一般遵循何种顺序？为什么？
在大多数化能异养微生物培养基中，除水分外，碳源含量最高，其后依次是氮源、大量元素和生长因子，它们间大体存在着十倍序列的递减趋势。
5.什么叫单功能营养物、双功能营养物和多功能营养物？试各举一例。
只具有一种营养功能的营养物称为单功能营养物，如光辐射能源；
同时具有两种营养功能的称为双功能营养物，如铵根离子；
同时具有三种营养功能的营养物称为三功能营养物，如氨基酸。
6.什么叫氮源？试从元素水平、分子水平和培养基原料水平列出微生物的氮源谱。
7.试述细菌通过基团转位吸收糖进入细胞内的分子机制。
其机制分两步：①HPr被PEP激活；②糖经磷化而进入细胞内。
8.什么叫能源？试以能源为主、碳源为辅对微生物的营养类型进行分类。
能为微生物生命活动提供最初能量来源的营养物质或辐射能称为能源。
化能自养、化能异养、光能自养、光能异养。
9.什么叫生长因子？它包括哪几类化合物？微生物与生长因子的关系有哪几类？试举例说明。
生长因子是一类对调节微生物正常代谢所必需，但不能用简单的碳、氮源自行合成的微量有机物。广义的生长因子包括维生素、碱基、卟啉及其衍生物、甾醇、胺类、C4～C6的分支或直链脂肪酸，有时还包括氨基酸营养缺陷突变株所需要的氨基酸在内。而狭义的生长因子一般仅指维生素。
生长因子与微生物的关系有一下3类：
①生长因子自养型微生物：它们不需要从外界吸收任何生长因子，多数真菌、
放线菌和不少细菌，如E.coli等。
②生长因子异养型微生物：它们需要从外界吸收多种生长因子才能维持正常生
长，如各种乳酸菌、动物致病菌、枝原体和原生动物等。
③生长因子过量合成型微生物：其代谢活动中，能合成并大量分泌某些维生素
等生长因子的微生物，如各种生产维生素的菌种。
10.什么叫水活度（a w）？它对微生物的生命活动有何影响？对人类的生产实践和日常生活有何意义？
水活度表示在天然或认为环境中，微生物可实际利用的自由水或游离水的含量。其定量含义为：某溶液的蒸气压与纯水蒸气压之比。
影响：生长繁殖在水活度高的微生物代谢旺盛，在水活度低的范围内生长的微生物抗逆性强。
意义：了解各类微生物生长的水活度，不仅有利于设计培养基，而且还对防止食物的霉腐具有指导意义。
11.什么叫碳源？试从元素水平、分子水平和培养基原料水平列出微生物的碳源谱。
凡可提供构成细胞物质或代谢产物中碳素来源的营养物质称为碳源。
微生物的碳源谱如下：
12.什么叫自养微生物？它们有几种主要生理类型？举例说明。
以无机碳作为主要或唯一的碳源的微生物称为自养微生物。
生理类型：①光能自养型：蓝细菌、紫硫细菌、绿硫细菌、藻类；
②化能自养型：硝化细菌、硫化细菌、铁细菌、氢细菌、硫黄细菌等。
13.什么是氨基酸自养微生物？试举一些代表菌，并说明其在实践上的重要性。不需要利用氨基酸做氮源，能把尿素、铵盐、硝酸盐、甚至氮气等简单单氮源自行合成所需要的一切氨基酸，为氨基酸自养微生物。如根瘤固氮菌，能直接利用空气中的氮气合成自身所的氨基酸，直接或间接地为人类提供蛋白质。
14.试比较营养物质进入微生物细胞的几种方式的基本特点。
15.研究微生物的营养有何意义？
16.试举例分析选择性培养基的原理。
酵母富集培养基中的孟加拉红抑制细菌的生长而对酵母菌无影响，偏酸性的环境有利于酵母菌的生长。
17.请列表区分微生物的营养类型。
18.说明鉴别性培养基鉴别作用的原理，以EMB （伊红美蓝乳糖琼脂培养基）为例，分析鉴别作用原理。
鉴别性培养基是在培养基中加入能与某菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能将其与其他外形相似的菌落区分。
EMB 培养基中大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H +，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色。从菌落表面反光还可看到绿色金属闪光。而产酸弱的菌株的菌落呈棕色，不发酵乳酸的菌落无色透明。
19.纤维素刚果红平板培养基配方如下： (NH 4)2SO 4 2g 、MgSO 4·7H 2O 0.5g 、KH 2PO 4 1g 、NaCl 2 0.5g 、CMC-Na （纤维素钠） 10g 、刚果红 0.2g 、琼脂 20g 、蒸馏水 1L 、
pH 值自然。
1）按照培养基营养物质来源、外观的物理状态、功能和用途分，该培养基分别属于什么类型的培养基
组合培养基；固体培养基；鉴别性培养基。
2）试述为该培养基提供碳源、氮源、能源、无机盐来源的物质是什么？ 碳源：CMC-Na ；氮源：(NH 4)2SO 4；能源：(NH 4)2SO ；无机盐：MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4。
3）该培养基可用于培养哪类微生物，加入刚果红的目的是什么？
加入刚果红的目的是与目的菌落的无色代谢产物发生显色反应，以能够用肉眼就能辨别颜色，从而方便地找到目的菌落。
20.下列为各类微生物生长的pH 范围，请连线。
细菌——7.0-8.0（6.5-7.5）；原生动物——6.0-8.0；藻类——6.0-7.0。
第四章微生物的营养和培养基 一、名词解释 单纯扩散；指疏水双分子层细胞膜在无载体蛋白参与下，单纯依靠物理扩散方式让许多小分子、非电离分子尤其是亲水性分子被动通过的一 种物质运送方式。通过这种方式运送的物质主要有O2、CO2、乙 醇、甘油和某些氨基酸分子。 基团移位：指一类既需特异性载体蛋白的参与，又需耗能的一种物质运送方式，其特点是溶质在运送前后还会发生分子结构的变化，因此不 同于一般的主动运送。它广泛存在于原核生物中，尤其是一些兼 性厌氧菌和专性厌氧菌，主要用于运送各种糖类（葡萄糖、果糖、 甘露糖）、核苷酸、丁酸和腺嘌呤等物质。 主动运输；指一类须提供能量并通过细胞膜特异性载体蛋白构象的变化，而使膜外环境中低浓度的溶质运入膜内的一种运送方式。它可以逆 浓度运送营养物，主要有无机离子、有机离子（某些氨基酸、有 机酸）和一些糖类（葡萄糖、乳糖和核糖）。 促进扩散：指溶质在运送过程中，必需借助存在于细胞膜上的底物特异载体蛋白的协助，但不消耗能量的一类扩散性运送方式。其载体蛋白 一般通过诱导产生，它借助自身构象的变化，在不耗能的条件下 加速把膜外高浓度的溶质扩散到膜内，而且这个过程是可逆的。 生长因子；是一类对调节微生物正常代谢所必需，但不能用简单的碳、氮源自行合成的微量有机物。广义的生长因子除了维生素外，还包括 碱基、卟啉及其衍生物、甾醇、胺类、C4-C6的分支或直链脂肪 酸，有时还包括氨基酸营养缺陷突变株所需要的氨基酸在内；而 狭义的生长因子一般仅指维生素。 鉴别性培养基；是一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反 应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近 似菌落中找出目的菌菌落的培养基。最常见的鉴别性培养基 是伊红美蓝乳糖培养基（即EMB培养基）。 选择性培养基；是一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因
实验一微生物培养基的制备与灭菌（8课时） 一、目的要求 1、学习配制微生物培养基的一般方法和步骤。 2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。 二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。 三、实验材料 1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L的NaOH和1mol/L HCl溶液。 2、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。 3、其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净，然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。 （二）牛肉膏蛋白胨培养基的配制 1、培养基配制 （1）称量：按培养基配方计算出各成分的用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中。 注意：称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。称药品用的药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。 （2）溶解：用量筒称量所需体积的水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水），倒入烧杯中，用玻璃棒搅动溶解即可。 （3）调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH，可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用PH试纸测试，直至达到所需pH为止。 注意：pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 2、制备液体培养基 （1）用量筒准确量取20ml培养基，倒入100ml三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。 注意：倒溶液时不要把瓶口沾湿。包扎时不要把瓶子弄倒而把棉塞弄湿。
1．培养基应具备微生物生长所需要的六大营养要素是_碳源___、__氮源__、__能源__、___无机盐___、__生长因子__和???????????____水___。 2．碳源物对微生物的功能是__提供碳素来源__和__能量来源__，微生物可用的碳源物质主要有___糖类_、___有机酸_、__脂类_、__烃__、__ CO2及碳酸盐__等。 ３．微生物利用的氮源物质主要有_蛋白质_、_铵盐_、_硝酸盐__、_分子氮__、__酰胺_等，而常用的速效Ｎ源如__玉米粉__，它有利于___菌体生长___；迟效Ｎ源如__黄豆饼粉__、__花生饼粉_，它有利于___代谢产物的形成______。 ４．无机盐对微生物的生理功能是__作为酶活性中心的组成部分_、__维持生物大分子和细胞结构的稳定性_____ 、_调节并维持细胞的渗透压平衡__ 和 _控制细胞的氧化还原电位和作为某些微生物生长的能源物质等_。 ５．微生物的营养类型可分为__光能无机自养型__、__光能有机异养型__、_化能无机自养型和_化能有机异养型_。微生物类型的可变性有利于_提高微生物对环境条件变化的适应能力_。 ６．生长因子主要包括_维生素_、__氨基酸_和__嘌呤及嘧啶_，它们对微生物所起的作用是__作为酶的辅基或辅酶参与新陈代谢_、_维持微生物正常生长_、_为合成核柑、核苷酸和核酸提供原料__。 ７．在微生物研究和生长实践中，选用和设计培养基的最基本要求是__选择适宜的营养物质_、_营养物的浓度及配比合适_、_物理、化学条件适宜_、_经济节约_和__精心设计、试验比较_。 ８．液体培养基中加入CaCO３的目的通常是为了__调节培养基的pH值___。 ９．营养物质进入细胞的方式有__单纯扩散__、__促进扩散__、_主动运输__和___基团移位_，而金黄色葡萄球菌是通过___主动运输__方式运输乳糖，大肠杆菌又是通过_基团移位__方式运输嘌呤和嘧啶的。 10．影响营养物质进入细胞的主要因素是_营养物质本身__、__微生物所处的环境__和___微生物细胞的透过屏障___。 11．实验室常用的有机氮源有__蛋白胨__和__牛肉膏__等，无机氮源有__硫酸铵__和_硝酸钠等。为节约成本，工厂中常用___豆饼粉__等作为有机氮源。 12．培养基按用途分可分为基础培养基、增殖培养基、鉴别培养基和选择培养基四种类型。 二．是非题 1、在固体培养基中，琼脂的浓度一般为—%．（×）
第四章微生物营养试题一．选择题： 40680大多数微生物的营养类型属于： A.光能自养 B.光能异养 C.化能自养 D.化能异养 答:( ) 40681蓝细菌的营养类型属于: A．光能自养 B.光能异养 C．化能自养 D.化能异养 答:( ) 40682E.coli的营养类型属于： A．光能自养 B.光能异养 C.化能自养 D.化能异养 答:( ) 40683碳素营养物质的主要功能是:
A.A.构成细胞物质 B.B.提供能量 C.C.A,B两者 答:( ) 40684占微生物细胞总重量70%-90%以上的细胞组分是: A.A.碳素物质 B.B.氮素物质 C.C.水 答:( ) 40685能用分子氮作氮源的微生物有： A.酵母菌 B.蓝细菌 C.苏云金杆菌 答:( ) 40686腐生型微生物的特征是： A.以死的有机物作营养物质 B.以有生命活性的有机物作营养物质 C.A,B两者 答:( ) 40687自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：A.A.所需能源物质不同
B.B.所需碳源不同 C.C.所需氮源不同 答:( ) 40688基团转位和主动运输的主要差别是： A.A.运输中需要各种载体参与 B.B.需要消耗能量 C.C.改变了被运输物质的化学结构 答:( ) 40689单纯扩散和促进扩散的主要区别是： A.A.物质运输的浓度梯度不同 B.B.前者不需能量,后者需要能量 40690 40691 40692 40693 40694 40695 40696 40697 40698 40699C.前者不需要载体,后者需要载体
答:( ) 微生物生长所需要的生长因子(生长因素)是： A.A.微量元素 B.B.氨基酸和碱基 C.C.维生素 D.D.B,C二者 答:( ) 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：A．生长因素 B．C源 C. N源 答:( ) 细菌中存在的一种主要运输方式为： A.A.单纯扩散 B.B.促进扩散 C.C.主动运输 D.D.基团转位 答:( ) 制备培养基中常用的碳源物质是： A.A.糖类物质 B.B.碳酸盐
第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于：（） A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于：（） A．光能自养 B. 光能异养C．化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是：（） A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A，B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是：（） A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有：（） A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于（）型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：（） A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是：（） A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是：（） A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量，后者需要能量 C. 前者不需要载体，后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是：（） A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B，C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：（） A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为：（） A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的：（） A. 10% B. 30% C. 50% D.70%
第五章微生物营养习题及参考答案 一、名词解释 1．生长因子： 2．选择培养基(seclected media)： 3．基础培养基 4．合成培养基 5．化能异养微生物 6．化能自养微生物 7．光能自养微生物 8．光能异养微生物 9.单纯扩散 10.促进扩散 11.主动运输 12.基团移位 13.pH的内源调节 14.渗透压 15.水活度 二、填空题 1．微生物生长繁殖所需六大营养要素是、、、、 和等。 2．碳源物质为微生物提供和，碳源物质主要
有、、 、、等。 3．生长因子主要包括、和，其主要作用是、。 4．根据，微生物可分为自养型和异养型。 5．根据，微生物可分为光能营养型和化能营养型。 6．根据，微生物可分为无机营养型和有机营养型。 7．根据碳源、能源和电子供体性质的不同，微生物的营养类型可分为、、 和。 8．按用途划分，培养基可分为、、和等4种类型。 9．常用的培养基凝固剂有、和。 10．营养物质进入细胞的方式有、、和。 三、选择题（4个答案选1） 1．下列物质可用作生长因子的是（）。 A.葡萄糖 B.纤维素 C.NaGl D.叶酸 2．大肠杆菌属于（）型的微生物。 A.光能无机自养 B.光能有机异养 C.化能无机自养 D.化能有机异养 3．硝化细菌属于（）型的微生物。 A.光能无机自养 B.光能有机异养 C.化能无机自养 D.化能有机异养 4．某种细菌可利用无机物为电子供体而有贾稀为碳源，属于（）型的微生物。 A.兼养型 B.异养型 C.自养型 D.原养型 5、化能无机自养微生物可利用（）为电子供体。
A.CO 2 B.H 2 C.O 2 D.H 2 O 6．用来分离产胞外蛋白酶菌株的酪素培养基是一种（）。 A.基础培养基 B.加富培养基 C.选择培养基 D.鉴别培养基 7、固体培养基中琼脂含量一般为（）。 8．用来分离固氮菌的培养基中缺乏氮源，这种培养基是一种（）。 A.基础培养基 B.加富培养基 C.选择培养基 D.鉴别培养基 9．水分子可通过（）进入细胞。 A.主动运输 B.扩散 C.促进扩散 D.基团转位 10．被运输物质进入细胞前后物质结构发生变化的是（）。 A．主动运输 B.扩散 C.促进扩散 D.基团转位 四、是非题 1．某些假单胞菌可以利用多达90多种以上的碳源物质。 2．碳源对配制任何微生物的培养基都是必不可少的。 3．氨基酸在碳源缺乏时可被微生物用作碳源物质，但不能提供能源。 4．培养营养缺陷型微生物的培养基必须同时加入维生素、氨基酸、嘌呤及嘧啶。 5．为使微生物生长旺盛，培养基中营养物质的浓度越高越好。 6．对含葡萄糖的培养基进行高压蒸汽灭菌时可以121.3℃加热20min即可。 7．半固体培养基常用来观察微生物的运动特征。 8．基础培养基可用来培养所有类型的微生物。 9．伊红美蓝（EMB）培养基中，伊红美蓝的作用是促进大肠杆菌的生长。 10．在促进扩散过程中，载体蛋白对被运输物质具有较高的专一性，一种载体蛋白只能运输一种物质。 五、简答题 1．能否精确地确定微生物对微量元素的需求，为什么？ 2．为什么生长因子通常是维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶，而葡萄糖通常不
第四章微生物的营养 一、填空题 1、微生物的营养要素有_______、_________、__________、_________、________、________。 2、微生物对营养物质的吸收方式有被动扩散、__________、________和_________四种类型。 3、按培养基功能可分为___ 、___ 、____ 、_____。 4、按对培养基成分的了解，培养基可分为__ _ 、__ __ 、_ __ ，按其物理状态，可分为 ____ 、____ 、__ ； 5、根据微生物生长所需的碳源、能源和电子供体性质的不同，微生物的营养类型可分为___ 、__ _、 ____ 、______。 6、根据，微生物可分为自养型和异养型。 7、根据，微生物可分为光能营养型和化能营养型。 8、根据，微生物可分为无机营养型和有机营养型。 9、营养物质进入细胞的主要影响因素是、和。 10、营养物质进入细胞的方式有、、和。 二、选择题 1、在含有下列物质的培养基中，大肠杆菌首先利用的碳物质是（） A、蔗糖； B、葡萄糖； C、半乳糖； D、淀粉 2、在工业生产中为提高土霉素产量，培养基中可采用的混合氮源是（） A、蛋白胨/酵母浸膏 B、黄豆饼粉/花生饼粉 C、玉米浆/黄豆饼粉 D、玉米浆/（NH 4） 2 SO 4 3、下列物质可用作生长因子的是（） A、葡萄糖 B、纤维素 C、NaCl D、叶酸 4、一般酵母菌生长最适水活度值为（） A、0.95 B、O.76 C、0.60 D、0.88 5、大肠杆菌属于（）型的微生物 A、光能无机自养 B、光能有机异养 C、化能无机自养 D、化能有机异养
微生物培养基配制 培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。 配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。 注意事項–灭菌锅的使用 ①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀 灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門 進入灭菌锅之物品，蓋子不可關太緊或太鬆 拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套 培养基中的主要成分及其作用： 营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水 常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏 常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖 双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；
醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油） 水：用蒸馏水，不能用自来水凝固剂：琼脂、明胶、血清等 抑制剂： 1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率 2、种类： 盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等 染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红 胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐 抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素 指示剂 1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。
2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。 培养基的类型： ●根据培养基的物理状态来区分： 1、液体培养基：主要用于增菌培养、鉴别性培养 2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定 3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种 4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。 ●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装 瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。 ●根据培养基的用途来区分： 增殖培养基选择培养基鉴别培养基 1、增殖培养基：在普通培养基中加入 一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物
第四章微生物的营养和培养基习题参考答案 A部分习题参考答案 一、选择题 1-5. DACCB；6-10. ABCCD；11-15. ACCDC 二、是非题 1-5. TFTTT；6-10. TTTTF 三、填空题 1.CO2，糖类，醇类，有机酸类 2.氮气，硝态氮，铵态氮，有机氮化物 3.光，CO2，有机物，CO2 4.氧化无机物，CO2 5.光能自养型，光能异养型，化能自养型，化能异养型 6.基团转位. 7.NH3，CO2，化能自养型 8.碳素，氮素，矿质元素，生长因素，水. 9.有机物，无机物，水. 10.主动输送，基团转位 11.主动运输，基团移位. 12.光能，CO2，，有机物，H2O，，有机物 13.0.63-0.99，5:1 14.病毒，立克次氏体，人工配制的培养基，活体培养 15.糖，氨基酸，某些阳离子 四、解释题 1.微生物营养：指微生物获得与利用营养物质的过程。 2.光能自养型：以日光为能源，以CO2为碳源合成细胞有机物的营养类型。 3.化能自养型：通过以氧化无机物释放出的能量还原CO2成为细胞有机物的营养类型。 4.化能异养型：用有机物分解时释放出的能量将有机物分解的中间产物合成新的有机物的营养类型。 5.有机营养型微生物：只以适宜的有机化合物作为营养物质的微生物。 6.无机营养型微生物：以CO2作唯一碳源，不需要有机养料的微生物。 7.生长因子：微生物生长不可缺少的微量有机物，包括维生素，氨基酸及碱基等。 8.单纯扩散：营养物质进入微生物细胞时不需要载体参加，也不消耗代谢能量，而是顺营养物的浓度梯度由高浓度向低浓度运输营养物质进入微生物细胞的运输方式。
第四章微生物的营养 微生物的营养 (nutrition) 是微生物生理学的重要研究领域，阐明营养物质在微生物生命活动过程中的生理功能以及微生物细胞从外界环境摄取营养物质的具体机制是微生物营养的主要研究内容。为了生存，微生物必须从环境吸收营养物质，通过新陈代谢将这些营养物质转化成自身新的细胞物质或代谢物，并从中获取生命活动必需的能量，同时将代谢活动产生的废物排除体外。那些能够满足微生物机体生长、繁殖和完成各种生理活动所需的物质称为营养物质(nutrient), 而微生物获得和利用营养物质的过程称为营养。营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是微生物维持和延续其生命形式的一种生理过程。 第一节微生物的营养要求 一、微生物细胞的化学组成 1．化学元素(chemical element) 构成微生物细胞的物质基础是各种化学元素。根据微生物生长时对各类化学元素需要量的大小，可将它们分为主要元素(macroelement)和微量元素(trace element)，主要元素包括碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙、铁等，碳、氢、氧、氮、磷、硫这六种主要元素可占细菌细胞干重的97%（表4-1）。微量元素包括锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。 表4-1微生物细胞中几种主要元素的含量（干重%） 组成微生物细胞的各类化学元素的比例常因微生物种类的不同而不同，例如细菌、酵母菌和真菌的碳、氢、氧、氮、磷、硫六种元素的含量就有差别（表4-1），而硫细菌(sulfur bacteria)、铁细菌(iron bacteria)和海洋细菌(marine bacteria)相对于其他细菌则含有较多的硫、铁和钠、氯等元素, 硅藻(Diatom)需要硅酸来构建富含(SiO2)n的细胞壁。不仅如此，微生物细胞的化学元素组成也常随菌龄及培养条件的不同而在一定范围内发生变化，幼龄的或在氮源(source of nitrogen)丰富的培养基(medium)上生长的细胞与老龄的或在氮源相对贫乏的培养基上生长的细胞相比，前者含氮量高，后者含氮量低。
江西农业大学生物科学与工程学院 第5章微生物营养和培养基练习题(A卷)试卷部分班级:___________学号:___________姓名:___________得分:___________ 题目部分，(卷面共有66题,146.0分,各大题标有题量和总分) 一、选择(12小题,共13.0分) (1分)[1]参与微生物基团移位运输方式的体系是： A.Hpr； B.酶1； C.酶2； D.Hpr+酶1+酶2 答：（） (1分)[2]微生物细胞吸收糖、核苷酸、脂肪酸和腺嘌呤等物质，通常采用的运输方式是：A.主动运输；B.促进扩散； C.基团移位； D.单纯扩散。答：（） (1分)[3]在鉴别性EMB培养基上，在反射光下大肠杆菌菌落呈现的颜色是： A.棕色； B.粉红色； C.绿色并带有金属光泽； D.无色。答：（） (1分)[4]培养放线菌的高氏一号培养基和培养真菌的察氏培养基属于下列培养基中的：A.天然培养基；B.组合培养基； C.半组合培养基； D.鉴别培养基。答：（） (1分)[5]微生物细胞吸收无机离子、有机离子、乳糖、蜜二糖或葡萄糖，通常采用的运输方式是： A.基团移位； B.单纯扩散； C.主动运输； D.促进扩散。答：（） (1分)[6]根据培养基上呈现菌落颜色的不同而能鉴别大肠杆菌和肠杆菌属几种细菌的培养基是： A.Ashby无氮培养基； B.Martin培养基； C.高氏一号培养基； D.EMB培养基。答：（） (1分)[7]为避免由于微生物生长繁殖过程中的产物而造成培养基pH值的变化，可采用的调节方法是： A.在配制培养基时加入磷酸盐缓冲液或不溶性CaCO3。 B.在配制培养基时应高于或低于最适pH值； C.在配制培养基时降低或提高碳、氮源用量；改变碳氮比。 D.在培养过程中控制温度和通气量。答：（） (1分)[8]微生物细胞吸收O2、CO2、乙醇和少数氨基酸分子，通常采用的运输方式是：A.促进扩散；B.单纯扩散； C.主动运输； D.基团移位。答：（） (2分)[9]微生物细胞吸收营养物质的促进扩散和主动运输方式最主要的差异在于： A.营养物质在运输前后均发生分子结构变化，促进扩散变化小，主动运输变化大。
常用微生物培养基配方 大全 Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】
（1）分离细菌时，在培养基中加入浓度为50U/ml制霉菌素，可以抑制霉菌和菌的生长。 （2）（2）分离放线菌时，在样品中加入%十二烷基磺酸钠（SDS）不仅可以抑制细菌的生长，还能 激活放线菌孢子的萌发。加入氟哌酸（5mg/L）+制霉菌素（50mg/L）+青霉素（L）也可以有效地抑 制细菌和真菌，而不影响放线菌的生长。 （3）（3）分离霉菌和菌时，在培养基中加入青霉素、链霉素和四环素各30U/ml，可以抑制细菌和 放线菌生长。 （4）（4）分离根霉和毛霉时，由于这些微生物的菌丝易蔓延成片，难以得到纯化的菌落，通常在 培养基中添加%去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延，使菌落长得小而紧密。 （5）一般用于分离单一目的微生物的培养基中均含有抑制其他微生物的抑制剂，这些专用的抑制剂 在小型实验室配制较麻烦，现已有成品供应，只要直接加入基础培养基即可。如氨苄西林，主要用 于分离亲水气单孢菌。 （6） 1、细菌培养基 配方一牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏克，蛋白胨克，氯化钠克，琼脂克， 水 1000毫升 在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到～,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二马铃薯培养基 取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。
精品文档 精品文档第四章微生物营养试题 一．选择题： 40680 大多数微生物的营养类型属于： A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40681 蓝细菌的营养类型属于: A．光能自养 B. 光能异养 C．化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40682 E.coli的营养类型属于： A．光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40683 碳素营养物质的主要功能是: A. A.构成细胞物质 B. B.提供能量 C. C.A,B 两者 答 :( ) 40684 占微生物细胞总重量 70%-90% 以上的细胞组分是: A. A.碳素物质 B. B.氮素物质 C. C.水 答 :( ) 40685 能用分子氮作氮源的微生物有： A.酵母菌 B.蓝细菌 C.苏云金杆菌 答 :( ) 40686 腐生型微生物的特征是： A.以死的有机物作营养物质 B.以有生命活性的有机物作营养物质 C.A,B 两者 答 :( ) 40687 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是： A. A.所需能源物质不同 B. B.所需碳源不同 C. C.所需氮源不同 答 :( ) 40688 基团转位和主动运输的主要差别是： A. A.运输中需要各种载体参与 B. B.需要消耗能量 C. C.改变了被运输物质的化学结构 答 :( ) 40689 单纯扩散和促进扩散的主要区别是： A. A.物质运输的浓度梯度不同 B. B.前者不需能量 , 后者需要能量
精品文档 C. 前者不需要载体 , 后者需要载体 答 :( ) 40690 微生物生长所需要的生长因子 ( 生长因素 ) 是： A. A.微量元素 B. B.氨基酸和碱基 C. C.维生素 D. D.B,C 二者 答 :( ) 40691 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：A．生长因素 B．C 源 C. N 源 答 :( ) 40692 细菌中存在的一种主要运输方式为： A. A.单纯扩散 B. B.促进扩散 C. C.主动运输 D. D.基团转位 答 :( ) 40693 制备培养基中常用的碳源物质是： A. A.糖类物质 B. B.碳酸盐 C. C.农副产品 答 :( ) 40694 微生物细胞中的 C 素含量大约占细胞干重的： A. A.10% B. B.30% C. C.50% D. D.70% 答 :( ) 40695 用牛肉膏作培养基能为微生物提供： A. A. C 源 B. B.N 源 C. C.生长因素 D. D.A,B,C 都提供 答 :( ) 40696 协助扩散的运输方式主要存在于： A. A.细菌 B. B.放线菌 C. C.真菌 答 :( ) 40697 主动运输的运输方式主要存在于： A. A.厌氧菌 B. B.兼性厌氧菌 C. C.好氧菌 答 :( ) 40698 基团转位的运输方式主要存在于： A. A.厌氧菌 B. B.兼性厌氧菌 C. C.好氧菌 D. D. A 和 B 答 :( ) 40699 缺少合成 AA 能力的微生物称为： 精品文档
36种微生物常用培养基配制 1.牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.4～7.6。 2.高氏1号培养基(用于放线菌培养) 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4?3H2O 0.5g，MgSO4?7H2O0.5g，FeSO4?7H2O0.01g，水1000mL，pH7.4～7.6。配制时注意：可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3.马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌） K2HPO41g，MgSO4?7H2O0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，1/3000孟加拉红水溶液100mL，水900mL，自然pH，121℃湿热灭菌30min。待培养基融化后冷却55～60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。 4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养) 马铃薯(去皮)200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL，配制方法如下： 将马铃署去皮，切成约2cm2的小块，放入1500mL的烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖，再补足至1000mL，自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。 5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养) 蔗糖30g，NaNO3 2g，K2HPO4 1g，MgSO4?7H2O0.5g，KCl 0.5g，FeSO4?7H2O0.1g，水1000mL，pH7.0～7.2。 6.Hayflik培养基(用于支原体培养) 牛心消化液(或浸出液)1000mL，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15g，pH7.8～8.0，分装每瓶70mL，121℃湿热灭菌15min，待冷却至80℃左右，每70mL中加入马血清20mL，25%鲜酵母浸出液10mL，15醋酸铊水溶液2.5mL，青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上)0.5mL，以上混合后倾注平板。 *注意：醋酸铊是极毒的药品，需特别注意安全操作。 7.麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基) 葡萄糖0.1g, KCl 0.18g，酵母膏0.25g，醋酸钠0.82g，琼脂l.5g，蒸馏水l00mL。溶解后分装试管，1l5℃湿热灭菌15min。 8.葡萄糖蛋白胨水培养基(用于V.P.反应和甲基红试验) 蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO4 0.2g，水100mL，pH7.2，1l5℃湿热灭菌20min。 9.蛋白胨水培养基(用于吲哚试验) 蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.2～7.4，121℃湿热灭菌20min。 10.糖发酵培养基(用于细菌糖发酵试验) 蛋白胨0.2g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.02g，水100mL，溴麝香草酚蓝(1%水溶液)0.3mL，糖类lg。分别称取蛋白胨和NaCl溶于热水中，调pH至7.4，再加入溴麝香草酚蓝(先用少量95%乙醇
第四章微生物的营养和培养基 一、目的要求 掌握微生物细胞的组成、营养类型、物质进入细胞的方式及及培养基的配制。 二、教学内容 1．微生物的营养要素 2．微生物的营养类型 3．营养物质进入细胞的方式 4．培养基 三、重点内容 微生物的营养类型以及配制培养基的原则 四、教学方法 利用多媒体进行教学。 微生物同其他生物一样，为了生存必须从环境中吸收营养物质，通过新陈代谢将其转化成自身的细胞物质或代谢物，并从中获取生命活动所需要的能量，同时将代谢活动产生的废物排出体外。那些能够满足机体生长、繁殖和完成各种生理活动所需要的物质称为营养物质。微生物获得和利用营养物质的过程称为营养。营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是微生物维持和延续其生命形式的一种生理过程。 第一节微生物的六种营养要素 一、微生物细胞的化学组成 1．化学元素（chemical element） 构成微生物细胞的物质基础是各种化学元素。根据微生物对各类化学元素需要量的大小,可将它们分为主要元素和微量元素,主要元素包括碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙、铁等，碳、氢、氧、氮、磷、硫这六种主要元素可占细菌细胞干重的97%。微量元素包括锌、锰、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。 组成微生物细胞的各类化学元素的比例常因微生物种类的不同而各异。不仅如此，微生物细胞的化学元素组成也常随菌龄及培养条
件的不同而在一定范围内发生变化，幼龄的比老龄的含氮量高，在氮源丰富的培养基生长的细胞比在氮源相对贫乏的培养基上生长的细胞含量高。 2. 化学成分及其分析 各种化学元素主要以有机物、无机物和水的形式存在于细胞中。有机物主要包括蛋白质、糖、脂、核酸、维生素以及它们的降解产物和一些代谢产物等物质。对细胞有机物成分的分析通常采用两种方式：一是用化学方法直接抽提细胞内的各种有机成分，然后加以定性和定量分析；二是先将细胞破碎，然后获得不同的亚显微结构，再分析这些结构的化学成分。无机物是指与有机物相结构或单独存在于细胞中的无机盐(inorganic salt)等物质。分析细胞无机成分时一般将干细胞在高温炉（550℃）中焚烧成灰，所得的灰分物质是各种无机元素的氧化物，称为灰分(ash constituent)。采用无机化学常规分析法可定性定量分析出灰分中各种无机元素的含量。 水是细胞维持正常生命活动所不可少的，一般可占细胞重量的70%-90%。细胞湿重(wet weight)与干重(dry weight)之差为细胞含水量，常以百分率表示。将细胞表面所吸附的水分除去后称量所得重量即为湿重，一般以单位培养液中所含细胞重量表示（g/L或mg/ml），但具体测量过程中，常由于细胞表面吸附水分除去程度的不同而导致测量结果有误差，聚集在一起的单细胞微生物表面吸附的水分难以除去，这些吸附的水分可占湿重的10%。采用高温（105℃）烘干、低温真空干燥和红外线快速烘干等方法将细胞干燥至恒重即为干重。值得注意的是：高温烘干会导致细胞物质分解，而利用后两种方法所得结果较为可靠。 二、微生物的营养要素 微生物生长所需要的元素主要以相应的有机物与无机物的形式提供的，也有小部分可以由分子态的气体物质提供。营养物质按照它们在机体中的生理作用不同，可以将它们区分成碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水。 1.碳源在微生物生长过程中能为微生物提供碳素来源的物质称为碳源。碳源物质在细胞内经过一系列复杂的化学变化后成为微生物自身的细胞物质（如糖类、脂类、蛋白质等）和代谢产物，碳可占一般细菌细胞干重的一半。同时绝大部分碳源物质在细胞内生化反应过程中还能为机体提供维持生命活动所需的能源，因此碳源物质通常
第四章微生物营养试题 一．选择题： 40680 大多数微生物的营养类型属于： A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40681 蓝细菌的营养类型属于: A．光能自养 B. 光能异养 C．化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40682 E.coli的营养类型属于： A．光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 答 :( ) 40683 碳素营养物质的主要功能是: A. A.构成细胞物质 B. B.提供能量 C. C.A,B 两者 答 :( ) 40684 占微生物细胞总重量 70%-90% 以上的细胞组分是: A. A.碳素物质 B. B.氮素物质 C. C.水 答 :( ) 40685 能用分子氮作氮源的微生物有： A.酵母菌 B.蓝细菌 C.苏云金杆菌 答 :( ) 40686 腐生型微生物的特征是： A.以死的有机物作营养物质 B.以有生命活性的有机物作营养物质 C.A,B 两者 答 :( ) 40687 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是： A. A.所需能源物质不同 B. B.所需碳源不同 C. C.所需氮源不同 答 :( ) 40688 基团转位和主动运输的主要差别是： A. A.运输中需要各种载体参与 B. B.需要消耗能量 C. C.改变了被运输物质的化学结构 答 :( ) 40689 单纯扩散和促进扩散的主要区别是： A. A.物质运输的浓度梯度不同 B. B.前者不需能量 , 后者需要能量
C. 前者不需要载体 , 后者需要载体 答 :( ) 40690 微生物生长所需要的生长因子 ( 生长因素 ) 是： A. A.微量元素 B. B.氨基酸和碱基 C. C.维生素 D. D.B,C 二者 答 :( ) 40691 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：A．生长因素 B．C 源 C. N 源 答 :( ) 40692 细菌中存在的一种主要运输方式为： A. A.单纯扩散 B. B.促进扩散 C. C.主动运输 D. D.基团转位 答 :( ) 40693 制备培养基中常用的碳源物质是： A. A.糖类物质 B. B.碳酸盐 C. C.农副产品 答 :( ) 40694 微生物细胞中的 C 素含量大约占细胞干重的： A. A.10% B. B.30% C. C.50% D. D.70% 答 :( ) 40695 用牛肉膏作培养基能为微生物提供： A. A. C 源 B. B.N 源 C. C.生长因素 D. D.A,B,C 都提供 答 :( ) 40696 协助扩散的运输方式主要存在于： A. A.细菌 B. B.放线菌 C. C.真菌 答 :( ) 40697 主动运输的运输方式主要存在于： A. A.厌氧菌 B. B.兼性厌氧菌 C. C.好氧菌 答 :( ) 40698 基团转位的运输方式主要存在于： A. A.厌氧菌 B. B.兼性厌氧菌 C. C.好氧菌 D. D. A 和 B 答 :( ) 40699 缺少合成 AA 能力的微生物称为：
实用文档 . 实验五培养基的配制（基础实验，4学时） 一、实验目的和要求 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素及水分等。琼脂是应用最广的凝固剂，培养基一经制成就应及时灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌器灭菌。 牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学中最常用的基础培养基，加琼脂制成的固体培养基常用于细菌的分离和培养。配方：牛肉膏0.3g, 蛋白胨1g，NaCl 0.5g，水100ml，琼脂1.5～ 2.0g，pH 7.2～7.6 三、实验用具 高压灭菌器、电热板、恒温培养箱、电子天平、500ml刻度搪瓷杯、称量纸、三角瓶、量筒、试管、培养皿、玻璃棒、pH试纸、记号笔、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH 、1mol/LHCl 四、实验步骤 1、称药品按配方依次称取，放入具刻度搪瓷杯中，牛肉膏可用表面皿或小烧杯称量，热水溶解后倒入搪瓷杯中，蛋白胨极易吸潮，称量要迅速。 2、溶解在具刻度搪瓷杯中加入少于所需要的水量，加热，用玻璃棒搅拌，溶解后加入琼脂，熔化后补充水至所需量。 3、调pH 用1mol/L NaOH 和1mol/LHCl调，用pH试纸检测。 4、分装液体培养基分装高度以试管高度的1/4左右为宜，三角瓶不超过容积的一半为好，固体培养基＜试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。 5、加塞用棉花制作塞 6、包扎三角瓶用牛皮纸或双层报纸包在棉塞外，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。试管先扎成捆后，在棉塞外用纸包。标明组别、培养基名称、日期。 7、灭菌 0.103MPa，121℃，湿热灭菌20min。 8、摆斜面趁热将试管口搁在一根长木条上，使斜面长度不超过试管总长的1/2。 9、平板制作灭菌后冷至50℃～60℃，取下棉塞，通过火焰，倒在已灭菌的平皿中，平皿制好后通常倒置 10、无菌检查将灭菌的培养基放在37℃恒温箱中培养24～48h，无菌生长可使用。 六、注意事项 1、分装时可用滤斗，避免培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 2、称药品用的牛角匙不要混用；称完药品及时盖紧瓶盖。 七、思考题 高压蒸汽灭菌器如何使用？
摘要：1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养 1、营养琼脂（普通琼脂) 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤) 100毫升 琼脂（视天气，琼脂质量而定) 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA) 制法：取营养琼脂（PH7．6)，加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基（肉膏汤BB) 成份：蛋白胨10克牛肉膏5克 氯化钠5克水1000毫升 制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。 用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基) 成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。 用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂) 成份：蛋白胨10克乳糖10克 氯化钠5克琼脂25（22)克 水1000毫升2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液20毫升 制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟)，冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖) 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 1 6、罗文斯坦培养基 成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克 枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克 纯甘油（丙三醇) 12毫升水600毫升 马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤) 2%孔雀绿水溶液20毫升 制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿)。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次)。 质控标准： 1 灭菌试验合格。 2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。 用途：作结核分枝杆菌培养用。