第七章高效毛细管电泳
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高效毛细管电泳使用说明
1.毛细管的冲洗方法
首先用双手拇指将压力冲洗装置的顶推盘压下,旋转一个角度,使其固定住。
然后将毛细管盖连同毛细管从高压端取出放到装有冲洗液的顶端处,并一同放到下盒盖中,盖上上盒盖后,再用双手拇指将顶推盘旋转回原来角度,使其顶住注射器推杆,即可进行毛细管冲洗。
2.施加高压方法
初次升压时,必须先将电压调节扭6逆时针旋到底后,再按高压启动扭3,并缓慢逆时针旋转高压扭6至所须电压值。
如果发生异常立即按高压关断扭5,排除故障后,再重新升压。
3.电迁移进样的方法
把电压调到所需电压。
掀开上盖,把样品瓶放在样品瓶托盘上,将毛细管的一端从放在样品瓶托盘上的缓冲液瓶里抽出,插进样品瓶里,盖上上盖。
然后立即按高压启动扭,待达到预定时间后,掀开上盖,将毛细管从样品瓶抽出,插入缓冲液瓶里。
立即盖上上盖,把电压上升到工作电压,开始数据采集。
维护与保养
1 .长时间不使用的试剂不得存放于仪器托盘中,特别是盐酸,有可能造
成仪器部件的腐蚀,和仪器内的湿度增加。
2 .未涂层的毛细管长时间不用,要先用水清洗,再用空气吹干。
3 .长时间不使用仪器,在停机之前必须使样品及缓冲溶液托盘处于
Load状态。
4 .仪器要注意防尘和防潮。
分析化学专业硕士研究生课程
教学大纲
课程名称:高效毛细管电泳分析技术
课程编号:0703022F14
学分:2
总学时数:40学时
开课时间:第二学期—第三学期
考试方式:笔试
课程说明:研究生方向课
课程内容:高效毛细管电泳技术(HPCE)是近年来发展的一种以毛细管为分离通道,高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术,是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大发展。
它使分析科学得以从微升水平进入纳升级水平,并使单细胞分析,单分子分析成为可能,广泛应用于化学、药学、生命科学以及材料科学和环境科学等领域。
通过本学位方向课程教学,要求学生掌握高效毛细管电泳的基本原理,仪器装置系统,分离条件的选择,毛细管的制备方法,电渗现象的影响因素及控制方法,毛细管电泳的应用和发展动态趋势等,从而为进一步深入研究和应用打下坚实的理论知识和技能。
教学学时安排:
第一章概述(2学时)
第二章高效毛细管电泳基本理论(6学时)
第三章高效毛细管电泳仪器装置系统(4学时)
第五章高效毛细管电泳分离条件的选择(6学时)
第六章毛细管的制备方法技术(4学时)
第七章高效毛细管电泳分析联用技术(6学时)
第八章高效毛细管电泳分离分析技术的应用(8学时)
第九章高效毛细管电泳分析发展动态(6学时)
参考目录:
1.邓延倬,何金兰编著,高效毛细管电泳,科学出版社,北京,2000。
2.《分析化学》有关毛细管电泳技术和应用论文选读
大纲起草人:阎宏涛大纲审定人:雷根虎。
高效毛细管电泳技术简介
高效毛细管电泳又称高效毛细管区带电泳(又称毛细管区带电泳),它的分离根据是电场中毛细管内的溶质具有不同的迁移速率。
高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis, HPCE)是在传统的电泳基础上结合高效液相色谱技术发展起来的一种高效分离分析技术,由于其具有无与伦比的高效.准确和高灵敏性,这项技术广泛运用于有机离子.无机离子,氨基酸,多肽,蛋白质,核酸分子,对映异构体和临床医学分析,同时它在生物工程,药物,环保,食品检验等领域也显示了极其重要的运用前景。
毛细管电泳仪的结构和特点
毛细管电泳仪主要由5个部分组成,毛细管柱.进样系统,高压系统,检测系统和数据采集系统组成。
毛细管电泳的特点
(1)电泳在细径(25-75u m,内径)弹性石英毛细管中进行,其有限长度一般为50cm.
(2)高电压(10-30KV)加在毛细管两端以产生高电场强度(100-500V/cm).
(3)分析时间短,数分钟至几十分钟可完成一次分析。
(4)多种分离模式,应用范围广(从生物大分子至小分子。
离子)
(5)样品需求量少,仪器自动化高。
现阶段取得的主要进展
P/ACE MDQ主要用于蛋白质的分析:
●毛细管等点聚焦●肽蛋白和糖蛋白的鉴别分析●纯度检测●免疫毛细管电泳检测
●SDS-分子量测定●肽谱分析。
高效毛细管电泳实验一、实验目的1.进一步了解毛细管电泳的基本原理;2.熟悉毛细管电泳仪的组成;3.了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数。
二、实验原理1.电泳淌度毛细管电泳(CE)是一种液相微分离技术,它以电渗流(EOF)为驱动力,以毛细管为分离通道,根据组分在样品中的迁移率和分布行为的差异,实现分离。
离子在自由溶液中的迁移率可以表示为:?=?E(1)?? 问题6??R(2)哪里离子迁移率是多少,?是电泳迁移率,E是电场强度。
?是介质的粘度,R是离子的流体动力学半径,Q是电荷。
因此,离子的电泳迁移率与其电荷成正比,与其半径和介质粘度成反比。
2.电渗流和电渗淌度电渗流(EOF)是指毛细管内壁上的表面电荷引起的液体在管内的整体流动,它来自外部电场对管壁上溶液的双电层的影响。
在水溶液中多数固体表面根据材料性质的不同带有过剩的负电荷或正电荷。
就石英毛细管而言,表面的硅羟基在ph大于3以后就发生明显的解离,使表面带有负电荷。
为了达到电荷平衡,溶液中的正离子就会聚集在表面附近,从而形成所谓双电层,如图1所示。
这样,双电层与管壁之间就会产生一个电位差,叫做zeta电势。
但毛细管两端施加一个电压时,组成扩散层的阳离子被吸引而向负极移动。
由于这些离子是溶剂化的,故将拖动毛细管中的体相溶液一起向负极运动,这便形成了电渗流。
电渗流的大小可以用速率和流动性来表示:?eof????/??e?eof???/?(3)或者(4)哪里EOF是电渗流速,?EOF是电渗迁移率,?zeta电位是吗,?是介电常数。
3.毛细管电泳分离方式ce有6种常用的分离模式,其中毛细管区带电泳(cze)、胶束电动毛细管色谱(mekc)和毛细管电色谱(cec)最为常用。
本实验的内容为cze。
4.毛细管电泳的基本参数一ce中的分析参数可以用色谱中类似的参数来描述,比如与色谱保留时间相对应的有迁移时间,定义为一种物质从进样口迁移到检测点所用的时间,迁移速率(?)则是迁移距离(l,即被分析物质从进样口迁移到检测点所经过的距离,又称毛细管的有效长度)与迁移时间(t)之比:?? 书信电报(5)因为电场强度等于外加电压(V)与毛细管长度(L)之比:e?vl(6)就ce的最简单的模式―毛细管区带电泳(cze)而言,结合式(1),可得:? A.什么?tetv(7)毛细管区带电泳(CZE)测量的迁移率是电泳迁移率和电渗迁移率的矢量和,称为表观迁移率?a、即:?a??e??eof(8)实验中可以采用一种中性化合物,如二甲亚砜或丙酮等,来单独测定电渗流淌度,然后求得被分析物的有效淌度。