肺炎支原体实验室检测的方法及临床意义
肺炎支原体(mp)无细胞壁最外层为细胞膜，主要通过呼吸道传播，它不仅引起多种呼吸道疾病，还可导致肺外其他系统的多种并发症。肺炎支原体的致病首先通过其顶端结构粘附在宿主细胞表面，并伸出微管插入胞内吸取营养、损伤细胞膜，继而释放出核酸酶、过氧化氢等代谢产生引起细胞的溶解、上皮细胞的肿胀与坏死。诱发机体产生的抗体也可能参与了上述病理损伤。呼吸道分泌的
si-ga对再感染有一定防御作用，但不够牢固。因mp缺乏细胞壁只对大环内酯类、四环素类等抗生素较为敏感，对常规治疗肺炎的抗生素耐受，而mp感染与病毒及细菌感染引起的呼吸道感染表现难以区别，为避免滥用抗生素，实验室诊断显得尤为重要。现将常用肺炎支原体实验室检测的方法及临床意义分述如下。
病原体的分离与培养
取疑似病人的咽分泌物、痰或胸水接种于2ml无血清液体培养基。并以培养基10倍连续稀释二管、三管同时培养，6周后培养液颜色未改变的判为阴性。不能判断的，取0.1ml接种于牛心浸液的固体平板培养基上，在5％c02环境中，37℃培养1～2周即可长出菌落。选择疑似菌落做溶血试验、生长抑制试验、氯化三苯基四氮唑还原试验、糖发酵分解试验、豚鼠红细胞吸附试验等进行鉴定。mp的分离培养是寻找病原体最可靠的方法，但耗时长(2～3周)，对标本运送及堵养基的要求高，且敏感性一般，尚不能依靠它解决临床快速诊断。故不能用于常规检测，但仍是寻找病原体及流行病学调查的
毕业论文 题目：三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 地市: 学校: 准考证号: 考生姓名: 王莹 指导老师: 二〇一八年八月十四日
三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 摘要 目的探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应（PCR）法和血清MP被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和PCR，同时取血清做MP-Ab检测，对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例，阳性率为51.3%，病程为（4.5±2.6）天；PCR法检测出阳性103例，阳性率为67.8%，病程为（6.2±3.5）天；MP-Ab法检测出阳性127例，阳性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。结论 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。 关键词肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合酶链反应，血清抗体，配对研究
目录 前言 (4) 第一章文献综述 (5) §1.1 肺炎支原体的定义 (5) §1.2 肺炎支原体的发病机制 (5) §1.3 肺炎支原体的分类 (5) §1.4 肺炎支原体的临床表现 (5) §1.5 肺炎支原体的临床诊断 (5) §1.6 肺炎支原体的实验室检查 (6) 第二章材料和方法 (7) §2.1 样本 (7) §2.2方法概述 (7) §2.3临床诊断MP感染的诊断标准 (7) §2.4实验方法 (7) §2.5统计学方法 .................................................................... .. (8) 第三章结果 (9) 第四章讨论 (10) 结论 (11) 参考文献 (11) 附录 (12) 错误！未定义书签。
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 解脲支原体检查方法 导语：解脲支原体很有可能会出现感染的现象，而这个是男性体内的一种激素，如果通过检查发现这个解脲支原体有什么异常现象的话，在报告结果中是会 解脲支原体很有可能会出现感染的现象，而这个是男性体内的一种激素，如果通过检查发现这个解脲支原体有什么异常现象的话，在报告结果中是会表现出来的，而解脲支原体的检查方法有是有很多的，一般在做这个检查的时候都是很多男性出现了尿多尿急尿频繁的现象，所以才到医院做检查，那么解脲支原体检查方法有哪些？ 解脲支原体的检查方法主要有三种，第一种检查方法就是血液检查，主要是通过抽血化验。第二种检查方法就是通过口腔的涂片的培养来进行检查。第三种检查方式就是PCR的技术检测，这种检查方式可以检查出igm的抗体情况，然后再判断感染的情况。这种疾病的治疗可以使用四环素，比如米诺环素、多西环素等等，但是建议最好两种到三种的抗生素结合一起使用，治疗效果更好。 支原体是细胞外生存的最小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3～0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状，分枝状等多种态。它不同于细胞，也不同于病毒，种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大，给人类健康和科研工作带来不利影响。从人体分离的16种支原体中，5种对人有致病性，即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体，生殖支原体及发酵支脲解支原体属含脲解支原体等体、脲解支原体及人型支原体等对人有致病性。 男性支原体检查方法有哪些？男性支原体检查方法如下： 1、血常规：周围血白细胞计数一般正常嗜酸性粒细胞增多。 2、血清学检全：采用补体结合试验着恢复期血清抗体效价比急性预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
肺炎支原体IgM抗体检测SOP 一、检验目的 规范实验室人员操作，以保证实验结果的准确性。 二、预期用途 该产品用于定性检测血清、血浆或全血中的肺炎支原体IgM抗体。是引起社区获得性呼吸道感染的主要病原体之一，可以导致支气管炎和非典型性肺炎。主要引起人非典型肺炎、气管炎及支气管炎，多经口和呼吸道等途径传播，多发于儿童和青年人。MP感染已占小儿呼吸道疾病30%以上，且有增加趋势。人体感染肺炎支原体后，能产生特异性IgM和IgG抗体。IgM 抗体出现早，一般在感染后1周出现，3~4周达高峰，以后逐渐降低。再次感染或重复感染后，常在1-2周内出现较高水平的IgG抗体。MP肺炎与一般呼吸道感染和肺炎的临床症状没有明显区别，MP感染早期诊断有利于MP肺炎的治疗。血青学诊断法是临床常用的主要诊断方法之一，灵敏度和特异性适中，常用的主要有酶联免疫吸附试验和凝集试验。 三、检验原理 本产品以胶体金作为指示标记，用胶体金标记抗人IgM单抗，以基因工程技术表达肺炎支原体P1蛋白抗原标被硝酸纤维素膜，应用“间接法”免疫层析技术原理，检测的肺炎支原体感染病人血清、血浆或全血中的肺炎支原体抗体IgM,在检测过程中，若样本中存在肺炎支原体抗体gM, 则肺炎支原体抗体1gM与样本吸附垫中的胶体金一抗人IgM单抗结合物形成复合物，复合物沿硝酸纤维素膜移动到检测区，与检测线上包被的肺炎支原体P1蛋白抗原结合，多余的未被结合的结合物继续移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG 抗体结合，反应膜上出现1条红色的检测线和1条红色的质控线；若样本中不存在肺炎支原体抗体IgM,则胶体金一抗人IgM单抗结合物直接沿硝酸纤维素膜移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体结合，仅形成一条红色的质控线。 四、主要组成成份 1、试剂盒组分 包括肺炎支原体1gM抗体检测卡，样品稀释液。 1.1、检测卡主要组分：包括金标垫和硝酸纤维素检测膜，金标垫内包被有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体；硝酸纤维素检测膜的检测线上包被有基因工程技术表达的肺炎支原体P1蛋白抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。
支原体肺炎患儿D—二聚体检测及临床意义 目的探讨支原体肺炎血浆D二聚体水平变化及临床意义。方法回顾分析湖南省人医院儿童呼吸病区2012年1月～12月收治的肺炎支原体肺炎患儿，根据临床症状、病程、影像学特点分为普通肺炎支原体肺炎组50例，难治性支原体肺炎组35例。于住院第1 d抽取静脉血行D二聚体检测，难治组恢复期再次抽血检测。普通肺炎组与健康对照组比较，普通肺炎组与难治组比较，难治组急性期与恢复期比较，并对结果进行分析。结果普通肺炎组与健康对照组D二聚体水平差异无统计学意义（P>0.05），难治性支原体肺炎组急性期D二聚体水平显著高于普通肺炎组（P＜0.01），难治性支原体肺炎组急性期与恢复期D二聚体水平差异显著（P＜0.01）。难治性支原体肺炎病情严重程度与D二聚体水平有一定的相关性。结论通过检查D二聚体水平可早期发现诊断难治性肺炎支原体肺炎。在难治性支原体肺炎患儿的诊治过程中，监测D二聚体水平并及时干预，有利于疾病转归。 标签：肺炎支原体肺炎；D二聚体；儿童 肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）是介于细菌与病毒之间能自我复制的一种病原微生物，是社区获得性肺炎的常见病原体之一[1]。既往认为MPP临床表现较轻，部分病例呈自限性。近几年重症/难治性肺炎支原体肺炎（RMPP）病例有逐年增多的倾向[2]。早期识别發现RMPP病例实属必要。本文旨在探讨肺炎支原体肺炎患儿D二聚体水平，为早期发现RMPP提供参考依据。 D-二聚体（D-dimmer）是纤溶酶水解交联纤维蛋白降解后形成的特异性降解产物，是体内高凝状态和纤溶亢进的分子标记物之一。研究证实，感染的程度不同，可伴有不同程度和范围的凝血系统的激活，D-二聚体水平有不同的变化。本研究拟在通过检测、对比分析湖南省人医院儿童医学中心呼吸病区2012年1月～12月收治的支原体肺炎患儿的血浆D-二聚体水平，揭示难治性支原体肺炎组与肺炎组之间的血浆D-二聚体水平差异性，从而为难治性支原体肺炎严重程度判定和临床治疗提供另一条思路，现分析报告如下。 1资料与方法 1.1一般资料资料来源于湖南省人医院儿童呼吸病区2012年1月～12月收治的肺炎支原体肺炎患儿。根据临床症状、病程、影像学特点分组。RMPP组：35例，男16例，女19例，年龄1～3岁5例，4～6岁19例，7～14岁11例，平均年龄（5.32±1.65）岁。MPP组：同期住院诊断MPP50例，男23例，女27例，年龄1～3岁9例，4～6岁23例，7～14岁18例，平均年龄（4.59±1.41）岁。健康对照组：儿童保健科体检儿童20例，男12例，女8例，平均年龄（3.87±1.18）岁。 1.2 MPP诊断标准参照《诸福棠实用儿科学》第7版[3]；起病4 w内双份血清支原体抗体的滴度升高有4 倍以上[4]；鼻咽部和口咽部的标本荧光定时定
肺炎支原体抗体检测 （被动凝集法） 1.目的：规范实验室肺炎支原体抗体检测操作。 2.范围： xxxx院xxxx科 3.测定原理： 将肺炎支原体（Mac株）的细胞膜成分致敏人工载体明胶粒子制造而成。这种致敏粒子和样本中的肺炎支原体抗体进行反应发生凝集，由此可以检测出血清和血浆中的肺炎支原体抗体，并且用来测定抗体的效价。 4.标本： 4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。 4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。 4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。 4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。 5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。 5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。 5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。 5.3试剂组成 5.3.1血清稀释液（液体）：用于稀释样品和复溶致敏粒子和未致敏粒子。 5.3.2致敏粒子（冷冻干燥）：肺炎支原体（Mac株）抗原致敏的明胶粒子。使用时加入规定量的血清稀释液。复溶后的试剂含有0.9%的致敏粒子。 5.3.3未致敏粒子（冷冻干燥）鞣化的明胶粒子冻干制品。使用时加入规定量的血清稀释液。 5.3.4阳性对照血清（液体）肺炎支原体（Mac株）抗体阳性的兔血清用血清稀释液1:10 稀释后的制品。 6.临床标本测定 6.1试剂的准备 6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。 6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。 6.1.3致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。 6.1.4未致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。 6.1.5阳性对照血清（液体）：按照操作规则使用。 6.2 手工操作步骤 6.2.1 用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至第8孔（或更多）各滴入1滴（25ul）血清稀释液。 6.2.2 用微量移液管取样品25ul至第1孔中，然后用微量加样器或微量移液管以倍比稀释的方式从第1孔稀释至第8孔中（或更多）。 6.2.3用试剂盒中提供的滴管在第2孔中加入1滴(25ul)未致敏粒子，用另一个滴管向第3
肺炎支原体检测方法选择的几个注意点 肺炎支原体（MP ），主要引起咽炎及支气管炎，少数累及肺。以其顶端结构与宿主细胞上受体结合粘附于上皮细胞上，一般为表面感染，除穿透支原体外（艾滋病人感染）大多不侵入血液。产生有毒代谢产物如外毒素或过氧化氢等引起发热及局部细胞损伤。 选择检测方法的注意事项： 1.临床常用全血（指尖血）或血清（橘黄管）检测IgM 来判定肺炎支原体的感染，但是，抗体检测只是各种实验室方法的一种，尚有其他方法可用，如培养及DNA 检测，每种方法各有利弊，对不同病程各有针对性。 2.每一种实验结果都需要另外一种实验结果来验证，正常人咽部或支气管可携带MP ，所以不能用一种实验数据来下诊断。 3.初次感染时， IgM 、IgG 都会产生，再次感染时，有时IgM 不产生。 4.儿童由于初次感染几率大，常能产生IgM ，成人由于机体可能感染过多次，常不产生IgM 。 5. 检测方法的选择需要根据病程确定： <6个月 6-12个月 1-9岁 IgM + IgM — 年龄对IgM 抗体产生的影响
抗体 抗原 MP感染不同时段产物的比较 由此图可以看出： a.感染早期，7天之内以检测抗原为主，宜培养或DNA检测： 培养为“金标准”，据国内文献显示，快速培养法阳性率为24%；PCR--DNA检测为96%。美国一篇文献显示，培养阳性率为5%，DNA为57%。 b.早期未产生抗体，导致延误治疗，后期抗体阳性，病原体消失，导致过用抗生素。 c.7天之后可检测IgM抗体； d.IgM可持续较长时间，感染后三个月抗体浓度依然较高，有的可以终生阳性，如果短时间内检测抗体，常不能分辨是否为MP现症感染或其他感染。 e.感染早期宜病原体筛查，此时抗体尚未产生，可导致延误治疗；中后期适宜抗体检测，主要用于回顾性验证试验，此时病原体消失，可导致过用抗生素。
支原体检验法 1 培养基 1.1 检验禽源细胞和由禽胚组织或其细胞制成的活疫苗，用改良Frey 氏培养基。 1.2 检验其他种类细胞和病毒活疫苗，用支原体培养基 1.3 检验血清用无血清的支原体培养基 2 检查法 2.1 样品处理每批制品取样3-5瓶，液体制品混合后备用；冻干制品加液体培养基复原成混悬液后混合。检测血清时用血清直接接种。 2.2 疫苗的检测 2.2.1 接种于观察每个样品需同时用以下两种方法检测 2.2.2.1 液体培养基培养将疫苗混合物5.0ml接种小瓶液体培养基中，再从小瓶中去0.2ml移植接种于1小管液体培养基中，将小瓶与小管置于37℃培养，分别于接种后5日、10日、15日从培养瓶中取出0.2ml培养物移植到小管液体培养基内，每日观察培养物有无颜色变黄或变红，如果无变化，则在最后一次移植小管培养、观察后14日后停止观察。在观察期内，如果发现小瓶或任一小管内液体颜色出现明显变化，在原pH变化达0.5时，应立即移植于液体培养基和固体培养基，观察在液体培养基中是否出现恒定的pH变化，及固体上有无典型的“煎蛋”状支原体菌落。 2.2.2.2 琼脂固体平板培养在每次液体培养物移植小管培养的同时，取培养物0.1-0.2ml接种于琼脂平板，置含5%-10%二氧化碳。潮湿的
环境、37℃下培养。此外，在液体培养基颜色出现变化，在原pH变化达到0.5时，也同时接种琼脂平板。每5-7日，在低倍显微镜下观察各琼脂平板上有无支原体菌落出现，经14日观察，仍无菌落时，停止观察。 2.2.2 对照每次检查需同时设置阳性、阴性对照，在同条件下培养观察。检测禽类疫苗时用滑液支原体作为对照，检测其他疫苗时用猪鼻支原体作为对照。 2.3 血清的检测取本血清50ml代替培养基中的马、猪血清，按附录38页培养基配方配成大瓶培养，按2.2.1.2项稀释、移植、培养，观察小管培养基的pH变化情况和琼脂平板上有无菌落。 3 结果判定 3.1 接种本物的任何一个琼脂平板上出现支原体菌落时，判定血清或者疫苗不合格。 3.2 阳性对照中至少有一个平板出现支原体菌落，而阴性对照中无支原体生长，则检验有效。 附注：上述小瓶培养基是指在100ml小瓶中盛20ml液体培养基；小管培养基是指在1.0cm*10cm中盛1.8ml培养基。小管与小瓶须用胶塞封口。
简易卡 一.【肺炎支原体抗体（IgG）检验方法】 1.将待测血清样本和试剂盒，恢复至室温（20～37℃）. 2.取出反应板，于反应板孔中滴入血清二滴，静置，待血清完全吸入. 3.在20分钟内观察反应板孔中现象. 三.【单纯疱疹检验方法】 1.用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min 离心10-15分钟，分离血浆. 2.取出反应板，用吸管吸取样本垂直加入，2-3滴. 3.15分钟内观察反应板孔中现象. 七.【革兰氏染色的检验方法】 目的： 1.涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液器吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用移液器分别吸取10ul金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌位于待检品的两侧（中间要有足够的空间），分别作为阴阳性对照。用无菌接种环将液滴涂布成均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2.干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯火焰高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 3.固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉得烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。 4.初染：在涂片薄膜上滴加革兰氏结晶紫试剂1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 5.水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 6.媒染：取1-2滴革兰氏碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约 1min。 7.水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 8.脱色：斜置载玻片，滴加革兰氏脱色剂脱色，至流出的脱色剂不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。
附录XIIB支原体检查法 主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时，应同时进行培养法和指示细胞法（DNA染色法）。病毒类疫苗的病毒收获液、原液采用培养法检查支原体，必要时，亦可采用指示细胞法筛选培养基。也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法 第一法培养法 推荐培养基及其处方 （1）支原体肉汤培养基 猪胃消化液 500ml 氯化钠2.5g 牛肉浸液（1:2）500ml 葡萄糖 5.0g 酵母浸粉5.0g 酚红0.02g pH值7.6±0.2。于121℃灭菌15分钟。 （2）精氨酸支原体肉汤培养基 猪胃消化液 500ml 牛肉浸液（1:2）500ml 葡萄糖 1.0g 酵母浸粉5.0g L-精氨酸2.0g 酚红0.02g 氯化钠2.5g pH值7.1±0.2。于121℃灭菌15分钟。 （3）支原体半流体培养基按（1）项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂2.5～3.0g。 （4）支原体琼脂培养基按（1）项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂13.0～15.0g。 培养基灵敏度检查（变色单位试验法）（1）菌种肺炎支原体（ATCC 15531）、口腔支原体（ATCC 23714），由国家药品检定机构分发。 （2）操作将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传2代后，将培养物接种到待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7～10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基
内。每个稀释度接种3支试管，置36℃ 士1℃ 培养7～14天，观察培养基变色结果。 ( 3 )结果判定以接种后培养基管数的2 / 3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。 液体培养基的灵敏度：肺炎支原体（ATCC 15531 )应达到10-8，口腔支原体（ATCC 23714）应达到10-4。 检查法（1）供试品如在分装后24小时以内进行支原体检查者可贮存于2～8℃ ；超过24小时应置一20℃ 以下贮存。 ( 2 )检查支原体采用支原体半流体培养基和支原体肉汤培养基（或支原体琼脂培养基）。支原体半流体培养基（或琼脂培养基）在使用前应煮沸10～15分钟，冷却至56℃ 左右，然后加人灭能新生牛血清（培养基与血清体积比为8:2 )，并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。液体培养基除无需煮沸外，使用前亦应同样补加上述成分。 取每支装量为10ml的支原体半流体培养墓（已冷至36℃ 士1℃ ）和支原体肉汤培养基各4支，每支培养基接种供试品0.5～1.0ml，置36℃ 士1℃ 培养21天。于接种后的第7天从4支中取2支进行次代培养，每1支培养基转种支原体半流体培养基及支原体肉汤培养基各2支，置36℃ 士l℃ 培养21天，每隔3天观察1次． ( 3 )结果判定培养结束时，如接种供试品的培养基均无支原体生长，则供试品判为合格；如疑有支原体生长，可取加倍量供试品复试，如无支原体生长，供试品判为合格，如仍有支原体生长，则供试品判为不合格。 【附注】质量检定部门应会同培养基制造部门定期抽检支原体培养基灵敏度。 第二法指示细胞培养法（DNA染色法） 将供试品接种于指示细胞（无污染的Vero细胞或经国家药品检定机构认可的其他细胞）中培养后，用特异荧光染料染色。如供试品污染支原体，在荧光显微镜下可见附在细胞表面的支原体DNA着色。 试剂（1）二苯甲酰胺荧光染料浓缩液称取二苯甲酰胺荧光染料5mg，加人100ml不含酚红和碳酸氢钠的Hank 's平衡盐溶液中，室温下用磁力搅拌器搅拌30～40分钟，使完全溶解，-20℃ 避光保存。 （2）二苯甲酰胺荧光染料工作液无酚红和碳酸氢钠的Hank ' s溶液100ml中加人二苯甲酰胺荧光染料浓缩液lml，混匀。 （3）固定液醋酸:甲醉（体积比1:3）混合溶液。 （4）封片液量取0.1mol / L枸橼酸溶液22.2ml、0.2mol / L磷酸氢二钠溶液27.8ml、甘油50.0ml，混匀，调pH值至5.5。 培养墓及指示细胞（1） DMEM完全培养基。 ( 2 ) DMEM无抗生素培养基。
支原体检测SOP 目的：制定支原体检验标准操作规程，确保检验操作正确。 范围：本标准适用于本公司主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞、病毒收获液、原液的支原体检验操作。 依据：《中国药典》2010年版三部通则3301支原体检测法。 一、培养法 1、检测原理：直接培养支原体于培养基中，观察其生长及菌落生成。 2、适用器材：灭菌锅、试管（带盖）、10ml移液管、1ml移液管、37℃培养箱、 3、检测步骤： （1）培养基的制备：【外购培养基】 （2）检测培养基的灵敏度： 将菌种接于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传两代后，将培养物接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7～10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。每个稀释度接种3支试管，置36℃±1℃培养7～14天，观察培养基变色结果。 结果判定以接种后培养基管数的2/3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。 液体培养基的灵敏度：肺炎支原体（ATCC 15531株）应达到10-8，口腔支原体（ATCC 23714株）应达到10-4。 （3）培养基前处理： 检查支原体采用支原体液体培养基和支原体半流体培养基（或支原体琼脂培养基）。半流体培养基（或琼脂培养基）在使用前应煮沸10～15分钟，冷却至56℃左右，然后加入灭能小牛血清（培养基︰血清为8︰2），并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。液体培养基除无需煮沸外，使用前亦应同样补加上述成分。 （4）接种培养： 取每支装量为10ml的支原体液体培养基各4支、相应的支原体半流体培养基各2支（已冷却至36℃±1℃），每支培养基接种供试品0.5～1.0ml，置36℃±1℃培养21天。于接种后的第7天从4支支原体液体培养基中各取2支进行代次培养，每支培养基分别转种至相应的支原体半流体培养基及支原体液体培养基各2支，置36℃±1℃培养21天，每隔3天观察1次。 （5）结果判定： 无生长——合格； 疑有生长——加倍量复试——无生长——合格；
肺炎支原体培养及药敏检测的临床意义 一、支原体 支原体：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。 支原体对热的抵抗力与细菌相似。对环境渗透压敏感，渗透压的突变可致细胞破裂。对重金属盐、石炭酸、来苏尔和一些表面活性剂较细菌敏感，但对醋酸铊、结晶紫和亚锑酸盐的抵抗力比细菌大。对影响壁合成的抗生素如青霉素不敏感，但红霉素、四环素、链霉素及氯霉素等作用于支原体核蛋白体的抗生素，可抑制或影响蛋白质合成，有杀灭支原体的作用。 二、肺炎支原体 肺炎支原体（M.Pneumonia），MP,是支原体的一种，是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。MP感染的临床表现常无特异性，临床的实际工作中，容易与一般病毒性感冒相混淆。在临床上患儿有下列症状：（1）发热呈弛张热或不规则热。刺激性咳嗽非脓性痰，偶带血丝。（2）可有咽痛、头痛、胸痛，全身症状比体征明显。（3）肺部体征不典型而胸片炎症显著，可见云雾状大片阴影。（4）WBC正常或升高。（5）青霉素类、磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始用大环内酯类抗生素有效。（6）实验室MP检验有1项或1项以上阳性具备以上2个条件或以上者可初步诊断为MP感染。更多时候，临床医生为了尽快缓解患儿的症状，需根据患儿的症状、体征和病史做MP感染的诊断性治疗，但应与肺结核相互鉴别。 三、肺炎支原体的诊断方法比较及临床意义 1、PCR法 咽拭子PCR法检测质粒核酸，该法快速、敏感和特异，通过这一技术可从患儿痰中检测MP-DNA。由于此方法相当敏感，易受污染，故实验室操作时应特别小心。统计结果显示，该法的阳性率为67.76%（103/152），高于快速培养法。此法弥补了极微量的和被药物杀死的MP不能通过快速培养法检出的病例。但是此法操作复杂，对设备及标本要求比较高。
肺炎支原体及其快速培养法 支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，它既不同于细菌，也不同于病毒，是介于细菌和病毒之间，能在无活细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。它广泛分布于自然界，与人类、nbsp;动植物的疾病有密切的关系。支原体的种类繁多，造成的危害非常广泛。 作者：罗三艳作者单位：412001 湖南株洲，株洲田心医院检验科支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，它既不同于细菌，也不同于病毒，是介于细菌和病毒之间，能在无活细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。它广泛分布于自然界，与人类、动植物的疾病有密切的关系。支原体的种类繁多，造成的危害非常广泛。目前证明对人体有致病作用的支原体有肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体等几种，但临床以肺炎支原体最为常见［1］。肺炎支原体主要以飞沫传播，引起儿童、青少年呼吸道感染、咽炎、气管炎、肺炎等。近年肺炎支原体感染病例明显增多并有局部流行的趋势，早期诊断极为重要。 1 肺炎支原体的实验室检测方法目前，肺炎支原体的实验室检测方法有支原体分离培养、 PCR法检测质粒核酸、抗体检测、支原体快速培养法、分子生物学方法等。支原体细胞分离培养可获得肺炎支原体，可以确诊。由于支原体分离培养要求苛刻，一般医院实验室难以推广。此法阳性率低，需时3 周甚至更长时间，对临床快速诊断意义不大。PCR法检测质粒核酸快速、特异、敏感，但需昂贵设备，不易普及，且方法过于敏感，容易受污染。传统的冷凝集法检测肺炎支原体的IgM 抗体，方法简单、易行，但其敏感性和特异性均较差，易受病程影响。ELISA 检测支原体抗体法较为简便、可靠。由于发病初期，机体中尚未产生抗体不能被检出，发病时间较长此法才有意义。而快速培养法正以其简单、快速、经济、无创伤等优点，被越来越多的临床实验室所推广，也被越来越多的患者所接受。 2 肺炎支原体快速培养法肺炎支原体快速培养法是利用肺炎支原体的代谢产物使培养基液体中的指示剂颜色发生改变来判断其生长，标本中的其他支原体和细菌则被培养基中的青霉素和醋酸陀抑制［2］。此法操作简便、快速、无痛苦。先从冰箱中取出快速培养基，复温，按常规方法采集患者咽拭标本，将标本棉签浸入培养液，沿瓶壁挤压棉签，取出棉签、丢弃。旋紧瓶盖，登记标本号，35℃～37℃孵育24～ 48h，观察结果。培养基由红色变为绿色、黄色，且仍保持清晰透明，说明有肺炎支原体生长，明显混浊变色者不能视为阳性。培养液颜色不变，应判为无肺炎支原体生长。我院检验科是从2007年4月份开始展开此项检测，共检测293 例疑似肺炎支原体感染病例，阳性病例161 例，阳性率54.9%，及早为临床诊断、治疗肺炎支原体感染提供了依据。 3 讨论近年来，肺炎支原体感染明显上升，危害较大，其临床表现常无特异性，易与一般病毒性感冒相混淆。临床医生为了尽快缓解患者的症状，需根据患者症状、体征及肺炎支原体的相关检测，及早诊断、治疗。快速培养法不受病程影响，感染初期就可检测出肺炎支原体。有资料报道，在肺炎支原体检测的各种方法中，该法阳性病例病程最短，提示病程时间较短的患者选择此法检测的阳性率较高。快速培养法是诊断肺炎支原体的金标准 ［2］。肺炎支原体快速培养法采咽拭标本，采集标本前，用生理盐水漱口。所采集的标本应迅速接种，若不能及时接种，室温保存不超过2h。使用
肺炎支原体肺炎的诊断 空军总医院刘春灵 支原体是介于细菌和病毒之间的一类缺乏细胞壁、呈高度多型性、能通过滤菌器、可在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。迄今分离到的支原体已达150余种，已确定与人类疾病关系最大的有3种，肺炎支原体（mycoplasma pneumonia, MP）是其中的一种。MP在国内外都是儿童和成人呼吸道感染的重要病原体之一，主要导致肺炎，所有肺炎的15-20%，约50%的儿童和青少年肺炎是由MP引起的.因此MP肺炎（MP pneumonia,MPP）是常见病和多发病。但迄今为止，MPP仍缺乏快速、可靠的诊断试验，因而临床确诊困难。 MPP的诊断包含两个层面：临床诊断（经验性）和结合了实验室病原学检测的确定诊断。 一、MPP临床诊断：根据流行病学、临床症状、体征、实验室辅助检查等特点经验性综合判断而出。MPP有着不同于一般感染性疾病的的特点：一般肺炎多发于冬季，MPP一年四季均可发病，但多发生于夏秋季节；临床症状大多只有发热和咳嗽；外周血白细胞总数大多不高；疾病早期X线检查即可出现肺炎，约10%-20%的病例会出现肺不张；因MP无细胞壁，临床常用的、作用于细胞壁的、安全性高的治疗肺炎的药物如β-内酰胺类的青霉素类、头孢类抗生素对其无作用；因此易被误诊为病毒性肺炎。综合上述特点，可作出初步的经验性临床诊断。 二、实验室病原学诊断：包括直接病原体检测和血清学检测。下面介绍几种常用或经典的MP实验室诊断方法。 （一）直接病原体检测：主要有MP分离培养和聚合酶链反应（PCR）法检测MP-DNA。检测用标本可取自可疑患者呼吸道的痰、咽拭子、鼻咽吸出物、支气管肺泡灌洗液、胸水等。 1、MP分离培养与鉴定： MP很挑剔，培养基的营养要求比一般细菌高，生长速度慢，较一般细菌难培养；分离培养需要10-14天，而通常需要2-5周才能生长成肉眼可见的菌落。通过生化反应和免疫学方法进行鉴定。还有其它影响因素，如MPP无细胞壁，对环境的影响更为敏感，易被灭活；标本采集后接种到培养基的过程也是培养可能失败的一个环节。由于其费时、费力、阳性率低，实际临床已经弃用此方法，目前主要用于研究性项目。
肺炎支原体感染的血清学试验 参考范围： 补体结合试验(CF) <1:8 代谢抑制试验(M1) 阴性 问接血凝试验(PHA) 阴性 酶联免疫吸附试验(ELISA) 阴性 MG链球菌凝集试验<1:40 临床评价： 1．肺炎支原体（MP）是主要的病原性支原体之一，在临床上主要引起上呼吸道感染、气管艾气管炎及支原潍肺炎。过去称为“原发性非典型性肺炎”的病原体中，MP最为常见。约有80％的慢性支气管炎患者合并MP感染。肺炎病例中约有10％～20％由MP引起。MP感染后，可用各种血清学试验检测体内产生的特异性抗体，有助于疾病的诊断。 2．测定病人血清中特异性抗体，常用的方法有CF、MI、PHA和ELISA等，其中CF 试验是诊断支原体肺炎最常应用的方法。支原体有较强的补体结合反应，单份血清抗体效价>1：6 4或恢复期较急性期抗体滴度增加4倍以上即有诊断价值。一般补体结合抗体在感染后7～9天开始上升，3～4周达到高峰，维持4～6个月。问接血凝试验在MP感染的急性期即可出现阳性，血凝抗体可存在数年。代谢抑制试验可测定MP脂多糖胞膜抗原的相应抗体，方法敏感且特异性强。这种抗体的出现较上二者为迟。ELISA所用抗原为MP表面P蛋白，采用间接法检测特异IgM抗体，具有早期诊断意义。 MG链球菌凝集试验是检测患者血清中MG链球菌凝集素效价的一种方法。MG链球菌是从某些原发性非典型性肺炎病人的呼吸道或肺部分离出的一种非溶血性菌株，约有40％～50％的支原体肺炎患者恢复期血清中常产生MG链球菌凝集素，本试验呈阳性，故检测患者血清内凝集素效价对支原体肺炎有辅助诊断意义。本试验还有助于与病毒性肺炎的鉴别，病毒性肺炎不出现MG链球菌凝集反应。 3．采用分离培养的方法检测患者痰、咽拭等标本中的MP，对支原体肺炎具有病原确诊意义，但需要2周以上时间，且阳性率不等，在临床上不能早期、快速诊断。寒冷凝集试验是一种非特异性反应，在临床上常用作支原体肺炎的辅助诊断，约有50％以上病例可出现冷凝集抗体。应用PCR技术检测患者呼吸道分泌物和支气管肺泡冲洗物中MP的DNA，是敏感、特异且快速的实验室诊断方法。 4．影响本试验结果的因素 (1)CF试验的敏感性和特异性不高，所用的MP糖脂抗原可与许多微生物、植物及人体组织有交叉反应。 (2)MG链球菌凝集试验在某些严重感染性疾病也可呈阳性。 寒冷凝集试验 参考范围： 寒冷凝集试验 临床评价： 1．寒冷凝集素是由I抗原刺激机体产生的一种非特异性抗体，属IgM类，在0～10℃的寒冷情况下，能与O型人红细胞或自身红细胞的膜抗原结合，产生凝集现象。此种凝集反应具有可逆性，若将已凝集的红细胞再放置于37℃时，凝集现象即可消失。支原体肺炎患者血清中常可出现高效价的寒冷凝集素，寒冷凝集试验可用于测定该抗体的效价，有助于支原体肺炎的诊断。 2．寒冷凝集素大多在发病后1～2周开始出现，以后继续增高，于病程3～4周达到
儿童肺炎支原体肺炎影像学及肺功能特点 目的：探讨儿童肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）的影像学及肺功能特点，协助临床诊治。方法：回顾性分析52例MPP患儿影像学及肺功能特点，并对MPP患儿急性期与恢复期肺功能进行比较分析。结果：52例MPP患儿的胸部DR表现为肺实变22例，肺间质改变14例，肺门淋巴结肿大5例，双肺纹影增多11例等。48例患儿急性期行肺功能检查，有33例均有不同程度的肺功能损害，在恢复期复查肺功能，有5例存在小气道通气功能障碍，其余恢复正常。MPP患儿急性期肺功能指标（包括FVC、FEV1、PEF、FEF25、FEF50、FEF75、FEF25-75）与恢复期比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：MPP患儿影像学表现呈现多样化，肺功能急性期改变有临床意义，应定期监测肺功能，预防哮喘发生。 标签：肺炎支原体肺炎；影像学；肺功能；儿童 肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）由肺炎支原体感染引起的一种常见儿童呼吸系统疾病，尽管多数MPP可以治愈，而且有一定的自限性，但重症MPP仍可导致患儿肺不张、胸腔积液、闭塞性支气管炎等，且近些年来肺炎支原体感染引起的儿童社区获得性肺炎有逐步增加的趋势[1]。所以有必要了解和掌握MPP的临床表现，但是针对MPP患儿的影像学特点及肺功能改变报道较少。本研究对笔者所在医院52例MPP患儿的资料进行回顾性分析，探讨其影像学及肺功能特点，现将结果报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 收集2011年4月-2012年4月在笔者所在医院儿内科住院确诊为MPP的患儿。诊断标准参照《诸福棠实用儿科学》及2007年中华医学会儿科学分会呼吸学组制定的《儿童社区获得性肺炎管理指南》[2-3]。患儿有咳嗽、发热、肺部闻及罗音等呼吸道感染表现，有胸部影像学改变证据，MP特异性IgM抗体阳性，临床上对青霉素、头孢类药物无效。根据参照标准选取52例MPP患儿，其中男30例，女22例，年龄4～10岁，平均（6.93±1.58）岁。所有患儿均因呼吸道感染就诊，以发热、咳嗽为主，其中7例出现喘憋，2例合并肺外表现，其中1例合并溶血性贫血，1例合并川崎病。 1.2 方法 所有患儿均进行胸部DR检查及肺功能检查。胸部DR检查：采取拍摄后前位胸部正位片，其中12例行胸部CT检查。肺功能检查：采用德国JEAGER公司生产的Master Screen Paed肺功能仪器，记录用力肺活量（FVC），第一秒用力呼气容积（FEV1），呼气峰流速（PEF），最大呼气中期流量（FEF25，FEF50，FEF75，FEF25-75）指标。常规肺功能检查均在入院后72 h内进行，对于肺功能
3301 支原体检查法 主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时，应同时进行培养法和指示细胞培养法（DNA染色法）。病毒类疫苗的病毒收获液、原液采用培养法检查支原体，必要时，亦可采用指示细胞培养法筛选培养基。也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法。 第一法培养法 推荐培养基及其处方 ⑴支原体液体培养基 支原体肉汤培养基 猪胃消化液500ml 氯化钠 2.5g 牛肉浸液（1︰2）500ml 葡萄糖 5.0g 酵母浸粉 5.0g 酚红0.02g pH值7.6±0.2。于121℃灭菌15分钟 精氨酸支原体肉汤培养基 猪胃消化液500ml 葡萄糖 1.0g 牛肉浸液（1︰2）500ml L-精氨酸 2.0g 酵母浸粉 5.0g 酚红0.02g 氯化钠 2.5g pH值7.1±0.2。于121℃灭菌15分钟 ⑵支原体半流体培养基按⑴项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂 2.5～ 3.0g。 ⑶支原体琼脂培养基按⑴项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂 13.0～15.0g。 除上述推荐培养基外，亦可使用可支持支原体生长的其他培养基，但灵敏度必须符合要求。 培养基灵敏度检查（变色单位试验法）⑴菌种肺炎支原体（ATCC 15531株）、口腔支原体（ATCC 23714株），由国家药品检定机构分发。 ⑵操作将菌种接于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传两代后，将培养物接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原
体稀释至10-7～10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。每个稀释度接种3支试管，置36℃±1℃培养7～14天，观察培养基变色结果。 ⑶结果判定以接种后培养基管数的2/3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。 液体培养基的灵敏度：肺炎支原体（ATCC 15531株）应达到10-8，口腔支原体（ATCC 23714株）应达到10-4。 检查法 ⑴供试品如在分装后24小时以内进行支原体检查可贮存于2～8℃；超过24小时应置-20℃以下贮存。 ⑵检查支原体采用支原体液体培养基和支原体半流体培养基（或支原体琼脂培养基）。半流体培养基（或琼脂培养基）在使用前应煮沸10～15分钟，冷却至56℃左右，然后加入灭能小牛血清（培养基︰血清为8︰2），并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。液体培养基除无需煮沸外，使用前亦应同样补加上述成分。 取每支装量为10ml的支原体液体培养基各4支、相应的支原体半流体培养基各2支（已冷却至36℃±1℃），每支培养基接种供试品0.5～1.0ml，置36℃±1℃培养21天。于接种后的第7天从4支支原体液体培养基中各取2支进行代次培养，每支培养基分别转种至相应的支原体半流体培养基及支原体液体培养基各2支，置36℃±1℃培养21天，每隔3天观察1次。 ⑶结果判定培养结束时，如接种供试品的培养基均无支原体生长，则供试品判为合格；如疑有支原体生长，可取加倍量供试品复试，如无支原体生长，供试品判为合格，如仍有支原体生长，则供试品判为不合格。 【附注】质量检定部门应会同培养基制造部门定期抽检支原体培养基灵敏度。 第二法指示细胞培养法（DNA染色法） 将供试品接种于指示细胞（无污染的Vero细胞或经国家药品检定机构认可的其他细胞）中培养后，用特异荧光染料染色。如供试品污染支原体，在荧光显微镜下可见附在细胞表面的支原体DNA着色。 试剂⑴二苯甲酰胺荧光染料（Hoechst 33258）浓缩液称取二苯甲酰胺荧光染料5mg，加入100ml不含酚红和碳酸氢钠的Hank’s平衡盐溶液中，在室
HQBJS/MYXM-9-2015 SOP文件B9.1【检验目的】 肺炎支原体是人类原发性支原体肺炎的病原体，经呼吸道感染。多发生于儿童、青年，发病初期临床症状不明显，隐性感染和轻型感染较多，也可致严重肺炎，出现头痛、发热、咳嗽等，本试验用胶体金法定性检测人血清中的肺炎支原体IgM 抗体。 B9.2【检验原理】 用肺炎支原体抗原固相硝酸纤维素膜，应用渗滤式间接法原理，检测血清中肺炎支原体抗体。 B9.3【样本要求】 血清样品不能溶血，应为新鲜血清或2℃～8℃条件保存不超过3天。高脂血症血清不能使用。 B9.4【样本采集】 不抗凝血2ml，避免溶血、混浊、或脂血标本 B9.5【试剂盒主要组成成份】 斑点反应板：40块（或20块） 试剂A： 1瓶, 约10ml 试剂B: 1瓶,约8ml, 胶体金标记物 B9.6【储存条件及有效期】 产品应储存在2℃～8℃条件中，不能冷冻；有效期8个月。
HQBJS/MYXM-9-2015 SOP文件 B9.7【检验方法】 滴入二滴试剂A于反应板中央孔中，待完全渗入； 滴入100μl血清于反应板孔中，待完全渗入； 滴加三滴试剂B于反应板孔中，待完全渗入； 渗入三滴试剂A于反应板孔中，待完全渗入。 B9.8【结果解释】 阳性：反应板孔中出现红色圆斑和清晰的红色质控线，为肺炎支原体抗体阳性； 阴性：反应板孔中只显现清晰的红色质控线，为肺炎支原体抗体阴性；失效: 反应板孔中未显现红色质控线，为操作失误或试剂失效。 B9.9【检验方法的局限性】 本试剂试验仅用于检测肺炎支原体抗体而非直接检测肺炎支原体，因而阳性结果并不能确诊是肺炎支原体感染。对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和试验结果的综合分析。 抗体含量低的血清样品，不能被检测出来是可能的。部份肺炎支原体感染的患者，不产生抗体或产生少量的抗体。此时，可能显示阴性结果。 试验结果可疑时，应用培养基进行培养确诊。
细胞支原体污染常用支原体检测方法和试剂盒介绍 （2016年10月16日） 哺乳动物细胞的培养，支原体（Mycoplasma）污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误。从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。 目前，细胞支原体污染常用的支原体检测方法主要有： 一、培养法 ●原理：将待检测样品先接种到支原体液体培养基中大量繁殖，然后再转 接种到支原体固体培养基中，培养一段时间后（大约一个月），如果固体 培养中，出现典型的支原体菌落，则说明待测样品有支原体污染。 ●优点：支原体培养法是相对可靠的支原体检测技术，也是我国药典认可 的方法之一。 ●缺点：（1）培养法非常耗时的，需要数周，不适合作为细胞培养液中支 原体污染的快速检测；（2）通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最 常见的支原体，即猪鼻支原体（M.Hyorhinis）。这是因为猪鼻支原体无 法在支原体固体培养基上形成可见的菌落。而猪鼻支原体约占所有细胞 支原体污染的20-50%。 ●《培养法支原体检测试剂盒》》主要厂家：读者可以根据《中国药典》中 收录的培养法支原体检测方法进行操作。 二、荧光染色法 ●原理：将待检测样品接种到专门的指示细胞（如：Vero细胞）中，培 养一段时间后，用DNA荧光染料（如：Hoechst 33258，DAPI）进行染色， 如果除了细胞核被染色外，细胞质也有大量的絮状核酸物质被荧光染料 染色，那么这些处于细胞质的核酸物质就是支原体DNA。 ●优点：荧光染色法也是我国药典认可的方法之一。 ●缺点：（1）该方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污 染；（2）需要用到专门的指示细胞（如：Vero细胞），如果不用指示细