碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）神经再生
1975年Gospodarowicz首先报道运用理化方法从牛的大脑和垂体中分离纯化出碱性成纤维细胞生长因子（Basic Fibroblast Growth Factor，bFGF）。80年代，bFGF的氨基酸序列得到澄清。90年代，国内外相继运用基因工程方法成功获得重组bFGF，有力推动了关于bFGF的研究。系列研究证实，bFGF能刺激和调节血管内皮细胞、上皮细胞、成肌细胞、成骨细胞和神经胶质细胞等多种起源于中胚层、神经外胚层的细胞分化增殖，在胚胎发育、组织愈合中起重要作用。神经方面，关于bFGF的研究集中在中枢神经，发现其神经活性广泛，能保护神经元，促进突起增生，提示在周围神经再生方面的研究意义。现参考近年来bFGF与神经再生的相关文献作一综述。
一、内源性bFGF正常情况下的表达和神经损伤后的变化
(一)中枢神经：正常情况下，内源性bFGF以微量分布于脑、垂体和下丘脑等器官，已证实星形胶质细胞、垂体滤泡及部分神经细胞能分泌bFGF，在海马皮质、中脑、纹状体和小脑颗粒细胞均有其受体。神经损伤后，早期就能观察到内源性bFGF表达增多，是神经损伤后早期反应之一。
叶诸榕用原代培养的大鼠大脑星形胶质细胞作成机械损伤模型，观察发现bFGF在损伤后2小时开始表达，12小时达高峰，2天后开始回落，星形胶质细胞胞体肥大，突起粗大。崔建忠运用Northern杂交、组织学方法动态观察大鼠颅脑弥漫性损伤后bFGF的基因表达和组织学改变，结果发现轻度损伤后12小时，重度损伤后4小时，bFGF基因表达增加，均于第3天达到高峰。Grothe〔1〕研究脊髓神经节bFGF及其Ⅰ型受体（FGFR-1)的表达时发现，正常情况下，bFGF和FGFR-1的mRNA在脊神经节均有表达，原位杂交显示星形胶质细胞产生bFGF，而感觉神经元表达FGFR-1，提示旁分泌作用；坐骨神经损伤后，L4～6感觉神经元bFGF的表达在1天内即上调，7天达高峰，28天后恢复，FGFR-1的变化则不明显。
(二)周围神经：Grothe〔1〕和Meisinger〔2〕1997年报道了bFGF及其受体在周围神经的表达和损伤后变化的研究结果，而此前该领域未见报道。该研究发现，正常情况下，大鼠坐骨神经FGFR-1 mRNA表达高于bFGF mRNA。坐骨神经损伤后，FGFR-1和bFGF的mRNA 在损伤远、近端均于不同的时相点上调，并有时间依赖性；bFGF的表达具有自身正反馈特点，且不影响FGFR-1。这一实验说明，与在中枢神经一致，内源性bFGF表达增多同样是外周神经损伤后的早期反应。
神经损伤后bFGF表达上调的意义是什么?不少学者将bFGF运用于神经细胞培养和神经损伤模型，发现bFGF具有广泛的促神经再生作用，提示bFGF表达增多是神经损伤后的修复反应，且可能具有始动意义。
二、外源性bFGF促进神经再生
(一)中枢神经
(1)离体试验：端礼荣在原代培养的大鼠胚胎中脑神经细胞中加入bFGF，观察发现细胞微团集落形成率明显增加，不同剂量的bFGF表现量效关系，图像分析见神经细胞突起增多，连接丰富呈网状。Miyagawa运用bFGF于原代培养的海马神经元轴突损伤模型，观察发现实验组较对照组轴突增生、突起增多。Himmelseher〔3〕进一步研究了不同浓度的bFGF对如上模型的作用，结果未用bFGF的对照组神经元存活65%，运用不同剂量bFGF的试验组神经元变性均减少，10 mg／L组存活神经元达85%，神经突起亦增多、增长。
由上述试验可见，bFGF能促进培养的神经细胞增生，神经细胞损伤后运用bFGF，变性死亡减少，神经突起增生，说明bFGF在体外具有促进、保护神经细胞的作用。Malgrane 〔4〕研究大鼠背根神经节神经元对神经毒性药物的反应时发现：bFGF不但能刺激轴突再
生，而且提前24小时运用可以显著减少神经毒性物质的作用，这从另一个角度说明了bFGF 对神经细胞的保护、维持作用。
(2)在体实验：bFGF保护中枢神经细胞、促进突起增长的效应在体内亦得到证实。汪春风运用bFGF治疗成年大鼠大脑皮质损伤模型，于损伤术中和术后分次给予bFGF，术后40天取材作体视学分析，结果实验组存活神经元显著多于对照组。Miyamoto〔5〕分别运用bFGF、神经生长因子（Nerve Growth Factor，NGF）于大鼠大脑单侧伞穹窿部切断模型，发现bFGF和NGF均能刺激海马乙酰胆碱酯酶阳性纤维生长，NGF组仅为细纤维而bFGF组粗、细纤维均有。
Nakahara〔6〕将经基因修饰后可分泌bFGF的成纤维细胞移植于大鼠脊髓损伤模型中央灰质处，发现2周至6月后，背侧区的感觉神经、去甲肾上腺素能神经均有纤维长入移植细胞，提示bFGF具有诱神经活性。
(二)周围神经：bFGF及其受体在周围神经的表达尚不清楚，Aebischer、Laquerriere即已尝试运用填充bFGF的小管套接坐骨神经缺损，术后4周行组织学、电生理检查，发现实验组有神经纤维生长，而对照组没有。虽然有神经纤维生长并不就说明神经成功再生，但已提示了bFGF直接或间接促进轴突生长的可能。故bFGF的作用效能、分子生物学作用机制，值得深入研究。
雪旺细胞（Schwann s cell，SC）分裂增殖是周围神经再生的重要环节，增殖的SC 吞噬变性产物，形成索带引导再生轴突长向远侧，并分泌多种神经营养、趋化因子，使轴突迅速、准确生长。体外培养的SC移植到神经再生室中能促进神经生长已为试验证实。在培养SC的工作中，Rater、Dong、龚炎培均发现bFGF能促进SC分裂增殖，龚氏运用流式细胞计观察FGF、NGF、纤连蛋白和神经再生条件液对SC体外细胞动力学的影响，发现8天后FGF组SC增殖最显著，达8倍以上，而NGF对SC分裂增殖不起作用。虽然SC超常增殖的意义学者们尚无定论，但对SC增殖期已过的陈旧性神经损伤，促进SC增殖对神经再生很可能有重要意义。因此，应进一步验证bFGF能否促进在体SC增殖及增殖后的继发效应。
血管发生对神经损伤后创口愈合、神经再生的意义重大，然其初始介质仍未完全阐明。Baffour〔7〕在兔下肢急性缺血模型运用bFGF，发现治疗组肌肉活力、肌内血氧含量、每平方毫米毛细血管数和每肌纤维毛细血管数均明显高于对照组。提示bFGF能促进微循环重建。Nissen〔8〕收集术后创口内液体分析发现，血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）浓度术毕无变化，后7天逐渐升高，而bFGF 浓度术毕即升达高峰，3天后降至血浆浓度；各时相点创室内液均对内皮细胞有趋化性，能引发神经、血管反应，术毕采取的创室内液，经VEGF的抗体中和后仍具趋化性和促血管发生能力，术后3至6天采取的创室内液，经VEGF的抗体中和后趋化性和促血管发生能力显著降低。提示bFGF是血管发生的始动介质，VEGF则起着继发而持续的作用。Seghzzi 研究小鼠角膜血管发生时，发现形成毛细血管的内皮细胞表达VEGF mRNA和蛋白，外源性bFGF或上调内源性bFGF能增加VEGF的表达。说明VEGF的表达受bFGF调控，运用bFGF能促进血管发生，改善血供。而血供的改善显然有利于创口愈合和神经再生。
综上所述，bFGF促进神经再生的作用是多方面的：(1)保护神经元；(2)促进轴突再生；
(3)促进SC增殖；(4)促进血管发生，改善血供微循环等。借助分子生物学、免疫学等的新技术，各方面的研究还在不断深入。但另一方面，强调神经营养性之外，神经支配的效应器应如何减缓退变?有关效应器营养性的研究仍不多见，值得注意，因为效应器不可逆性退变，同为神经损伤、尤其陈旧性损伤修复困难的主要障碍。
三、bFGF与周围神经再生
近10余年来，新兴的、跨学科的神经生物学发展迅速，对周围神经再生的研究从细胞、
亚细胞发展到分子水平，提出了一些新的概念和理论。认为神经不同于一般组织，神经细胞胞体位于中枢，而轴突延伸很长，组成周围神经，神经损伤的性质是细胞损伤。损伤后不仅轴突断裂，还引起近端神经元坏死，远段神经变性，失神经支配的感觉、运动效应器退变萎缩，因此神经损伤不仅是损伤局部一个水平有病变，还包括神经元、效应器，是三个水平的病变，只注重损伤局部的处理是片面的。成功的神经再生要求：(1)保护近端神经元；(2)再生轴突快速、准确长向远段；(3)效应器未发生不可逆性退变；(4)再生轴突与效应器形成功能性突触。SC、基底膜和神经营养因子（Neurotrophic Factor，NTF）是发挥以上作用的物质要素。NTF是指能保护神经元，和／或促进轴突再生的物质，已提出NGF、睫状神经节营养因子(CNTF)、脑源性营养因子(BDNF)、bFGF等20余种。至今，NGF由于：(1)体内有特异受体；(2)体内外作用均有效；(3)制备的抗体能阻断活性，唯一得到证实，而bFGF 及其受体在周围神经的表达及损伤后变化的研究正在开展，其在体运用的效能、抗体阻断的实验亦待进行，所以是一种潜在的、未完全证实的NTF，但在试验中已经展现了较NGF促神经再生活性广泛的特点，除与NGF一样能保护神经元、促进轴突生长外，还能刺激SC 增殖，促进毛细血管形成改善损伤神经及周围组织的血供，因而又是很有潜力的，预计随着以上两方面研究的进展，bFGF作为一种NTF的性质将很快澄清，为神经损伤患者带来新的希望。
bFGF
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早在1940年，Hoftman等在脑和垂体的抽提物中发现一种能够促进成纤维细胞生长的物质。1974年该物被分离纯化，并命名为成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor， FGF）。接着，人们又分离出一种与之高度同源的物质，由于它含有较多的酸性氨基酸碱基，等电点为酸性（5.6），故命名为酸性FGF（aFGF）。先发现的FGF因对酸和热敏感，等电点呈碱性（9.6），则称为碱性FGF（bFGF）。aFGF和bFGF与后发现的int-2、FGF-5、角质细胞生长因子（KGF／FGF-7）、hst-1／kfgf、FGF-6基因表达产物……共9个成员组成FGF家族〔1，2〕。
目录
八、bFGF的发现获得的殊荣
一、bFGF的一般性质
二、bFGF的分布
三、bFGF的作用机制
四、bFGF的生物学功能
五、bFGF对神经组织的生物学效应
六、存在的问题和临床应用前景
七、bFGF在美容方面的应用
八、bFGF的发现获得的殊荣
展开
简介
随着bFGF的高度纯化（Bohlen，1984）、测序（Esch，1985，Simpson，1987）和DNA克隆成功（Araham，1986，Gospodarowicz，1984）引入肝素-琼脂糖亲和层析提纯bFGF，可得到纯度达90%以上，由此bFGF研究进入了新阶段。现今资料表明，bFGF的生物学作用极其广泛，它在血管形成、促进创伤愈合与组织修复、促进组织再生和神经组织生长发育过程中起着十分重要的作用。现就bFGF的一般性质、分布、对神经组织的作用和机制以及临床应用前景等作一综述，以促进bFGF的开发和临床应用。
编辑本段一、bFGF的一般性质
bFGF是含155个氨基酸的促有丝分裂的阳离子多肽，其氨基酸序的55%和aFGF 相同，分子量为16～18.5 KD。bFGF分子结构中有4个半胱氨基酸，以此形成分子的三维空间结构。由丝氨酸取代半胱氨酸的重组bFGF的生物学活性不变，而单链多肽则易于在大肠杆菌中表达〔3〕。
bFGF基因位于人的第5对染色体上，为单拷贝基因，呈不连续状态，其功能区被两个内含子隔开分为三个外显子区域。bFGF基因长度大于38 kb，第一个内含子位于第60、61位密码间，第二个内含子位于第94、95位密码子之间。bFGFmRNA有4.6 kb和2.2 kb两种形式，有bFGFmRNA反转录的cDNA序列已清楚，在bFGFcDNA 可读框架中可见到一个常见的AUG起始密码、UGA终止密码。在AUG前面有起始密码CUG存在，它可启动氨基末端的延长。bFGF羧基末端较氨
基末端稳定，如果氨基末端截取少于25个氨基酸时并不影响其生物学活性。bFGF 活性比aFGF大30～100倍〔4〕。bFGF在生物进化上具有很强的保守性，各种动物的FGF都有很高的同源性。人和牛bFGF氨基酸顺序同源性达98.7%。
bFGF有很强的肝素亲和力，在其114～123位氨基酸为高亲和力区，其它部位则有低亲和力区。抗bFGF与受体结合的单克隆抗体对其与肝素结合力无影响，取消有羟基端42位氨基酸，肝素亲和力即消失，而且可丧失部分生物学活性。bFGF基因中未发现信号肽顺序，用bFGF的cDNA转染3 T3细胞，能观察到bFGF对单个细胞的趋化作用，且用抗bFGF的mcAb可中和这一活性，说明bFGF可经自分泌方式释放
〔5〕。
编辑本段二、bFGF的分布
主要分布于垂体、脑和神经组织及视网膜、肾上腺、胎盘等〔17〕，尤以垂体含量最高，能纯化大量的bFGF（0.5 mg/kg），其它组织含量很少，约为其1/10～1/50。bFGF不存在或以极低浓度存在于血清和体液中。
bFGF作为细胞分裂原，主要作用在起源于中胚层和神经外胚层的骨骼肌细胞、成纤维细胞和骨细胞等，其受体也相应的分布于上述细胞表面。FGF存在两类受体：一类是亲和力受体，属跨膜性酪氨酸蛋白激酶类受体；另一类是低亲和力受体，即肝素样受体，为硫酸乙酰肝素蛋白多糖类物质〔6〕。它们是一条单链多肽，约110～150 KD，受体数目约2×103～8×104/细胞，受体对bFGF的亲和力KD=18～80 pm。受体至少有4种形式，由细胞外区、跨膜区、胞浆区的近膜区和酪氨酸激酶区组成，由于每种FGF受体均能和FGF家族每个成员结合，而不同FGF受体的表达存在着组织细胞特异性。bFGF与受体亲和力显著大于aFGF。
编辑本段三、bFGF的作用机制
bFGF通过与靶细胞上的受体结合而发生作用，因此细胞内合成的bFGF需分泌至细胞外才能发挥生物学作用。但bFGF的mRNA翻译产物缺少引导它们向细胞外分泌的信号序列，其分泌途径与经典途径不同，除了可能是细胞受损或死亡后释出〔7〕，还有自分泌和旁分泌起作用〔8〕。
bFGF与高亲和力受体结合时需低亲和力受体的参与，提示低亲和力受体的结合使高亲和力受体结合更容易、更牢固〔9〕。bFGF与受体结合后可能通过以下途径将信号传至胞核：（1）激活腺苷酸环化酶与鸟苷酸环化酶，磷脂酶C（PLC-rl）磷酸化，又使磷脂酰肌醇-4，5二磷酸（PIP2）分解为甘油二酯（DG）和三磷酸肌醇（IP3），导致蛋白激酶C激活和Ca2+内流；（2）与受体结合后定位于细胞核，影响RNA聚合酶Ⅰ，加强核蛋白体基因的转录，以加速细胞由G0→G1和→G1→S期的转换，刺激细胞的DNA合成增强，促进细胞的分裂与增殖〔9〕；（3）bFGF与FGFR复合物的内部化。
编辑本段四、bFGF的生物学功能
bFGF的生物学效应分体内和体外两大部分。体外作用十分强烈，成纤维细胞、骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、肾上腺皮质和髓质细胞、神经元和神经胶质细胞等具有很强的促细胞分裂增殖活性〔10〕。体外细胞培养中能在低浓度（1 mg·ml－1）发挥其作用。bFGF是重要的促有丝分裂因子，也是形态发生和分化的诱导因子〔11〕。其主要生物学作用有：（1）作为血管生长因子；（2）促进创伤愈合与组织修复；（3）促进组织再生；（4）参与神经再生等。
编辑本段五、bFGF对神经组织的生物学效应
1.bFGF在神经组织的表达
从多种神经外胚层和中胚层起源的组织(如大脑皮质、下丘脑、垂体和视网膜等)可提取、纯化出bFGF。采用免疫组织化学方法测出神经元胞体、轴突与树突近端bFGF 浓度为40～120 pm*g－1〔12〕。在星形胶质细胞和海马神经元、腰段脊髓神经元、神经胶质细胞及坐骨神经的雪旺氏细胞、郎飞氏结等也发现有bFGF的分布〔13，14〕。在鹌鹑的胚胎期，发现神经管和神经嵴有bFGF表达，后期在脊索和脊索神经节根表达。
中枢神经损伤后，有关bFGF表达情况的研究较多。Finklestine等（1988）发现脑损伤后bFGF明显增加，尤其病灶周围星形胶质细胞最为显著；Salley（1991）报道大脑损伤后3天，患侧皮层、室管膜和海马神经元中bFGF增加；Christine等（1994）诱发成年大鼠癫痫发作时，前脑神经元和胶质中bFGFmRNA显著增多。但在周围神经有关神经损伤后bFGFmRNA的表达，尚未见文献报道。
2.bFGF作为神经营养因子
（1）是神经胶质细胞和雪旺氏细胞的促有丝分裂原。bFGF有刺激神经胶质细胞的非有丝分裂活性，如促进星形胶质细胞的迁移和纤溶酶活剂的释放；调节胶质细胞纤维酸性蛋白（GFAP）的表达及谷氨酸和S-100蛋白的合成；改变星形胶质细胞的典型的细胞进程和细胞膜结构；促进星形胶质细胞的增殖并形成纤维状外形；也可促进少突胶质细胞的增殖，并增加其髓磷脂相关蛋白和类脂的含量。
(2)对体外培养神经元的作用
bFGF能延长培养液中多种中枢和外周神经元的存活，刺激胆碱乙酰化酶的合成以及突起的生长。Aoyagi等〔15〕报道在培养的胎鼠海马神经元中加入bFGF，可使神经元成活时间增加和其轴突延长。在培养的胎鼠海马神经元中加入bFGF10～30pg·ml－1，使原只能存活5～7天的神经元生命延长14天，数目增加4倍；当浓度增至200～500pg·ml－1时，可使原只30μm的突起延长至100μm。Patner等（1988）在培养的雪旺氏细胞中加入bFGF后，5%～10%的细胞进入分裂期。bFGF对培养中的胚鼠脑的额区、顶区、纹状体、丘脑的胆碱能神经元和多巴胺能、γ-氨基丁酸能神经元，大鼠小脑皮质神经元、交感节细胞、鸡胚脊髓前角神经元等都有营养和促进作用。
(3)体内神经营养作用
当bFGF用于损伤的大脑时，能促使海马神经元存活，而无bFGF时海马神经死亡。在外周神经系统，当bFGF加入紧靠坐骨神经切断处，能够促进神经的髓鞘化，防止背根神经节神经元的死亡〔16〕。Seivers（1987）、Gospodarowicz（1990）等也证实bFGF可使切断视神经后的视网膜后的视网膜节细胞成活。将bFGF注入大鼠脑中，也可保持切断轴突的大脑皮层的胆碱能神经元的存活（Anderson，1988）。Ferrari
等（1989）经体内实验证实，bFGF能提高中脑腹侧多巴胺能神经元移植物的成活。
(4)对周围神经再生的促进作用
在周围神经损伤修复的研究中，有资料表明，bFGF有明显的促进外周神经纤维再生的作用是比较肯定的，也已在体的神经“套管”模型实验中得到证实〔16〕。自Lundborg（1982）建立神经再生模型后，有关加入某些因子对神经再生影响的研究很多。Cuevas〔17〕等给切断坐骨神经灌注bFGF，可提高神经的再生率。Laquerriere 等〔18〕在桥接大鼠7mm长坐骨神经缺损中使用bFGF，4周后发现神经再生成功。Koshinaga等〔19〕研究了脊髓损伤后bFGF、aFGF的表达情况后认为，aFGF、bFGF 参与脊髓损伤的修复过程。有研究表明bFGF的促神经再生作用可与NGF家族、睫状节神经营养因子（CNTF）、胰岛素样生长因子（IGFs）等的神经营养活性相互协同〔2〕。
(5)促进神经前体细胞分化
bFGF有对神经前体细胞的增殖分化作用。Gensburgeror（1987）发现培养的大鼠神经元加入bFGF后，出现胆碱能成份分裂并增殖。Dicico-Bloom（1990）观察到成神经细胞的分裂受bFGF的调节，分裂过程中出现轴突突起生长出生长锥、神经递质合成、递质小泡的转运等神经元特性。此外，bFGF还可通过它的促血管生成作用来影响中枢神经和周围神经系统的发育。
编辑本段六、存在的问题和临床应用前景
bFGF是一种促细胞分裂的肝素结合蛋白，可诱导多种细胞的增殖与分化，对神经系统有重要作用。在不同种间bFGF结构的高度守恒性，提示它在个体发育中起着原始的促进作用。鉴于以往bFGF的研究多集中于中枢神经系统，在周围神经损伤后，bFGFmRNA的表达情况、bFGF受体表达的细胞、bFGF如何与受体识别以及结合后的变化?bFGF促周围神经再生的机制，生理状态下存在多种生长因子，它们的相互协调作用以及调节关系怎样?等，这些问题的阐明将为临床提高周围神经损伤后的修复效果提供理论依据。此外，由于bFGF易被酶分解，其在体内作用的发挥需持续长时间与靶细胞受体结合，如研究一种既能让bFGF稳定不受蛋白酶降解，又能使bFGF 持久缓慢释放的载体，则解决了bFGF临床的一大难题。虽然bFGF在体内含量甚微，但分布广泛，生理功能复杂多样。bFGF生物活性的多效性以及神经营养的广谱性，为其从基础走向临床提供了保证，bFGF对于神经损伤再生的研究，是对于神经损伤治疗领域的一个新的探索和拓宽，目前在动物实验上已现成效。国内第二代基因重组h-bFGF也已经问世〔4〕，它的出现，展示着bFGF临床应用的光明前景。
碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）神经再生 1975年Gospodarowicz首先报道运用理化方法从牛的大脑和垂体中分离纯化出碱性成纤维细胞生长因子（Basic Fibroblast Growth Factor，bFGF）。80年代，bFGF的氨基酸序列得到澄清。90年代，国内外相继运用基因工程方法成功获得重组bFGF，有力推动了关于bFGF的研究。系列研究证实，bFGF能刺激和调节血管内皮细胞、上皮细胞、成肌细胞、成骨细胞和神经胶质细胞等多种起源于中胚层、神经外胚层的细胞分化增殖，在胚胎发育、组织愈合中起重要作用。神经方面，关于bFGF的研究集中在中枢神经，发现其神经活性广泛，能保护神经元，促进突起增生，提示在周围神经再生方面的研究意义。现参考近年来bFGF与神经再生的相关文献作一综述。 一、内源性bFGF正常情况下的表达和神经损伤后的变化 (一)中枢神经：正常情况下，内源性bFGF以微量分布于脑、垂体和下丘脑等器官，已证实星形胶质细胞、垂体滤泡及部分神经细胞能分泌bFGF，在海马皮质、中脑、纹状体和小脑颗粒细胞均有其受体。神经损伤后，早期就能观察到内源性bFGF表达增多，是神经损伤后早期反应之一。 叶诸榕用原代培养的大鼠大脑星形胶质细胞作成机械损伤模型，观察发现bFGF在损伤后2小时开始表达，12小时达高峰，2天后开始回落，星形胶质细胞胞体肥大，突起粗大。崔建忠运用Northern杂交、组织学方法动态观察大鼠颅脑弥漫性损伤后bFGF的基因表达和组织学改变，结果发现轻度损伤后12小时，重度损伤后4小时，bFGF基因表达增加，均于第3天达到高峰。Grothe〔1〕研究脊髓神经节bFGF及其Ⅰ型受体（FGFR-1)的表达时发现，正常情况下，bFGF和FGFR-1的mRNA在脊神经节均有表达，原位杂交显示星形胶质细胞产生bFGF，而感觉神经元表达FGFR-1，提示旁分泌作用；坐骨神经损伤后，L4～6感觉神经元bFGF的表达在1天内即上调，7天达高峰，28天后恢复，FGFR-1的变化则不明显。 (二)周围神经：Grothe〔1〕和Meisinger〔2〕1997年报道了bFGF及其受体在周围神经的表达和损伤后变化的研究结果，而此前该领域未见报道。该研究发现，正常情况下，大鼠坐骨神经FGFR-1 mRNA表达高于bFGF mRNA。坐骨神经损伤后，FGFR-1和bFGF的mRNA 在损伤远、近端均于不同的时相点上调，并有时间依赖性；bFGF的表达具有自身正反馈特点，且不影响FGFR-1。这一实验说明，与在中枢神经一致，内源性bFGF表达增多同样是外周神经损伤后的早期反应。 神经损伤后bFGF表达上调的意义是什么?不少学者将bFGF运用于神经细胞培养和神经损伤模型，发现bFGF具有广泛的促神经再生作用，提示bFGF表达增多是神经损伤后的修复反应，且可能具有始动意义。 二、外源性bFGF促进神经再生 (一)中枢神经 (1)离体试验：端礼荣在原代培养的大鼠胚胎中脑神经细胞中加入bFGF，观察发现细胞微团集落形成率明显增加，不同剂量的bFGF表现量效关系，图像分析见神经细胞突起增多，连接丰富呈网状。Miyagawa运用bFGF于原代培养的海马神经元轴突损伤模型，观察发现实验组较对照组轴突增生、突起增多。Himmelseher〔3〕进一步研究了不同浓度的bFGF对如上模型的作用，结果未用bFGF的对照组神经元存活65%，运用不同剂量bFGF的试验组神经元变性均减少，10 mg／L组存活神经元达85%，神经突起亦增多、增长。 由上述试验可见，bFGF能促进培养的神经细胞增生，神经细胞损伤后运用bFGF，变性死亡减少，神经突起增生，说明bFGF在体外具有促进、保护神经细胞的作用。Malgrane 〔4〕研究大鼠背根神经节神经元对神经毒性药物的反应时发现：bFGF不但能刺激轴突再
成纤维细胞的最新用途 一、自体成纤维细胞除皱整形技术的研究应用进展 1、培养的成纤维细胞去皱技术在整形外科上的应用 2005年Anon道在2002年ChelseWestminster医院用Isoagen治疗85％烧伤病人取得了被称为“接近奇迹”的效果。病人康复后说：“瘢痕的皮肤整个不再正常，但治疗后很多的活力回到了她脸上，朋友们见到她认为又回到了她自己，我不能想象有可能用任何其他的方法。” 2、作用原理： 注射培养的自体成纤维细胞制剂能促进软组织的强化作用和促进组织的再生用于除皱和软组织的缺陷，胶原蛋白的氨基酸组成和结构，具有组织细胞的支持功能，是构成皮肤的支架。胶原分子在成纤维细胞内合成并分泌到细胞外，在细胞内先合成多肽链，继之，3条前α链集聚，生成前胶原，即胶原分子的前体。前胶原分子分泌到细胞外间隙内以后受到限制性蛋白水解作用，消除分子的伸展肽而软化为胶原。在细胞外间隙内消除伸展肽后，胶原分子自发地排到成纤维。胶原交联后，纤维获得了所需的张力强度。注射培养的自体成纤维细胞制剂增加了皮肤成纤维细胞，促进胶原分子的合成、交联，使皮肤恢复弹性，皱纹消失。 二、成纤维细胞成骨作用的研究 1、成纤维细胞在骨折愈合中的成骨作用 成纤维细胞在骨缺损等特殊环境下同成骨细胞一起参与成骨过程。Chai
Parrasad]等通过电镜发现成纤维细胞分泌合成胶原纤丝,并在胶原纤丝内沉积钙盐结晶,在纵形排列的胶原纤丝内可以看到64 OA的周期带。软骨细胞合成分泌的是Ⅱ型胶原;而成纤维细胞及成骨细胞合成分泌的是Ⅰ型胶原,两种细胞合成分泌的Ⅰ型胶原,无论在形态上,还是在生化结构上是完全一样的。成纤维细胞形成基质小泡,并引起小泡内的钙盐沉积。钙化的基质小泡形成毛球状钙球,钙球合并融合成为骨组织。金大地在骨缺损修复的超微结构中发现了不同发育阶段的成纤维细胞的成骨现象。 2、作用原理： 在骨折愈合实验及成纤维细胞体外培养实验研究中均已被证实。成纤维细胞在骨折修复中不仅对早期形成的纤维骨痂起到固定作用;在以后阶段中,纤维骨痂中的成纤维细胞两种途径演变为骨组织,成为两种相互联系的细胞。体外培养成纤维细胞证实,成纤维细胞不仅能分泌胶原、软多糖等基质成份,在细胞胞浆内及培养液中, ALP活性检测均为阳性,且能分泌大量骨小结节。成纤维细胞的固有发生性只有在特殊环境特殊需要的条件下才能表现出来;一些成骨因子在成纤维细胞骨化过程中起到诱导作用。这就提示我们在骨诱导因子的作用下,成纤维细胞不仅参与骨折愈合,在病理状态下,这种具有游走性的成纤维细胞可能发生局部浸润及成为组织病理性钙化和骨化的原因之一。
1856年，实现红豆杉细胞培养生产紫杉醇的突破。 1885年，Roux温生理盐水培育鸡胚组织； 1887年，培养皿（英文：Petri dish）由在德国生物学家罗伯特·科赫手下工作的细菌学家朱利斯·理查德·佩特里（Julius Richard Petri，1852－1921）于1887年设计，故也称为“佩特里皿”。是一种用于细胞培养的实验室器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般用玻璃或塑料制成。 1902年，植物细胞培养是在植物组织培养技术基础上发展起来的。1902年Haberlandt 确定了植物的单个细胞内存在其生命体的全部能力(全能性)，使成为植物组织培养的开端。 其后，为了实现分裂组织的无限生长，对外植体的选择及培养基等方面进行了探索。 1906年，Beebe和Ewing用盖片悬滴培养法，以动物血清做培养基，培养狗淋巴细胞存活了72 小时。现代细胞培养是从Harrison(1907)和Carrel(1912)两人开始的。Harrison参考前人经验，创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法。 1907年，哈里森(Harrison)在无菌条件下用淋巴液作培养基，培养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养的基础。 1910-1912年，Carrel采用无菌操作、更新培养基、传代，完善了悬滴培养法； 1912年，Haberlandt的学生Kotte和美国的Robins在根尖培养中获得了组织培养的成功。Kotte采用了无机盐、葡萄糖、蛋白胨、天冬酰胺，及添加各种氨基酸的培养基。 1915年，昆虫细胞培养的鼻祖是德国人forhardBendict（1878—1958），发表了有关昆虫细胞培养的第一篇文章。 1923年，Carral设计创立了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随时更换培养液，既有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞，极大地推动了当时组织培养研究。 在培养基方面，Earle在1948年设计了含有碳酸氢钠等盐类的Earle氏盐溶液，Hank’s在1949年设计了Hank’s氏盐溶液。 Earle、Dulbecco等于1943年创建单层细胞培养法，首建长期传代的L-细胞系；1948年Sanford创建单细胞分离培养法，获L-细胞纯系。 1948年，体外细胞毒性试验细胞毒性实验它是利用体外细胞培养的方法，测定细胞溶解，抵制细胞生长的毒性作用来评价生物材料的潜在细胞毒性。 1948年，RosenBluth等首次报道利用鼠成纤维细胞培养来筛选聚合物，开始了细胞毒性试验评价生物材料的生物相容性的研究与应用工作。 1950年，Enders及其同事发表了第一篇关于在培养细胞中生长病毒的报告，开拓了以动物病毒为研究对象的新领域。作为大规模细胞培养，Copsik等人成功的进行了有关仓鼠肾细胞（BHK）的悬浮培养。
利用组织块可以成功地培养得到原代培养的人皮肤真皮成纤维细胞。培养中应该注意以下事项： ①一般皮肤主要取白手术过程中切除的部分组织，方法似外科取断层皮片手术操作，但组织一般2—3cm 即可，注意取材时不要用碘酒消毒．此外，不要切取太厚，要尽量去除皮下组织，如果皮下脂肪太厚会影响组织块的贴壁，不易于日后细胞的游出． ②尽量去除表皮，如有表皮未被完全剔除，则可能造成表皮细胞竞争生长，最为常见的为角质形成细胞的污染，它可以和成纤维细胞共同生长．虽说在今后的传代培养时可通过细胞纯化方法适当去除，但这种混和生长状态会对后续实验产生影响．所以，一旦发现细胞污染，应立即停止实验，重新培养． ③在剪切组织块时要注意保持组织块湿润，可向其表面滴加几滴培养液，要始终保持其成湿润状态，这一点要特别注意而且十分重要．剪切时要掌握好时间，尽量在短时间内完成． ④组织块在最初贴壁时不是很牢固，所以开始加液不应太多，以刚刚浸没组织块为易，特别要注意，在最初几天时要减少移动培养瓶次数，避免过多晃动而造成组织块脱壁，最好在开始3 d内不换液．⑤文献报告成纤维细胞培养多在CO 培养箱内进行，培养箱内环境为CO 浓度50 ml／L，湿度95％，培养瓶为开放式．因其湿度，温度及氧气与人体内实际情况较为接近，所以适合成纤维细胞的成长．但开放式培养的同时也增加了细胞培养污染的机率，所以，可以根据
自己实验室的条件选用合适的培养方法，如半开放式和充气后密闭瓶口，其效果也十分理想．但同时要密切观察培养液的pH变化，以保持适宜的酸碱度． ⑥细胞培养失败的最常见原因是污染，其中以微生物污染最常见，污染一旦明确，多数将无法救治，应尽快弃之，以防止污染扩大，影响其他细胞．因此，应在各个阶段严格遵守无菌操作原则，把好每一关口，尽可能禁止其他污染的物品进入操作环节，以避免造成时间、人力、物力的浪费．
幽丕医药呈塑竺生筮垒２鲞箜墨翅 酸性成纤维细胞生长因子应用于眼科 疾病的研究进展 董玉萍１。钱焕文２ （１北京武警总队第二医院，北京１０００３８；２军事医学科学院） 【关键词］酸性成纤维细胞生长因子；眼组织；视神经损伤 ［中图分类号］Ｒ８５６．７７［文献标识码］Ａ［文章编号］１００２－２６６Ｘ（２００９）０８－０１１１－０３ 酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）是一种具有多方面功能的活性蛋白，不但可以促进创伤修复，而且具有保护心肌、神经及局部缺Ｊ１ｉＬ等作用，在治疗帕金森氏综合症、急性脊柱扭曲性损伤等多种临床应用方厩具有巨大潜力。研究表明，ａＦＧＦ还对视觉系统的神经、组织、细胞有重要影响。本文就ａＦＧＦ及视神经保护、眼科疾病治疗中的应用作一综述。 １ａＦＧＦ特征 ａＦＧＦ最初由Ｔｈｏｍａｓ于１９８４年从牛脑中分离纯化得到，且在肾脏和脑组织含量最丰富。人的ａＦＧＦ基因位于第４号染色体上，为单拷贝基因，由两个大的内含子和ｉ个外显子组成。ａＦＧＦ蛋白由１５４个氨基酸残基组成，分子量约１５０００～１８０００Ｄａ，等电点５～７，呈酸性。其蛋白质的二级结构包括了１２条不平行Ｂ链组成的ｉ叶草结构。组成亚结构折叠单位的４条１３链，连结为稳定的统一体。ａＦＧＦ生物学特性与其多肽链序列中的多个功能区域有关，三维晶体结构测定ａＦＧＦ的主要功能区，包括肝素结合区、受体结合区和核转位区。这些结构区域与ａＦＧＦ的生物学特性密切相关。ａＦＧＦ通过激活ａＦＧＦ酪氨酸激酶受体（ａＦＧＦＲ），形成复合体行使生物学功能，这个过程需要肝素的参与。 １．１肝素结合区肝素结合区是碱性氨基酸的富集区，这些带正电荷的碱性残基很可能在与带负电荷的肝素结合中发挥作用。ＦＧＦ、肝素、ＦＧＦＲ胞外域的分子模型表明：１０～１２Ｂ折叠可能在ＦＧＦ与肝素一ＦＧＦＲ胞外域复合体的相互作用中扮演重要角色。甘氨酸盒（ＧＩＰＶＲＧ）决定了ａＦＧＦ与肝素硫酸盐一ＦＧＦＲ复合体结合的特异性…。１９９３年，Ｍａｒ－ｇａｌｉｔ建立了肝素与ａＦＧＦ的蛋白三维结构模型，认为人ａＦＧＦ的１２６．１３３位氨基酸序列在肝素与ａＦＧＦ的结合中起着决定性的作用。此外，２２．２７、１１３．１２０和１３６也是肝素结合的基本位点。肝素可增加ａＦＧＦ的稳定性，防止ａＦＧＦ被热、极端ｐＨ变性和蛋白酶所水解。 １．２受体结合区晶体结构分析发现，ａＦＧＦ与ＦＧＦＲＤ２作用位点位于三维结构中的１３１、Ｂ２／Ｂ２转角、１３３／ｐ４环、Ｂ９、１３１０／１３１１环、１３１２；与Ｄ３作用的位点位于Ｎ／１３ｓ和Ｎ端的５—９位氨基残基。 １．３核转位区Ｎ端２ｌ一２７位的Ａｓｎ—Ｔｙｒ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ—Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ序列对ａＦＧＦ的丝裂原活性十分重要，此序列被称为核定位序列（ＮＬＳ），也称为核转位区。删去该序列后ａＦＧＦ诱导ＤＮＡ合成和细胞增生的能力丧失，但仍能与ＦＧＦ受体结合并诱导受体介导的酪氨酸磷酸化和ｃ—ｌｏｓ蛋白的表达。 １。４作用机制ａＦＧＦ通过与ＦＧＦＲ结合，启动丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）信号通路，可以刺激成纤维细胞、血管内皮细胞和神经细胞的生长。ＭＡＰＫ途径是调节各种细胞趋化应答、分化、分裂的重要途径，是细胞增殖、分化等信息传递途径的交集点和共同通路。Ｈａｄａｒｉ等悼’证实，ＦＲＳ２０作为ＦＧＦ信号传导中的中介物质，扮演了发挥ＦＧＦ功能过程中的一个至关重要的角色。位于ＦＲＳ２Ａｈ的酪氨酸磷酸化位点起着介导ＦＧＦ生物活性的作用。近来研究表明，ｎｍ—ｈａＦＧＦ可竞争取代ａＦＧＦ与ＮＩＨ３Ｔ３细胞膜上的ａＦＧＦ受体结合，但不改变细胞膜上ａＦＧＦ－受体的总结合位点数，对受体无阻断作用，证明ｎｍ．ｈａＦＧＦ仍与受体结合，ＭＡＰＫ信号通路并无中断。在无血清培养条件下，衰老的牛视网膜色素上皮细胞由于合成和分泌内源性ａＦＧＦ，使细胞凋亡降低，而细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）阻断剂、ａＦＧＦ抗体或ＦＧＦＲＩ抗体均可导致凋亡增加。ａＦＧＦ基因转染的ＲＰＥ细胞分泌ａＦＧＦ，可通过上调ＦＧＦＲｌ和ＥＲＫ２及ｂｃｌ．ｘ表达来抵抗无血清培养的ＲＰＥ细胞的凋亡。ａＦＧＦ保护凋亡的作用不依赖于其促有丝分裂活性，不仅如此，在蛋白改构后，Ｂｉｎ．ｈａＦＧＦ的抗凋亡能力还显著地增强，其机制可能是通过上调ｂｅｌ－２的蛋白水平和下调ｂａｘ的蛋白水平，从而抑制光感受器细胞发生凋亡Ｈ１。 ２与眼组织关联 ２．１ＦＧＦ与角膜ＦＧＦ在角膜中的分布依赖于ＦＧＦ的浓度、基膜的构成、细胞的通透性、局部所含肝素量等Ｈ１。角膜上皮对于ＦＧＦ在眼部的扩散仍是个屏障，去掉角膜上皮层，ＦＧＦ在眼中扩散较快。ＦＧＦ在眼组织的浓度有两个高峰，一是滴药后１０～３０ｍｉｎ在眼前段出现，二是滴药后８ｈ在眼前段再现，至４８ｈ消失。ＦＧＦ能促进角膜上皮细胞、内皮细胞以及基质细胞的增殖。储备在基膜和细胞外基质中的ＦＧＦ对角膜伤口的修复起着积极的作用，但同时由于其不断地释放，对角膜新生血管的形成也是一个不可忽视的诱因。因为ＦＧＦ对血管内皮细胞有明显的促增殖作用，可刺激角膜缘的血管向角膜基质中生长。另外，有报道，巨噬细胞能产生ＩＬ．Ｉ、ＴＮＦ．ｄ和ｂＦＧＦ，这就进一步说明当角膜有炎症浸润时， １１１ 万方数据
成纤维细胞的成骨作用 成纤维细胞经诱导可以形成骨组织，由于成纤维细胞直接参与了骨折愈合过程中纤维性骨痂的形成，其自身又具备被诱导成骨的能力，在体外大量培养扩增成纤维细胞，并施以有效的诱导因素(如上皮细胞、TNG-α和BMP等)使其具备成骨效能，然后与合适的生物材料载体复合，同时使该复合体在体外或体内保持良好的成骨能力并进行一定程度的成骨，则有望获得具有一定的生物力学支撑强度而成骨作用又保持活跃的“活骨”复合体，用以替代自体骨或异体骨回植体内治疗难以自身修复的较大的骨缺损，这无疑将为骨缺损的修复治疗开辟一条新的有辉煌前景的道路。 成纤维细胞修复受损心脏 美国研究人员通过对成纤维细胞进行重新编程，使其直接变成心肌细胞来修复受损的心脏。该方法一旦在人体试验中获得成功，再生的心肌组织将可用以修复因自然衰老和心脏停搏导致的损伤，同时还可避免干细胞疗法的安全隐患。该研究发表在《细胞》杂志上。 重组人类成纤维细胞生长因子 重组人类成纤维细胞生长因子研究具有非常重要的理论和实用意义，它有助于阐明分子水平的免疫调节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗，特别是利用基因工程技术生产的重组细胞因子已用于治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等，并收到良好疗效，具有非常广阔的应用前景。 在炎症期，重组人类成纤维细胞生长因子对创伤细胞有明显的趋向活性，刺激成纤维细胞，血管内皮细胞等向创伤部位移动。当细胞迁移至损伤部位时，开始进入增殖和修复期，其中最关键的步骤之一是肉芽组织的形成，肉芽组织的本质是大量的毛细血管和丰富的成纤维细胞，重组人类成纤维细胞生长因子正是成纤维细胞、血管内皮细胞及血管平滑肌细胞的高效促生长剂，能够强烈促进新生毛细血管的形成，显著增加肉芽组织毛细血管数量和血液流量，改善创面微循环，为组织修复提供所必须的氧及丰富的营养物质；同时重组人类成纤维细胞生长因子对损伤组织部位神经纤维的再生也有显著的促进作用，加速损伤组织功能的恢复；成纤维细胞也是合成胶原的主要细胞，而胶原是肉芽组织中细胞间质的主要成份，重组人类成纤维细胞生长因子通过调控胶原的不断合成、分泌、改构和更新，而不断改善修复组织的结构和强度。
大规模细胞培养技术简介 大规模培养技术应用简介通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。上世纪60-70 年代，就已创立了可用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术。近十数年来，由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增，以传统的生物化学技术从动物组织获取生物制品已远远不能满足这一需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善，动物细胞大规模培养技术趋于成熟。 所谓动物细胞大规模培养技术( large-scale culture technology )是指在人工条件下(设定ph、温度、溶氧等) ，在细胞培养工厂 (Cosmo Cat.No. 1101-400 or 1101-800 )或生物反应器( bioreactor )中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho(中华仓鼠卵巢) 细胞、BHK-21( 仓鼠肾细胞)、Vero 细胞(非洲绿猴肾传代细胞，是贴壁依赖的成纤维细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。 在过去几十年来，该技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube 等贴壁细胞培养，发展为一次性细胞培养工厂( Made by Cosmo )或生物反应器 (Bioreactor )进行大规模细胞培养。第一代细胞培养技术核心问题是难以产业化或者说是规模化生产：一是在工艺生产时不能大规模制备产品；二是非批量生产容易导致产品质量的不均一性；三是难以对同批生产进行生产和质量控制。 随着生物技术的发展，迫切需要大规模的细胞培养，特别是培养表达特异性蛋白的哺乳动物细胞，以便获得大量有用的细胞表达产物。采用玻璃瓶静置或旋转瓶的培养方法，已不能满足所需细胞数量及其分泌产物。因而必须为工业化生产开创一种新的技术方法。自70 年代以来，细胞培养用生物
实验-小鼠成纤维细胞的原代培养 一.实验目的 1. 掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养中的取材、消化及无菌操作等基本实验技术和操作过程。 2 ?熟悉在倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况的方法。 3?了解细胞原代培养与传代培养的原理和方法。 二.实验原理 自17世纪下半叶Robert Hooke提出"细胞”概念直至20世纪中叶，细胞培养(CeIl CUltUre )才逐渐发展起来。现代生命科学以及相关领域的研究前提是细胞的维持和增殖，因此，细胞培养不仅是细胞生物学的密不可分的组成部分，而且已经成为生物化学、生物物 理学、遗传学、免疫学、肿瘤学、生理学、分子生物学和神经科学、甚至临床医学的重要内容。细胞培养也是细胞生物学延伸至相关学科的一条主要途径。 如今，细胞培养已经成为生命科学和医学研究最常用的基础技术之一。 细胞培养是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下，使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。细胞培养的直接目的是维持或扩增细胞数量。依据取材于动物组织或培养细胞，细胞培养分为原代培养和传 代培养。 1 .原代培养(Primary CUItUre )是从供体取得组织或细胞后在体外进行首次培养直至成功地进行首次传代之前的培养。但实际上通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。原代培养是建立细胞系的第一步，其最基本的方法有两种：组织块培养法和消化 培养法。 组织块培养法是指直接从机体取下组织和器官，通过组织块直接长出单层细胞，该培养法是最常用的原代培养方法，其将刚刚离体的、生长活力旺盛的组织剪成小块接种在培养瓶 中作为实验材料，一天后细胞可从贴壁的组织块四周游出并生长。组织块培养法操作过程简 便、易行，培养的细胞较易存活，适用于一些来源有限、数量较少的组织的原代培养。 消化培养法利用酶或机械方法将组织分散成单个细胞后，在不加任何粘附剂的情况下，直接移植在培养瓶壁上，加入培养基立即进行培养的方法。该方法主要使用生物化学手段将 较小体积的动物组织中妨碍细胞生长的间质加以分解、消化，使组织中结合紧密的细胞连接 松散、相互分离，细胞失去与间质的连接，活细胞从组织中释放出来形成含单细胞或细胞团的悬液，分散的细胞易与外界进行新陈代谢互动，在短时间内即可贴壁生长成片。胰蛋白酶
随着生物学，特别是分子生物学技术的发展，给美容化妆品行业带来了全新的发展机遇，护肤品已经从精细化工美容、植物美容向生物美容、基因美容发展。作为生物护肤品的主要成分生物活性多肽大部分是细胞生长因子，它们在体内含量极微，但生物活性极高，对多种细胞生理功能和代谢活动发挥生物调节作用，直接或间接地影响多种类型细胞的生长、分裂、分化、增殖和迁移，在美容护肤、整形外科、烧伤溃疡以及各种皮肤病的伤口修复与愈合中有重要作用。 1．生物活性多肽的生物学效应 添加到美容护肤品中的各种生物活性多肽，都是与存在于靶细胞上的特异受体相结合而发挥作用，其主要生物学效应为：趋化诱导炎症细胞，刺激靶细胞增殖和分化，促使靶细胞合成分泌细胞外基质如胶原等。生物活性多肽对胚胎发育、组织再生以及创伤愈合的作用远不止促进细胞分裂和分化作用，还涉及到生物活性物质的合成和分泌、免疫应答，甚至在细胞生长的抑制方面也起重要作用。近年来的研究发现，多种活性多肽在体内皆可诱导血管形成，它们可直接与上皮细胞膜表面特异性受体结合而刺激血管上皮游走和有丝分裂，也可间接通过巨噬细胞介导分泌活性物质促进内皮细胞复制和趋化游走，诱导血管增生。 生物活性多肽具有调节t细胞、b细胞、组织细胞、郎格罕氏细胞和真皮树突的形成、发育、代谢等功能，并影响它们的迁移和生长速率。同时也刺激结缔组织、角化细胞、成纤维细胞和巨噬细胞等分泌细胞因子、淋巴因子、血清蛋白、胞外蛋白和基质多糖。在胚胎发育期，活性多肽通过调节相同或不同类型细胞的活动而参与组织器官形成的调节；对于发育成熟的组织器官，创伤后引发的器官受损、功能削弱，或由于缺少促生长多肽而引起的细胞活力减弱及衰老，活性多肽有显著的修复重建功能。 2．与皮肤有关的生物活性多肽 到目前为止，研究发现的生物活性多肽有几十种，其中有不少已被添加到美容护肤品中，与美容护肤及皮肤软组织损伤修复关系密切的主要有： 成纤维细胞生长因子(fgf)：包括酸性 (afgf)和碱性 (bfgf)两种。酸性成纤维细胞生长因子(afgf)属于成纤维细胞生长因子(fgf)家族的成员，是一种多功能的细胞生长因子，对中胚层来源的多种细胞有营养和促分裂、分化作用。上皮细胞、真皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、神经细胞、成肌细胞、成骨细胞等均有afgf的受体，afgf对这些细胞都可以发挥作用。来源于中胚层和神经外胚层的多功能细胞因子，是作用极强的有丝分裂原，对血管内皮细胞、成纤维细胞、成肌细胞、造骨细胞等都有促分裂作用，并通过其趋化作用和促细胞迁移作用使巨噬细胞、间充质细胞、内皮细胞、成纤维细胞等向创伤部位聚集，启动创伤愈合过程；修复肽直接作用于受损的细胞组织，能促进成纤维细胞生长，促进胶原细胞、角质细胞分裂、增殖，使皮肤深层损伤组织迅速修复，加速伤口愈合，对皮肤组织的各种创伤（包括晒后紫外线灼伤，痤疮，换肤后的脱皮、发红，果酸等导致的皮肤灼伤及磨削后深层肌肤损伤等）的修复具有突出的效果。同时，生物活性肽(afgf)在延缓皮肤衰老及提供皮肤养分、促进皮肤细胞新生、消除皮肤皱纹等方面有着重要的作用。另外，生物活性肽还可以调节细胞分泌，高效为肌体提供营养，提高肌体免疫力，补充肌肤养分供应，在皮肤受到外界刺激时，自动释放激活人体防御系统，抑制黑色素生成，控制油脂分泌，在使肌肤细胞维持正常状态、保持肌肤活力等方面起着重大作用。
成纤维细胞生长因子及其与受体作用机制 的研究进展1 姜媛媛，任桂萍，王文飞，郝建权，李德山 东北农业大学生命科学学院生物制药教研室，哈尔滨（150030） E-mail：deshanli@https://www.doczj.com/doc/158488920.html, 摘要：成纤维细胞生长因子(FGF)是一类多肽类物质，其中大多数成员可与肝素结合发挥作用。目前已知FGF至少包括23个因子，即FGF1～23。部分FGF家族成员N末端有大约3O个氨基酸残基组成的典型信号肽序列，可以分泌到细胞外。FGF家族成员是一类生理功能较广泛的生长因子，功能包括促进细胞有丝分裂、趋化与血管生成、促进中胚层和神经外胚层细胞的存活与生长等。本文根据最近的研究成果对 FGF因子及其受体研究进展做一综述，并主要对FGF因子特征及其研究趋势进行了探讨。 关键词：FGF，FGF受体，肝素 中图分类号:Q74 引言： 成纤维细胞生长因子最早是从脑和垂体的提取液中发现的，该物质是一种能促进成纤维细胞生长的多肽类活性物质，可以通过与细胞膜特异性受体结合对细胞生长进行调节。从70年代中期到目前已进行了大量广泛的研究，目前已知FGF至少包括23个因子，它们在一级氨基酸序列上有一定的同源性，并有类似的生物学功能，且广泛存在于体内多种组织中。FGF对中胚层和神经外胚层来源的细胞具有十分明显的促细胞分裂增殖作用，并且在机体内的胚胎发育、细胞生长分化、创伤组织愈合及肿瘤发生发展中起着十分重要的作用。 1. 成纤维细胞生长因子（FGF）家族 成纤维生长因子（Fibroblast growth factor, FGF）又被称为肝素亲和生长因子(Heparin binding growth factor, HBGF)，是一类通过与细胞膜特异性受体结合发挥作用的多肽分子。现已知FGF家族至少包括23个成员，即FGF1～FGF23。FGF家族成员之间的氨基酸序列同源性约为25%～50%，其每个成员都有140个氨基酸的中轴，该中轴在不同的成员中有高度的同源性。结构分析表明，此中轴折叠成12条逆向平行的β链，它们又进一步形成圆柱状的结构。部分FGF家族成员N末端有大约3O个氨基酸残基组成的典型信号肽序列，使得它们可通过内质网一高尔基复合体的经典(即自分泌和旁分泌)途径被分泌到细胞外，但其中也有部分FGF则因本身缺乏信号肽结构，不能向外分泌，只能在细胞受损时释放[1]。多数FGF（如FGF3～8、10、15、17～19、21～23）的N末端具有典型的信号肽序列。而FGF16和FGF20虽然没有明确的信号肽序列却也能高效地分泌到细胞外[12]。FGF1 和FGF2也缺乏信号肽序列和正常的分泌途径，却也能出现在胞外基质，推测两者可能来自受伤的细胞，或者通过与内质网-高尔基体通路不同的细胞脱颗粒机制释放至胞外的。此外，FGF 11～14没有典型的信号肽序列，因此认为这些FGF是在胞内发挥作用[13]。由于FGF家族成员之间的氨基酸序列有25％～50％的同源性，分子结构有一定的共性，故FGF不同分子之间的生物学效应既有相似性，又有各自的特点[1-3]。 FGF1(aFGF)和FGF2(bFGF)是最先被发现，也是迄今为止研究最充分的两个成员，因其1本课题得到黑龙江省科技厅重点攻关项目（编号：2006G0461-00）的资助。
成纤维型细胞：在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵园形核，胞质向外伸出2-3 厘米个 长短不同的突起，除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。 培养细胞的纯化 【我是小米2】培养细胞的纯化： 1、自然纯化 即利用某一种类细胞的增殖优势，而排挤其他细胞生长，靠自然的增值潜力最后留下生长优势细胞，去除其他细胞。有些恶性肿瘤细胞可以通过此方法，自然纯化建立细胞系。 2、人工纯化 （1）酶消化法 在消化培养细胞时，常是成纤维细胞先脱壁，而上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁，特别是在原代培养和培养早期这种差别尤为明显，因而可以利用这种差异采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开。 （2）机械划除法 原代培养成功后，上皮细胞和成纤维细胞所数都同时出现，混杂生长。这种混杂生长常常分区成片，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。因此可以采用机械的方法去除不需要的细胞。 （3）反复贴壁法 成纤维细胞与上皮细胞相比，其贴壁过程快，大部分细胞常能在短时间内大约 10－30min完成附着过程，而上皮细胞大部分在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，这样可以利用此差别来纯化细胞。 （4）克隆法 采用细胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，选择出所需要的克隆。 （5）培养及限定方法 某些细胞在生长过程中必须存在或必须去除某种物质，否则无法生长，可以利用这种技术来纯化细胞。
（6）流式分选 brdu 【sxtyzyq2】除了Brdu能用于抑制成纤维细胞的生长，便宜易买到的 【snany】阿糖孢苷效果不是特别理想 【cl1202】我在SD大鼠胃粘膜壁细胞原代培养的文献中看到的：成纤维细胞大量生长是壁细胞分离培养失败的常见原因。培养基中加入血清会刺激成纤维细胞而抑制壁细胞生长，对壁细胞可能还有一定的毒性作用。为了减少成纤维细胞的生长，先加入含有胎牛血清（100ml/L）的培养液，时差贴壁30-45分钟，除去成纤维细胞，然后再换用无血清的培养液进行培养。不知道你有没有用？试试吧。 【sxtyzyq2】买sigma公司的brdu然后把它配成终浓度为1 mmol/l然后1ml 培养液中加入5微升就可抑制成纤维细胞 【gfeng8078】我是养心肌原代，也需要抑制成纤维细胞，请问各位大侠，5-brdu 用多大的浓度？ 【cheerfulness】养心肌原代最初24h培养液中加入终浓度为0.1mmol/L的brdu 【gfeng8078】你是怎么样达到0.1mmol/L的浓度呀，由于有培养液的存在，加了Brdu进去，自然就稀释了？我想把Brdu溶解于DMEM中然后一起抽滤，可是有报道说这对Brdu的药效有影响 【jiangbin1230】请问用组织块贴壁法能培养出肠的成纤维细胞吗？我试过很多次了，一个皿就只有零散的一二十个成纤维细胞，都是柱状上皮细胞，是否由于正常组织太少不能培养出啊？能帮帮忙吗？ 【sdf771214】请问成纤维细胞的帖壁时间一般是多少?我养的是内皮细胞,如何时差帖壁啊? 【victoh】不同来源的成纤维细胞在不同培养支撑介质上的贴壁时间应该是不一样的，此外也还受到其他一些因素的影响，至于上皮细胞，其本身种类就更加复杂了 上皮细胞 【warmbull】我现在正在做的培养，但发现有几瓶细胞可能是被成纤维细胞（长梭形、透明细胞）污染了，后来成纤维细胞抑制了色素上皮细胞的生长。现在又出现了这种情况，请问各位大侠，有什么办法可以除去杂细胞？还有，我养的色素上皮细胞生长增殖很缓慢，有的甚至慢慢萎缩，会是什么原因呢？
人酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)酶联免疫酶联免疫分析分析分析 试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围检测范围：： 96T 1.5pg/ml-40pg/ml 使用目的使用目的：： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)水平。用纯化的人酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)，再与HRP 标记的酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液 6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（80pg/ml ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B 液 6ml ×1/瓶 12 密封袋 1个 标本标本要求要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 40pg/ml 5号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 20pg/ml 4号标准品 150μl 的5号标准品加入150μl 标准品稀释液 10pg/ml 3号标准品 150μl 的4号标准品加入150μl 标准品稀释液 5pg/ml 2号标准品 150μl 的3号标准品加入150μl 标准品稀释液 2.5pg/ml 1号标准品 150μl 的2号标准品加入150μl 标准品稀释液
成纤维细胞 科技名词定义 中文名称：成纤维细胞 英文名称：fibroblast 定义： 普遍存在于结缔组织中的一种中胚层来源的细胞。分泌前胶原、纤连蛋白和胶 原酶等细胞外基质成分，伤口愈合过程中可迁移到伤口进行增殖。 所属学科：细胞生物学（一级学科）；总论（二级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 百科名片 疏松结缔组织中的成纤维细胞 成纤维细胞（fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的 间充质细胞(mesenchymalcell) 分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚， 多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁
大而明显。根据不同功能活动状态，可将细胞划分成成纤维细胞和纤维细胞，成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成 和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维 细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分 重要的作用。 目录 细胞的功能活动状态划分 来源 特征 创伤修复 分离培养 原代培养 展望 展开 编辑本段 细胞的功能活动状态划分
根据不同的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细胞乃是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌 活动；纤维细胞（fibrocyte）功能活动不活跃，细胞轮廓不明显，核 小着色深，核仁不明显，细胞质少。此二型细胞可互相转化。[1] 编辑本段 来源 成纤维细胞：数目最多，胞体大，为多突的纺锤形或星形的扁平 细胞，细胞核呈规则的卵圆形，细胞轮廓不清。 成纤维细胞摄取所需的氨基酸，如脯氨酸和赖氨酸等，在粗面内质网的核蛋白体上合成前α多肽链（proalphapolypeptidechain ），多肽链输送到高尔基复合体后，组成前胶原分子（procollagen ）。前 胶原分子由分泌囊泡带到细胞表面，然后通过胞吐作用释放到细胞 外。在前胶原肽酶催化下，将每一前α多肽链的尾段除去，成为原胶 原分子（tropocollagen ）。许多原胶原分子成行平行排列，结合成具 有周期性横纹的胶原原纤维。由胶原原纤维互相结合形成胶原纤维。 编辑本段 特征 成纤维细胞是结缔组织中最常见的细胞，由胚胎时期的间充质细 胞(mesenchymalcell)分化而来。在结缔组织中，成纤维细胞还以其成熟状态—纤维 细胞(fibrocyte)的
重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF) 品牌：Robustnique? INCI：Rh-Polypeptide-1 (Human oligopeptide-2) CAS No.：106096-93-9 别名：成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，成纤维细胞生长因子-β (FGF-β) 概述： 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)属于FGF家族(23个已知成员)，是一种肝素结合生长因子，能够促进包括间叶细胞、神经外胚层和血管内皮细胞在内的一系列细胞的增殖。碱性成纤维细胞生长因子在体内还具有潜在的促血管生成活性。此外，碱性成纤维细胞生长因子是胚胎干细胞培养基中的一个重要组成成分，使细胞在无血清培养基中保持未分化的形态。重组人碱性成纤维细胞生长因子是由155个氨基酸残基组成的蛋白质，分子量17.2 KDa。 机制： 成纤维细胞生长因子(FGF)的信号转导经由成纤维细胞生长因子受体(FGFRs)。FGFR是一个带酪氨酸激酶的跨膜受体家族，包含四个成员(FGFR1-4)每个成员都有多个剪接变异体。碱性成纤维细胞生长因子可以同多种FGFRs(但不是全部)高亲和力的结合。碱性成纤维细胞生长因子和硫酸乙酰肝素糖胺聚糖(HSGAG)同FGFRs的结合导致FGFRs二聚，并随后激活FGFR胞质激酶结构域。由碱性成纤维细胞生长因子激活的信号转导通路包括RAS-RAF-MAPK、PLCγ/PKC和PI3K/AKT途径。
规格： 产品重组人碱性成纤维细胞生长因子(原液) 货号E0031 包装100 mL (可订制) 性状无色液体 浓度 1 mg/mL 成份纯化后的蛋白溶于：10 mM 柠檬酸柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0)， 300 mM NaCl，1 mM EDTA，5%甘露醇，2 mg/ml羧甲基纤维 素(CMCNa) 氨基酸序列MAAGSITTLPALPEDGGSGAFPPGHFKDPKRLYCKNGGFFLR IHPDGRVDGVREKSDPHIKLQLQAEERGVVSIKGVCANRYL AMKEDGRLLASKCVTDECFFFERLESNNYNTYRSRKYTSW YV ALKRTGQYKLGSKTGPGQKAILFLPMSAKS 分子量17.2 kDa 纯度≥ 95% (SDS-PAGE和HPLC) 活性0.8 × 106 IU/mg (Balb/c 3T3细胞增殖法检测) 无菌处理0.22 μm滤膜过滤 内毒素≤ 0.5 EU/μg 来源大肠杆菌(E. coli)表达的重组蛋白 存储-80°C/-20°C 保质期36 个月(-80°C); 24 个月(-20°C) 产地中华人民共和国 运输条件干冰运输 产品重组人碱性成纤维细胞生长因子(冻干粉) 货号E0032, E0033 包装60 μg, 1 mg (可订制) 性状白色冻干粉 赋形剂柠檬酸/柠檬酸钠，5%甘露醇，0.2%羧甲基纤维素(CMCNa) 氨基酸序列MAAGSITTLPALPEDGGSGAFPPGHFKDPKRLYCKNGGFFLR IHPDGRVDGVREKSDPHIKLQLQAEERGVVSIKGVCANRYL AMKEDGRLLASKCVTDECFFFERLESNNYNTYRSRKYTSW YV ALKRTGQYKLGSKTGPGQKAILFLPMSAKS 分子量17.2 kDa 纯度≥ 95% (SDS-PAGE和HPLC) 活性0.8 × 106 IU/mg (Balb/c 3T3细胞增殖法检测) 无菌处理0.22μm滤膜过滤 内毒素≤ 0.5 EU/μg 来源大肠杆菌(E. coli)表达的重组蛋白 存储室温(25°C) 保质期24个月(室温, 25°C) 复溶无菌去离子水, 存于低温环境防止微生物污染 产地中华人民共和国 运输条件常温运输
中国组织工程研究 第20卷 第15期 2016–04–08出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research April 8, 2016 Vol.20, No.15 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 2255 ·综述· www. CRTER .org 苏钰涵，女，1986年生，内蒙古自治区人，汉族，医师，内蒙古医科大学在读硕士。 通讯作者：翁立新，硕士，教授，研究生导师，内蒙古医科大学病理教研室，内蒙古自治区呼和浩特市 010059；内蒙古医科大学附属医院病理科，内蒙古自治区呼和浩特市 010050 中图分类号:R318 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2016)15-02255-10 稿件接受：2016-02-09 https://www.doczj.com/doc/158488920.html, 成纤维细胞生长因子的信号通路 苏钰涵1 ，杜 华2 ，牛广明3 ，王 静4 ，翁立新1，2(1 内蒙古医科大学病理教研室，内蒙古自治区呼和浩特市 010059；内蒙古医 科大学附属医院，2病理科，3影像科，内蒙古自治区呼和浩特市 010050；4 内蒙古包头市第四医院ICU ，内蒙古自治区包头市 014030) 引用本文：苏钰涵，杜华，牛广明，王静，翁立新. 成纤维细胞生长因子的信号通路[J].中国组织工程研究，2016，20(15):2255-2264. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.15.018 ORCID: 0000-0002-2684-4178(翁立新) 文章快速阅读： 文题释义： 成纤维细胞生长因子：成纤维细胞生长因子可以由内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞分泌。它的作用是促进内皮细胞的游走和平滑肌细胞的增殖，不能使平滑肌细胞游走。能够促进新血管形成，修复损害的内皮细胞。成纤维细胞生长因子被认为是病灶形成促进因子，但从修复角度看它也有有利的一面。 成纤维细胞生长因子亚科：分泌的信号成纤维细胞生长因子基于生化功能、序列相似性和进化关系可以分为一些亚科：旁分泌的成纤维细胞生长因子的5亚科，内分泌的成纤维细胞生长因子的一个亚科，和细胞内成纤维细胞生长因子的一个亚科。 摘要 背景：在最早的胚胎发育阶段和器官形成期间，成纤维细胞生长因子家族成员的功能是维持祖细胞并介导祖细胞的生长、分化、存活和形态。成纤维细胞生长因子常在成熟的组织通过重新激活信号通路介导代谢功能、组织修复和再生。 目的：总结并讨论成纤维细胞生长因子信号通路对组织和器官的作用。 方法：由第一作者用计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI ：2010至2016年)和Medline 数据库(2000至2016年)，检索词分别为“成纤维细胞生长因子，信号通路”和“Fibroblast growth factor ，signaling pathway ”语言分别设定为中文和英文。全面阐述成纤维细胞生长因子的信号通路的研究进展。 结果与结论：①共纳入47篇文献；②哺乳动物成纤维细胞生长因子家族的信号是由18个分泌蛋白组成，这18个分泌蛋白与4个信号酪氨酸激酶成纤维细胞生长因子受体相互作用；③成纤维细胞生长因子配体与受体的相互作用是由蛋白质或辅助因子蛋白多糖和胞外结合蛋白来调节的；④活化的成纤维细胞生长因子受体使特定的酪氨酸残基磷酸化，调节与细胞质接头蛋白、RAS-MAPK 、PI3K-AKT 、磷脂酶C γ和STAT 细胞内信号通路的相互作用，4个结构相关的细胞内非信号的成纤维细胞生长因子相互作用来调节电压门控钠离子通道；⑤结果说明，成纤维细胞生长因子存在所有的组织和器官中，成纤维细胞生长因子信号通路异常与发育缺陷、损害对损伤的反应、导致代谢紊乱和癌症发病相关联。 关键词： 组织构建；组织工程；成纤维细胞生长因子；成纤维细胞生长因子受体；信号通路；Klotho 细胞；硫酸乙酰肝素蛋白多糖；成纤维细胞生长因子结合蛋白1；细胞外调节蛋白激酶；微小RNA ；肺动脉高压；原发性乳腺肿瘤；内蒙古自治区自然科学基金 主题词： 组织工程；成纤维细胞生长因子；肿瘤 基金资助： 内蒙古自治区自然科学基金(NJZY12151)