寄生虫病常用的免疫学诊断方法
刘凡 @ 2006-04-26 12:53
寄生虫病目前还是危害我国人民身体健康的重要疾病。根据近年的全国调查报告，共发现我国有人体寄生虫56种，主要为肠道寄生虫。其中半数以上为不常见虫种，尚不包括疟疾、黑热病、血吸虫、丝虫以及弓形虫、卡氏肺孢子虫、巴贝西虫和锥虫等重要寄生虫。人均寄生虫感染率高达62.6%。估计全国有7亿多人感染寄生虫，最多的1人同时感染9种寄生虫，特别在农村人口中。因此对寄生虫的检验工作是一项非常重要和基本的技术。对寄生虫的检验不仅要能熟悉各种寄生虫的生活史及它们各个时期的形态特征，而且要求掌握对各种标本的处理技术(如取材、制片、染色、镜检)及必要的免疫学等检验方法。
目前,寄生虫诊断技术主要包括病原检查、免疫学检查和分子生物学检查三个方面。实际应用中免疫学检查比较高效和准确，几乎所有的免疫学方法均可用于寄生虫病的诊断，但是各有各的优缺点，各有各的应有条件，主要而且常用的免疫检验方法有：
1.环卵沉淀试验(COPT)：这是国内外公认的用以诊断血吸虫病的有效血清学方法之一。现在该法已趋向完善，不但提高了它的诊断效果，而且使该法更适合于现场推广应用。虫卵的处理有甲醛处理冰冻干卵抗原；热处理超声干卵抗原等。方法有双面胶纸条法、蜡封片法、塑料管、薄膜抗原片COPT，聚乙烯醇缩甲醛氯仿COPT(PVF-COPT)等，均有实用价值，已经作为基本消灭和消灭血吸虫病地区首先考虑应用的血清免疫学诊断方法。
2.间接红细胞凝集试验：已用于多种寄生虫病的诊断和流行病学调查。可分为间接血凝(IHA)，反向间接血凝(RIHA)，间接血凝抑制试验(IHAI)，反向间接血凝抑制试验(RIHAI)，可以检测抗原或抗体，有较高的敏感性和一定的特异性。单克隆抗体的应用使敏感性和特异性有所提高。
3.酶联免疫吸附试验(ELISA)：目前国外ELISA已广泛应用于寄生虫病免疫学诊断中。许多商品试剂盒已被引入国内，但是价格较高。国内也研制了多种试剂盒，推广应用于各种寄生虫病诊断中。例如：血吸虫病、肺吸虫病、黑热病、包虫病、弓形虫病、隐孢子虫病、卡氏肺孢子虫病、囊虫病、阿米巴病等。除传统的ELISA 外，又发展了K-ELISA、ABC-ELISA、DOT-ELISA、薄膜ELISA等，应用于血吸虫病、肺吸虫病、肝吸虫病等。可测抗体，也可测循环抗原及粪便样品、脓液及其它体液中的抗原。目前存在的问题主要有抗原制备和试验方法尚需进一步标准化和规范化。
4.间接荧光抗体试验(IFAT)：在国外已广泛应用IFAT作为寄生虫病的免疫学诊断方法。国内主要应用该法诊断疟疾、丝虫病、弓形虫病。在血吸虫病、肺吸虫病、华支睾吸虫病、包虫病、阿米巴病等也有应用。IFAT有较高的敏感性、特异性和重现性。但试验结果需要用荧光显微镜观察反应，限制了该法的广泛应用。结果判定需要有经验的人员，有一定的主观性。该法可检测血清中的抗体，也可检测组织内的寄生虫，如利什曼原虫、阿米巴、疟原虫、弓形虫等。
5.乳胶凝集试验(LAT)：LAT是以胶乳微粒作为载体的凝集反应。主要应用于弓形虫病、囊虫病、旋毛虫病、血吸虫病、棘球蚴病等诊断。该法有较好的敏感性和特异性，方法简便，判断结果快速，适于现场应用。
6.免疫印迹技术(IBT)：（又称Western印迹试验）是以聚丙烯酰胺凝胶电泳、转移电泳、固相酶免疫试验三种方法合一的实验技术，是近年来发展迅速的一种新技术。已应用于血吸虫病、绦虫病、包虫病、肺吸虫病、卡氏肺孢子虫、阿米巴病、囊虫病等。随着技术的完善，IBT可望成为高度敏感和特异的诊断寄生虫病和区别寄生虫感染期的有效方法。
7.免疫层析技术(ICT)：ICT是近年来发展的快速诊断技术，可检测抗体或抗原。应用于寄生虫病的有恶性疟原虫/间日疟原虫抗原检测和班氏丝虫抗原及利什曼原虫抗原检测。该法敏感、快速、特异性较好，适于临床快速诊断和现场调查。
8.PCR和核酸分子杂交技术：随着分子生物学的发展，PCR基因扩增技术及核酸分子杂交技术已越来越多的应用于寄生虫病的诊断和研究之中。如锥虫病、利什曼病、肺孢子虫病、贾第虫病、弓形虫病、血吸虫病、阿米巴病、包虫病、疟疾、丝虫病和肠球虫病等。PCR技术虽具有高度的敏感性和特异性，但由于技术条件的要求很高，目前尚仅限于实验室试用阶段。
由于免疫技术的发展及分子生物学、单克隆抗体的应用，已使寄生虫病的诊断方法达到了简易、微量、快速、准确和经济的目的，显著地提高了诊断效率和准确性。随着越来越多其它学科新技术在寄生虫学上的应用，将使寄生虫学拥有更多、更为理想的研究方法，这对作为生物进化最重要模型之一的寄生虫的研究将是极大的推动。如：伴随免疫、带虫免疫、免疫抑制等的阐述将有助于其他疾病如肿瘤、爱滋病等的发生机制、发展、治疗及预防提供参考依据；对真核生物与原核生物分界线的原虫和真菌、低等动物向高等动物进化桥梁的蠕虫的研究将有助于生命奥秘的揭开。而对于我们来说，了解寄生虫学的各种研究方法对我们加深理解寄生虫学、免疫学、生物化学、细胞学、生态学、生物信息学等多门学科的原理和应用有很大的帮助，并能使我们在各学科的交叉中学会更多的东西，开拓更广的思维空间，进行更深层次的创新。
名词解释 1．环境寄生虫学：寄生虫与环境能以不同的方式互相影响，该学科就是利用寄生虫来监测环境是一门新兴的交叉学科。 2．免疫寄生虫学：是研究寄生现象和寄生虫与宿主相互关系免疫学方面的科学。 3．免疫流行病学：是以流行病学的形式与方法研究免疫力的群体效应，即研究宿主个体的免疫差别是如何影响致病因素的群体生物学表现，研究通常还包括运用数学模型及血清流行病学等方法。 4．非消除性免疫：大多数寄生虫感染可引起宿主对再感染产生一定程度的免疫力，但这仅仅是一种不完全的保护性免疫力，宿主体内的寄生虫并不能被彻底清除，而是维持在一个低水平状态，与宿主的特异保护性免疫力同在；一旦用药物清除体内的残余寄生虫后，宿主已获得的这种免疫力即逐渐消失。包括带虫免疫和伴随免疫。 5．消除性免疫：未经治疗，宿主即能消除体内寄生虫，并对再感染产生完全的保护性免疫力。如：硕大利什曼原虫的东方疖。 6．获得性非特异性免疫：宿主受到与抗寄生虫效应的靶抗原无关的病原体的提取物或某些合成产物的刺激所产生的保护力，它并不针对某特定的靶病原体，而是可抵抗多种感染因子（包括单细胞的原虫和细菌，多细胞的蠕虫，甚至肿瘤等）的攻击。 7．带虫免疫：某些血内寄生原虫感染后，产生一定程度的免疫力，可杀伤体内原有的原虫，使其数量明显下降，维持在一个低水平上，临床症状消失，呈带虫状态，但不能完全清除体内的虫体，可抵抗同种寄生虫的再感染，体内无此虫时此免疫力即消失，这种免疫状态就是~。 8．伴随免疫：人感染某些蠕虫（如：血吸虫）后可获得部分免疫力，患者门静脉内仍有成虫寄生和产卵，但宿主对再感染有一定免疫力，而无损于体内的成虫，当体内成虫消失后此免疫力也消失，这种免疫称为~。 9、流行率：指的是在一定时间内受感染的人，通常以百分比表示。 10、感染度：是指一个个体的虫荷或一组个体的平均虫荷，在人群中只能通过定量的虫卵计数表示，但也有少量尸检的研究测定虫荷数。流行率和感染度有着内在的联系，一般，人群流行率越高，感染者的平均感染度就越高。 11、(新)感染的发生率：是指原先未感染的个体在一定时间内受感染，以年百分率表示，通常在儿童中计算。 问答题 1．何谓超敏反应？分别可见于哪些寄生虫病？ 超敏反应是处于免疫状态的机体，当再次接触相应抗原或变应原时出现的异常反应，常导致宿主组织损伤和免疫病理变化。 按照Gell和Coombs关于超敏反应的分类，寄生虫感染的超敏反应也可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4型；它们分别称为速发型、细胞毒型、免疫复合物型、迟发型或细胞免疫型。 在寄生虫感染中，有的寄生虫病可同时存在几型超敏反应，甚为复杂多变。例如，血吸虫病就可有速发型、免疫复合物型及迟发型超敏反应同时或先后存在。 【寄生虫所致的超敏反应见下页】
《动物寄生虫病学》试题(A卷)
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《动物寄生虫病学》试题（A卷） 一、名词解释（每小题2分，共10分） 1、中间宿主：寄生虫幼虫期或无性生殖阶段所寄生的宿主。 2、带虫免疫：寄生虫感染常常引起宿主对重复感染产生一定的免疫力，此时宿主体内的寄生虫并未完全被清除，而是维持在低水平。（非消除性免疫） 3、二宿主蜱：蜱的幼虫及若虫在同一个宿主体上吸血，而成蜱则寄生于另一个宿主，饱血后落地产卵。 4、孢子生殖：有性生殖后形成合子，合子再分裂形成许多子孢子的过程。 5、生物性传播：节肢动物传播病原体最重要的途径。在传播者体内要经历发育或/和繁殖的过程。（只有在传播者体内发育或/和繁殖后才具有感染力） 二、填空题（每空1分，共40分） 1、肝片形吸虫寄生于牛、羊的肝胆管，中间宿主是椎实螺科的淡水螺，治疗动物肝片形吸虫病时可选用三特、肝蛭净等药物。 2、日本血吸虫寄生于人、畜的肝门静脉和肠系膜静脉，中间宿主是湖北钉螺，治疗动物日本血吸虫病时可选用三特、肝蛭净等药物。 3、布氏姜片吸虫寄生的终末宿主是猪和人，寄生部位是小肠。 4、猪囊尾蚴寄生的宿主是猪和人，成虫名称是猪带绦虫；成虫寄生的终末宿主是人。 5、细粒棘球蚴主要寄生于牛、羊的肝和肺，治疗动物细粒棘球蚴病时可选用吡喹酮、丙硫咪唑等药物。 6、扩展莫尼茨绦虫寄生于牛、羊的小肠 ,中间宿主是甲螨或地螨类，治疗动物扩展莫尼茨绦虫病时可选用吡喹酮等药物。 7、疥螨寄生于人和动物的皮肤表皮层内；痒螨寄生于动物的皮肤表面；蠕形螨寄生于人和动物的毛囊和皮脂腺；治疗动物螨病时可选用伊维菌素等药物。 8、猪后圆线虫寄生于猪的支气管、细支气管，中间宿主是蚯蚓，
寄生虫实验检验技术
实验检验技术 一、病原检查 1.粪便检查 （1）直接涂片法：适用于蠕虫卵、原虫检查 （活滋养体检查和包囊的碘液检查）。 （2）浓集法 1）加藤厚涂片法。 2）沉淀法：自然沉淀法主要用于蠕虫的检查、离心沉淀法、倒置沉淀法适于比重较大的蠕虫卵检查、汞碘醛离心沉淀法适于原虫滋养体、包囊、蠕虫卵和幼虫的检查；醛醚沉淀法适于蠕虫卵和原虫包囊的检查。 3）漂浮法：饱和盐水漂浮法适于各种线虫卵、带绦虫卵等检查；硫酸锌离心漂浮法适于原虫包囊、多数蠕虫卵等检查；蔗糖溶液漂浮法适于原虫包囊、卵囊或孢子囊检查。 4）尼龙袋集卵法：主要适于血吸虫卵检查。 （3）虫卵计数法 1）改良加藤厚涂片法：适于各种蠕虫卵计数。 2）小管浮聚计数法：适于大多线虫卵计数 （4）毛蚴孵化法：适于血吸虫病原体检查。 （5）钩蚴培养法：检出率较直接涂片法高7倍。 （6）带绦虫孕节检查法：肉眼可观察。 （7）常用原虫检查染色法：劳氏酸性品红-固绿染色法适于阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫检查、福氏快速苏木精染色法适于阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊检查、金胺-酚染色法和改良抗酸染色法适于隐孢子虫卵囊检查。 2.肛门外检查 （1）肛门周围蛲虫虫卵检查：有透明胶纸法、棉签拭子法，适于蛲虫、带绦虫检查。 （2）肛门周围蛲虫成虫检查：在肛门附近发现白色小虫，可进一步鉴定。 3.血液及骨髓检查 （1）检查微丝蚴：①新鲜血片检查法；②厚血膜法；③活微丝蚴浓集法；④离心浓集法。 （2）检查疟原虫：①新鲜血片检查法：采血、制片（薄血膜，厚血膜）、固定、染色；②定量血沉棕黄色层（QBC）检查法；③疟原虫计数法。 4.其他排泄物与分泌物检查 （1）痰液检查：适于肺吸虫卵、溶组织内阿米巴滋养体、蛔蚴等检查，方法有：直接涂片法、消化沉淀法。 （2）尿液和鞘膜积液检查：适于检查班氏微丝蚴，可用离心法。 （3）阴道分泌物检查：适于检查阴道毛滴虫等，可用直接涂片法、悬滴法、涂片染色法。 （4）前列腺液检查：适于检查男性泌尿生殖道的阴道毛滴虫。 （5）十二指肠液检查：十二指肠液检查引流液检查适于粪便检查寄生虫阴性时使用；肠检胶囊法适于蓝氏贾第鞭毛虫。 （6）脑脊液检查：适于弓形虫、溶组织阿米巴大滋养体和肺吸虫卵等检查。 （7）浆膜腔积液检查：适于检查弓形虫、微丝蚴等。 5.活组织检查 （1）皮肤及皮下结节活检：适于检查利什曼原虫、蠕虫、疥螨和蠕形螨； （2）肌肉活检：适于检查旋毛虫幼虫、猪囊虫、卫氏并殖吸虫成虫等其他蠕虫； （3）淋巴结活检：适于检查利什曼原虫、弓形虫和丝虫成虫；
寄生虫病 ★我国有五大寄生虫病：疟疾、血吸虫病、钩虫病、丝虫病、黑热病 ★人体寄生虫包括：蠕虫（吸虫、绦虫、线虫、棘头虫）、原虫、节肢动物 ★宿主：寄生生活的两种生物中受害的一方。 寄生物：寄生关系的两种生物中受益的一方。 机会致病寄生虫：常宿主体内隐形感染，于宿主免疫功能低下时致病的寄生虫。 ★共栖：一方受益，另一方无益也无害。 互利共生：双方均受益。 寄生：一方受益，另一方受害。 ★寄生虫的生活史是指生长发育过程。 根据是否需要中间宿主分： 不需要中间宿主的直接型（钩虫、蛔虫、鞭虫、土原性蠕虫） 需要中间宿主的间接型（日本血吸虫、并殖吸虫、丝虫） ★寄生虫病的流行特点是：地方性、季节性、自然疫源性。 ★寄生虫病的防治原则：消灭传染源、切断传播途径、保护易感者。 ★非消除性免疫是指机体对某种寄生虫保持低密度，对再感染有一定免疫力。（多数） 消除性免疫是指机体对某种寄生虫既能消除虫体，又能对再感染产生完全抵抗力。（热带利什曼原虫） ★终宿主或成虫宿主：有性繁殖阶段寄生的动物 中间宿主：幼虫期或无性生殖阶段寄生的动物 转续宿主：幼虫寄生而不发育的宿主 保虫宿主或储存宿主：人兽共患寄生虫病中的家畜或野生动物。 人兽共患寄生虫病指：脊椎动物与人之间传播的寄生虫病 ★影响寄生虫病流行的因素：生物、自然、社会因素。 ★蠕虫成虫直接产幼虫的是：丝虫、旋毛虫 ★医学原虫：指寄生于人体的致病与非致病原虫。 ★医学原虫的基本结构：包膜、包质、包核。 ★寄生在细胞内的原虫：疟原虫（红细胞）、杜氏利什曼原虫（巨噬细胞）、 1
刚地弓形虫（有核细胞）、旋毛虫（横纹肌细胞） 不寄生在细胞内的原虫：溶组织内阿米巴 ★疟疾 疟原虫虫媒传播有世代交。 疟原虫主要致病作用：侵袭并破坏红细胞。 疟原虫在人体的繁殖方式：裂体增殖 疟原虫感染后所产生的免疫：带虫免疫 我国较常见的疟原虫：间日疟原虫和恶性疟原虫 传染源：现症患者和带虫者，其外周血有雌、雄配子体。 感染阶段：子孢子 感染途径：经按蚊叮咬感染、经输血感染。 中间宿主：人 终宿主：按蚊 流行主要因素：温度 疟原虫引起复发的发育阶段是：休眠子 疟原虫引起复发是由于：血液中有红内期疟原虫残留 与疟疾发作有关的疟原虫生活史时期是：红内期裂体增殖期 从恶性疟患者外周血中一般只能查见：环状体、配子体 检查：对间日疟患者进行血疫检查的适宜采血时间是发作后数小时至10余小时。 病原学检查方法：厚、薄血涂片 镜检血涂片上的疟原虫时要注意观察：大小滋养体、裂殖体和裂殖子、雌雄配子体、被寄生红细胞的形态。 确诊依据：血涂片查见疟原虫，并定种。 临床表现：周期性寒战 恶性疟初为隔日发热，以后则每天或不规则间歇发作，持续高热20-36小时以上； 间日疟、卵形疟为隔日发热； 三日疟为隔2天发热。 初发或混合两种或以上疟原虫感染、儿童以及进入疫区的初患病 2
寄生虫检验技术习题集 一、总论 （一）名词解释 1、寄生生活 2、寄生虫 3、宿主 4、终宿主 5、中间宿主 6、保虫宿主 7、生活史 8、感染阶段 9、异位寄生 10、带虫免疫 11、伴随免疫 12、土源性蠕虫 13、生物源性蠕虫 （二）填空题 1、人体寄生虫包括__________、__________、__________三大类。 2、蠕虫根据生活史中是否需要中间宿主可分为________蠕虫和_________蠕虫两大类。 3、人体感染蠕虫时，外周血液中_________细胞明显增多。 4、寄生虫病的传染源包括__________、__________、__________。 5、寄生虫病最重要、最危险的传染源是__________。 6、影响寄生虫病流行的因素有_________因素、_________因素和________因素。 7、影响寄生虫病流行的因素中起决定性作用的是__________因素。 8、寄生虫病的综合防治原则有__________、__________、__________。 （三）单项选择题 1、医学蠕虫主要包括 A、线虫、吸虫、鞭毛虫 B、线虫、吸虫、绦虫 C、阿米巴、孢子虫、绦虫 D、吸虫、绦虫、阿米巴 E、线虫、绦虫、孢子虫 2、寄生生活是指 A、两种生物生活在一起，双方都受益 B、两种生物生活在一起，双方都受害 C、两种生物生活在一起，一方受益，一方受害 D、两种生物生活在一起，一方受益，另一方既不受益也不受害
E、两种生物生活在一起，双方既不受益也不受害 3、中间宿主是指寄生虫 A、幼虫阶段或无性生殖期所寄生的宿主 B、成虫阶段或有性生殖期所寄生的宿主 C、成虫阶段或无性生殖期所寄生的宿主 D、幼虫阶段或有性生殖期所寄生的宿主 E、成虫阶段所寄生的脊椎动物 4、寄生虫病流行的基本环节是 A、传染源、中间宿主、传播媒介 B、终宿主、中间宿主、保虫宿主 C、自然因素、社会因素、传播途径 D、传染源、传播途径、易感人群 E、寄生虫的种类、数量、致病性 5、寄生虫病流行特点是 A、卫生习惯不良的人群易发 B、常暴发性流行 C、多由动物传播给人 D、感染途径多样化 E、地方性、季节性 （四）简答题 1、简述寄生虫对宿主的致病作用。 2、列出寄生虫病常见的传播途径。 3、分析影响寄生虫病流行的因素。 二、线虫纲 （一）名词解释 1、异嗜症 2、微丝蚴夜现周期性 3、象皮肿 （二）填空题 1、蛔虫卵包括________卵和________卵。 2、蛔虫对人体的主要危害是蛔虫的________阶段寄生引起的并发症，最常见的并发症是________和________。 3、儿童睡眠时常用手抓肛门周围皮肤痒处，可能因_______________雌虫在肛门周围________活动引起的。 4、蛲虫病的感染方式有________、________和________。 5、钩虫有________和________两种，其中________钩虫成虫形态呈________形，________钩虫成虫形态呈________形。 6、钩虫成虫口囊内有成对的________或________。
动物寄生虫病PCR诊断技术 聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术是一种既敏感又特异的DNA体外扩增方法，它可将一小段目的DNA扩增上百万倍，其扩增效率使得该方法可检测到单个虫体或仅部分虫体的微量DNA。通过设计种、株特异的引物，此法只扩增出种、株特异的PCR产物，具有很高的特异性。而且PCR 技术的操作过程也相对简便快捷，无需对病原进行分离纯化；同时可以克服抗原和抗体持续存在的干扰，直接检测到病原体的DNA，既可用于虫种、株的鉴别，动物寄生虫病的临床诊断，又可用于动物寄生虫病的分子流行病学调查。随着PCR技术的不断完善与发展，它已广泛应用于分子生物学、生物技术、临床医学等各个领域，具有广泛的应用前景。 一、实验目的要求 掌握PCR诊断技术所涉及实验的基本原理，全面熟悉PCR诊断技术的操作过程，其中包括寄生虫DNA 的提取、PCR引物的设计、PCR条件的优化、对目的片断的扩增、琼脂糖凝胶电泳及结果分析、PCR产物的纯化等等。 二、实验仪器和材料 （一）寄生虫基因组DNA的提取及纯化 1.虫体材料。单个虫体。 2.器具。超净工作台、恒温培养箱、TGL-16G高速台式离心机、旋涡振荡器、微量取液器及配套吸头、微量离心管、一次性注射器、微型眼科镊、微型眼科剪刀、玻璃平皿、滴管、有机架等。 3.试剂。 (1) 乙二胺四乙酸（Ethylene diaminetetra acetic acid，EDTA）、十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate，SDS）、三（羟甲基）氨基甲烷-盐酸（Tri (Hydroxymethyl) Aminomethane-HCl，Tris-HCl）、氯化钠、蛋白酶K（25μg/μl）、异丙醇（80%）、双蒸水、灭菌超纯水等。 (2) DNA裂解液：500 mM NaCl 70 μl 、100 mM Tris-HCl（pH 8.0）30 μl、50 mM EDTA（pH 8.0）150 μl、10%SDS 30 μl。 (3) Wizard TM DNA Clean-Up 试剂盒或类似的DNA提取试剂盒。 （二）PCR扩增及琼脂糖电泳 1．材料。提纯的虫体DNA。 2．器具。超净工作台、微型高速台式离心机、微量取液器（2/20/200/1000 μl）、PCR扩增仪、琼脂糖电泳系统、凝胶成像系统、微波炉、4℃/-20℃冰箱、紫外透射仪、微型离心管（200/500/1500 μl）、有机架、一次性手套、透明胶带、量筒（100 ml）、三角瓶（500 ml）等。 3．试剂。 (1) 10×PCR Buffer（无Mg2+）、dNTP（2.5 mM each）、ddH2O 、MgCl2（25 mM）、Primers、Ex Taq 酶（5 U/l）、琼脂糖、EB（10mg/ml）、Tris碱、硼酸（Boric acid）、去离子水、EDTA（0.5 mol/L，pH 8.0）、10×载样缓冲液。 (2) 0.5×TBE缓冲液：准确秤取Tris碱5.4g，硼酸2.75g，充分溶解于800 ml去离子水中，加10ml 0.5 mol/L EDTA（pH8.0），用去离子水定容至1000ml。 （三）PCR扩增产物的纯化 1．材料。PCR扩增产物。 2．器具。TGL-16G高速台式离心机；三用电热恒温水箱；微量取液器（2/20/200/1000 μl）、琼脂糖
寄生虫病常用的免疫学诊断方法 刘凡 @ 2006-04-26 12:53 寄生虫病目前还是危害我国人民身体健康的重要疾病。根据近年的全国调查报告，共发现我国有人体寄生虫56种，主要为肠道寄生虫。其中半数以上为不常见虫种，尚不包括疟疾、黑热病、血吸虫、丝虫以及弓形虫、卡氏肺孢子虫、巴贝西虫和锥虫等重要寄生虫。人均寄生虫感染率高达62.6%。估计全国有7亿多人感染寄生虫，最多的1人同时感染9种寄生虫，特别在农村人口中。因此对寄生虫的检验工作是一项非常重要和基本的技术。对寄生虫的检验不仅要能熟悉各种寄生虫的生活史及它们各个时期的形态特征，而且要求掌握对各种标本的处理技术(如取材、制片、染色、镜检)及必要的免疫学等检验方法。 目前,寄生虫诊断技术主要包括病原检查、免疫学检查和分子生物学检查三个方面。实际应用中免疫学检查比较高效和准确，几乎所有的免疫学方法均可用于寄生虫病的诊断，但是各有各的优缺点，各有各的应有条件，主要而且常用的免疫检验方法有： 1.环卵沉淀试验(COPT)：这是国内外公认的用以诊断血吸虫病的有效血清学方法之一。现在该法已趋向完善，不但提高了它的诊断效果，而且使该法更适合于现场推广应用。虫卵的处理有甲醛处理冰冻干卵抗原；热处理超声干卵抗原等。方法有双面胶纸条法、蜡封片法、塑料管、薄膜抗原片COPT，聚乙烯醇缩甲醛氯仿COPT(PVF-COPT)等，均有实用价值，已经作为基本消灭和消灭血吸虫病地区首先考虑应用的血清免疫学诊断方法。 2.间接红细胞凝集试验：已用于多种寄生虫病的诊断和流行病学调查。可分为间接血凝(IHA)，反向间接血凝(RIHA)，间接血凝抑制试验(IHAI)，反向间接血凝抑制试验(RIHAI)，可以检测抗原或抗体，有较高的敏感性和一定的特异性。单克隆抗体的应用使敏感性和特异性有所提高。 3.酶联免疫吸附试验(ELISA)：目前国外ELISA已广泛应用于寄生虫病免疫学诊断中。许多商品试剂盒已被引入国内，但是价格较高。国内也研制了多种试剂盒，推广应用于各种寄生虫病诊断中。例如：血吸虫病、肺吸虫病、黑热病、包虫病、弓形虫病、隐孢子虫病、卡氏肺孢子虫病、囊虫病、阿米巴病等。除传统的ELISA 外，又发展了K-ELISA、ABC-ELISA、DOT-ELISA、薄膜ELISA等，应用于血吸虫病、肺吸虫病、肝吸虫病等。可测抗体，也可测循环抗原及粪便样品、脓液及其它体液中的抗原。目前存在的问题主要有抗原制备和试验方法尚需进一步标准化和规范化。 4.间接荧光抗体试验(IFAT)：在国外已广泛应用IFAT作为寄生虫病的免疫学诊断方法。国内主要应用该法诊断疟疾、丝虫病、弓形虫病。在血吸虫病、肺吸虫病、华支睾吸虫病、包虫病、阿米巴病等也有应用。IFAT有较高的敏感性、特异性和重现性。但试验结果需要用荧光显微镜观察反应，限制了该法的广泛应用。结果判定需要有经验的人员，有一定的主观性。该法可检测血清中的抗体，也可检测组织内的寄生虫，如利什曼原虫、阿米巴、疟原虫、弓形虫等。
互利共生Mutu alism：两种生物生活在一起双方都获利如白蚁和它肠道中的鞭毛虫。 寄生Parasitism：两种生物生活在一起，其中一方从共同生活中获利；另一方受害。共栖commensalism：两种生物生活在一起，其中一方从共同生活中获利，另一方既不受益，也不受害。 中间宿主intermediate host：寄生虫幼虫或无性阶段寄生的宿主。如华枝睾吸虫幼虫阶段先后寄生在豆螺、召螺和淡水鱼体内，所以豆螺、召螺，淡水鱼为中间宿主。终宿主definitive host：寄生虫成虫或有性阶段寄生的宿主。如血吸虫成虫寄生在人体肠系膜静脉内，人是血吸虫的终宿主。 转续宿主paratenic host：有些蠕虫幼虫进入非正常宿主，虽能存活，但仍保持幼虫阶段，不能发育为成虫，而对正常宿主有感染性，这种非正常宿主为转续宿主。 保虫宿主reservoir host：有些寄生虫既能感染人体，也能感染动物，人和动物均是寄生虫的正常宿主，这些动物在流行病学中起储存和保虫作用，故称保虫宿主。如感染血吸虫的牛和鼠均为血吸虫的保虫宿主。 寄生虫生活史life cycle：寄生虫完成一代的生长、发育、繁殖及宿主转换的整个过程。 感染阶段infective stage：寄生虫在整个生活阶段有多个时期，能进入人体并继续发育的时期。 带虫免疫Premunition：人体疟原虫感染后机体可产生一定的免疫力拮抗同种疟原虫在感染，而同时宿主血液内又有低水平的原虫血症，这种免疫状态称为带虫免疫。 免疫逃避immune evasion：宿主感染疟原虫后，通过尝试体液免疫和细胞免疫应答，抑制疟原虫的发育增殖，但疟原虫也有较强的适应能力可拮抗宿主的免疫杀伤作用，疟原虫具有逃避宿主免疫应答的现象称为免疫逃避。 伴随免疫concomitant immunity：有些寄生虫感染可诱导机体产生抗再攻击的抗体，而最初感染的寄生虫完全不受所产生的抗体的作用，可继续存活，随寄生虫的消灭，此抗体就消失，这种现象叫伴随免疫。 幼虫移行症larva migrans：有些动物体内寄生的蠕虫幼虫侵入非正常宿主(包括人体)内，发育受阻，不能发育为成虫，但可在人体内长期移行，破坏组织，引起疾病。 异嗜症：少数钩虫患者表现喜食生米、生豆、甚至食泥土、碎纸、破布等异常嗜好，此种现象称为“异嗜症”。 带虫者Carrier:人体感染寄生虫后不出现明显的临床症状和体征，但能传播病原体这种感染者称为带虫者。 异位寄生Ectopic parasitism：有些寄生虫在常见的寄生部位以外组织和器官内寄生。 隐性感染suppressive infection:人体感染寄生虫后既没有明显的临床症状,又不易用常规方法检获病原体。
徐州生物工程职业技术学院 《动物寄生虫病》课程标准 （课程代码：03011） 一、适用对象 适用于高职高专动物医学、畜牧兽医、兽医医药、动物防疫与检疫、兽医卫生检验、兽药生产与营销、特种经济养殖等专业及相关专业的三年制大专、五年制高职高专生。 二、课程性质 《动物寄生虫病》是包含一般生物学和兽医学内容的综合学科，是动物医学等专业的必修课，依据我院的办学定位、人才培养模式和生源等特点，本课程为动物医学等专业的专业课程之一，是预防兽医学的重要组成部分，也是一门重要的临床课程，在动物医学等专业目标培养中占有很重要的地位。 随着我国城郊型农业集约化畜禽养殖业蓬勃发展以及爱玩动物的不断增加，动物寄生虫的病防治显得尤为重要。 三、参考学时 施教总学时：54学时，其中理论讲授38学时，课堂实训16学时。 四、学分 3学分 五、课程目标 （一）情感与态度目标 通过多样化的教学形式和教学手段，激发学生的学习兴趣，使学生全面了解和掌握有关畜禽寄生虫病以及人畜共患寄生虫病的病原特征、疾病流行规律、致病机理、诊断方法以及防治措施，为从事相关的管理与技术监督工作、畜牧业养殖生产及专门的兽医师工作奠定基础。 （二）能力目标 培养学生具有分析问题和解决问题的能力，具有独立获取知识和追踪本学科科技发展的能力。既重视基础理论的教学，又要重视基本技能的训练，正确处理传授知识、培养能力和素质教育三者的关系，使培养能力和业务素质贯彻教学的始终。充分利用标本、模型、多媒体等教学手段进行直观教学和电化教学，并充分利用实验室、校内外实训基地进行技能训练，通过实际操作，掌握动物寄生虫病诊断的方法，培养学生的实践动手能力，满足岗位需要，为从事兽医、畜牧兽医工作奠定基础。。 （三）知识目标 通过本课程的教学，使学生熟悉掌握常见寄生虫病的病原体形态特征、病原生活史、疾病流行规律、致病机理、特征性临床症状、诊断技术、治疗和综合防制等方面的知识；同时，使学生了解动物寄生虫病的免疫机理、免疫诊断和免疫预防等的研究进展，了解寄生虫的分类、科学命名、地理分布等，了解我国动物寄生虫病的研究现状和取得的成就等。能够综合运用所学知识和技能，就某一局部地区进行一般的寄生虫病流行病学调查，能对其中主要寄生虫病的流行状况作出比较正确的分析，制订出在原则上比较正确、一般可行的防止措施，并能提出进一步解决问题的途径。 六、设计思路 本课程的总体设计思路是按照以职业岗位为课程目标、以职业标准为课程指导，以职业技能为课程内容，以最新技术为课程视野，以培养学生的职业技能为课程核心，以“双师型”教师为课程主导设计教学内容体系。在课程的建设和教学过程中，采用过程评价和效果评价相结合的方式，培养学生对动物寄生虫病的防制能力和考察学生对动物寄生虫病相关理论知识的掌握程度。 七、内容纲要 （一）理论教学标准 动物寄生虫病学包括总论和各论两个部分，总论部分阐述动物寄生虫学的基本知识、动物寄生虫病的流行病学和免疫、动物寄生虫病的诊断及防治的基本原则。各论按寄生虫的分类系统编排，包括动物蠕虫病学、动物蜘蛛昆虫病学、动物原虫病学等三个方面。在每个疾病中又分为通性、人畜共患寄生虫病和其它寄生虫病三个方面。大纲中所列疾病均为常发多见的动物寄生虫病。 第一章总论（8学时） 学习目的与要求 1、掌握寄生生活的概念、寄生虫及宿主的类型、相互关系以及寄生虫的分类原则。 2、掌握寄生虫病发生的条件和流行特点，基本掌握寄生虫病免疫的基本理论及其应用。 3、掌握寄生虫病诊断方法，对动物及其产品进行疫病检查，防止寄生虫病的发生和传播；掌握寄生虫病防制的基本原则，对动物寄生虫病进行预防、控制。 课程教学内容要点 第一节寄生虫与宿主 1、主要内容 ⑴寄生现象 ⑵寄生虫与宿主的类型
1 寄生虫 人体寄生虫学：又称医学寄生虫学，是研究与人体健康有关的寄生虫的形态结构、生活活动、生存繁殖规律，阐明寄生虫与人体和外界环境相互关系的一门科学。人体寄生虫学的内容包括医学原虫、医学蠕虫和医学节肢动物三部分。 热带五大寄生虫病：疟疾、血吸虫病、丝虫病、利什曼病（黑热病）、锥虫病。我国五大寄生虫病：疟疾、血吸虫病、丝虫病、钩虫病、利什曼病（黑热病）。 肠道寄生虫：蛔虫、钩虫、蓝氏贾第鞭毛虫、阿米巴。 共生：两种不同的生物共同生活的现象。共生现象分为共栖、互利共生和寄生。 共栖：两种不同的生物共同生活，其中一方受益，另一方既不受益也不受害的关系。 互利共生：两种生物共同生活，双方互相依靠，彼此受益的关系。 寄生：两种生物共同生活，其中一方受益，另一方受害，受害者提供营养物质和居住场所给受益者的关系。受益者称为寄生物，受害者称为宿主。 寄生虫的生活史：寄生虫完成一代生长、发育和繁殖的整个过程。 机会致病性寄生虫：有些寄生虫在宿主免疫功能正常时处于隐性感染状态，当宿主免疫功能低下时，虫体大量繁殖、致病力增强，导致宿主出现临床症状的一类寄生虫。 终宿主：指寄生虫成虫或有性生殖阶段所寄生的宿主。
2 中间宿主：指寄生虫的幼虫或无性生殖阶段所寄生的宿主。 保虫宿主：亦称储存宿主，指某些寄生虫既可寄生于人，又可寄生于某些脊椎动物。 转续宿主：某些寄生虫的幼虫侵入非适宜宿主后不能发育为成虫，但能存活并长期维持幼虫状态。在此期间，可导致幼虫移行症。 寄生虫的分类：医学原虫（叶足虫、鞭毛虫、孢子虫、纤毛虫），医学蠕虫（吸虫、绦虫、线虫、棘头虫），医学节肢动物（昆虫、蛛形）。 虫对宿主的损害：掠夺营养、机械性损伤、毒性与免疫损伤。 带虫者：人体感染寄生虫后并不出现明显的临床症状和体征，这些人称带虫者。 阴性感染：指人体感染寄生虫后，既没有明显的临床表现，又不易用常规方法检获病原体的一种寄生现象。 免疫应答：指宿主对特异的寄生虫抗原产生的免疫反应过程。 原虫：单细胞真核动物，个体微小，结构简单，但具有能独立完成全部生命活动的完整的生理功能。 原虫篇 运动细胞器为原虫分类重要标志。 溶组织内阿米巴 运动器：伪足。繁殖：二分裂法。 溶组织内阿米巴成熟内有4核，结肠内阿米巴成熟内含8核。 肠阿米巴多发于盲肠或阑尾，典型的病变是口小底大的烧瓶样溃烂。 病原学检查：生理盐水涂片法、碘液涂片法、体外培养、核酸诊断。
《动物寄生虫病学》复习题 （一）名词解释 1、中间宿主：寄生虫的幼虫或无性生殖阶段所寄生的宿主。 2、二宿主蜱：蜱的幼虫及若虫在一个宿主体上吸血，而成蜱在另一个宿主体上吸血，饱血后落地产卵。 3、多宿主寄生虫：有些寄生虫能寄生于许多种宿主，我们称这些寄生虫为多宿主寄生虫，称这些宿主为非专性宿主。 4、免疫逃避：寄生虫能在具有免疫力的宿主体内生存，甚至可以繁殖，不为宿主所消灭的现象。 5、机械性传播：昆虫本身是病原发育、传播所不必需的，仅在其体表暂时存活。如虻传播伊氏锥虫。 （二）填空题 1、片形吸虫病的病原包括肝片吸虫、大片吸虫，动物生前的病原学诊断方法为循序沉淀法。 2、日本血吸虫的感染性阶段为尾蚴，该虫体寄生于人畜的肝门静脉和肠系膜静脉，其中间宿主为钉螺。 3、脑多头蚴寄生于牛、羊的脑和脊髓，其成虫名称是多头多头绦虫，该绦虫寄生的终末宿主是犬等肉食动物。 4、扩展莫尼茨绦虫寄生于羊的肠道；中间宿主是地螨；治疗动物扩展莫尼茨绦虫病时可选用丙硫咪唑（吡喹酮或甲苯咪唑）等药物。 5、疥螨寄生于人和多种动物的皮肤表皮层，痒螨寄生于动物的皮肤表面，蠕形螨寄生于动物的毛囊和皮脂腺。 6、棘钩瑞利绦虫的中间宿主是，终末宿主是，治疗棘钩瑞利绦虫病可选用等药物。 7、双芽巴贝斯虫寄生于牛的红细胞，传播媒介是微小牛蜱，治疗牛双芽巴贝斯虫病时可选用三氮脒等药物。 （三）单项选择题 1、前殖吸虫的第二中间宿主是（B ） A.蚂蚁 B.蜻蜓 C.草螽 D.淡水鱼
2、泡状带绦虫的中间宿主是（A ） A.猪 B.剑水蚤 C.甲螨 D.兔 3、羊仰口线虫寄生于羊的（C ） A.真胃 B.瘤胃 C.小肠 D.盲肠 4、毛首线虫的感染途径是（B ） A.经皮肤感染 B.经口感染 C.胎盘传播 D.接触传播 5. 环形泰勒虫寄生于牛的（B ） A．肝脏B．有核细胞和红细胞C．心脏D．肺脏 6、牛皮蝇蛆的宿主是（B ） A.猪 B.牛 C.羊 D.鸡 7. 细颈囊尾蚴寄生于猪的（B ） A. 小肠 B. 腹腔 C. 脑 D. 肌肉 8 引起鸡盲肠肝炎的病原体是( C ) A．住白细胞虫B．鸡盲肠球虫C．组织滴虫D．异刺线虫 9. 下列不属于内寄生虫的是（A ） A．微小牛蜱B．猪带绦虫C．姜片吸虫D．钩虫 10. 疥螨的主要传播途径是（D ） A．经皮肤感染B．经口感染C．自体感染D．接触感染 四、多项选择题 1. 下列寄生虫病中，可选用丙硫咪唑治疗的有（AC ） A．鸡蛔虫病B．弓形虫病C．肝片吸虫病D．鸡球虫病 2. 姜片吸虫在中间宿主体内要经过以下几个发育阶段( ABCD) A.胞蚴 B . 尾蚴 C.囊蚴 D.雷蚴 3. 寄生在犬小肠内的寄生虫有( AC ) A.犬蛔虫 B.犊新蛔虫 C.犬钩虫 D.犬恶丝虫 4. 寄生在牛、羊肝脏胆管的吸虫有( AC ) A.肝片吸虫 B.前后盘吸虫 C.双腔吸虫 D.阔盘吸虫 5. 属于鸡球虫病病原的有（ACD ） Ａ.堆形艾美耳球虫 B.斯氏艾美耳球虫 C. 柔嫩艾美耳球虫 D. 毒害艾美耳球虫（五）判断题，正确的打“√”，错误的打“×”。
总论部分（包括一部分综合性试题） 1.为我国五大寄生虫病之一的原虫是： A丝虫B蛲虫Cxxxx虫D疟原虫E包虫 2.下列哪项不属于我国五大寄生虫病： A血吸虫病B钩虫病C蛲虫病D疟疾E黑热病 3.人体寄生虫学的研究内容包括三大类： A吸虫、绦虫、线虫B绦虫、节肢动物、原虫C蠕虫、原虫、节肢动物D吸虫、原虫、节肢动物E线虫、节肢动物、原虫 4．寄生关系是指两种生物生活在一起，其中： A一方受害，一方受益B一方受益，另一方无害C双方都受益 D双方都受害E双方既无害也无利 5.诊断人体寄生虫最常用的方法是： A病原学检查B血清学检查C问病史D PCR,DNA检测E免疫学检测 6.人体寄生虫虫病的传染源包括： A仅有病人和带虫者B医学节肢动物C所有野生动物D所有家畜E病人、带虫者、感染的动物 7．人体感染寄生虫后产生的特异性免疫应答类型，最常见的是： A细胞免疫B体液免疫C消除性免疫D非消除性免疫E缺少有效的获得性免疫 8.下列哪项全是机会致病寄生虫： A蛔虫、蛲虫、钩虫B钩虫、日本血吸虫、阴道毛滴虫
C牛带绦虫、微小膜壳绦虫、蓝氏贾第鞭毛虫D弓形虫、卡氏肺孢子虫 E丝虫、xx利什曼原虫、疟原虫 9.可以引起肝脏病变的寄生虫有： A华支睾吸虫B血吸虫C包虫D溶组织内阿米巴E以上都可以 10.下列需要同肝癌进行鉴别的寄生虫病是哪一种： A包虫病B华支睾吸虫引起的肝脏损害C泡球蚴病D黑热病引起的肝肿大、肝硬化E疟疾引起的肝肿大、肝硬化 11.引起脾肿大的寄生虫有： A日本血吸虫、钩虫、杜氏利什曼原虫B杜氏利什曼原虫、溶组织内阿米巴C溶组织内阿米巴、日本血吸虫、疟原虫D间日疟、杜氏利什曼原虫、日本血吸虫E钩虫、疟原虫、杜氏利什曼原虫 12.生活史中可以不需要中间宿主的是： A微小膜壳绦虫B牛带绦虫C细粒棘球蚴D疟原虫E丝虫 13.下列与吃肉类食物无关的寄生虫病是： A包虫病B猪带绦虫病C牛带绦虫病D肝吸虫病E以上都不是 14．下列描述，正确的是： A两种生物生活在一起，一方获益，另一方既不受益也不受害称为共生。 B寄生虫生活是中具有感染人体能力的发育阶段称为致病阶段。 C寄生虫的生活史可以分为直接性和土源性两种。 D人感染寄生虫后最常见的免疫类型为消除性免疫。 E防治寄生虫病可以从控制传染源、切断传播途径和保护易感人群三个方面入手。
《动物寄生虫病学》课程（含实验内容）教学大纲 一、课程基本信息 课程编码：09281093 课程名称：动物寄生虫病学 英文名称：Veterinary Parasitology 开课学期：8 学时/学分：80/4 （其中实验学时：20） 课程类型：专业教育必修课 开课专业：动物医学专业 选用教材：张西臣李建华主编,动物寄生虫病学,科学出版社（第三版）,2010.01。 主要参考书： 1. 汪明主编,兽医寄生虫学（第三版，面向21世纪课程教材），中国农业出版社，2007.03 2. 孔繁瑶主编，家畜寄生虫学（第二版），中国农业大学出版社,1997.09。 3. 杨光友主编，动物寄生虫病学，四川科学技术出版社,2005.01 4. 李国清主编，兽医寄生虫学（双语版），中国农业大学出版社，2006.02 5. Edited by Richard J. Martin, Henk D. F. H. Schallig, Veterinary Parasitology , General editor L. H. Chappell ，Cambridge University Press,2000 执笔人：张西臣 二、课程性质、目的与任务 课程性质：动物寄生虫病学是动物医学专业的专业课，其与家畜传染病学、内科学、外科学、产科学等课程共同组成动物医学专业的专业课程。 课程目的：通过本课程学习使学生掌握和了解动物寄生虫病学的基本知识和理论，同时结合教学实践培养学生独立思考、独立工作的能力和严谨的科学作风。 课程任务：通过本门课程的学习使学生全面了解和掌握有关畜、禽的寄生虫病及重要人兽共患寄生虫病的病原特征、流行规律、致病机理、临床症状、剖检变化、诊断方法及防制措施等，为从事兽医临床工作、畜牧养殖业生产与管理及肉品卫生检验与技术监督等工作奠定基础。 三、教学基本要求 1. 掌握寄生虫与宿主及其类型、寄生虫对宿主的致病特点、寄生虫病的流行规律、免疫特点以及寄生虫病的诊断技术和综合防制措施。 2. 掌握重要寄生虫病的病原特征、传播规律、致病机理、临床症状、剖检变化、诊断方法和治疗、预防措施。
人体寄生虫病诊断研究进展 当前寄生虫学正处于一个从传统寄生虫学向现代寄生虫学过渡的知识更新时期，寄生虫的基因组学，生物信息学，抗寄生虫新药，疫苗和诊断技术及新的有发展前景的媒介防治技术是寄生虫学的主要研究内容。这里，我想就我国流行最为严重的五大寄生虫病的诊断现状进行讨论，归纳总结了目前研究人员对这五种寄生虫病诊断所取得的进展，以及一些临床检测技术，由于一些诊断方法正处于研究中，因此尚未广泛应用于临床检查中，但相信随着技术的进步，这些方法终将成熟适用。 我国寄生虫病的现状及诊断 寄生虫种类繁多，据记载，可以感染人体的寄生虫在我国有229种，其中线虫35种，吸虫47种，绦虫16种，原虫41种。血吸虫病、疟疾、幼虫病、黑热病和钩虫病列为重点防治的“五大寄生虫病”。根据2001年6月～2004年底在全国31个省、自治区、直辖市组织开展了人体重要寄生虫病现状的调查，结果显示，钩虫、蛔虫、鞭虫等土源性线虫感染率明显降低，感染人数显著减少；食源性寄生虫的感染率在部分省（区、市）明显上升；包虫病和黑热病在西部地区流行仍较严重。全国31个省(区、市)共检查356629人，查出感染于人体的蠕虫26种。蠕虫总感染率为21.74%，其中土源性线虫感染率为19.56%(钩虫6.12%;蛔虫12.72%;鞭虫4.63%)，带绦虫感染率为0.28%，流行区华支睾吸虫感染率为2.40%。2005年公布的全国第二次寄生虫病调查结果与1990年第一次调查结果相比，蛔虫、钩虫、鞭虫等土源性线虫感染率下降了63.65%，推算感染人数比1990年减少了4.07亿人。 寄生虫病的诊断主要依赖以下几种方式，病原学诊断技术，免疫学诊断技术，分子生物学诊断技术，临床表现，及其他检测。 一、病原学诊断技术：1）粪便检查：a:直接涂片法 b:厚涂片透明法 c:浓聚法 d:毛蚴孵化法 e:肛门拭子法 f:钩蚴培养法 g:定量透明法 h:淘虫检测法 i:带绦虫孕节检查法 2) 血液检查：a:检查疟原虫 b:检查微丝蚴 3）排泄物与分泌物的检查: a:痰液 b:十二指肠液和胆汁 c:尿液 d:鞘膜积液 e:阴道分泌物 4）其他器官组织检查：a:骨髓穿刺 b:淋巴结穿刺 c:肌组织活检 d:皮肤及皮下组织活检 e:直肠粘膜活检 二、免疫学诊断技术：1）一般免疫学诊断技术：a:皮内试验e:对流免疫电泳法
我国寄生虫病流行特点： 1. 钩虫、蛔虫、鞭虫等土源性线虫感染率明显降低，感染人数显著减少 2、食源性线虫的感染率在部分省区明显上升 寄生虫的类型 专性寄生虫 一生或一生中的某个阶段必须营寄生活，如蛔虫。 兼性寄生虫 既能自生,又能寄生，如粪类圆线虫。 偶然寄生虫 偶然侵入非正常宿主，如犬钩虫。 机会致病寄生虫如肺孢子虫。 宿主的类型（宿主是指被寄生虫寄生的人或动物。） (1)中间宿主（Intermediate host）：指寄生虫的幼虫期或无性生殖期所寄生的宿主。有些寄生虫有一个以上的中间宿主，则依其寄生的顺序分别称为第一、第二中间宿主。 (2)终宿主（Definitive host）：指寄生虫成虫期或有性生殖期所寄生的宿主。 (3)保虫宿主（Reservoir host）：又称储蓄宿主。某些寄生虫除寄生于人体外，还可寄生于某些脊椎动物，这些脊椎动物是人体寄生虫病的主要传染源，在流行病学上，这些动物称为保虫宿主。 (4)转续宿主（Paratenic或Transport host）：是幼虫所寄生的非正常宿主；某些寄生虫的幼虫侵入非正常宿主后，不能发育为成虫，长期保持幼虫状态，当此幼虫期有机会再进入正常宿主后，才可继续发育为成虫，这种非正常宿主称为转续宿主。 宿主的特点： （1）特异性一种寄生虫只能与某种或某些宿主建立寄生关系，这称宿主特异性 （2）宿主转换与世代交替寄生虫的生活史，除一部分寄生原虫以二分裂方式增殖传代外，大多有宿主转换和／或世代交替（有性与无性）。大多数寄生虫完成生活史需要转换宿主和世代交替。 寄生环境 寄生虫可在脊椎和无脊推动物的各种系统、器官和组织寄生，具体寄生部位因虫种而异。人体寄生虫的寄生部位可粗分为血内（包括淋巴管内），细胞内，组织内和呼吸道、胃肠管及其他管腔内。 在宿主体内、有的寄生虫的寄生部位比较专一，有的则可在多种器官或组织中寄主。这种现象是在演化过程中，寄生虫与宿主之间长期相互适应的结果。 寄生虫的代谢 寄生虫的代谢可简分为能量代谢和合成代谢。 能量的来源主要为糖，其代谢大概分为同乳酸酵和固定二氧化碳两种类型。前者见于血液和组织寄生虫，后者见于肠道寄生虫。 固定二氧化碳是在糖酵解到磷酸烯醇丙酮酸（PEP）时进行的这个过程与通常的三羧酸循环相比较是个逆过程（正常过程是琥珀酸→延胡索酸→苹果酸→草酰乙酸）。 寄生虫的生活史（寄生虫的生活史是指寄生虫完成一代的生长、发育和繁殖的全过程） 生活史类型包括： 直接型：完成生活史不需要中间宿主，虫卵或幼虫在外界发育到感染期后直接感染人。如蛔虫。 间接型：完成生活史需要中间宿主，幼虫在其体内发育到感染期后经中间宿主感染人。如血吸虫。
保虫宿主（reserboir host）:有些寄生虫即可寄生于人也可寄生于脊椎动物，脊椎动物体内的寄生虫在一定条件下可传给人，从流行病学角度上看，这些动物称保虫宿主。（例子：日本血吸虫的保虫宿主为牛、羊、鼠）。幼虫移行症（larva migrans）一些蠕虫侵入非正常宿主人后，不能发育为成虫，长期以幼虫状态存在，在皮下，组织，器官间窜扰，造成的局部或全身病变；分为内脏幼虫移行症和皮肤幼虫移行症；其共同特征是嗜酸性粒细胞增多，血中丙球蛋白及IgE水平升高。变态（metamorphosis）：昆虫从幼虫到成虫性成熟的过程中发生的外部形态、内部结构、生理功能到生态习性、行为的一系列变化。全变态(complete metamorphosis)：昆虫在个体发育中,经过卵、幼虫、蛹和成虫等4个时期地叫完全变态。不完全变态(Hemimetabolism)：昆虫发育过程不需要经历蛹期。世代交替（alternation of generation）：需要有性生殖与无性生殖交替进行才能完成生活史的现象。中间宿主 ．．．． （intermediate host）：指寄生虫的幼虫或无性生殖阶段所寄生的宿主。保虫宿主 ．．．．（reservoir host）亦称储存宿主，指某些寄生虫既可寄生于人，也可寄生于脊椎动物，后者在一定条件下可将体内的寄生虫传播给人。在流行病学上将这些脊椎动物称之为储存宿主 或保虫宿主。转续宿主（ ．．．．． paratenic host ）有些寄生虫幼虫侵入非适宜宿主后不能发育成虫，但能存活并长期维持幼虫状态，只有当该幼虫有机会进入其适宜宿主体内时，才能发育 为成虫。这种非适宜的宿主称为～。机会致病寄生虫 ．．．．．．．(opportunistic parasite)：某些寄生虫在宿主免疫功能正常时处于隐性感染状态，当宿主免疫功能低下时，虫体出现异常繁殖、致病力增强，导致宿主出现临床症状，称之。如弓形虫、微小隐孢子虫。共栖 ( commensalism )：两种不同的生物共同生活，其中一方受益，另一方既不受益，也不受害，此种现象称为共栖。鮣鱼与鲨鱼，海葵与寄居蟹。互利共生( mutualism ) ：两种生 物共同生活，双方互相依靠，彼此受益，称为互利共生。河马与小鸟。寄生 ．．(parasitism)：两种生物共同生活，其中一方受益，另一方受害，受害者提供营养和居住场所给受益者，这种关系称为寄生。受益者称为寄生物(parasite)，受害者称为宿主(host)。。机会致病性寄生虫：某些寄生虫在健康的人体内寄生时，通常不表现明显致病性，但当人体免疫功能低下或缺陷时，则可出现异常增殖且致病力明显增强，引起人体急性感染或严重发作，甚至死亡。这类寄生虫称为机会致病性寄生虫。 寄生虫生活史 ．．．．．．：是指寄生虫完成一代的生长、发育与繁殖的整个过程。包括寄生虫侵入宿主的途径、虫体在宿主体内移行、定居及离开宿主的方式，以及发育过程中所需的宿主种类（包括传播媒介）和内外环境条件等。 我国五大寄生虫病：血吸虫病、疟疾、丝虫病、钩虫病、黑热病。 寄生虫对宿主的损害：1、掠夺营养2、机械性损伤3、毒性与免疫损伤。 宿主对寄生虫的抵抗：1、全部清除寄生虫，并具有抵御再感染能力。2、部分清除寄生虫，并具有部分抵御再感染能力。3、不能有效控制寄生虫，寄生虫发育并大量繁殖。导致寄生虫病。 寄生虫感染 ．．．．．(．parasitic infection)：寄生虫侵入人体并能生活或长或短一段时间，若不引起明显的临床表现，这种现象称为寄生虫感染。有明显临床表现的寄生虫感染则称为寄生虫病。 感染阶段(infection stage)：寄生虫生活史中能使人体感染的阶段，又称感染期。 异位寄生 ．．．．(ectopic parasitism)：有些寄生虫在常见寄生部位以外的器官、组织内寄生,这种寄生现象称为异位寄生。 人兽共患寄生虫病(parasitic zoonoses)：有些人体寄生虫病可以在人与动物之间自然的传播，这些寄生虫病称之。人兽共患寄生虫病主要有黑热病、弓形虫病、血吸虫病、肺吸虫病、肝吸虫病、姜片虫病、囊虫病、包虫病、曼氏迭宫绦虫裂头蚴病、旋毛虫病和广州管圆线虫等。 自然疫源性：不需要人的参与而存在于自然界的人兽共患寄生虫病具有明显的自然疫源性。伴随免疫（concomitant immunity）：宿主感染蠕虫后对再感染产生不同程度的抵抗力，这种免疫力能作用于再次感染的幼虫或童虫，而对初次感染的成虫无杀伤作用，这种不完全非消除性免疫称伴随免疫，如血吸虫。 终宿主（definitive host）:成虫或有性生殖阶段所寄生的宿主。