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DyLight405标记山羊抗大鼠IgG二抗

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Abbkine, Inc • Redlands, CA • USA •
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DyLight 405, Goat Anti-Rat IgG
# A23140

Product Information 

Product Name: DyLight 405 Conjugated Goat Anti-Rat IgG(H+L)
Amax: 400nm Emax: 421nm
Catalog Number: A23140 Lot Number: Refer to vial
Formulation: Liquid Size: 100ul/500ul
Storage: Store at -20°C. Be protected from light and avoid repeated freeze / thaw cycles. Note: Contain sodium azide.

Background: DyLight fluorescent dyes are a new generation of dyes with improved brightness and photostability, which are
highly water soluble and remain fluorescent from pH 4 to pH 9. They are better than or comparable to the best fluorescent
dyes from other companies. Abbkine's secondary antibodies are available conjugated to enzyme, biotin or fluorophore for use
in a variety of antibody-based applications including WB, IHC, IF, FC and ELISA. We offer high quality secondary antibodies
from goat, rabbit and donkey sources for your each application. Serum adsorbed secondary antibodies are also available and
are recommended for use with immunoglobulin-rich samples.

Purity:
Affinity purified using solid phase Rat IgG (H&L) with finally > 95% purity based on SDS-PAGE.

Specificity: The antibody reacts with whole molecule rat IgG. It also reacts with heavy chains of rat IgG, and light chains of all
other rat immunoglobulins. It has no reactivity on non-immunoglobulin serum proteins, while it may cross-react with
immunoglobulins from other species.

Application Notes:
Optimal working dilutions should be determined experimentally by the investigator. Suggested starting

1:50-1:1,000 dilutions for most applications.

Storage Buffer: 0.01M Sodium Phosphate, 0.25M NaCl, 50% Glycerol pH 7.4.
Stabilizer: 1% Bovine Serum Albumin (IgG and Protease Free).
Preservative:
0.05% (w/v) Sodium Azide.
Storage Instructions: Stable for one year at -20°C from date of shipment. For maximum recovery of product, centrifuge the
original vial after thawing and prior to removing the cap. Aliquot to avoid repeated freezing and thawing.

Note:
The product listed herein is for research use only and is not intended for use in human or clinical diagnosis. Suggested
applications of our products are not recommendations to use our products in violation of any patent or as a license. We
cannot be responsible for patent infringements or other violations that may occur with the use of this product.

合集下载

[资料]博士德试剂盒说明

[资料]博士德试剂盒说明

0000产品货号：SA1023产品价格：290元/1/2盒(可以做80张左右的切片),550元/1盒(可以做160张左右的切片)00000000产品编号：00000000SA1023—山羊IgG(适于一抗为山羊多克隆抗体)SA1024—人IgG (适于人自身抗体的检测)SA1025—大鼠IgG(适于一抗为大鼠单克隆抗体)试剂的保存：4℃可保存一年，应避免冷冻。

工作原理：SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。

链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。

同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。

亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。

链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

SABC 即StreptAvidin—BiotinComplex,。

根据研究，SABC 大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。

大量的酶将保证SABC 具有很高的敏感性。

SABC 兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

00000000试剂盒中内容1.正常兔血清封闭液：12ml。

用于组织切片的封闭。

2.二抗：12ml。

亲和纯化抗体，标记长臂生物素。

兔抗大鼠IgG(或IgM)或明或暗兔抗山羊IgG 或兔抗人IgG。

3.SABC：12ml。

链酶亲和素—过氧化物酶复合物。

用户自备试剂：1．粘片剂APES 或POLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。

2．免疫组化专用PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml 蒸馏水中加氯化钠8.5g, Na2HPO4 2.8g,NaH2PO4 0.4g。

如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。

3．0.01M 枸橼酸盐缓冲液：1000ml 蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g, 枸橼酸(C6H8O7·H2O ) 0.4g。

免疫荧光标记为什么不能直接标记一抗而标记二抗

免疫荧光标记为什么不能直接标记一抗而标记二抗

一抗只识别一种底物，如果每种一抗都需要荧光标记，那这样成本很高。

而二抗既可以和一
抗结合，又带有可以被检测出的标记（如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是
检测一抗，提高了通用性。

一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体，即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。

一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团（底
物和二抗）。

特点是：
特异性强、敏感性高、速度快。

主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的
客观性不足，技术程序也还比较复杂。

荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。

与放射免疫法相比，荧光
免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。

国外生产的TDM用试剂盒，有相当
一部分即属于此类，并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。

由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。

新发展了
几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。

几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记

几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记

几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等，还有一些其他的标记方法例如金标记，本文主要讲述了这些抗体标记的基本原理、操作步骤。

一、酶标记1、辣根过氧化物酶(HRP)标记辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。

其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG 后该醛基与IgG氨基结合，形成Schiff氏碱。

为了防止HRP 中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。

氧化反应末了，用硼氢化钠稳定Schiff氏碱。

这里介绍两种程序。

程序一：(1)将5mg HRP溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3溶液中;加0.5ml 10mmol/LNaIO4溶液，混匀，盖紧瓶塞，室温避光作用2小时。

(2)加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3混匀。

(3)加入0.75ml小鼠已处理的腹水，或纯化单抗等(15mg/ml)，混匀。

(4)称取SephadexG25干粉0.3g，加入一支下口垫玻璃棉的5ml注射器外筒内;随后将上述交联物移入注射器外套;盖紧，室温作用(避光)3小时或4℃过夜。

(5)用少许PBS将交联物全部洗出，收集洗出液，加1/20V体积新鲜配制的5mg/mlNaBH4溶液，混匀，室温作用30分钟;再加入3/20V NaBH4溶液，混匀，室温作用1小时(或4℃过夜)。

(6)将交联物过Sephadex g200或Sepharose6B(2.6×50cm)层析纯化，分管收集第一峰。

(7)酶结合物质量鉴定：克分子比值测定酶量(mg/ml)=OD403×0.4IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.3)×0.62克分子比值(E/P)=酶量×4/IgG量，一般在1-2之间。

酶结合率=酶量×体积/抗体，标记率一般为0.3-0.6，即1-2个HRP分子结合在一个抗体分子上，标记率可大于0.6，0.8，0.9;OD403/OD280等于0.4时，E/P约为1。

免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项

免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项

免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项来源：生物谷 2008-6-27 访问量：9826评论（0）分享一、免疫荧光的标本制作的基本程序同DAB显色的免疫组化，不同点如下：1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其它相同。

2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。

3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。

4、免疫荧光在封片使用专用封片剂或甘油：0.01MPBS （1：1）。

5、条件许可可以购买防淬灭的试剂加入封片剂中，标本可以保存更久。

6、荧光抗体的孵育以及后续处理需要闭光。

7、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要设定阳性和阴性对照。

二、注意事项1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，会使荧光减弱。

2、每次试验时，需设置以下三种对照：（1）阳性对照：阳性血清+荧光标记物（2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物（3）荧光标记物对照：PBS+荧光标记物三、免疫荧光双标的经验之谈1、选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit和rat的抗体，secondary antibodies则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red（红）。

2、我的做法是两种primary antibodies同时孵育，然后两种secondary antibodies同时孵育。

抗体浓度、孵育时间要认真摸索，我感觉primary antibodies 4度孵育过夜比较好，背景比较干净。

3、我的阳性对照采用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是rabitt和rat的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。

4、Block用的血清使secondary antibody来源动物的血清，我的是10%正常donkey血清。

5、其余同一般操作。

原代培养胚胎14天大鼠端脑细胞：在骨发生形态蛋白—{诱导下，乙酰胆碱转移酶(呈绿色荧光)和同源域蛋白Islet—1(呈红色荧光)共存于细胞质内(激光扫描共聚焦显微镜观察)1．一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B)，按直接法进行染色。