明胶水溶液(1%,无菌)

无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制实验中所使用的玻璃仪器及塑料器皿清洁与否，直接影响实验结果，往往由于器皿的不清洁或被污染而导致较大的实验误差，甚至会出现相反的实验结果。

因此，实验用器皿洗涤清洁工作是十分重要的基本操作，是做好实验的前提及实验成败的关键之一。

1、洗涤液的种类及配制（1）0.5%去垢剂溶液（常用洗涤液）。

去垢剂是能使蛋白质变性的一类化学物。

去垢剂(表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质，一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取钟应用的较多。

[生化]去垢剂（detergent）A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。

一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚，如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚，如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌。

中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白，不必先除去去垢剂。

B．阴离子去垢剂常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。

前者可促进核蛋白的溶解，将核酸释放出来，并对核酸酶有一定抑制作用，常用于核酸的提取。

C．阳离子去垢剂如洁尔灭、新洁尔灭、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒净（TMPB）、杜灭芬等，消毒灭菌类居多。

D．天然表面活性剂又称为生物表面活性剂，包括种类较为广泛，如各种树胶（阿拉伯胶、杏胶、桃胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、胆甾醇、胆酸类、多糖类（如环糊精）等。

冰冻切片详细说明切片技术最早期是从冰冻切片开始，后来逐步有了发展和更新，冰冻切片弥补了石蜡切片和火棉胶切片之不足，石蜡切片和火棉胶切片需时太久，且在制片中要使用许多化学试剂，石蜡切片还需要加温过程，因而某些重要的不稳定的组织成分如脂类、酶以及抗体等，可能被溶解和破坏。

冰冻切片过程较简单，无须经过上述步骤，组织中的水分起着包埋剂的作用，组织经固定或不固定即可进行冰冻切片，切片厚度一般可在6-8微米，组织没有收缩，易保持生活时原有状态，是保存脂肪组织，许多神经组织特殊染色方法和组织化学方法，特别是酶的活性十分理想的切片方法，对于外科临床诊断和现代免疫荧光诊断，冰冻切片也很重要。

一、直接冰冻切片法冰冻切片多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。

组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。

1．恒冷箱切片就是将组织在恒冷箱的切片机切片。

目前恒冷箱切片机的品种较多。

此种切片适用于科研和教学上的连续切片。

要求预先开动电源（预冷准备），配多种固定组织台，以便更换组织。

2．甲醇制冷器制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装制，其冷却速度比较快，属于开放式，作一般常规冰冻切片用。

3．二氧化碳冰冻法将组织用蒸馏水洗后，放在冰冻切片机的冷冻台上，加蒸馏水少许。

打开冷冻台的二氧化碳开关，二氧化碳气体喷出，待组织出现冷霜时，将二氧化碳关闭，即可切片。

若组织冷冻过硬则切片易碎；组织冷冻硬度不足，则切片呈粥糜状，需用间歇方法继续冷却。

硬度一般在刚开始解冻时最合适，应迅速切片。

4．半导体致冷冰冻切片法将组织置半导体致冷台上，滴加少许蒸馏水，调好切片机的厚度。

⑶移至25%明胶溶液内浸6-24h。

⑷25%明胶包埋，连同包埋器放入冰箱内使明胶迅速凝固，取出后在空气中蒸发10min 。

⑹蒸馏水洗后，置冰冻切片机或滑动式切片机切片。

切片可保存于10%甲醛液中。

⑺依检查目的而进行染色，染色后一般不经乙醇脱水及二甲苯透明，而用下述明胶溶液或其他类似的明胶溶液封片：果糖26g,明胶1.1g，钾矾0.75g，麝香草酚水溶液1.15ml。

⽔产微⽣物实验—培养基的配制实验⼆培养基的配制⼀、基础知识培养基是⼈⼯配制的适合微⽣物⽣长繁殖或积累代谢产物的营养基质，⽤以培养、分离、鉴定、保存各种微⽣物或积累代谢产物。

飞⾃然界中，微⽣物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的⽬的不同，所以培养基的种类很多。

但是，不同种类的培养基中，⼀般应含有⽔分、碳源、氮源、能源、⽆机盐、⽣长因素等。

不同微⽣物对pH要求不⼀样，霉菌和酵母的培养基的pH⼀般是偏酸性的，⽽细菌和放线菌的培养基的pH⼀般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。

所以配制培养基时，都要根据不同微⽣物的要求将培养基的pH调到合适的范围。

此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微⽣物，因此，已配制好的培养基必须⽴即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防⽌其中的微⽣物⽣长繁殖⽽消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

根据微⽣物的种类和实验⽬的不同，培养基的类别如下（⼀）按成分的不同分1．天然培养基。

主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、⽟⽶粉、⾖饼粉、⾖芽汁、⽜⾁膏、蛋⽩胨、⾎清等。

这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所⽤的原料，其中各成分的数量也不恒定。

这类培养基是实验室和发酵⼯⼚常⽤的培养基，例如⽜⾁膏蛋⽩胨培养基，马铃薯培养基，⽟⽶粉、黄⾖饼粉培养基、⾎琼脂培养基等。

2．合成培养基⽤化学成分完全了解的纯化合物药品配制⽽成的培养基，因此也称化学成分明确的培养基(chemically defined medium)，如⾼⽒I号培养基、查⽒培养基、M9培养基等。

⼀般⽤于研究微⽣物的形态，营养代谢、分类鉴定、菌种选育、遗传分析等。

⾼⽒I号培养基是⽤来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。

如果加⼊适量的抗菌药物(如各种抗⽣素、酚等)，则可⽤来分离各种放线菌。

此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的⽆机盐，这些⽆机盐可能相互作⽤⽽产⽣沉淀、如⾼⽒⼯号培养基中的磷酸盐和镁盐相互混合时易产⽣沉淀；因此，在混合培养基成分时，⼀般是按配⽅的顺序依次溶解各成分，甚⾄有时还需要将三种或多种成分分别灭菌，使⽤时再按⽐例混合。

第三章注射剂一、名词解释1. 灭菌制剂和无菌制剂：指直接注射于体内或直接用于创伤面、粘膜等的一类制剂。

2. 注射剂：俗称针剂，是指专供注入机体内的一种制剂。

输液：由静脉滴注输入体内的大剂量 (一次给药100ml以上) 注射液。

3. 等渗和等张：等渗是指渗透压与血浆相等的溶液，可用人造的理想半透膜以物理化学实验方法求得，因而等渗是个物理化学概念。

然而，根据这个概念计算出某些药物如盐酸普鲁卡因、丙二醇、尿素、甘油等的等渗浓度，配制成等渗溶液，结果发生不同程度的溶血，因而提出等张溶液的概念。

等张是指与红细胞张力相等的溶液。

即与细胞接触时，使细胞功能和结构保持正常的溶液。

4. 热原：注射后能引起人体致热反应的物质，称热原5. 纯化水和注射用水：纯化水：为原水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法等处理后制得的供药用的水。

注射用水：纯化水经蒸馏所得的蒸馏水。

6. 灭菌法：杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽胞的方法或技术。

7. 无菌：在任一指定的物体、介质或环境中，无任何活的微生物。

8. 防腐和消毒：防腐：用物理或化学方法抑制微生物生长与繁殖的手段，亦称抑菌。

消毒：用物理或化学方法杀灭或除去病原微生物的手段。

9. 湿热灭菌法：用饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法。

二、思考题1. 药剂学中灭菌法可分为哪几类？物理灭菌技术主要包括哪些方法？灭菌法可分为三大类：物理灭菌法、化学灭菌法、无菌操作法。

物理灭菌：热灭菌法、射线灭菌法、过滤除菌法。

热灭菌法：1）干热灭菌法：①火焰灭菌法、②干热空气灭菌法。

2）湿热灭菌法：①热压灭菌法、②流通蒸汽灭菌法、③煮沸灭菌法、④低温间歇灭菌法。

射线灭菌法：①辐射灭菌法、②微波灭菌法、③紫外线灭菌法。

2. 影响湿热灭菌的主要因素有哪些？①微生物的种类与数量；②蒸气性质；③药品性质和灭菌时间；④其他如介质pH对微生物的生长和活力具有较大影响；⑤灭菌温度。

3. 注射剂的质量检查项目有哪些？无菌，热原和细菌内毒素，可见异物，不溶性微粒，装量检查，装量差异，渗透压摩尔浓度，Ph，其他4. 注射剂处方中应用什么水？注射剂处方中应用注射用水或灭菌注射用水。